(Luận văn) nghiên cứu một số phương pháp tách chiết adn từ dấu vết máu trên các vật mang là vải sau khi bị giặt bằng xà phòng trong các vụ án hình sự phục vụ công tác giám định adn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT lu ĐẶNG THỊ THU GIANG an n va gh tn to p ie NGHIÊN CỨU MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT ADN TỪ DẤU VẾT MÁU TRÊN CÁC VẬT MANG LÀ VẢI oa nl w SAU KHI BỊ GIẶT BẰNG XÀ PHÒNG TRONG CÁC VỤ ÁN d HÌNH SỰ PHỤC VỤ CƠNG TÁC GIÁM ĐỊNH ADN ll u nf va an lu oi m LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z at nh z m co l gm @ an Lu HÀ NỘI – 2015 n va http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ĐẶNG THỊ THU GIANG lu an n va NGHIÊN CỨU MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT tn to ADN TỪ DẤU VẾT MÁU TRÊN CÁC VẬT MANG LÀ VẢI HÌNH SỰ PHỤC VỤ CƠNG TÁC GIÁM ĐỊNH ADN p ie gh SAU KHI BỊ GIẶT BẰNG XÀ PHÒNG TRONG CÁC VỤ ÁN d oa nl w u nf va an lu Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ll oi m z at nh Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: z PGS.TS Nguyễn Văn Hà m co l gm @ an Lu HÀ NỘI - 2015 n va http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành bản luâ ̣n văn này xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắ c tới Đại tá, PGS.TS Nguyễn Văn Hà - Phó giám đốc T rung tâm giám đinh ̣ Sinh học Pháp lý - Viê ̣n Khoa ho ̣c hiǹ h sự - Bô ̣ Công an đã rấ t tâ ̣n tiǹ h hướng dẫn suố t quá trin ̀ h nghiên cứu hoàn thành bản luâ ̣n văn Tôi xin chân thành cảm ơn Lañ h đa ̣o Viện Khoa học hình , Lãnh đạo Trung tâm đồng nghiệp Trung tâm giám đinh ̣ Sinh ho ̣c Pháp lý - lu Viê ̣n Khoa ho ̣c hin ̀ h sự - Bô ̣ Công an đã đô ̣ng viên, giúp đỡ rất nhiều an q trình làm ḷn văn va n Tơi cũng xin chân thành cảm ơn các thầ y cô giáo th uô ̣c Viê ̣n Sinh thái gh tn to Tài nguyên sinh vật , Viện Công nghệ Sinh học đã tâ ̣n tiǹ h truyề n đa ̣t kiế n p ie thức và giúp đỡ suố t quá triǹ h ho ̣c tâ ̣p w Cuố i cùng xin bày tỏ lòng biế t ơn đế n gia điǹ h và ba ̣n bè , đã đô ̣ng oa nl viên, góp ý tạo điều kiện cho suốt thời gian học tập nghiên cứu d Hà Nội, ngày an lu tháng năm 2015 Học viên ll u nf va oi m z at nh Đặng Thị Thu Giang z m co l gm @ an Lu n va si K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết việc nghiên cứu đề tài Mục tiêu nghiên cứu 3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 4 Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU lu an 1.1 Lịch sử giám định gen khoa học hình n va 1.2 Nhận thức chung về dấu vết máu khoa học hình 1.2.2 Cơ sở khoa học giám định dấu vết máu gh tn to 1.2.1 Khái niệm về máu p ie 1.3 Ảnh hưởng xà phòng lên dấu vết máu w 1.4 Phát dấu vết máu vật mang vải sau bị giặt xà phịng 11 oa nl 1.4.1 Mục đích 11 d 1.4.2 Phương pháp thu lượm dấu vết máu vật mang vải 12 lu va an 1.4.3 Giám định định hướng dấu vết máu xác định tính đặc hiệu lồi 12 u nf 1.5 Tách chiết ADN từ dấu vết máu 15 ll 1.6 Định lượng ADN 16 m oi 1.7 Khuếch đại ADN (PCR) 17 z at nh 1.8 Những khó khăn nâng cao hiệu PCR chất lượng ADN 21 z 1.9 Kỹ thuật điện di 22 gm @ 1.9.1 Nguyên lý kỹ thuật điện di 22 l 1.9.2 Nguyên lý điện di máy giải trình tự gen ABI Prism 3130 m co Genetic Analyzer 23 an Lu 1.10 Phân tích dấu vết ADN bị lẫn 23 1.11 Vấn đề nhiễm ADN 24 n va si K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang 1.12 Tình hình nghiên cứu nước nước lĩnh vực nghiên cứu đề tài 26 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Vâ ̣t liê ̣u 28 2.1.1 Thiế t bi ̣ máy móc 28 2.1.2 Dụng cụ 28 2.2 Hóa chất 29 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 lu 2.3.1 Phương pháp thu lượm dấu vết máu vật mang vải 29 an 2.3.2 Phương pháp giám định định hướng dấu vết máu 29 va n 2.3.3 Phương pháp miễn dịch khuếch tán kép – Ouchterlony 30 2.3.5 Định lượng ADN 34 ie gh tn to 2.3.4 Phương pháp tách chiết ADN từ dấu vết máu 31 p 2.3.6 Phương pháp PCR 36 nl w 2.3.7 Kỹ thuật điện di máy điện di mao dẫn(Capillary Electrophoresis - CE) 36 d oa 2.4 Thiết kế bố trí thí nghiệm 37 an lu 2.4.1 Các mẫu khảo nghiệm tạo 37 va 2.4.2 Các mẫu tạo ký hiệu 1A, 1B, 1C, 2A, 2B, 3A, 3B, 4A, 4B, 5A, u nf 5B, 5C, 6A, 6B, 7A, 7B, tiến hành bước thí nghiệm sau: 43 ll 2.4.3 Tách chiết ADN dung dịch Chelex 5% kít PrepFiler 44 m oi 2.4.4 Thử nghiệm kết tách chiết kít PrepFiler mẫu z at nh từ vụ án cụ thể 44 z CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 47 @ gm 3.1 Kết nghiên cứu 47 l 3.1.1 Kết xác định định hướng dấu vết máu thu từ vụ án với dung m co dịch phenolphthalein 47 an Lu n va si K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang 3.1.2 Kết xác định protein loài sử dụng kỹ thuật khuếch tán miễn dịch kép theo Ouchterlony 47 3.1.3 Kết thực nghiệm tách chiết phương pháp sử dụng chelex 5% tách chiết kít PrepFiler 47 3.1.4 Kết tách chiết phương pháp PrepFiler ứng dụng vào mẫu vụ án thực tế 56 3.1.5 Hình ảnh điện di số mẫu thực nghiệm, mẫu án thực tế 58 3.2 Thảo luận kết nghiên cứu 66 lu KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 an TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va si K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang DANH MỤC CÁC TƢ̀ VIẾT TẮT : Axit deoxyribonucleic ARN : Axit ribonucleic LR : Likelihood Ratio (tỉ lệ khả dĩ) RFU : Relative Flourescence Units (đơn vị huỳnh quang tương đối) RFLP : Restriction fragment Length Polymorphism (đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn) PCR : Polymerase Chain Reaction (phản ứng nhân bội gen) ProK : Proteinaza K lu ADN (DNA) an n va tn to : Short Tandem Repeat (đoạn lặp lại ngắn) ie gh STR p : Variable Number Tandem Repeats (đoạn lặp có độ dài trung bình) : Khoa học hình d oa KHHS nl w VNTR ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va si K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang DANH MỤC CÁC BẢNG, HÌNH MINH HỌA Bảng 1.1: Thành phần thể tích phản ứng PCR 36 Bảng 1.2: Các thành phần hóa chất sử dụng để điện di mao quản 37 Bảng 2.1: Kết định lượng ADN tách chiết chelex 5% 48 Bảng 2.2: Chất lượng ADN tách chiết chelex 5% 50 Bảng 2.3: Kết định lượng ADN tách chiết kít PrepFiler 52 Bảng 2.4: Chất lượng ADN tách chiết kít PrepFiler 54 Bảng 3.1: Kết định lượng ADN với mẫu máu vải bị giặt lu an vụ án cụ thể 56 n va Bảng 3.2: Chất lượng ADN thu từ dấu vết máu bị giặt vụ gh tn to án cụ thể 57 p ie Hình 4.1: Biểu đồ kết điện di mẫu 1A, lần thực nghiệm 1.1 58 Hình 4.2: Biểu đồ kết điện di mẫu 1B, lần thực nghiệm 1.2 59 oa nl w Hình 4.3: Biểu đồ kết điện di mẫu 6B, lần thực nghiệm 1.2 60 d Hình 4.4: Biểu đồ kết điện di mẫu MA1.1 61 an lu Hình 4.5: Biểu đồ kết điện di mẫu MA2.1 62 u nf va Hình 4.6: Biểu đồ kết điện di mẫu MA2.2 63 Hình 4.7: Biểu đồ kết điện di mẫu MA3.2 64 ll oi m Hình 4.8: Biểu đồ kết điện di mẫu MA4.2 65 z at nh z m co l gm @ an Lu n va si K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang MỞ ĐẦU Tính cấp thiết việc nghiên cứu đề tài Phân tích dấu vết ADN trở thành phần thiếu công tác giám định hình nói chung giám định dấu vết sinh học nói riêng công cụ quan trọng cho nhà điều tra phá án Thông qua phân tích ADN có thể truy nguyên, nhận dạng cá thể vụ án hình sự, tìm tung tích nạn nhân, người mất tích vụ cháy, vụ tai nạn, thảm họa… xác định quan hệ huyết thống lu Mỗi năm Viện Khoa học hình nhận hàng trăm trưng cầu giám an n va định ADN từ vụ án, chủ yếu từ dấu vết máu, tinh trùng, tóc, tế bào, tn to xương, mô tổ chức thể, móng tay móng chân… Thống kê năm gh 2014 Viện Khoa học hình có 421 vụ án yêu cầu giám định ADN, p ie đó số lượng trưng cầu giám định ADN từ dấu vết máu 146 vụ số vụ án w có dấu vết máu vật mang vải quần áo, chăn ga, gối đệm… 54 vụ oa nl với 144 mẫu cần giám định, số đó có nhiều vụ án vật mang dấu vết máu d vải đưa đến giám định tình trạng qua ngâm giặt xà lu va an phòng, dấu vết vật mang khơng cịn ngun vẹn, giảm đáng kể về số u nf lượng chất lượng ADN Gây khó khăn rất lớn công tác giám định ll Trong vụ án hình việc khẳng định dấu vết máu nạn nhân để m oi lại quần áo đối tượng gây án hay máu đối tượng bám dính z at nh vật mang vải để lại trường nguồn chứng rất quan trọng, z thủ phạm có thể vơ tình hay cố ý dùng hóa chất xà phòng, chất tẩy gm @ rửa để giặt quần áo, hay vật mang vải có bám dính dấu vết máu đó l Vì vậy việc tách chiết ADN từ dấu vết máu gặp rất nhiều khó khăn m co Do chất tẩy rửa tác động lên dấu vết phá hủy rửa trôi dấu vết Trong thực an Lu tế gặp trường hợp vậy mà áp dụng phương pháp tách chiết thông thường dấu vết máu có chất lượng tốt tỉ lệ thành n va ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang công rất thấp Hơn phải tách chiết, PCR, chạy điện di nhiều lần gây tốn hóa chất mất rất nhiều thời gian, mặt khác lượng dấu vết thường khơng nhiều nên địi hỏi phải có phương pháp tách chiết hiệu để tránh sử dụng hết dấu vết mà không cho kết phân tích ADN dẫn đến khơng góp phần giải vụ án Trong thực tế vụ án có dấu vết máu vật mang vải theo lời khai đối tượng qua ngâm giặt xà phòng thực tế giám định quan sát mắt thấy vật mang dấu vết tương đối sạch, lượng dấu lu vết bám dính vật mang mờ nhạt với phương pháp tách chiết thông an thường dùng chelex 5% không cho hiệu cao với lý do: va n - Lượng ADN tách chiết không đủ để thực phản ứng PCR to - Hình ảnh điện di kém: Mất alen, nhiều alen lặp ảnh hưởng đến việc ie gh tn - Không loại bỏ hết chất ức chế ảnh hưởng đến chất lượng ADN p phân tích kiểu gen nl w Trong q trình giải vụ án thực tế thấy nhiều dấu vết d oa máu để lại vật mang nguồn chứng nhất không tách chiết an lu ADN có chứa đó để phân tích giám định vụ án vào bế tắc u nf va Trước tình hình đó, chúng thấy việc nghiên cứu thử nghiệm phương pháp tách chiết khác dấu vết máu vật mang vải ll oi m sau bị giặt xà phòng rất cần thiết, nhằm tạo quy trình ổn định z at nh tách chiết ADN từ dấu vết máu vật mang vải bị giặt xà phòng vụ án, góp phần giải yêu cầu thực tế đặt ra, z góp phần hoàn thiện quy trình giám định ADN loại dấu vết khó @ l gm thường gặp có giá trị Vì vậy việc tiến hành triển khai đề tài: “Nghiên m co cứu số phương pháp tách chiết ADN từ dấu vết máu vật mang vải sau bị giặt xà phòng vụ án hình phục vụ cơng an Lu tác giám định ADN” yêu cầu cấp thiết n va ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang 3.1.4 Kết tách chiết phương pháp PrepFiler ứng dụng vào mẫu vụ án thực tế Sau trình thực nghiệm tách chiết phương pháp PrepFiler chúng tiến hành thử lại kết mẫu lấy từ vụ án rõ Số lượng mẫu mẫu máu người quần áo bị giặt vụ án thực tế Áp dụng phương pháp tách chiết kít PrepFiler vào mẫu án vụ án có mẫu mẫu máu người quần áo bị giặt gửi trưng cầu lu giám định Viện Khoa học hình sự, cho kết bảng 3.1 thể an Phân tích thấy: nồng độ ADN thu thấp nhất 0,13 ng/µl, cao nhất va n 2,2 ng/µl, với hiệu tách vậy đủ để thực phản ứng PCR lưu Bảng 3.1 Kết định lượng ADN với mẫu máu vải bị giặt ie gh tn to mẫu theo nguyên tắc bảo toàn dấu vết hình p vụ án cụ thể Nồng độ ADN (ng/µl) MA1.1 2,20 d Tên mẫu oa nl w STT an lu MA1.2 MA2.1 MA2.2 MA3.1 MA3.2 MA4.1 MA4.2 1.22 u nf va 0,15 ll m oi 0,13 z at nh 1,67 z 1.42 l gm @ 2,00 m co 1.20 an Lu n va 56 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang Sau trình định lượng, tiến hành PCR chạy điện di phân tích kết máy giải trình tự gen để đánh giá chất lượng ADN thu phương pháp tách chiết dùng kít PrepFiler với số: số lượng locus bị mất alen, chiều cao TB peak, tỷ lệ peak bị lỗi, kết thể bảng 3.2 Hình thái peak sau điện di thể chất lượng ADN thu sau tách chiết PCR, cho thấy chất lượng ADN tốt, kiểu gen mẫu có rất locus bị mất alen, chiều cao peak từ 370 đến 2330 (rfu), tỷ lệ peak bị lỗi không đáng kể từ 3,5% đến 7,0% Như vậy, kiểu gen thu từ lu dấu vết máu người vật mang vải số vụ án sau tách an chiết kít PrepFiler cho kết tốt, đủ để sử dụng truy nguyên cá va n thể, làm chứng có độ tin cậy cao, thuyết phục, giúp ích cho công tác Bảng 3.2: Chất lượng ADN thu từ dấu vết máu bị giặt ie gh tn to điều tra phá án p vụ án cụ thể w oa nl STT Số lƣợng locus Chiều cao TB peak d bị alen Tỷ lệ peak bị lỗi (%) 2330 0 7,0 450 3,5 1260 MA1.1 MA1.2 1324 MA2.1 370 MA2.2 MA3.1 MA3.2 MA4.1 MA4.2 va u nf an lu (RFU) ll oi m z at nh z @ 1250 600 m co l gm 1189 an Lu n va 57 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang 1.5 Hình ảnh điện di số mẫu thực nghiệm, mẫu án thực tế Sau hình ảnh điện di số mẫu thực nghiệm số mẫu vụ án thực tế Sau tách chiết kít PrepFiler, nhân bội kít Identifiler Direct (hãng ABI, Mỹ) chạy điện di máy phân tích gen ABI – 3130, phân tích kết theo hệ Identifiler phần mềm GeneMapper ID v3.2 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.1: Biểu đồ kết điện di mẫu 1A, lần thực nghiệm 1.1 n va 58 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.2: Biểu đồ kết điện di mẫu 1B, lần thực nghiệm 1.2 n va 59 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.3: Biểu đồ kết điện di mẫu 6B, lần thực nghiệm 1.2 n va 60 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.4: Biểu đồ kết điện di mẫu MA1.1 n va 61 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.5: Biểu đồ kết điện di mẫu MA2.1 n va 62 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.6: Biểu đồ kết điện di mẫu MA2.2 n va 63 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.7: Biểu đồ kết điện di mẫu MA3.2 n va 64 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.8: Biểu đồ kết điện di mẫu MA4.2 n va 65 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang Thảo luận kết nghiên cứu Đề tài đươ ̣c tiế n hành nghiên cứu thực nghiê ̣m sở các trang thiế t bị phịng thí nghiệm Trung tâm giám định Sinh học pháp lý , Viê ̣n Khoa học hình - Bơ ̣ Cơng an Đề tài đã định hướng áp dụng thêm mô ̣t phương pháp tách chiết dấu vết máu phục vụ việc giám định đó phương pháp dùng kít PrepFiler Để tạo quy trình giám định chuẩn phù hợp với điều kiê ̣n có phịng thí nghiệm So sánh với phương pháp tách chiế t ADN từ dấu vết máu thông thường lu dùng chelex 5% chúng nhận thấy: an - Nế u sử du ̣ng phươ ng pháp tách chiết kít PrepFiler tách chiết va n mẫu máu vật mang vải bị giặt xà phòng tạo thực tn to nghiệm thử lại mẫu vụ án cụ thể đều cho kế t quả rấ t tố t ie gh (nồng độ thấp nhất 0,13 ng/µl, cao nhất 2,2 ng/µl), lươ ̣ng ADN thu đươ ̣c p hoàn toàn đủ để thực bước t iế p theo : Định lượng PCR, lượng nl w ADN lại đủ lưu để có thể thực lặp lại, kiểm tra đối chiếu kết d oa - Hình ảnh điện di c ho thấ y với mẫu tạo thực nghiệm an lu số mẫu vụ án trưng cầu Viện Khoa học hình sự, chất va lượng ADN thu từ tách chiết kít PrepFiler khơng bị mất alen u nf locus gen, cân peak alen locus locus với ll nhau, tỷ lệ peak lỗi không có không đáng kể Kết thu đáng tin oi m z at nh cậy, đủ để truy nguyên cá thể làm chứng vụ án hình Kế t quả nghiên cứu đề tài góp phầ n giải quyế t nhanh chóng, xác z kịp thờ i yêu cầ u thực tiễn đă ̣t với công tác giám đinh ̣ ADN ta ̣i Viê ̣n @ gm Khoa học hình - Bộ Cơng an, viê ̣c đưa quy trình giám đinh ̣ chi tiế t cho l tách chiết ADN từ dấu vết máu vật mang vải bị giặt xà phòng m co quy trình ứng du ̣ng trực tiế p giám đinh ̣ các vu ̣ án thực tế cho thấ y phịng thí nghiệm Viện Khoa học hình - Bộ Cơng an an Lu đề tài hoàn thành tốt mục tiêu đề ứng dụng trực tiếp vào thực tiễn n va 66 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau đề tài nghiên cứu hoàn thiện có thể rút số kết luận sau: Xác định phương pháp tách chiết ADN tối ưu nhất từ dấu vết máu người vật mang vải bị giặt xà phòng phù hợp với điều kiện giám định có Viện Khoa học hình - Bộ Công an đó phương pháp tách chiết sử dụng kít PrepFiler lu an Từ kết nghiên cứu đề tài, góp phần rút ngắn thời gian, tiết kiệm n va chi phí tách chiết lượng ADN hiệu nhất nhờ lựa chọn đúng tn to phương pháp phù hợp dấu vết máu vật mang vải sau bị Ứng dụng phương pháp tách chiết phù hợp để tách chiết thành công p ie gh giặt xà phịng vụ án hình nl w ADN dấu vết máu vật mang vải sau bị giặt xà d oa phịng vụ án hình Giúp truy nguyên cá thể, có để an lu xác định tội phạm, nguồn chứng để giải vụ án hình va Hồn thiện quy trình tách chiết ADN từ dấu vết máu người vật ll u nf mang vải bị giặt xà phịng thường gặp vụ án hình oi m Tạo tiền đề để tiến hành thực nghiệm tách chiết mẫu sinh Kiến nghị z at nh học khác phục vụ công tác giám định gen hình z Sau thực đề tài chúng có kiến nghị sau: @ l gm Vật mang dấu vết yếu tố có tác động rất lớn m co tới chất lượng dấu vết máu đó cần có nghiên cứu tác động số vật mang tiêu biểu lên chất lượng dấu vết phục vụ giám định sinh an Lu học, đặc biệt giám định gen điều kiện Việt Nam n va 67 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang Nên đầu tư kinh phí để có thể nghiên cứu tối ưu hóa phương pháp tách chiết, tinh loại mẫu sinh học khác thân tóc, tổ chức thể người biến tính, bị ngâm foocmol, tối ưu hóa phương pháp PCR Để hồn thiện quy trình giám định ADN loại mẫu có chất lượng lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va 68 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Đặng Đức Trạch, Nguyễn Đình Hương, Phạm Mạnh Hùng, Ponsmand K.W, Wrigt P.E (1987), Miễn dịch học, Nhà xuất Khoa học Kỹ tḥt Đỗ Đình Rãng (2012), Hóa học hữu 2, Nhà xuất Giáo dục Hà Quốc Khanh, Nguyễn Văn Hà (2007), Giáo trình giám định ADN, Viện Khoa học hình - Bộ Cơng an lu an Hồ Huỳnh Thùy Dương (2001), Sinh học phân tử Nhà xuất Y học va n Lê Đình Lương, Phan Cự Nhân (2003), Cơ sở di truyền học, Nhà xuất gh tn to Giáo dục p ie Lê Như Lĩnh (1999), Nghiên cứu tách chiết ADN từ tế bào máu và tế bào w thể dùng cho giám định sinh học hình sự, Đề tài khoa học cấp oa nl Ngô Tiến Quý (2008), Bảo vệ và khám nghiệm trường, Nhà xuất d Công an Nhân dân an lu va Ngô Tiến Quý (2013), Phát hiện, thu, bảo quản, nghiên cứu và giám định ll u nf dấu vết sinh vật, Nhà xuất Công an Nhân dân oi m Nguyễn Văn Hà (2011), Nghiên cứu tối ưu hóa phương pháp tách chiết và z at nh tinh ADN ti thể từ răng, xương người phục vụ giám định ADN ti thể điều kiện Việt Nam, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp z gm @ 10 Trịnh Tuấn Toàn (2011), Nghiên cứu và ứng dụng phương pháp giám định định hướng dấu vết máu dung dịch phenolphthalein Việt Nam, m co l Đề tài nghiên cứu khoa học cấp xuất Giáo dục an Lu 11 Võ Thị Thương Lan (2011), Sinh học phân tử tế bào và ứng dụng, Nhà n va 69 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si Luận văn cao học Đặng Thị Thu Giang Tài liệu Tiếng Anh 12 Gill P, Whitaker J, Flaxman C, Brown N, Buckleton J: An investigation of the rigor of interpretation rules for STRs derived from less than 100 pg of DNA Forensic Sci Int 2000, 112:17-40 13 Gilbert N: Science in court: DNA’s identity crisis Nature 2010, 464:347-348 14 Kloosterman AD, Kersbergen P: Efficacy and limits of genotyping low copy number (LCN) DNA samples by multiplex PCR of STR loci J Soc Biol lu 2003, 197:351-359 an n va 15 Gaines ML, Wojtkiewicz PW, Valentine JA, Brown CL: Reduced volume tn to PCR amplification reactions using the AmpFlSTR Profiler Plus kit J Forensic ie gh Sci 2002, 47:1224-1237 p 16 Smith PJ, Ballantyne J: Simplified low-copy-number DNA analysis by d oa nl w post-PCR purifiaction J Forensic Sci 2007, 52:820-829 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va 70 ac th K17 - Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật si