Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu nhân nhanh in vitro hoa hiên tam bội k1

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO HOA HIÊN TAM BỘI – K1 Sinh viên thực : VŨ KIM DUNG Lớp : K62 – CNSHC Khóa : 62 Ngành : Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN XUÂN TRƯỜNG PGS TS ĐỒNG HUY GIỚI HÀ NỘI – 2021   LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan số liệu, hình ảnh, kết trình bày luận văn trung thực, khơng chép tài liệu, cơng trình nghiên cứu người khác mà không rõ nguồn tham khảo Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước Hội đồng Nhà trường Hà Nội, ngày 03 tháng 10 năm 2021 Sinh viên thực Vũ Kim Dung i   LỜI CẢM ƠN Sau học tập Học viện Nông Nghiệp Việt Nam thực tập tốt nghiệp Viện Sinh học Nông nghiệp, nhờ giúp đỡ tận tình Thầy cơ, anh chị Viện Sinh học Nông nghiệp, với nỗ lực học tập thân, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trước tiên, xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nghiệm khoa Công nghệ Sinh học thầy cô giảng viên truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam Đặc biệt, tơi xin gửi lịng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Xuân Trường PGS TS Đồng Huy Giới giành nhiều quan tâm, tận tình hướng dẫn góp ý cho tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành khóa luận Tiếp đến, tơi xin cảm ơn bạn làm khóa luận Viện Sinh học Nơng Nghiệp, tập thể cán Viện Sinh học Nông nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ thực hồn thành đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn với gia đình, bạn bè ln bên chăm sóc, động viên động lực cho suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 03 tháng 10 năm 2021 Sinh viên thực Vũ Kim Dung ii   MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan hoa hiên (Hemerocallis fulva) 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm hình thái 2.1.4 Phân bố 2.1.5 Điều kiện tự nhiên 2.1.6 Công dụng 2.2 Các nghiên cứu nhân giống in vitro đối tượng hoa hiên nước giới PHẦN III VẬT LIỆU NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 11 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 11 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 11 3.2 Địa điểm, thời gian thực đề tài 13 3.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 13 iii   3.3.1 Nội dung nghiên cứu 13 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu 17 3.3.3 Các tiêu theo dõi 20 3.4 Phương pháp đánh giá kết xử lý số liệu 21 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chế độ khử trùng khác HgCl2 0,1% 22 4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ hoa hiên 25 4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D Kinetin tới khả tạo callus từ hoa hiên 29 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ đế hoa hiên 33 4.5 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ cánh hoa hiên 36 4.6 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ nhị hoa hiên 39 4.7 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ bao phấn hoa hiên 42 4.8 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA tới khả phát sinh hình thái callus 44 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 5.1 Kết luận 48 5.2 Kiến nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC 50 iv   DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng chế độ khử trùng khác HgCl2 0,1% (nguồn mẫu: củ hoa hiên) 22 Bảng 4.2 Ảnh hưởng chế độ khử trùng khác HgCl2 0,1% (nguồn mẫu: hoa hiên) 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng chế độ khử trùng khác HgCl2 0,1% (nguồn mẫu: nụ hoa hiên) 24 Bảng 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ hoa hiên điều kiện sáng 25 Bảng 4.5 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ đế hoa hiên điều kiện tối 27 Bảng 4.6 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D Kinetin tới khả tạo callus từ đế hoa hiên điều kiện sáng 29 Bảng 4.7 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D Kinetin tới khả tạo callus từ đế hoa hiên điều kiện tối 31 Bảng 4.8 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ đế hoa hiên điều kiện sáng 33 Bảng 4.9 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ đế hoa hiên điều kiện tối 33 Bảng 4.10 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ cánh hoa hiên điều kiện sáng 36 Bảng 4.11 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ cánh hoa hiên điều kiện tối 37 Bảng 4.12 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ nhị hoa hiên điều kiện sáng 39 Bảng 4.13 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ nhị hoa hiên điều kiện tối 40 v   Bảng 4.14 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ bao phấn hoa hiên điều kiện sáng 42 Bảng 4.15 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ bao phấn hoa hiên điều kiện tối 43 Bảng 4.16 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA tới phát sinh hình thái callus 45   vi   DANH MỤC HÌNH   Hình 3.1 Cây hoa hiên tam bội – K1 11 Hình 3.2 Củ hoa hiên tam bội – K1 11 Hình 3.3 Các giai đoạn chồi hoa hiên tam bội – K1 12 Hình 3.4 Các giai đoạn nụ hoa hiên tam bội – K1 13 Hình 4.1 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ hoa hiên điều kiện sáng sau tuần 26 Hình 4.2 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ hoa hiên điều kiện tối sau tuần 28 Hình 4.3 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D Kinetin tới khả tạo callus từ hoa hiên điều kiện sáng sau tuần 30 Hình 4.4 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D Kinetin tới khả tạo callus từ hoa hiên điều kiện tối sau tuần 32 Hình 4.5 Callus tạo thành từ đế hoa môi trường bổ sung mg/L 2,4-D mg/L BA điều kiện tối sau tuần 35 Hình 4.6: Callus tạo thành từ cánh hoa môi trường bổ sung mg/L 2,4D kết hợp 10 mg/L BA sau tuần 38 Hình 4.7 Callus tạo thành từ nhị môi trường bổ sung mg/L 2,4-D kết hợp 15 mg/L BA điều kiện tối sau tuần 41 Hình 4.8 Callus tạo thành từ bao phấn mơi trường bổ sung mg/L 2,4D kết hợp mg/L BA điều kiện tối sau tuần 44 Hình 4.9 Callus từ cánh hoa hiên môi trường bổ sung BA α-NAA sau tuần 46 Hình 4.10 Tiền chồi phát sinh từ callus nguồn mẫu đế hoa cánh hoa môi trường bổ sung mg/L BA 0,25 mg/L α-NAA sau tuần 47   vii   DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BA Benzyl Adenine CV Sai số thí nghiệm Cs Cộng CT Cơng thức ĐC Đối chứng GĐ Giai đoạn IAA Indole-3-Acetic Acid LSD0,05 Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MS Murashige Skoog NST Nhiễm sắc thể TDZ Thidiazuron TCN Trước cơng ngun α-NAA α-Naphtyl Axetic Acid viii   TĨM TẮT Hoa hiên (Hemerocallis spp) cịn có tên gọi khác hồng hoa, huyên thảo, rau huyên hay kim châm thái… Loài biết đến với công dụng làm thuốc, sử dụng làm dược liệu bào chế tân dược trị số bệnh trị tiểu buốt, chảy máu, điều kinh, vàng da, an thai, bổ máu, hoa hiên sử dụng làm nguyên liệu thực phẩm thơm ngon bổ dưỡng Đề tài thực nhằm xác định số yếu tố ảnh hưởng đến nhân nhanh in vitro hoa hiên tam bội – K1 Kết thu được: Khử trùng kép với dung dịch HgCl2 0,1% cho tỷ lệ mẫu cao so với khử trùng đơn với dung dịch HgCl2 0,1%, thời gian khử trùng phụ thuộc vào nguồn mẫu Nguồn mẫu tốt để nuôi cấy tạo callus hoa hiên tam bội – K1 cánh hoa giai đoạn (< cm) môi trường MS + mg/L 2,4-D + 10 mg/L BA môi trường sáng Môi trường tối ưu để callus từ cánh hoa hiên phát sinh hình thái mơi trường MS + mg/L BA + 0,25 mg/L α-NAA   ix   Bảng 4.11 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ cánh hoa hiên điều kiện tối Nồng độ chất điều tiết sinh trưởng (mg/L) Công thức GĐ1 < cm GĐ2 – cm GĐ3 – cm GĐ4 > cm Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất tạo lượng tạo lượng tạo lượng tạo lượng callus callus callus callus callus callus callus callus (%) (%) (%) (%) 2,4-D BA (ĐC) 0 - - 0,0 - 0,0 - 13,3 ++ 10,0 ++ 0,0 - 0,0 - 10 30,0 +++ 26,7 +++ 6,7 ++ 0,0 - 15 43,3 +++ 40,0 +++ 13,3 ++ 0,0 - 5 46,7 +++ 43,3 +++ 20,0 ++ 3,3 ++ 10 83,3 ++++ 53,3 +++ 26,7 +++ 10,0 ++ 15 63,3 ++++ 36,7 +++ 10,0 ++ 0,0 - 26,7 ++ 20,0 ++ 3,3 ++ 0,0 - 10 16,7 ++ 13,3 ++ 0,0 - 0,0 - 10 15 3,3 ++ 0,0 - 0,0 - 0,0 - Chú thích: - : Khơng phát sinh callus; ++ : Phát sinh callus trung bình +++ : Phát sinh callus khá; ++++ : Phát sinh callus tốt GĐ1, GĐ2, GĐ3, GĐ4: giai đoạn hoa Kết nghiên cứu cho thấy: Ở điều kiện sáng, cánh hoa hiên không tạo callus Ở điều kiện tối: Cánh hoa hiên giai đoạn không tạo callus Tỷ lệ mẫu cấy tạo callus giảm dần từ giai đoạn hoa hình thành tới giai đoạn nở 37   Mẫu nuôi cấy môi trường bổ sung mg/L 2,4-D 10 mg/L BA có tỷ lệ tạo callus cao đạt 83,3% Callus tạo thành có dạng chặt, số dạng hạt màu vàng kích thức từ 0,1 cm tới 0,2 cm Sau chuyển điều kiện sáng, callus chuyển thành màu xanh tăng kích thước (Hình 4.6).        Chú thích: A: mẫu cấy sau tuần điều kiện tối B: mẫu cấy sau tuần điều kiện tối đưa sáng Hình 4.6: Callus tạo thành từ cánh hoa môi trường bổ sung mg/L 2,4-D kết hợp 10 mg/L BA sau tuần   38   4.6 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ nhị hoa hiên Kết theo dõi sau tuần trình bày bảng số liệu: Bảng 4.12 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ nhị hoa hiên điều kiện sáng Nồng độ Công chất điều tiết GĐ1 GĐ2 GĐ3 GĐ4 sinh trưởng < cm – cm – cm > cm (mg/L) Tỷ lệ thức 2,4-D BA Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất tạo lượng tạo tạo lượng lượng tạo lượng callus callus callus callus callus callus callus callus (%) (%) (%) (%) (ĐC) 0 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 5 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - Chú thích: - : Không phát sinh callus; ++ : Phát sinh callus trung bình +++ : Phát sinh callus khá; ++++ : Phát sinh callus tốt GĐ1, GĐ2, GĐ3, GĐ4: giai đoạn hoa   39   Bảng 4.13 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ nhị hoa hiên điều kiện tối Nồng độ Công chất điều tiết GĐ1 GĐ2 GĐ3 GĐ4 sinh trưởng < cm – cm – cm > cm (mg/L) Tỷ lệ thức Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất 2,4-D BA tạo lượng tạo lượng tạo lượng tạo lượng callus callus callus callus callus callus callus callus (%) (%) (%) (%) (ĐC) 0 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 0,0 3,3 ++ 30,0 ++ 0,0 - 0,0 3,3 10 13,3 ++ 40,0 +++ 0,0 - 0,0 13,3 15 36,7 +++ 63,3 ++++ 0,0 - 0,0 36,7 5 3,3 ++ 13,3 ++ 0,0 - 0,0 3,3 10 6,7 ++ 23,3 ++ 0,0 - 0,0 6,7 15 13,3 ++ 46,7 +++ 0,0 - 0,0 13,3 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 0,0 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 0,0 10 15 6,7 ++ 20,0 ++ 0,0 - 0,0 6,7 Chú thích: - : Không phát sinh callus; ++ : Phát sinh callus trung bình +++ : Phát sinh callus khá; ++++ : Phát sinh callus tốt GĐ1, GĐ2, GĐ3, GĐ4: giai đoạn hoa 40   Kết nghiên cứu cho thấy: Ở điều kiện có ánh sáng, tất cơng thức thí nghiệm khơng tạo callus Ở điều kiện có ánh sáng: Chỉ nhị giai đoạn giai đoạn tạo callus, giai đoạn giai đoạn không tạo callus tất cơng thức thí nghiệm Chỉ nhị giai đoạn CT4 cho tỷ lệ tạo callus cao 63,3% với chất lượng sinh trưởng tốt Callus dạng hạt, màu vàng ngả xanh   Hình 4.7 Callus tạo thành từ nhị môi trường bổ sung mg/L 2,4-D kết hợp 15 mg/L BA điều kiện tối sau tuần Chỉ nhị giai đoạn CT3 cho tỷ lệ tạo callus cao 63,3% với chất lượng sinh trưởng tốt Callus có dạng hạt, màu xanh đậm   41   4.7 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ bao phấn hoa hiên Kết theo dõi sau tuần trình bày bảng số liệu: Bảng 4.14 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ bao phấn hoa hiên điều kiện sáng Nồng độ Công chất điều tiết GĐ1 GĐ2 GĐ3 GĐ4 sinh trưởng < cm – cm – cm > cm (mg/L) Tỷ lệ thức Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất 2,4-D BA tạo lượng tạo lượng tạo lượng tạo lượng callus callus callus callus callus callus callus callus (%) (%) (%) (%) (ĐC) 0 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 5 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - Chú thích: - : Khơng phát sinh callus; ++ : Phát sinh callus trung bình +++ : Phát sinh callus khá; ++++ : Phát sinh callus tốt GĐ1, GĐ2, GĐ3, GĐ4: giai đoạn hoa   42   Bảng 4.15 Ảnh hưởng tổ hợp 2,4-D BA tới khả tạo callus từ bao phấn hoa hiên điều kiện tối Nồng độ chất điều tiết GĐ1 GĐ2 GĐ3 GĐ4 sinh trưởng < cm – cm – cm < cm (mg/L) Công Tỷ lệ thức 2,4-D BA Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất mẫu Chất tạo lượng tạo tạo lượng lượng tạo lượng callus callus callus callus callus callus callus callus (%) (%) (%) (%) (ĐC) 0 - - 0,0 - 0,0 - 53,3 ++ 13,3 ++ 0,0 - 0,0 - 10 23,3 ++ 3,3 ++ 0,0 - 0,0 - 15 6,7 ++ 0,0 - 0,0 - 0,0 - 5 3,3 ++ 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 10 15 0,0 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - Chú thích: - : Khơng phát sinh callus; ++ : Phát sinh callus trung bình +++ : Phát sinh callus khá; ++++ : Phát sinh callus tốt GĐ1, GĐ2, GĐ3, GĐ4: giai đoạn hoa Kết nghiên cứu cho thấy: Ở điều kiện sáng, tất cơng thức thí nghiệm khơng tạo callus tuần đầu bao phấn khơng có tượng Từ tuần thứ 5, bao phấn chuyển dần thành màu đen 43   Ở điều kiện tối: Bao phấn giai đoạn giai đoạn tạo callus, giai đoạn giai đoạn không tạo callus tất cơng thức thí nghiệm Bao phấn giai đoạn CT2 cho tỷ lệ tạo callus cao 53,3% với chất lượng sinh trưởng Callus dạng chặt, màu xanh đậm (Hình 4.8)   Hình 4.8 Callus tạo thành từ bao phấn môi trường bổ sung mg/L 2,4-D kết hợp mg/L BA điều kiện tối sau tuần  4.8 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA tới khả phát sinh hình thái callus α-NAA có tên gọi đầy đủ α-Naphthaleneacetic acid hormone thực vật thuộc nhóm auxin có tác dụng tốt đến q trình sinh trưởng tế bào, hoạt động tầng phát sinh, hình thành rễ, tượng ưu ngọn, tính hướng thực vật, sinh trưởng tạo không hạt… Khi kết hợp chất điều tiết sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin (BA) auxin (αNAA) giúp phát sinh chồi non, tăng khả nhân chồi Do đó, chúng tơi thực thí nghiệm kết hợp BA nồng độ mg/L với α-NAA nồng độ 0; 0,25; 0,5 ;0,75 mg/L để tìm mơi trường tốt cho phát sinh hình thái callus 44   Kết theo dõi sau tuần trình bày bảng số liệu: Bảng 4.16 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA tới phát sinh hình thái callus Nguồn mẫu Đế hoa Cánh hoa Chỉ nhị Bao phấn Công thức 4 4 Nồng độ chất điều tiết sinh trưởng (mg/L) BA α-NAA 2 0,25 0,5 0,75 CV% LSD0,05 2 0,25 0,5 0,75 CV% LSD0,05 2 0,25 0,5 0,75 2 0,25 0,5 0,75 Số tiền chồi trung bình Chất lượng tiền chồi 0,0 8,2d 4,6c 2,2b 2,8 0,2 0,0a 12,9d 7,4c 3,1b 1,9 0,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 +++ ++ ++ ++++ +++ ++ - Chú thích: - : Không phát sinh tiền chồi, ++ : Phát sinh tiền chồi trung bình +++: Phát sinh tiền chồi khá, ++++ : Phát sinh tiền chồi tốt Những giá trị số cột có chữ a, b, c, d khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 95% Kết nghiên cứu cho thấy: 45   Sau tuần, cánh hoa đế hoa, tiền chồi tạo phát sinh tiền chồi, bao phấn nhị khơng có hiên tượng Có thể callus từ bao phấn nhị cần nhiều thời gian Trên công thức, cánh hoa phát sinh chồi tốt đế hoa Ở callus từ cánh hoa: Tất môi trường có bổ sung BA α-NAA phát sinh tiền chồi Tuy nhiên mơi trường có nồng độ BA α-NAA khác khả phát sinh tiền chồi khác (Hình 4.9)   Ghi chú: CT1: mg/L; CT2: mg/L BA + 0,25 mg/L α-NAA CT3: mg/L BA + 0,5 mg/L α-NAA; CT4: mg/L BA + 0,75 mg/L α-NAA Hình 4.9 Callus từ cánh hoa hiên môi trường bổ sung BA α-NAA sau tuần 46   + Môi trường đối chứng không phát sinh tiền chồi + Số lượng tiền chồi trung bình/mẫu cơng thức 1: 12,9 chồi/mẫu, có khả sinh trưởng tốt (Hình 4.10) + Khi tăng nồng độ α-NAA kết hợp với mg/L BA số lượng tiền chồi giảm dần   Ghi chú: A: Nguồn mẫu đế hoa B: Nguồn mẫu cánh hoa Hình 4.10 Tiền chồi phát sinh từ callus nguồn mẫu đế hoa cánh hoa môi trường bổ sung mg/L BA 0,25 mg/L α-NAA sau tuần   47   PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Trên sở kết nghiên cứu thu được, rút số kết luận sau: Khử trùng kép với dung dịch HgCl2 cho tỷ lệ mẫu cao so với khử trùng đơn với dung dịch HgCl2 Đối với nguồn mẫu củ hoa hiên, khử trùng kép thời gian lần 1: phút; lần 2: phút cho tỷ lệ mẫu cao Đối với nguồn mẫu hoa hiên, khử trùng kép thời gian lần 1: phút; lần 2: phút cho tỷ lệ mẫu cao Còn nguồn mẫu nụ hoa hiên, khử trung kép lần 1: phút; lần 2: phút cho tỷ lệ mẫu cao Môi trường MS bổ sung tổ hợp 2,4-D BA tổ hợp 2,4-D Kinetin không phù hợp để nuôi cấy tạo callus từ hoa hiên Nguồn mẫu tốt để nuôi cấy tạo callus hoa hiên tam bội – K1 cánh hoa giai đoạn (< cm) môi trường MS + mg/L 2,4-D + 10 mg/L BA điều kiện tối Môi trường tối ưu để callus từ cánh hoa hiên phát sinh hình thái môi trường MS + mg/L BA + 0,25 mg/L α-NAA 5.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu môi trường phù hợp để tạo callus từ nguồn mẫu hoa hiên Tiếp tục hồn thiện quy trình nhân nhanh in vitro hoa hiên tam bội – K1 Ứng dụng nhân nhanh in vitro vào sản xuất số lượng lớn hoa hiên tam bội – K1   48   TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Nguyễn Thị Lâm Hải cs (2016) Nghiên cứu nhân giống in vitro (Hemerocallis fulva), Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt nam, 14(6): 913-920 Nguyễn Thị Đỏ (2007) Thực vật chí Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Hà Thị Thúy (2005) Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ nhân nhanh in vitro giống hoa lilium spp, Báo cáo khoa học Hội nghị Sinh học toàn quốc, 98-99 Tài liệu tiếng Anh Kanyand M., Meordrick S and Chenxin L (2021), “In vitro daylily (Hemerocallis species) bract multiple shoot induction” African Journal of Biotechnology, 20(2): 43-50 Kanyand M., Meordrick S and Chenxin L (2020), “High frequency in vitro regeneration of adventitious shoots in daylilies (Hemerocallis sp) stem tissue using thidiazuron” BMC Plant Biology, 20(31): 1-10 Surinder K., Bharat P., Johnn C.,  Robert I (2009), “Daylily: Botany, Propagation, Breeding” Horticultural Reviews 3: 193-220 Kanyand M., Ning W., Stephan C., George A (2013), “A more improved protocol for in vitro shoot organogenesis in daylily (Hemerocallis sp.)” African Journal of Biotechnology, 12(8): 820-825 Zhiwu L., Katherine M., Faith C (2010), “Regeneration of daylily (Hemerocallis) from young leaf segments” Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 102: 199-204 Zhiwu L., Linda P., N Faith C., Ana C.E (2009), “Development of triploid daylily (Hemerocallis) germplasm by embryo rescue” Euphytica, 169(3): 313-318 J.W Amling, G.J Keever, J.R Kessler, Jr., D.J Eakes (2007), “Benzyladenine (BA) promotes ramet formation in Hemerocallis” Journal of Environmental Horticulture (2007), 25(1):.9-12 Tài liệu mạng http://www.americanmeadows.com/perennials/daylily http://www.brecks.com http://www.calgaryplants.com http://www.caycanhvietnam.com http://www.daylilies.org/AHSFAQsNew.html http://www.dreamydaylilies.com http://www.evergreenplantnursery.com     49   PHỤ LỤC Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA tới khả phát sinh hình thái callus Analysis of variance Canh hoa Variable N R² Adj R² CV Canh hoa 12 1.00 1.00 1.91 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 283.95 94.65 7571.98