(Luận văn) nghiên cứu tạo hạt nano polymer bọc alpha mangostin và bước đầu đánh giá hoạt tính kháng ung thư in virtro của hạt tạo được

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ***** NGUYỄN TRUNG HỢP lu “NGHIÊN CỨU TẠO HẠT NANO POLYMER an n va BỌC ALPHA- MANGOSTIN VÀ BƯỚC ĐẦU gh tn to ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ IN p ie VITRO CỦA HẠT TẠO ĐƯỢC’’ oa nl w Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm d Mã số: 60 42 01 14 ll u nf va an lu oi m LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC z at nh z Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN THỊ MAI PHƯƠNG m co l gm @ an Lu HÀ NỘI - 2017 n va ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện luận văn khoa học, đã nhận được nhiều sự giúp đỡ, khích lệ và động viên Thầy, Cô giáo, bạn đồng nghiệp, bạn bè người thân gia đình Qua đây, xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc mình đến cá nhân tập thể đã hết lòng giúp đỡ để tơi có thể hoàn thành bản ḷn văn này Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn lu Thị Mai Phương, phòng Sinh hóa Thực vật, Viện Công nghệ sinh học, Viện an va Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam đã tận tình hướng dẫn, tạo mọi n điều kiện tốt để tơi có thể tìm hiểu, nâng cao kiến thức suốt quá Tôi xin cảm ơn Đảng ủy, lãnh đạo, huy cán bợ phịng Kỹ tḥt p ie gh tn to trình học tập, thực hiện nghiên cứu hoàn thiện bản ḷn văn này w hình sự - Cơng an thành phố Hà Nội đã tạo điều kiện giúp đỡ thời oa nl gian học d Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình thân yêu, bạn bè, người thân lu nf va an đồng nghiệp - người đã luôn bên tôi, động viên, khích lệ và là chỗ dựa vững chắc cho suốt quá trình học tập và nghiên cứu z at nh oi lm ul Hà Nội, tháng năm 2017 Học viên z co l gm @ m Nguyễn Trung Hợp an Lu CÁC THUẬT NGỮ VIẾT TẮT va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp lu an Alpha – magostin DLS Dynamic light scattering EPS Exopolysaccharide FESEM Field emission scanning electron microscopy HPLC High performance liquid chromatography NMG Nanomagostin NMR Nuclear magnetic resonance TLC Thin layer chromatography DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s media n va AMG gh tn to Fetal Bovine Serum p ie FBS d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu MỤC LỤC MỞ ĐẦU va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh học ung thư 1.1.1 Các giai đoạn phát triển bệnh ung thư 10 1.1.2 Nguyên nhân gây ung thư 11 1.1.3 Các liệu pháp điều trị ung thư 11 1.1.4 Tình hình bệnh ung thư giới Việt Nam 13 1.2 Công nghệ nano ứng dụng 15 1.2.1 Hệ dẫn thuốc cấu trúc nano 16 1.2.2 Đặc điểm hạt nano 17 lu 1.2.3 Nghiên cứu về vật liệu nano phục vụ y học Viêt Nam 18 an va 1.3 Khái quát về β-cyclodextrin 19 n 1.3.1 Cấu trúc β-cyclodextrin 19 to 1.3.3 Ứng dụng β-cyclodextrin 22 p ie gh tn 1.3.2 Tính chất β-cyclodextrin 20 nl w 1.4 Alpha-mangostin, chất kháng ung thư tiềm từ vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) 23 d oa 1.4.1 Đặc điểm sinh học 23 an lu 1.4.2 Các chất xathone măng cụt 24 nf va 1.4.3 Tác dụng sinh học chất xanthone măng cụt 25 lm ul 1.4.4 Alpha- mangostin từ vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L) 27 z at nh oi 1.5 Ý tưởng nghiên cứu đề tài 28 Chương 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 29 z 2.1 Dòng tế bào ưng thư điều kiện nuôi 29 @ 2.2 Nguyên liệu thực vật 30 gm l 2.3 Hóa chất, thiết bị 30 m co 2.3.1 Hóa chất 30 an Lu 2.3.2 Thiết bị 30 2.4 Phương pháp nghiên cứu 31 va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp 2.4.1 Tinh AMG từ vỏ măng cụt 31 2.4.2 Tạo hạt nano polyme micelle bọc AMG (nanomangostin) đánh giá đặc trưng hạt 32 2.5 Hoạt tính gây đợc lên dòng tế bào ung thư phởi A549 33 2.6 Đánh giá thâm nhập hạt NMG vào tế bào 34 2.7 Đánh giá ảnh hưởng NMG đến kích thước nhân tế bào 34 2.8 Xử lý thống kê 34 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Nghiên cứu quy trình tinh AMG từ vỏ măng cụt 34 lu 3.1.1 Tách chiết phân đoạn có chứa AMG từ vỏ măng cụt 34 an 3.1.2 Tinh AMG từ vỏ măng cụt 37 va n 3.2 Chế tạo hạt nano polymer bọc mangostin (nanomangostin)-NMG 46 to 3.2.2 Tối ưu hóa thơng số tạo hạt NMG 48 ie gh tn 3.2.1 Tổng hợp hạt NMG 46 p KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 nl w KẾT LUẬN 56 d oa ĐỀ NGHỊ 57 an lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 nf va Tài liệu tiếng Việt 57 Tài liệu tiếng Anh 58 lm ul Ng̀n trích dẫn URL 61 z at nh oi DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỚ CỦA TÁC GIẢ 62 PHỤ LỤC 64 z m co l gm @ an Lu va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp DANH MỤC CÁC BẢNG SỬ DỤNG TRONG LUẬN VĂN Bảng Trang Bảng 1.1 Cơng thức hóa học mợt số xanthone có vỏ 24 măng cụt Bảng 3.1 Độ chế phẩm α-mangostine so với chất chuẩn 41 Bảng 3.2 Số liệu phân tích phở 1H 13C AMG đã tinh 43 Bảng 3.3 Đánh giá hiệu mang AMG chất nghiên cứu 48 lu Bảng 3.4 Ảnh hưởng tỉ lệ trộn chất mang β - cyclodextrin an 49 n va AMG lên thông số hạt p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp DANH MỤC CÁC HÌNH SỬ DỤNG TRONG LUẬN VĂN Hình Trang 15 Hình 1.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới hệ dẫn thuốc 16 Hình 1.3 Hình minh họa cấu trúc loại nano dẫn thuốc 17 Hình 1.4 Hình ảnh minh họa cấu trúc phân tử β-cyclodextrin 19 Hình 1.5 Quả măng cụt 23 Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo alpha – mangostin 27 lu Hình 1.1 Các ưu điểm hệ dẫn thuốc nano an n va 37 tn to Hình 3.1 Sắc ký đồ phân đoạn chiết vỏ măng cụt ethanol ie gh n-hexane sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng p Hình 3.2 Sắc ký đồ phân đoạn n-hexane sử dụng phương pháp sắc 38 oa nl w ký lớp mỏng d Hình 3.3 Sắc ký cột silica gel phân đoạn chiết n-hexane vỏ lu 39 nf va an măng cụt với hệ dung môi rửa chiết n-hexane: acetone theo tỉ lệ (3:1) lm ul Hình 3.4 A Sắc ký đờ AMG tinh từ vỏ măng cụt với hệ dung 40 môi hexane: acetone (3:1 v/v) z at nh oi Hình 3.4 B Sắc ký đờ AMG tinh từ vỏ măng cụt với hệ dung môi TEAF (5:3:1:1 v/v) 40 z @ Hình 3.5 Sắc ký đờ HPLC chất tinh sau qua cột sắc m co l gm ký silicagel đo máy Hitachi – DAD L2455 40 an Lu va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Hình 3.6 Phở Proton (A) 13C (B) chất AMG đo máy 42 NMR Bruker, Avance 500 Hình 3.7 Phở MS chất AMG đo máy LC-MS, Avance 44 500 Hình 3.8 Cấu trúc hóa học AMG (C24H26O6) 44 Hình 3.9 Sơ đờ qui trình tinh AMG từ vỏ măng cụt 45 Hình 3.10 Dung dịch NMG thu sử dụng chất mang β- lu 49 an cyclodextrin va 50 n Hình 3.11 Kích thước hạt NMG đo máy DLS tn to Hình 3.12 A Ảnh chụp FE-SEM hạt NMG ie gh 50 Hình 3.12 B Ảnh chụp kính hiển vi đồng tụ quét laser hạt NMG p 50 w Hình 3.13 Thế zeta hạt nanomangostin đo máy DLS 3.3 d oa nl 51 lu Hình 3.14 Hoạt tính gây đợc tế bào NMG tan nước lên an 52 nf va dòng tế bào ung thư A549 53 Hình 3.16 Hình thái nhân tế bào xử lý với AMG NMG 54 (A) (B) (C) z at nh oi lm ul Hình 3.15 Khả xâm nhập NMG vào tế bào ung thư phổi z m co l gm @ an Lu va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp MỞ ĐẦU Theo thống kê Bợ Y tế, hàng năm, Việt Nam có khoảng 150.000 200.000 người mắc bệnh ung thư khoảng 75.000 - 100.000 người tử vong bệnh Cơng bố tổ chức Y tế giới (WHO) 4/2014 cho thấy Việt Nam tḥc tḥc nhóm thứ hai quốc gia dẫn đầu về tỉ lệ mắc bệnh Phần lớn bệnh nhân ung thư Việt Nam (khoảng 70%) chỉ đến bệnh viện điều trị đã muộn, khiến cho hội chữa khỏi bệnh thấp Theo thống kê, tỷ lệ chữa khỏi bệnh ung thư Việt Nam 35% Ung thư lu an nguyên nhân thứ hai gây tử vong Việt Nam thực mối quan tâm va quốc gia n tn to Hiện nay, loại thuốc điều trị ung thư thường không mang lại hiệu ie gh mong muốn một số nguyên nhân tính hướng đích đặc hiệu chưa cao p hiệu thâm nhập khối u kém khả hòa tan thuốc thấp Đặc biệt, w thuốc tự nhiên sử dụng điều trị ung thư oa nl paclitaxel, doxorubixin, curcumin, có tính tan kém (ví dụ curcumin chỉ đạt d 0,001%), khả xâm nhập khối u cũng điều trị bệnh hạn chế lu nf va an Ứng dụng công nghệ nano vào y học cách dùng dạng vật liệu kích thước nano để tương tác với yếu tố sinh học mức tế bào hay xuống lm ul thấp cấp phân tử, ví dụ dẫn thuốc đến tế bào bệnh chẩn đoán z at nh oi bệnh mức phân tử đã chứng minh tăng tính sinh khả dụng, hướng đích, giảm liều dùng nhờ khả bảo vệ dược chất giảm thải trừ thuốc z thể @ gm Măng cụt (Garcinia mangostana L) thực vật trồng phổ biến l nước Đông Nam Á, có Việt Nam Vỏ chứa hàm lượng lớn m co chất xanthone (có thể đạt đến 0,2%), chất tḥc nhóm phenol, có an Lu nhiều đặc tính sinh học q Alpha-mangostin (AMG) mợt dẫn xuất xanthone tự nhiên phổ biến vỏ măng cụt Chất đã chứng va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp minh có khả kháng khuẩn, kháng nấm, kháng viêm ức chế phát triển dòng tế bào ung thư cao Phân tích in vitro cũng khẳng định chất ức chế tăng sinh tế bào ung thư ruột HT-29 với IC50 khoảng 6–12 μM đồng thời làm giảm biểu BcL-2 DNA β-catenin AMG cảm ứng apoptosis tế bào ung thư đã nhiều nghiên cứu khẳng định AMG đưa vào thể theo đường uống cũng làm giảm phát triển khối u chuột Các nghiên cứu gần Nguyen cộng [20] cho thấy AMG có khả ức chế có hiệu hình thành biofilm vi kh̉n gây sâu người Streptococcus mutans Ngoài ra, AMG còn có tác dụng ức chế lu hoạt tính enzyme HIV-1 protease với nồng độ IC50 khoảng 5,1 M Vì thế, an n va việc nghiên cứu ứng dụng chất đã thu hút quan tâm tn to nhiều nhà khoa học suốt một thập kỷ qua Tuy nhiên, cũng giống gh curcumin paclitaxel, khả hòa tan chất nước thấp (chỉ p ie đạt 0,0002%), đã hạn chế lớn hoạt tính sinh học Cho đến nay, w ngồi việc nghiên cứu tởng hợp dẫn suất để tăng cường tính oa nl tan hiệu tác dụng cũng đã bắt đầu xuất mợt số nghiên cứu d giới về việc nâng cao tính tan AMG sử dụng phương pháp tạo hạt nano lu nf va an (nanomangostin) để xử lý bệnh liên quan đến ung thư Các kết thu khả quan cần phải có nghiên cứu tiếp tục sâu lm ul nhằm tạo hệ hạt tối ưu, có tính sinh, khả dụng cao, có khả z at nh oi ứng dụng thực tiễn Đề tài luận văn nhằm tạo hạt nano polymer bọc mangostin z (nanomangostin) để làm tăng tính tan sinh khả dụng chất AMG, tạo @ co l gm sở để ứng dụng chúng xử lý bệnh ung thư m Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU an Lu 1.1 Bệnh học ung thư va n ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Các thông số vật lý hạt cũng đã kiểm tra cho kết sau:  Hình thái và kích thước hạt nanomangostin: Các thơng số xác định sử dụng máy DLS kính hiển vi điện tử quét phát xạ trường FESEM Kết đo máy DLS (Hình 3.10) cho thấy hạt NMG thu có kích thước đạt 50 nm với mật độ > 60% lu an n va ie gh tn to p Hình 3.11 Kích thước hạt NMG đo máy DLS w oa nl Kết chụp FE-SEM (Hình 3.12A) kính hiển vi đờng tụ quét d lasercũng cho thấy hạt NMG thu có kích thước < 50 nm có khả tự an lu phát quang màu xanh lục (green) bước sóng vùng 500-600 nm bị kích nf va thích vùng ánh sáng 400 nm (Hình 3.12B) Như vậy kết kích thước z at nh oi lm ul hạt NMG đo từ DLS phù hợp với kết FE-SEM z co l gm @ Hình 3.12B Ảnh chụp kính hiển vi đồng tụ quét laser hạt NMG m an Lu Hình 3.12A Ảnh chụp FE-SEM hạt NMG n va 50 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp  Xác định zeta Hạt NMG xác định điện tích bề mặt đo độ phân bố hạt sử dụng máy DLS Theo lý thuyết hạt zeta > - 40 mV bền Trong nghiên cứu này, zeta NMG đạt  -38 mV, gợi ý hạt NMG thu có đợ bền tốt (Hình 3.13) lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình 3.13 Thế zeta hạt NMG đo máy DLS 3.3 an lu 3.2.2.4 Hiệu bao gói hạt NMG nf va Hàm lượng AMG hạt xác định sử dụng hệ thống khối phổ LC- lm ul MS Các kết thu cho thấy NMG đã tởng hợp thành cơng có z at nh oi một đỉnh xuất với thời gian lưu (retention time) 25.3 - 25.6 cho NMG AMG (số liệu khơng trình bày) Hàm lượng AMG dung dịch hạt nano đạt 2,90  0,25 mg/ml Hiệu bao gói hạt AMG cũng xác z gm @ định dựa tỉ lệ hàm lượng AMG đo hạt NMG hàm lượng 3.2.2.5 Tác dụng kháng tế bào ung thư phổi A549 m co l NMG sử dụng để tổng hợp hạt Kết cho thấy hiệu bao gói đạt 74,3% an Lu Các nghiên cứu trước chúng tơi đã cho thấy AMG có tác dụng ức n va chế mạnh phát triển một số dòng tế bào ung thư, có dòng tế bào 51 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp ung thư phổi A549 [13] Để tìm hiểu xem liệu tương tác AMG với ßcyclodextrin có làm ảnh hưởng đến hoạt tính NMG hay khơng, hoạt tính gây đợc tế bào ung thư phổi A549 NMG đã kiểm tra nồng độ khác 0; 2,5; 5,0; 10; 20,0 μg/ml Các kết thu hình 3.14 cho thấy NMG thể hoạt tính gây đợc mạnh lên tế bào ung thư theo cách phụ thuộc nồng độ với giá trị IC50 đạt 4,86 µg/mL Giá trị IC50 ca AMG t 2,34 àg/ml Dung dich cht mang ò-cylodextrin cũng kiểm tra đợc tính dòng tế bào Kết cho thấy ß-cylodextrin khơng thể hoạt tính gây đợc (số liệu khơng trình bày) lu an p ie gh tn to A549 n va w oa nl Nờng độ AMG (µg/ml) d Hình 3.14 Hoạt tính gây độc tế bào NMG tan nước lên dòng tế bào lu nf va an ung thư A549 NMG () và AMG () Các tế bào ung thư (105 tế bào/ml) được xử lý với các nồng độ chất khác (NMG tan nước; AMG tan lm ul DMSO) z at nh oi Như vậy, NMG đã thể hoạt tính kháng ung thư in vitro gần tương tự với AMG tự tan DMSO Điều chứng tỏ NMG đã phân tán tốt z nước thể hoạt tính chất AMG Hoạt tính kháng tế bào ung thư @ l gm hạt nano mang chất tự nhiên cũng đã cơng bố, có chất tự nhiên curcumin, parlitaxel… [6, 8, 22, 29] Có thể thấy việc tạo hạt co m nano bọc chất tự nhiên hướng tiếp cận khả thi để tăng sinh khả dụng an Lu ứng dụng chúng n va 52 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp 3.2.2.6.Khả xâm nhập NMG vào tế bào ung thư phổi Kết quan sát phát quang AMG NMG tế bào ung thư đã xử lý với chất so với đối chứng bước sóng 485nm hình 3.15 đã cho thấy tế bào đối chứng khơng có khả phát quang tế bào xử lý với AMG NMG có khả Tế bào xử lý NMG có khả phát quang mạnh tế bào xử lý AMG, gợi ý NMG đã xâm nhập tốt vào tế bào Điều cũng giải thích NMG có khả gây đợc tế bào A549 lu an n va gh tn to B C p ie A nl w Hình 3.15 Khả xâm nhập NMG vào tế bào ung thư phổi (A) Đối d oa chứng; (B) Xử lý AMG (2µg/ml); (C) xử lý NMG (2µg/ml) lu nf va an 3.2.2.7 Kích thước nhân tế bào xử lý với NMG Quan sát hình thái nhân tế bào ung thư phởi kính hiểm vi đồng tụ lm ul quét laser sau nhuộm thuốc nhuộm huỳnh quang Hoesch cho thấy mẫu z at nh oi xử lý chất AMG kích thước nhân khơng có nhiều khác biệt so với mẫu đối chứng Trong đó, mẫu xử lý tế bào NMG tế bào nhân to nhiều so z với mẫu đối chứng Điều chứng tỏ NMG đã xâm nhập vào nhân tế bào m co l gm @ ảnh hưởng đến kích thước nhân an Lu n va 53 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp A B C Hình 3.16 Hình thái nhân tế bào xử lý với AMG và NMG (A) Đối chứng; (B) Xử lý AMG; (C) xử lý NMG lu an Trong số nhiều giải pháp khác hệ thống dẫn trùn thuốc va n tới vị trí bệnh, có hai giải pháp quan tâm là: i) tích thuốc gh tn to vị trí bệnh hướng đích thụ đợng dựa vào tính thấm dễ dàng chất ie mang thuốc máu; ii) hướng đích chủ đợng dựa vào gắn phối tử đặc p biệt lên bề mặt chất mang để nhận liên kết với tế bào bệnh nl w Nguyên tắc việc nhả thuốc theo chế thụ động dựa việc môi d oa trường xung quanh khối u có nhiều điểm khác biệt so với tế bào lành Sự khác an lu về độ pH tế bào ung thư tế bào lành là: tế bào ung thư có đợ pH nf va thấp (2 - 3); có nhiệt đợ cao (38 - 40oC) bề mặt có nhiều loại vitamin lm ul (nhiều nhóm B9), tế bào thường có pH nhiệt độ tương ứng khoảng 7,2 - 7,4 36,5 - 37oC Các tế bào khối u có mức z at nh oi độ trao đổi chất cao nên sử dụng trình đường phân để nhận thêm lượng, hình thành axit hữu làm giảm pH môi trường xung quanh tế z bào u Cấu trúc hạt nano dẫn thuốc nhạy cảm với pH Chúng ổn định @ l gm pH sinh lý 7,2 - 7,4 bị phân giải môi trường pH thấp giá trị sinh lý Khi thuốc giải phóng mơ đích co m Mợt đặc điểm quan trọng giúp tăng cường hiệu tác dụng an Lu hệ dẫn trùn thụ đợng kích cỡ hạt nano phân bố kích cỡ chúng n va 54 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp liên quan đến đặc điểm khối u Môi trường khối u một mơi trường phức tạp, nơi bất bình thường về giải phẫu sinh lý học Sự phát triển tế bào ung thư khơng kiểm sốt tiết yếu tố tạo mạch dẫn đến hệ mạch máu phát triển vô tổ chức môi trường ngoại mạch dày đặc Những khiếm khuyết cấu trúc nguyên nhân hiệu ứng tăng tính thấm khả lưu giữ (Enhanced permeability DNA retention effect - EPR), ng̀n gốc tích lũy lưu trữ không đồng đều vât liệu nano khối u Sự cân điều hòa tăng sinh mạch máu dẫn đến kết nhân tố sinh trưởng làm cho mạch máu khối u tổ chức thủng nhiều lu an lỗ, tạo khoảng cách tế bào nợi mơ làm mạch Kích thước n va lỗ mạch vi mạch máu khối u dao động từ 100 đến 500 nm [27] Do đó, tn to kích thước hạt nano đóng mợt vai trị quan trọng tích lũy khối u thơng gh qua hiệu ứng EPR Kích thước hạt nano sử dụng một hệ thống phân p ie phối thuốc cần đủ lớn để ngăn chặn rị rỉ nhanh chóng mạch máu, w phải đủ nhỏ để không bị hệ miễn dịch đào thải Vì vậy, để tận dụng hiệu oa nl ứng EPR thoát khỏi hàng rào miễn dịch, nhiều nghiên cứu đã đưa phạm d vi kích thước hạt nano tối ưu khoảng 10-250 nm lu nf va an Trong nghiên cứu chúng tôi, hạt NMG đã tổng hợp thành công thể ưu việt so với hạt nano đã công bố trước lm ul so với dạng chất chưa nano hóa Điều thể điểm sau: z at nh oi Trước hết, tính tan nước tiêu chí lý tưởng mợt chất dùng làm thuốc Khả tan tốt nước NMG rõ ràng đặc điểm ưu z việt chất so với dạng tự nhiên gm @ Về kích thước, hạt NMG tạo có kích thước < 50 nm sử dụng hệ dẫn l đơn giản đảm bảo độ bền hạt Với kích thước hạt này, NMG có m co thể lọt lỗ mạch khối u ung thư theo hướng vận chuyển thuốc an Lu thụ đợng, tận dụng hiệu ứng EPR khỏi hàng rào miễn dịch n va 55 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Các kết về hoạt tính gây đợc dòng tế bào ung thư phổi A549 thu hạt NMG chứng tỏ tương tác AMG với chất mang dường đã khơng làm thay đởi cấu trúc hóa học chất Vì vậy, hoạt tính sinh học chất tự nhiên trì Tóm lại, hạt NMG sinh tổng hợp đã chứng tỏ khả gây độc tế bào ung thư phởi mạnh có triển vọng ứng dụng Mặc dù vậy, nghiên cứu cần tiến hành để tối ưu công thức tạo hạt cũng chứng minh đầy đủ chế tác dụng hạt tạo được, làm sở để ứng dụng chứng điều trị bệnh lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z gm @ m KẾT LUẬN co l KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ an Lu n va 56 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Đã đưa qui trình tinh sạchα-mangostin đơn giản từ vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) gờm bước là: i) chiết phân đoạn với n-hexane ii) sắc ký cột silica gel với hệ dung môi n-hexane : accetone theo tỉ lệ 3:1 Chất thu có đợ đạt > 98% Đã chế tạo thành cơng hạt nanomangostin có khả phân tán tốt nước, có kích thước đạt < 50 nm, zeta đạt -38 mV, hàm lượng AMG bao gói đạt 2,90 mg/ml hiệu bao gói đạt > 74,3% Hạt NMG tạo phân tán tốt nước trì hoạt lu an tính kháng tế bào ưng thư phởi A549 với IC50 đạt 4,86 g/ml, có khả va n nănng thâm nhập vào tế bào ung thư ảnh hưởng đến kích thước to gh tn nhân tế bào p ie ĐỀ NGHỊ w oa nl - Tiếp tục tối ưu hạt NMG về kích thước, hiệu mang thuốc để đạt d hiệu tác dụng cao lu nf va an - Đi sâu đánh giá chế kháng ung thư đầy đủ hạt nanomangostin dòng tế bào ung thư khác để khẳng định tiềm ứng dụng z at nh oi lm ul hạt tổng hợp z gm @ co l TÀI LIỆU THAM KHẢO m Tài liệu tiếng Việt Đỗ Tất Lợi, (2000), “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y an Lu n va học Hà Nội, tr.567-568 57 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Đỗ Thị Tuyên, Nguyễn Thu Thùy, Nguyễn Ngọc Hạnh, Nguyễn Thị Ánh Tuyết, Phùng Văn Trung, Quyền Đình Thi, Nguyễn Thị Mai Phương, Nguyễn Thị Ngọc Dao (2010), Nghiên cứu quy trình tách chiết hoạt tính kháng khuẩn a-mangostin từ vỏ quả măng cụt Garcinia mangostana L Hội nghị Khoa học kỷ niệm 35 năm Viện KHCNVN – Hà Nội; tr.136-143 Đỗ Thị Tuyên, Nguyễn Thị Mai Phương, Nguyễn Thị Ngọc Dao, Qùn Đình Thi (2012), Hoạt tính ức chế sự phát triển tế bào ung thư lu mangostin từ vỏ quả măng cụt Tạp chí Dược liệu 2(7): 123-128 an n va Nguyễn Thị Mai Phương, (2005), “Nghiên cứu ảnh hưởng một số tn to chất kháng kh̉n lên q trình sinh lý hóa sinh vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans”, Luận án tiến sỹ ie gh p Nguyễn Thị Mai Phương Marquis R.E, (2011), “Hoạt tính kháng vi nl w khuẩn Streptococcus xoang miệng α-mangostin tinh từ vỏ quả an lu 303 d oa măng cụt (Garcinia mangostana L.)",Tạp chí Dược liệu,16(5): 298- nf va Trần Thị Hải Yến, Nguyễn Hoài Nam, Lê Thị Thùy Dương, Hà Phương lm ul Thu, Hoàng Thị Mỹ Nhung, (2012),“Nghiên cứu khả điều trị ung z at nh oi thư hệ nano kết hợp VX680 Curcumin bọc copolymer TPGS (PLA-TPGS)”.Tạp chí Khoa học, 10: 223-229 z gm @ co l Tài liệu tiếng Anh Aisha F, Ismail Z, Abu-Salah KM, Majid AM (2012), “Solid dispersions m of α-mangostin improve its aqueous solubility through self-assembly of an Lu nanomicelles”, J Pharm Sci, 101(2): 815-825 n va 58 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp Anand P, Nair HB, Sung B, Kunnumakkara AB, Yadav VR, Tekma RR, Aggarwal BB (2010), “Design of curcumin-loaded PLGA nanoparticles formulation with enhanced cellular uptake, and increased bioactivity in vitro and superior bioavailability in vivo”,Biochem Pharmacol, 79: 330338 Duchene D, Cavalli R, Gref R (2016), “Cyclodextrin-based polymeric nanoparticles as efficient carriers for anticancer drugs”, Curr Pharm Biotechnol, 17(3): 248-55 lu 10.Ee GC, Daud S, Taufiq-Yap YH, Ismail NH, Rahmani M (2006), “Xanthones from Garcinia mangostana (Guttiferae)”,Nat Prod Res an n va 11.Ee GC, Daud S, Izzaddin SA, Rahmani M (2008), “Garcinia mangostana: a source of potential anti-cancer lead compounds against CEM-SS cell line”, J Asian Nat Prod Res, 10(5-6): 475-479 p ie gh tn to 12 Frederick SO, Reinhard AK (2009) Basics of Oncology Springer publishing nl w 13 Ha PT, Duong TQ, Mai TTT, Tran THH, nguyen HN, Nguyen XP, d oa Tran TM, Phan QT, Phan THT, Vuong TKO, Le MH (2013), “ In vitro an lu apoptosis enhancement of Hep-G2 by PLA-TPGS and PLA-PEG block 14.Heijmadi M lm ul 255-257 nf va copolymers encapsulated Curcumin nanoparticles”, Chem letters 42(3): (2009) to cancer biology z at nh oi www.bookboon.com Introduction 15.Koh JJ, Qiu S, Zou H, Lakshminarayanan R, Li J et al (2013), “ Rapid z bactericidal action of alpha-mangostin against MRSA as an outcome of @ 844 co l gm membrane targeting”,Biochim Biophys Acta (BBA), 1828(2): 834– m 16.Kwanggjae XC, Shuming B, Shuo C, Shin MD (2008), “ n va Res, 14(4): 4-12 an Lu Therapeupeutic nanoparticles for drug delivery in cancer”, Clin Cancer 59 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp 17.Liechty WB, Kryscio DR, Slaughter BV, andPeppas NA (2010), “Polymers for drug delivery systems”, Annu Rev Chem Biomol Eng,1:149-173 18.Matsumoto K., Akao Y., Kobayashi E., Ohguchi K., Ito T., Tanaka T., Iinuma M., Nozawa Y., (2003), "Induction of apoptosis by xanthones from mangosteen in human leukemia cell lines", J Nat Prod., 66(8): l124-1127 19.Nguyen PTM and Marquis RE, (2011), “Antimicrobial actions of alphamangostin against oral Streptococci”, Can J Microbiol, 57(3): 217-25 lu an 20.Nguyen P.T.M, Falsetta ML, Hwang G, Gonzalez M, and Koo H (2014), n va “α-Mangostin disrupts the development of Streptococcus mutans e1113122014 21.Pignatello R Bucolo C, Puglíi G, (2002), Ocular tolerability of eudragit p ie gh tn to biofilms and facilitates its mechanical removal”, Plos One, 9(10): RS100 and RL100 nanosuspensions as carriers for ophthalmic w oa nl controlled drug delivery J Phar.Sci 91: 2636–2641 d 22.Pan-In P, Tachapruetinun A, Chaichanawongsaroj N, Banlunara W, S, Wanichwecharungruang S(2014),“Combating nf va an lu Suksamrarn Helicobacter pylori infections with mucoadhesive nanoparticles loaded lm ul with Garcinia mangostana extract”,Nanomedicine (Lond), 9(3): 457- z at nh oi 68 23.Pan-In P, Wongsomboon A, Kokpol C, Chaichanawongsaroj N, S (2015),“Depositing z Wanichwecharungruang α-mangostin @ nanoparticles to sebaceous gland area for acne treatment”,J Pharmacol l gm Sci, 129(4): 226-32 m co 24.Peres V, Nagem TJ and Oliveira FF (2000), “Tetraoxygenated naturally an Lu occurring xanthones”, Phytochemisty, 55(7): 28-33 n va 60 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp 25.Qiu S, Granet R, Mbakidi JP, Brégier F, Pouget C, Micallef L, SotheaOuk T, Leger DY, Liagre B, Chaleix V, Sol V(2016),“Delivery of tanshinone IIA nanoparticle and α-mangostin from designed for platform gold/PEI/cyclodextrin prostate cancer chemotherapy”,Bioorg Med Chem Lett, S0960-894X(16)30329-8 26.Sato A, Fujiwara H, Oku H, Ishiguro K, Ohizumi Y, (2004),“Alphamangostin induces Ca(2+)-ATPase-dependent apoptosis via mitochondrial pathway in PC 12 cells”, J Pharmacol Sci., 95(1), tr 33- 40 lu an 27.Steinhauser I, Spänkuch B, Strebhardt K, Langer K (2006), va n “Trastuzumab-modified nanoparticles: optimisation of preparation to 28.Xu W, Ling P and Zhang T (2013), “Polymeric micelles, a promising p ie gh tn and uptake in cancer cells” Biomaterials 27(28):4975-83 w drug delivery system to enhance bioavailability of poorly water-soluble oa nl drugs”, J Drug Deliv, 2013: 340315 d 29.Yao L, Gu X, Song Q, Wang X, Huang M, Hu M, Hou L, Kang T, Chen lu nf va an J, Chen H, Gao X(2016), “Nanoformulated alpha-mangostin ameliorates Alzheimer's disease neuropathology by elevating LDLR z at nh oi Release,226: 1-14 lm ul expression and accelerating amyloid-beta clearance”,J Control z Nguồn trích dẫn URL 30.http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2007/021731s00 gm @ 5,021488s010,021379s010,021343s015lbl.pdf l m benh-ung-thu/c/17990107.epi co 31.http://www.baomoi.com/viet-nam-dung-top-2-the-gioi-ve-ti-le-mac- an Lu 32.http:/www.cancer.gov/about-cancer/treatment/types/chemotherapy n va 61 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Trung Hợp 33.https://www.drugs.com/history/opaxio.html 34.http://www.genericmedsexim.com/anti-cancer.html 35.http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs297/en/ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỚ CỦA TÁC GIẢ z - gm @ Nguyễn Thị Mai Phương*, Trần Đại Lâm, Tạ Thu Mai, Nguyễn TrungHợp l co (2017) Hoạt tính kháng dòng tế bào ung thư phổi A549 hạt nano m polymer bọc alpha-mangostin Tạp chí Sinh học(đã nhận đăng) an Lu n va 62 ac th si Nguyễn Trung Hợp Luận văn Thạc sỹ Khoa học lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va 63 ac th si Nguyễn Trung Hợp Luận văn Thạc sỹ Khoa học PHỤ LỤC lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va 64 ac th si