(Luận văn) nghiên cứu tính ổn định của vắc xin mẫu chuẩn sử dụng trong đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào

BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu an n va to p ie gh tn Trần Ngọc Nhơn oa nl w NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN d SỬ DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU VẮC XIN nf va an lu HO GÀ VÔ BÀO lm ul z at nh oi LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z m co l gm @ an Lu Hà Nội - 2021 n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu an Trần Ngọc Nhơn n va SỬ DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU VẮC XIN ie gh tn to NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN p HO GÀ VÔ BÀO d oa nl w nf va an lu Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z at nh oi lm ul NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC z gm @ m co l PGS.TS Nguyễn Thị Lan Phƣơng an Lu Hà Nội - 2021 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận v n Th c s “Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vơ bào” cơng trình nghiên cứu riêng cá nh n nh m nghiên cứu hông chép Do nh m nghiên cứu tự nghiên cứu đọc, dịch tài liệu, tổng hợp thực Nội dung lý thuyết luận v n c sử dụng số tài liệu tham khảo nhƣ trình bày phần tài liệu tham khảo Các số liệu, chƣơng trình phần mềm kết luận v n trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình hác lu Tơi xin hồn toàn chịu trách nhiệm trƣớc Học viện Khoa học Công nghệ phát sai ph m hay chép đề tài này! an n va to gh tn Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2021 p ie Học viên oa nl w d Trần Ngọc Nhơn nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si LỜI CẢM ƠN Lời cho phép ch n thành cảm ơn đến PGS.TS Nguyễn Thị Lan Phƣơng, ngƣời thầy tận t m hƣớng dẫn giúp đỡ suốt q trình hồn thành luận v n Tơi xin ch n thành cảm ơn Viện trƣởng TS Dƣơng Hữu Thái quan t m t o điều kiện cho tơi suốt q trình học tập làm luận v n t i viện IV C Cảm ơn b n đồng nghiệp Khoa Mẫu chuẩn Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế (NICVB), phòng Kiểm Định (IVAC) hợp tác giúp đỡ cho tơi q trình nghiên cứu lu Tơi xin ch n thành cảm ơn Ban lãnh đ o Học viện Khoa học Cơng nghệ Phịng Đào t o Khoa Công nghệ Sinh học quý thầy cô d y dỗ t o điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực luận v n an n va Tôi xin ch n thành cảm ơn! p ie gh tn to Cuối xin cảm ơn gia đình ln động viên tơi suốt thời gian qua w oa nl Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2021 d Học viên nf va an lu lm ul Trần Ngọc Nhơn z at nh oi z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết đầy đủ Ý ngh a STT Chữ viết tắt 01 CV 02 DĐVN 03 DPT 04 ĐVMD 05 FHA Filametous Haemagglutinin 06 GMP Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt International unit Đơn vị quốc tế Institute of Vaccines and Medical Biologicals Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Độ biến thiên Coefficient of variation Dƣợc điển Việt Nam Diptheria – Pertussis – Tetanus B ch hầu – Ho gà – Uốn ván lu Đơn vị miễn dịch an n va ie gh tn to IU p 07 nl w 08 09 MCQG 10 MCQT Mẫu chuẩn quốc tế 11 NICVB Viện Kiểm định Quốc National Institute for Control gia Vắc xin Sinh of Vaccines and Biologicals phẩm Y tế 12 PT 13 PTN Phịng thí nghiệm 14 SD Standard Deviation d oa IVAC nf va an lu Mẫu chuẩn quốc gia z at nh oi lm ul z co l gm @ Pertussis Toxin m Độ lệch chuẩn an Lu n va ac th si 15 TCMR Tiêm chủng Mở rộng 16 VXMC Vắc xin mẫu chuẩn 17 VXMT Vắc xin mẫu thử 18 WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Công thức pha chế 1800 ml VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 hấp phụ .22 Bảng 2.1 Tiêu chuẩn dự kiến VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 24 Bảng 3.1 Kết nhận d ng háng nguyên FH PT mẫu vắc xin RaP01 .43 Bảng 3.2 Kết kiểm tra cảm quan tính chất vật lý vắc xin RaP01 45 Bảng 3.3 Kết kiểm tra tính chất vật lý vắc xin ho gà vô bào RaP01 .48 lu Bảng 3.4 Kết kiểm tra tiêu h a học vắc xin RaP01 49 an n va Bảng 3.5 Kết xác định đặc tính háng nguyên vắc xin RaP01 50 tn to Bảng 3.6 Kết xác định ĐVMD vắc xin RaP01 t i IVAC 51 ie gh Bảng Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) 54 p Bảng Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ 5°C ± 3°C .55 d oa nl w Bảng 3.9 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 -40°C ± 2°C 56 nf va an lu Bảng 3.10 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 5°C ± 3°C 57 lm ul Bảng 11 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 25°C ± 2°C .58 z at nh oi Bảng 12 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 37°C ± 2°C .58 Bảng 13 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 45°C ± 2°C .59 z Bảng 3.14 Kết công hiệu RaP01 t i thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 45°C ± 2°C .60 m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Khuẩn l c Bordetella Pertussis mơi trƣờng Bordert Gengou Hình Cấu trúc háng nguyên vi huẩn Bordetella pertussis Hình Ho gà mức độ bao phủ tiêm vắc xin DPT3, Việt Nam, 12 Hình Bản đồ tỷ lệ tiêm vắc xin ho gà trẻ n m 2019 12 Hình Tỷ lệ tiêm chủng mũi vắc xin ho gà toàn giới n m 1980 – 2019 13 Hình Sơ đồ t m tắt quy trình sản xuất VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 23 lu an Hình 2.1 VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đƣợc sản xuất t i IVAC 24 n va Hình 2 Sơ đồ tổng quát nghiên cứu 27 tn to Hình Kết kiểm tra vô trùng mẫu RaP01 42 p ie gh Hình Kết sau nhuộm thí nghiệm nhận d ng háng nguyên PT FH mẫu vắc xin RaP01 42 oa nl w Hình 3 T ng trọng trung bình chuột nhắt thử nghiệm an toàn chung VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 44 d Hình T ng trọng trung bình chuột lang thử nghiệm an tồn chung VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 44 an lu nf va Hình VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đơng hơ 46 lm ul Hình Độ ẩm tồn dƣ ống vắc xin RaP01 đông hô 47 z at nh oi Hình Khối lƣợng hơ ống vắc xin RaP01 đơng hơ 47 Hình Số ĐVMD trung bình ống vắc xin ho gà RaP01 đông hô chuẩn độ t i IV C NICVB 53 z l gm @ Hình Đồ thị biểu diễn công hiệu VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 -40°C ± 2°C 54 co Hình 10 Đồ thị biểu diễn công hiệu mẫu chuẩn RaP01 5°C ± 3°C 55 m Hình 11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc công hiệu RaP01 bảo quản nhiệt độ 45°C ± 2°C theo tuần 60 an Lu n va ac th si MỤC LỤC LỜI C M ĐO N LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỤC LỤC MỞ ĐẦU lu CHƢƠNG T NG QU N TÀI LIỆU an va 1 T NG QU N VỀ BỆNH HO GÀ n 1 Tác nh n g y bệnh chế bệnh sinh gh tn to 1.1.1.1 Vi khuẩn ho gà p ie 1 Các yếu tố độc lực háng nguyên bảo vệ w 1 Cơ chế bệnh sinh 10 oa nl 1 Đƣờng l y dịch tễ học bệnh Ho gà 11 d 1.2 VẮC XIN HO GÀ 12 lu nf va an 1.2.1 Miễn dịch bảo vệ ho gà 12 2 Các lo i vắc xin ho gà 13 lm ul 1.2.3 Thử nghiệm xác định công hiệu ho gà 15 z at nh oi 1.2.4 Vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 16 1.2.4.1 Mẫu chuẩn quốc tế vắc xin ho gà vô bào 16 z 1.2.4.2 Nhu cầu tính cần thiết vắc xin mẫu chuẩn quốc gia 16 @ l gm Đặc điểm vắc xin mẫu chuẩn quốc gia 17 4 Đánh giá chất lƣợng vắc xin mẫu chuẩn 18 co m 1.2.4.5 Chuẩn định với mẫu chuẩn quốc tế 19 an Lu Đánh giá tính ổn định 19 n va ac th si 1.2.5 Sản xuất vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia 21 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHI N CỨU 24 ĐỐI TƢỢNG NGHI N CỨU 24 2.2 VẬT LIỆU NGHI N CỨU 25 2 Động vật thí nghiệm 25 2.2.2 Sinh phẩm – h a chất 25 2.2.3 Dụng cụ - thiết bị 26 PHƢƠNG PHÁP 27 lu Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 27 an Phƣơng pháp xác định đặc tính ỹ thuật 28 va n Phƣơng pháp iểm tra vô trùng 28 gh tn to 2 Phƣơng pháp iểm tra nhận d ng háng nguyên PT FH 28 p ie 3 Phƣơng pháp iểm tra an toàn chung 29 w Phƣơng pháp iểm tra cảm quan tính chất vật lý 29 oa nl Phƣơng pháp iểm tra tiêu h a học 31 d 2.3.2.6 Kiểm tra đặc tính háng nguyên 35 lu nf va an 3 Phƣơng pháp xác định đơn vị miễn dịch ống vắc xin mẫu chuẩn (nối chuẩn) 38 z at nh oi lm ul Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 39 Nghiên cứu tính ổn định nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) 39 z Nghiên cứu tính ổn định dải nhiệt độ cao nhiệt độ bảo quản 39 gm @ 2.3.5 Dự đoán tuổi thọ sản phẩm theo nguyên lý Vant-Hoff 39 l m co Phƣơng pháp xử lý số liệu 40 an Lu CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 41 n va ac th si 52 13 81,40 50,7 - 152,8 14 70,00 42,24 - 130 15 48,60 34,3 - 87,24 16 79,20 49,61 - 148,4 17 65,75 42,75 - 121,52 18 51,00 35,5 - 92,54 67,71 45,64 - 121,84 lu GM an 13,62 n va SD tn to p ie gh Qua lần chuẩn độ với mẫu chuẩn JNIH-3 thu đƣợc 18 số liệu cho kết số ĐVMD ống vắc xin ho gà RaP01 đông hô đ t trung bình 67,71 IU/ống giá trị thấp 48 60 IU/ống cao 85 23 IU/ống; SD = 13,62 IU, khoảng GM ± 2SD từ 45,64 – 121,84 IU oa nl w d Trong hi đ t i NICVB, kết chuẩn độ ĐVMD vắc xin ho gà RaP01 với lần thực so sánh với mẫu chuẩn JNIH-3 c giá trị trung bình 76 28 IU/ống Kết chuẩn độ NICVB cho thấy tất lần chuẩn độ c giá trị công hiệu nằm khoảng GM ± 2SD (24,55 – 128,01 IU) với SD = 25,866 IU nf va an lu z at nh oi lm ul z Nhìn chung tất ết chuẩn độ t i IV C NICVB cho giá trị ĐVMD ống vắc xin RaP01 cao 34 IU/ống dù đƣợc tính đến khoảng dao động GM ± 2SD Giá trị trung bình ĐVMD vắc xin RaP01 chuẩn độ t i NICVB cao so với kết chuẩn độ t i IV C nhƣng mức độ dao động cao thể qua SD CV lần thực (Hình 8) m co l gm @ an Lu n va ac th si 53 lu an n va Từ ết chuẩn độ nối chuẩn với MCQT PTN (IV C p ie gh tn to Hình 3.8 Số ĐVMD trung bình ống vắc xin ho gà RaP01 đông hô chuẩn độ t i IV C NICVB w NICVB), ĐVMD VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đƣợc xử lý thống oa nl ê công bố 72 IU/ống (theo định số 612/QĐ-KĐQG) d 3.3 KẾT QUẢ NGHI N CỨU TÍNH N ĐỊNH CỦA VẮC XIN HO GÀ RaP01 lu nf va an 3.3.1 Tính ổn định nhiệt độ bảo quản 3.3.1.1 Tính ổn định cơng hiệu nhiệt độ -40°C ± 2°C 5°C ± 3°C lm ul Ở nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C vắc xin RaP01 đƣợc theo dõi công z at nh oi hiệu t i mốc thời gian tháng tháng tháng tháng tháng Kết đƣợc bảng 3.7 z m co l gm @ an Lu n va ac th si 54 Bảng 3.7 Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) ĐVMD (IU/ống) TB Mẫu Mẫu Mẫu (IU/ống) 72,54 74,52 73,56 77,56 74,25 68,50 lu Thời gian (tháng) an CV% 73,54 0,99 1,3 76,54 76,12 1,7 2,2 76,58 78,56 74,55 5,3 7,1 75,25 72,34 71,45 73,01 2,0 2,7 74,58 76,54 68,54 73,22 4,2 5,7 n va SD p ie gh tn to 90.000 85.000 oa nl w 80.000 74.547 73.013 73.220 nf va an 75.000 lu IU/ống d 76.117 73.540 70.000 60.000 z at nh oi lm ul 65.000 z Tháng @ co l gm Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn công hiệu VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 -40°C ± 2°C m Nhƣ nhiệt độ -40°C ± 2°C sau tháng công hiệu vắc xin hông thay đổi, so với số ĐVMD ống VXMC dự tuyển ho gà an Lu n va ac th si 55 vô bào RaP01 đƣợc công nhận (72 IU/ống) Sự dao động ết đánh giá tính ổn định công hiệu vắc xin -40°C ± 2°C (73 ± 4,2 IU/ống) giới h n phép đo Đối với vắc xin đông hô nhiệt độ 5°C ± 3°C đƣợc coi nhiệt độ bảo quản VXMC thời gian ngắn h n Nghiên cứu độ ổn định công hiệu vắc xin RaP01 đƣợc thực t i mốc thời gian tuần, tuần 12 tuần Kết đƣợc bảng 3.8 Bảng 3.8 Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ 5°C ± 3°C ĐVMD (IU/ống) Thời gian TB CV% an Mẫu Mẫu Mẫu (IU/ống) 74,80 67,74 71,18 71,24 3,5 5,0 72,68 70,35 67,26 70,10 2,7 4,0 69,50 67,26 69,24 68,67 1,2 1,8 n va (tuần) p lu SD ie gh tn to d oa nl w 12 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn công hiệu mẫu chuẩn RaP01 5°C ± 3°C n va ac th si 56 Kết bảng 3.8 cho thấy với nhiệt độ 5°C ± 3°C công hiệu vắc xin c xu hƣớng giảm nhẹ theo thời gian Sau tuần công hiệu trung bình 71,24 ± 3,53 IU/ống tƣơng đƣơng 98 5% Sau tuần cơng hiệu sụt giảm cịn 70,10 ± 2,72 IU/ống, giảm 97% sau 12 tuần cơng hiệu cịn 68 67 ± 1,23 IU/ống, giảm cịn 95% so với giá trị cơng hiệu ban đầu nhiệt độ bảo quản Nhƣ sau tuần bảo quản nhiệt độ ± 3°C giá trị cơng hiệu giảm 5% so với ban đầu (hình 9) 3.3.1.2 Tính ổn định cảm quan tính chất vật lý vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản lu Bảng 3.9 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 -40°C ± 2°C an va Thời gian bảo quản nhiệt độ -40oC n Chỉ tiêu tháng p ie gh tn to Tiêu chuẩn đánh giá tháng tháng tháng tháng Cảm quan d oa nl w D ng bánh bong hông teo Không Không Không Khơng Khơng sau hồn ngun thay thay thay thay thay t o hỗn dịch đổi đổi đổi đổi đổi đồng màu trắng đục nf va an lu ≤3 Độ hấp phụ (%) ≥ 80 Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) ≤ 60 gi y 2,32 2,45 z at nh oi lm ul Độ ẩm tồn dƣ (%) 85,25 86,48 2,34 2,75 84,50 81,57 82,46 45 54 z 2,56 50 m co 45 l gm @ 40 an Lu n va ac th si 57 Nhƣ thời gian theo dõi tháng nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C VXMC RaP01 đ t tiêu cảm quan tính chất vật lý so với tiêu chuẩn Bảng 3.10 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 5°C ± 3°C Thời gian bảo quản nhiệt độ 5oC ± 3oC Chỉ tiêu Tiêu chuẩn đánh giá lu an n va Cảm quan tuần 12 tuần D ng bánh bong hơng teo sau hồn ngun t o hỗn dịch đồng nhất, màu trắng đục Không thay đổi Không thay đổi Không thay đổi ≤3 2,48 2,76 2,84 ≥ 80 81,25 82,48 82,35 50 45 55 ie gh tn to tuần p Độ ẩm tồn dƣ (%) nf va an lu ≤ 60 gi y z at nh oi lm ul Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) d oa nl w Độ hấp phụ (%) z @ m co l gm Ở nhiệt độ bảo quản 5°C ± 3°C đặc tính cảm quan tính chất vật lý VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn 12 tuần an Lu n va ac th si 58 3.3.2 Tính ổn định nhiệt độ thúc đẩy nhanh dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 3.3.2.1 Tính ổn định nhiệt độ 25°C ± 2°C; 37°C ± 2°C 45°C ± 2°C lu Tính ổn định vắc xin RaP01 dải nhiệt độ cao nhiệt độ bảo quản đƣợc đánh giá thông qua tiêu vắc xin đ công hiệu độ hấp phụ tốc độ t o huyền dịch đồng Ở nhiệt độ 25°C ± 2°C, 37°C ± 2°C thời gian đánh giá 12 tuần với khoảng cách tuần lần Trong đ nhiệt độ 45°C ± 2°C vắc xin đƣợc theo dõi thời gian ngắn nhƣng với khoảng cách dày (1 tuần, tuần, tuần tuần) Kết đánh giá tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ thúc đẩy nhanh đƣợc bảng 3.11, 12 13 an n va gh tn to Bảng 3.11 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 25°C ± 2°C Thời gian ie tuần tuần 12 tuần 32,87 31,82 29,69 60,5 50,4 40,6 42 46 49 p Kết oa nl w Công hiệu (IU/ống) d Độ hấp phụ (%) lu nf va an Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) lm ul Bảng 3.12 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 37°C ± 2°C Kết z at nh oi Thời gian tuần 12 tuần 29,51 25,06 z tuần 60,5 45 50 m 40 40,6 co an Lu Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) 50,6 l Độ hấp phụ (%) gm 31,20 @ Công hiệu (IU/ống) n va ac th si 59 Bảng 3.13 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 45°C ± 2°C Thời gian tuần tuần tuần tuần Công hiệu (IU/ống) 42,21 32,02 24,00 10,42 Độ hấp phụ (%) 60,5 50,5 44,5 38,4 44 48 50 55 Kết lu Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) an n va p ie gh tn to Nhƣ nhiệt độ cao hơn, vắc xin RaP01 c sụt giảm đồng tiêu công hiệu độ hấp phụ Đánh giá cảm quan d ng đông hô vắc xin cho thấy hơng c thay đổi hình d ng màu sắc Tuy nhiên số tốc độ t o huyền dịch đồng bị éo dài so với ban đầu, so với vắc xin bảo quản ở nhiệt độ thấp d oa nl w Kết cho thấy nhiệt độ cao hơng thích hợp để bảo quản vắc xin thời gian tuần 37°C 25°C nf va an lu 3.3.2.2 Dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 z at nh oi lm ul Tuổi thọ vắc xin bảo quản điều kiện định đ phải đƣợc xác định theo thời gian thực Tuy nhiên VXMC thƣờng đƣợc sản xuất với mục đích sử dụng l u dài tối thiểu 10 n m việc xác định tuổi thọ n điều hơng thực tế Tuy nhiên việc dự đốn tuổi thọ vắc xin c thể thực dựa sụt giảm ho t tính hi để vắc xin điều kiện giáng h a cấp tốc nhƣ nhiệt độ cao z gm @ m co l Trong nghiên cứu dựa vào ết công hiệu vắc xin RaP01 hi đặt nhiệt độ 45°C ± 2°C tuần chúng tơi thiết lập phƣơng trình để tính tốn tuổi thọ dự đoán vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản - 40°C ± 2°C Kết đƣợc trình bày bảng 3.14 an Lu n va ac th si 60 Bảng 3.14 Kết công hiệu RaP01 t i thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 45°C ± 2°C STT Thời gian ủ mẫu (tuần) Công hiệu (IU/ống) 1 42,21 2 32,02 24,00 10,42 lu an n va p ie gh tn to Từ kết công hiệu thiết lập đƣợc phƣơng trình hồi quy tuyến tính biểu thị mối tƣơng quan thời gian bảo quản cơng hiệu nhƣ đƣợc hình 11 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc công hiệu RaP01 bảo quản nhiệt độ 45°C ± 2°C theo tuần gm @ m R2 = 959: đ t yêu cầu tính hồi quy co l Phƣơng trình hồi quy thu đƣợc: Y= -6.084*X +45.41 an Lu n va ac th si 61 Dựa vào phƣơng trình hồi quy ta tính đƣợc thời điểm mà t i đ hiệu cịn 50%: cơng 36,16 - 45,41 X= = 1,52 (tuần) - 6,084 Tuổi thọ dự đoán điều kiện bảo quản -40°C: C = × X = 28 5×1 52 = 550.44 (tuần) tƣơng đƣơng 10 59 n m Nhƣ với phƣơng pháp theo dõi điều kiện bảo quản lão h a cấp tốc ta xác định đƣợc tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên cứu 10 59 n m lu an n va ie gh tn to Tuổi thọ dự đoán theo phƣơng pháp hơng phản ánh xác số tuổi thọ thực mẫu c chất sinh học nhƣng n phản ánh tƣơng đối tuổi thọ mẫu nghiên cứu Kết cho thấy tuổi thọ dự đoán mẫu chuẩn RaP01 cao p Do đ từ kết ết luận mẫu chuẩn RaP01 c tuổi thọ phù hợp yêu cầu đƣa 10 n m w d oa nl Tuy nhiên biến đổi chất c chất sinh học phụ thuộc vào biến đổi nhiệt độ thấp so với chất c chất h a học nên phƣơng pháp thúc đẩy nhiệt để dự đoán tuổi thọ VXMC c độ xác hơng cao Do đ phải tiếp tục giám sát công hiệu VXMC dự tuyển RaP01 điều kiện bảo quản thƣờng (-40°C) theo thời gian Việc chọn thời điểm giám sát c thể dựa vào ph n tích xu hƣớng theo mốc thời gian định kỳ cụ thể Nghiên cứu chƣa xác định đƣợc giai đo n mẫu chuẩn bắt đầu giảm công hiệu liên tục Đ y giai đo n quan trọng hi bƣớc vào giai đo n độ ổn định công hiệu mẫu chuẩn thấp hơng cịn đủ tin cậy để đƣa vào thử nghiệm mẫu chuẩn phải hủy bỏ nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 62 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN (1) VXMC ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn chất lƣợng dự kiến tiêu vơ huẩn, an tồn chung cảm quan tính chất vật lý h a học đặc tính háng ngun cơng hiệu đủ tiêu chuẩn dự tuyển cho MCQG (2) ĐVMD VXMC ho gà vô bào RaP01 đƣợc xác định t i IV C 67,71 IU/ống t i NICVB 76 28 IU/ống Vắc xin RaP01 đƣợc công nhận mẫu chuẩn ho gà vô bào quốc gia c số ĐVMD 72 IU/ống lu an n va p ie gh tn to (3) VXMC ho gà vô bào quốc gia RaP01 đảm bảo đƣợc độ ổn định chất lƣợng nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C thời gian theo dõi tháng nhiệt độ 5°C ± 3°C thời gian theo dõi 12 tuần Nghiên cứu thúc đẩy nhanh nhiệt độ 25°C ± 2°C 37°C ± 2°C cho thấy thời gian lƣu trữ hông tuần Tuổi thọ VXMC ho gà vô bào quốc gia RaP01 đƣợc dự đoán 10 n m nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C nl w 4.2 KIẾN NGHỊ d oa (1) Giám sát ho t tính miễn dịch tính ổn định mẫu chuẩn thơng qua q trình bảo quản sử dụng Thông báo phối hợp với NICVB tái chuẩn định ĐVMD hi c thay đổi c ảnh hƣởng đến chất lƣợng mẫu chuẩn nf va an lu lm ul z at nh oi (2) Nghiên cứu mở rộng mục đích sử dụng mẫu chuẩn RaP01 thử nghiệm huyết học (Mouse Immunogenicity Test - MIT), phƣơng pháp đánh giá tính sinh miễn dịch vắc xin ho gà vô bào c thể thay cho thử nghiệm thử thách chuột z m co l gm @ an Lu n va ac th si 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Lan Phƣơng 2008, Xây dựng phương pháp đánh giá kháng nguyên ngoại nội độc tố vắc xin ho gà - Đề xuất tiêu chuẩn sản xuất vắc xin ho gà an toàn cao Viện Vắc xin Nha Trang, Luận án tiến s y học Đặng Đức Tr ch cộng 1992 Vi sinh vật y học, Nhà xuất y học Hà Nội tr 97-101 Lê V n Phủng 2009 Vi khuẩn y học, Nhà xuất giáo dục Việt Nam tr 350-353 lu an Lê V n Hiệp, 2004, Công nghệ sản xuất vắc xin ho gà, Miễn dịch công nghệ Nhà xuất y học Hà Nội John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and diagnostic laboratory immunology, pp 464-470 n va p ie gh tn to Biken-JICA, Text book of Diphtheria – Pertussis – Tetanus combined vaccine, Biological products technology course 6/1992-3/1993 WHO, 1993, The immunological basis for Immunization series – modul 4: Pertussis, WHO/EPI/GEN93.14 WHO, 2004, Global Immunization data, pp 1-3 Viện Vệ sinh Dịch Tễ Trung Ƣơng Cục Y Tế Dự phòng Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm n m 2010 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul 10 Bộ Y tế, 2015, Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm z l gm @ 11 WHO, 2020, Progress Towards Global Immunization Goals - 2019: Summary presentation of key indicators m co 12 Granstrom M., 2011, The History of Pertussis Vaccination: From Whole -Cell to Subunit Vaccines, pp 73-82 an Lu n va ac th si 64 13 World Health Organization, 2013, Expert Committee on Biological Standardization, WHO TRS 979, annex 4, pp 11-22 14 John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and diagnostic laboratory immunology, pp 464-470 15 World Health Organization, 2011, WHO manual for the Establishment of national and other secondary standards for vaccines WHO_IVB_11.03 _eng.pdf lu 16 World Health Organization, 2006, Guidelines on stability evaluation of vaccines, WHO TRS No 962 annex an n va gh tn to 17 ECBS Expert Committee on Biological Standardization, 2015, Guidelines on the stability evaluation of vaccines for use under extended controlled temperature conditions, Geneva p ie 18 World Health Organization, 2016, Guidelines on stability evaluation of vacciens for use under extended controlled temperature conditions, WHO TRS No 999 annex 5, WHO Geneva nl w d oa 19 Đỗ Khánh Linh, 2016, Xác định tính khả dụng Vắc xin bạch hầu đông khô RD6 dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia, Luận v n Th c s Công nghệ sinh học nf va an lu z at nh oi lm ul 20 Đoàn Hữu Thiển, Sản xuất đánh giá chất lƣợng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vơ bào Tạp chí Khoa hoc Kiểm định Vắc xin Sinh phẩm Y tế (11/2021), tr 22-31 z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC Phụ lục 1: Quyết định cho phép sử dụng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vô bào lần thứ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ lục Hƣớng dẫn sử dụng vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào lần thứ nhất, mã số MCQG aP.01 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si