Microsoft Word bao cao tong ket doc TỔNGCÔNGTYHÓACHẤTVIỆTNAM VIỆNHÓAHỌC CÔNG NGHIỆP VIỆTNAM Báocáotổngkếtđềtài NGHIÊNCỨUCÔNGNGHỆSẢNXUẤTCAO DỊCHCHIẾTCỦARỄCÂYCHÚTCHÍTRUMEXCRISPUSĐỊNHHƯỚNGLÀ MTHUỐCTRỪNẤM[.]
TỔNGCƠNGTYHĨACHẤTVIỆTNAM VIỆNHĨAHỌC CƠNG NGHIỆP VIỆTNAM Báocáotổngkếtđềtài: NGHIÊNCỨUCƠNGNGHỆSẢNXUẤTCAO DỊCHCHIẾTCỦARỄCÂYCHÚTCHÍTRUMEXCRISPUSĐỊNHHƯỚNGLÀ MTHUỐCTRỪNẤMTHẢOMỘCTHÂNTHIỆNMƠITRƯỜNG Chủnhiệmđềtài: TS.LưuHoàngNgọcCánb ộthamgia: Ths.NguyễnNgọcThanhThs NguyễnThịHoàiAnhThs.Ngu yễnThịThuHươngKs.Nguyễ nMaiCương Cn.LêNgọcThức Ks.NguyễnThanhLoan 7453 15/7/2009 HàNội,04-2009 MỤCLỤC LỜINÓIĐẦU CHƯƠNG I:TỔNGQUAN 1.1 Giớithiệu chungvềcâyRumex crispus 1.2 Thành phầnhốhọctrong câyRumexcrispus 1.3 Hoạt tính sinh họccủamộtsốhợp chấtchính trongRumex 1.4 Mộtsố ứng dụngchính 1.4.1 Đặcđiểmsinh họcvàsinhtháicủanấmFusarium spgây bệnh héo vàngcâykhoaitâyvàhéorũcây chuối 1.5 Phươngpháp chiếttáchcaodịchchiếtrễcâyrumexvàcácchấtcóhoạt tính 1.5.1 PhươngphápcủaJin-CheolKimvàcộng 1.5.1 Phương pháp AusatA Khan 1.6 Lựachọn công nghệ CHƯƠNG II:ĐỐITƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiêncứu 2.2 Thiết kếnghiêncứu 2.3 Hoáchấtthiếtbị 2.4 Phươngpháp nghiên cứu 2.4.1 Chiết caotổng 2.4.2 Làmgiàucaodịch chiết 2.4.3 Phân tích sản phẩm 2.4.4 Thửhoạttínhsinh học CHƯƠNG III:KẾTQUẢVÀTHẢO LUẬN 3.1 Nghiêncứucácyếutốảnhhưởngtớiquá trình chiết 3.1.1 Ảnhhưởng củadungmôichiết 3.1.2 Ảnhhưởng nhiệtđộchiết 3.1.3 Ảnhhưởng thờigian chiết 3.2 Làmgiàucao dịchchiết 3.3 Phântíchsảnphẩm 3.4 Kếtquảthửhoạttính 3.4.1 HiệuquảứcchếvớinấmFusariumgây bệnhhéo vàngcây khoaitây 3.4.2 HiệuquảứcchếnấmFusariumgây bệnh héorũcâychuối 3.4.3 Hiệuquảứcchếmộtsốloạibệnh khác 3.5 Sảnxuấtthửnghiệm, thửnghiệmsảnphẩm - - 3 10 13 13 14 14 16 16 16 17 17 17 17 17 18 20 20 20 21 22 24 25 26 26 27 29 30 3.5.1 Sảnxuất thửnghiệm 3.5.2 Bàochếchếphẩm 3.6 ĐềxuấttiêuchuẩncơsởdịchchiếtrễcâyRumexcrispus KẾTLUẬN MỘTSỐKIẾNNGHỊ TÀILIỆUTHAM KHẢO MỘTSỐKIẾNNGHỊ PHỤLỤC - - 30 31 32 33 34 35 37 LỜINĨIĐẦU Nhómbệnhn ấmmốclàmộttrongnhữngbệnhgâyhạinhấtở c â y trồng,gâyg i ảmnăngs uấtmùamàng.Đãcónhiềunghiêncứuứngdụngthuốctrừnấmđểtrừloạibệnhnàytừnhữngloạit huốctrừnấmgốcvơcơtớinhữngloạitổnghợpnhưngđềuchưacóhiệuquảrõrệt,lạigânhiễm mơitrườngvàsứckhỏeconngười.Cácnghiênc ứugầnđâyvềlồiRumexsp.Lchohiệuquảdiệtn ấmtốt,đặchiệuvớiloạibệnhnấmmốcsươngtrêncâylúa,đậuHàlanvàcâydưachuột.Ngồirasả nphẩmnàycũngtácdụngt ớic c loạin ấmmốcgâybệnhnhưM.grisea,C.sasaki,B.cinerea,P.r econdite,B.graminisf.spở lúa,vàkhoaitây.Cácphépthửchothấynhữnghợpchấtemodin,parie ntincótínhchấtdiệtnấm,l i ềuEC50(nồngđ ộ ả nhhưởngtốiđ a50%)t ừ0,4820g/mlvàhỗnhợpdịchchiếtRumexsp.cónồngđộkhoảng250g/mlchohiệuquả diệtnấmc a o vàphổrộng,đặchiệucaotrênmộtsốloạinấmmốcsươngtrắngPodosphaerasp.và Blumeriasp.Pháttriểnsảnphẩmmớitừnguồnthảodượcsẵncólàviệccầnthiết,manglạihiệuqu ảkinhtếcao HiệnHànQuốcđangphảinhậpkhẩud ịchchiếtRumex,s ảnp h ẩmnàyc ó giávàokhoảng 59-60USD/ 1kgdịchchiết.ỞViệtnamchưacónghiêncứucụthểnàovềs ảnxuấtc a o dịchchiếtrễcâychútchí ttheođ ị nhhướngl m thuốcb ảovệthựcvật.N ăm2007,Vi ệnKRICT(HànQuốc)vàViệnHóa họccơngnghiệpViệtNamđãkývănbảnghinhớhợptácnghiêncứusànglọcvàpháttriểncácchế phẩmbảovệthựcv ậtcónguồngốctừcâycỏViệtNam.Rumexlàmộttrongnhữngđốitượngcảh aibêncùng quan tâm Xuấtpháttừnhucầuhợptácnghiêncứuvàsảnxuấtchếphẩmthuốctrừnấmsinhhọckhơn ggâyhạimơitrường,chúngtơiđãđềxuấtvàthựchiệnđềtài“Nghiêncứucơngnghệsảnxuấtcao dịchchiếtcủarễcâychútchítRumexcrispusđịnhhướngl m thuốc trừnấmthảomộcthânthiện mơi trường” vớicácnộidungcụthểnhưsau: -Nghiêncứucácyếutốảnhhưởngtớiq trìnhchiết tách; - Làmgiầucaodịchchiết,đạttiêuchuẩnlàmthuốctrừnấmvàtiêuchuẩnxuất khẩu; - Xâydựngtiêuchuẩncơsởcaodịch chiếttừrễcâychútchit; - Thửhoạt tínhsinhhọc; - Thửnghiệmchếtạothuốc trừnấmthảomộc thânthiệnmơi trường CHƯƠNGI:TỔNGQUAN 1.1 GiớithiệuchungvềcâyRunmexcrispus CâychútchítcótênkhoahọcRumexcrispus,thuộchọraurăm(Polygonaceae),chiRum ex,bộCaryophyllales,cịnđượcgọilàcâylưỡibị,dươngđềnhăn.ChiRumexc ó khoảng200lồ i,thuộcloạit h â n thảo,sốngl â u năm,trongđóRumexcrispusđãđược sửdụng rộngrãitrongđờisốngtừrất lâu TêngọidângiancủaRumexcrispusxuấtpháttừđặcđiểmhìnhtháicủacây.Dorễcâygiốn gchândêdođócótên“dươngđề”,lácâygiốnglưỡibịnêncâycịncótêngọi"ngưuthiệt".Trẻcont hườngcọhailávàonhau,làmphátratiếngkêu“chútchít”dođócịncótên"chútchít".[1,2] Rumexlàloạicâysinhtrưởngtốttạivùngđấtchua,chủyếutạikhuvựcbắcbáncầunhư ngđãđượcdunhậpgầnnhưkhắpmọinơi.Câysinhtrưởngtốtvàomùathuđơng,ởnhữngnơiẩmt hấp[1,2] Chútchítlàloạicỏ,rễcáidàicómàuhơinâuởbênngồivàmàuvàngởtrong,thâncứng,m ọcthẳng,ítphânnhánh.Câycaokhoảng20– 70cm,trênthâncórãnhdọc,lárộng,mọngnước,màuxanhlục,dài7-12cm,rộng5cm8cm;ládầy,mọcsole,mépláquăn,lượnsóng,cạnhsắc,córăngcưa,lơngtơmọcnhiềutrêngânlá Lámọcthànhtánrộngdướithân.Hoanhỏmàuhơixanhhoặchơiđỏ,mọcnhiềuvàomùahè.Hoa mọcthànhcụmsítnhau.Đàihoacókíchthước3-4mm,cólơngtơ,trànghoahơitrắngdài45mm.Hoachútchítmọctrêncáclávàmọcthànhcụmgiốngnhưmộtvịngxoắn,khó quansát Chúngchủyếulàhoalưỡngtính.Quảbếbacạnh,dướicóđàidài8-12mm[2] Rễcâycóthểđàoquanhnăm,nhưngtốtnhấtvàomùathuđơng,từthángtámtớitháng10.S aukhithuhoạch,rễđượcrửasạch,cắtbỏrễconvàphơikhơ,cắtthànhtừngđoạn1020cm,đườngkính 1-1,5cm,mặtngồi màu nâucóvết nhăn dọc,mặtcắtngangmàuvàngnâu,vùngsinhtầngtrơngrấtrõ,mùinhẹ,đặcbiệt,vịlúcđầuhơingọts auđắng[1,2] Hình1.1.HìnhảnhcâyRumexcrispus 1.2 ThànhphầnhốhọctrongcâyRumex crispus Thànhphầnhóahọcchínhcủacâychútchítlàanthraquinones/ antracen,cácdẫnxuấtcủanaphthalen,tannin,mộtsốa c i d hữuc ơ,rumicin,c c chấtd ầuvàclor ophyl[4].Trongrễvàláchútchítcóantraglucozit.Tỷlệantraglucozittồnphầntrungbìnhlà3% -3,4%trongđócóchừng0,47%ởdạngtựdovà2,54%ởdạngkếthợp[3,4,10] Bảng1.1.Thànhphầncáchợpchất chínhđãbiếttrongcácphầncủachiRumex Lồi Quả Rễ Tổnglượngchất Đơnvị:mg/gchấtkhơ R.acetosa R acetosella 0,83 1,59 3,76 6,18 12,93 1,10 3,66 17,69 R confertus 0,52 0,67 163,42 164,61 R crispus 0,39 2,40 25,22 28,01 R.hydrolapathum 0,39 0,89 1,02 2,30 R obtusifolius 0,26 19,91 14,71 34,88 Trongsốc c chấtđượct ì m thấytrongRumexcrispus,bốnhoạtchấtcókhảnăngkhángn ấmquantrọnglà:chrysophanol,parietin,nepodin,emodin.Thànhphần củacáchoạtchấtnày trongcâythayđổi theođiềukiệntựnhiênvàđiềukiệngieo trồng(bảng1) [4,5,7] Trongcâychútchít,phầnrễlàphầnquantrọngnhất,cácchấtcóhoạttínhsinhhọccóhàmlượngcaotro ngrễ(bảng1).Chínhvìvậy,cácnghiêncứuvềhoạttínhsinhhọcvàchiếtt c h chủyếutậptrungvàođ ốitượnglàrễcâychútchit[17,18,19] OH O OH OH H 3C O OH OH CH3 O Emodin: O 1,3,8-Trihydroxy-6-methyl-9,10anthracenedion Chrysophanol: Kếttinhhìnhkim,màuvàngtớinâuv n g Mp.266-268 C OH O OH 1,8-Dihydroxy-3-methyl-9,10anthracenedion Kếttinhdạngmảnh,màuvàngMp 200–201 C OH O OH CH H 3C O COOH O Parietin(physcion): O Rhein: Kếttinhhình kim Mp.321 C 1,8-Dihydroxy-3-methoxy-6methylanthraquinon Kếttinhhìnhkim,màuvàngcamMp 209–210 C OH OH O C OH O OH OH 2-Acetyl-3-methyl-1,8-naphthalenediol CH2OH CH2OH KếttinhhìnhkimM p.164–165 C O CH3 CH Nepodin: OH Aloeemodin O H - - CH2OH O OH OH OH Barbaloin(aloin ) 1.3 Hoạttínhsinh học củamột sốhợpchấtchínhtrongRumex Mộtvàinghiên cứuchỉra,cao dịchchiếttừRumex crispuscóhoạttínhchống vitrùng,chốnglạikhuẩntụcầu,khuẩnhìnhque,khánglạihoạtđộngcủacácvikhuẩng r a m (+) vàgram(-)[4] Năm2004,JinCheolKimcùngcáccộngsựtạiviệncơngnghệhốhọcHànQuốcKrictcủaHànQuốcđãcơngbố nghiêncứuthửhoạttínhkhángnấmcủamộtsốhoạtchấtđượccơ lậptừrễcủaRumexcrispus.K ếtquảchothấyRumexcrispuschohiệuquảdiệtnấmtốt,đặchiệuvớiloạibệnhnấmmốctrên đậuHàLan,lúamạchvàdưachuột.Ngồir a cũngtácdụngt ớic c loạin ấmmốcgâybệnhnhư M.grisea,C.sasaki,B.cinerea,P.recondite,B.graminis f.spởlúavàkhoai tây [11, 12, 13] CácnhànghiêncứuHànQuốcđãchỉrarằngtrongrễcủaRumexcrispuschứaba chấtkhángnấmquan trọnglà:chrysophanol, hoạt parietin, nepodin.Cácchấtnàycókhảnăngkiểmsốthoạtđộngsốngtrongcâychốnglạisựpháttriểncủas áuloạinấm,g i ảmsựphátsinhcủan ấmmốc.Cácphépthửtrêndịchchiếtnhexan,ethylaxetat,butanol,nướcchothấychúngđềucótácdụngtrênmộtsốnấmgâybệnhởcác mứcđộkhácnhaudosựphânbốcáchoạtchấtchínhtrongdungmơikhácnhau.Kếtquảthửhoạttí nhchothấylớpchiếtn-hexanmanghoạttínhcaonhất,tiếptheolàethylaxetat(bảng1.2)[3,4] Bảng1.2.Khảnăng khángnấmcủadịchchiết rễRumexcrispusđược chiết bằngdungmơikhácnhau Lớpdung Nồngđộ mơi dịchchiết (µg/ml) Khảnăng kiểmsốt bệnh RCB c RSB TGM TLB WLR BPM 99±0,9a 100a n-Hexan 2000 65±12ab 0a 60±5,6b 25±13a Etyl axetat 2000 75±9,8a 0a 70±4,5a 0b Butanol 2000 65±8,9ab 0a 10±4,5c 0b 7±11c 62±61c Nước 2000 10±13c 0a 0d 0b 0d 5±4,6d 83±5,2b 73±8,6b a Câyđãbịtruyềnmầmbệnhmộtngàysau khiđemphundịchchiếtlênlá; b Mỗi giátrịđạidiệnđãđượcđánh giá sựsaikhác vớiđộtincậy95%; - -