Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu nhân giống in vitro cây thuốc củ dòm (stephania dielsiana y c wu)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY THUỐC CỦ DÒM (Stephania dielsiana Y C Wu)” Sinh viên thực : Hoàng Thị Thu Hường Giảng viên hướng dẫn : TS Đặng Thị Thanh Tâm Mã sinh viên : 620497 Lớp : K62CNSHB HÀ NỘI – 2021   LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết quả, số liệu sử dụng khóa luận tốt nghiệp hồn tồn lấy từ q trình thực nghiên cứu cá nhân tôi, hướng dẫn khoa học TS Đặng Thị Thanh Tâm Số liệu, bảng biểu trung thực lấy từ thực tiễn Một lần xin khẳng định chịu trách nhiệm với lời cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Người thực Hoàng Thị Thu Hường i      LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành báo cáo tốt nghiệp này, xin gửi cảm ơn chân thành tới: Ban lãnh đạo Khoa Công nghệ Sinh học đặc biệt thầy cô môn Thực vật - khoa Công nghệ sinh học tạo điều kiện giúp đỡ, hỗ trợ tơi thực tốt khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Đặng Thị Tâm, người tận tâm, dành thời gian, tâm huyết, hướng dẫn kiến thức lẫn kĩ năng, tác phong làm việc suốt trình thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể anh, chị cán môn Thực vật Học viện Nông nghiệp tận tình giúp đỡ, bảo tơi hồn thành khóa luận cách tốt Lời cuối cho phép gửi lời cảm ơn đặc biệt tới gia đình, bạn bè bên cạnh, ủng hộ, giúp đỡ phương diện Tôi xin trân trọng cảm ơn ! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Hoàng Thị Thu Hường ii      MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi TÓM TẮT viii PHẦN : MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu củ Dòm 2.1.1 Sơ lược phân bố 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Đặc tính sinh học sinh thái 2.1.4 Giá trị sử dụng 2.1.5 Phân bố tình trạng phân hạng 2.2 Tình hình nghiên cứu củ Dịm giới Việt Nam 2.2.1 Trên giới 2.2.2 Tại Việt Nam 2.3 Một số nghiên cứu nhân giống in vitro thuốc họ Tiết dê (Menispermanceae) thuốc củ Dòm (Stephania dielsiana Y C Wu ) 2.3.1 Nghiên cứu nhân giống in vitro thuốc họ Tiết dê 2.3.3 Các nghiên cứu nhân giống in vitro Củ dòm PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 3.1 Vật liệu nghiên cứu 11 3.2 Dụng cụ, hóa chất, môi trường nghiên cứu 11 iii      3.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 11 3.3.1 Địa điểm nghiên cứu 11 3.3.2 Thời gian nghiên cứu 11 3.4 Nội dung nghiên cứu 11 3.5 Phương pháp nghiên cứu 12 3.5.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 12 3.5.2 Phương pháp xử lí số liệu 15 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 0,1 % đến giai đoạn tạo mẫu in vitro 16 4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BAP α-NAA đến hình thành mơ sẹo tái sinh chồi 18 4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BAP 2,4 D đến hình thành mô sẹo tái sinh chồi 21 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro 23 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 5.1 Kết luận 27 5.2 Kiến nghị 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 I Tài liệu tham khảo nước 28 II Tài liệu tham khảo nước 28 PHỤ LỤC 30 iv      DANH MỤC BẢNG   Bảng Kết khử trùng mẫu đoạn thân củ Dòm với HgCl2 0,1 % 17 Bảng Ảnh hưởng tổ hợp BAP 2,4 D đến hình thành mơ sẹo tái sinh chồi 21 Bảng Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro 24  v      DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây củ Dịm (Stephania dielsiana Y.C.Wu ) Hình 4.1 Hình ảnh củ Dịm khử trùng HgCl2 0,1% phút sau tuần nuôi cấy 18 Hình 4.2 Hình ảnh củ Dịm khử trùng HgCl2 0,1% phút sau tuần nuôi cấy 18 Hình 4.3 Hình ảnh lát mỏng công thức ĐC ( môi trường MS + mg/l BAP ) sau tuần nuôi cấy 19 Hình 4.4 Hình ảnh lát mỏng CT1 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,1 mg/l NAA ) sau tuần nuôi cấy 19 Hình 4.5 Hình ảnh lát mỏng CT2 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA ) sau tuần nuôi cấy 20 Hình 4.6 Hình ảnh lát mỏng CT3 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA ) sau tuần nuôi cấy 20 Hình 4.7 Hình ảnh tái sinh chồi sau tuần nuôi cấy CT1 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,1 mg/l 2,4 D ) 23 Hình 4.8 Hình ảnh phát sinh mơ sẹo sau tuần ni cấy CT1 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,1 mg/l 2,4 D ) 23 Hình 4.9 Hình ảnh phát sinh mơ sẹo sau tuần nuôi cấy CT2 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,3 mg/l 2,4 D ) 23 Hình 4.10 Hình ảnh tái sinh chồi sau tuần ni cấy CT2 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,2 mg/l 2,4 D ) 23 Hình 4.11 Hình ảnh chồi ni cấy công thức ĐC ( không bổ sung BAP ) 25 Hình 4.12 Hình ảnh chồi ni cấy CT1 ( bổ sung mg/l BAP ) 25 Hình 4.13 Hình ảnh chồi ni cấy CT2 ( bổ sung mg/l BAP) 26 Hình 4.14 Hình ảnh chồi ni cấy CT5 ( bổ sung mg/l BAP) 26 Hình 15 Hình ảnh chồi ni cấy CT4 ( bổ sung mg/l BAP) 26   vi      DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4 D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BAP 6-Benzylaminopurine CT Cơng thức CV(%) Sai số thí nghiệm ĐC Đối chứng ĐHST Điều hướng sinh trưởng IAA Indole-3-acetic acid IBA Indol Butiric Acid LSD0.05 Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MS Môi trường Murashige Skoog, 1962 α-NAA α- Naphtyl acetic acid   vii     TĨM TẮT Củ Dịm (Stephania dielsiana Y C Wu) loài thuốc quý Việt Nam dùng để trị bệnh đau đầu, sốt rét, đau bụng, ngồi cịn dùng để trang trí, mang lại hiệu kinh tế cao Hiện nằm danh sách sách đỏ, có nguy bị tuyệt chủng cao cần có phương pháp bảo tồn hợp lý Bên cạnh phương pháp nhân giống thông thường phương pháp giâm cành, gieo hạt, phương pháp nuôi cấy in vitro đánh giá mang lại hiệu cao Hiện nay, thuốc củ Dòm nhân lên số phương pháp truyền thống, nhiên phương pháp cho hệ số nhân giống thấp Để tìm phương pháp hiệu hơn, thực hiên đề tài nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro thuốc củ Dòm Kết thí nghiệm cho thấy, sát khuẩn bề mặt mẫu thân non với ethanol 70% phút, sau khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% phút, nuôi cấy mơi trường dinh dưỡng MS có bổ sung mg/l BAP, 30 g/l sucrose 6,3 g/l agar cho tỉ lệ mẫu 65,5 % tỉ lệ mẫu tái sinh 58,9 % sau tuần nuôi cấy Cảm ứng tạo mô sẹo tái sinh chồi mơi trường dinh dưỡng MS có bổ sung mg/l BAP; 0,3 mg/l 2,4D; 30 g/l sucrose; 6,3 g/l agar Cho tỉ lệ tạo mô sẹo 10 % tỉ lệ tái sinh chồi 13,33 % Mơi trường nhân nhanh Củ dịm mơi trường dinh dưỡng MS có bổ sung mg/l BAP; 30 g/l sucrose; 6,3 g/l agar, cho hệ số nhân chồi 3,1 chồi/mẫu ; chiều cao trung bình chồi cm; chồi xanh, mập, khỏe     viii     PHẦN : MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Củ Dòm (Stephania dielsiana Y C Wu ) loại dược liệu quý thuộc họ Tiết dê (Menispermaceae), thân thảo leo, có củ thn dài, Phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới châu Á Ở Việt Nam, có 10 – 12 lồi, có – lồi khơng có rễ phình thành củ Lồi củ Dịm xếp vào diện tương đối hiếm, có điểm phân bố Ba Vì (Hà Tây), Kỳ Sơn (Hồ Bình), Bạch Thơng (Bắc Kạn) Trà My (Quảng Nam) (Nguyễn Kim Liễn, 2011) Rễ củ chứa nhiều hoạt chất dược liệu quý Có vị đắng, lợi tiểu an thần, tiêu viêm Dùng chữa trị bệnh đau lưng, mỏi nhức chân, đau bụng Có nhiều nghiên cứu củ Dịm cịn có tác dụng ức chế số dòng tế bào ung thư Các chất tinh khiết phân lập từ loài thuộc chi kháng số dịng tế bào ung thư cepharanthin (có tác dụng kích thích miễn dịch), tetrandrin thuộc nhóm bis benzylisoquinolin (Nguyễn Quốc Huy, 2010) Ngồi củ Dòm sử dụng để làm cảnh trang trí, nhiều người ưa chuộng, mang tiềm giá trị kinh tế cao Có giá trị lớn song lồi có nguy tuyệt chủng cao, việc nhân giống vơ quan trọng Hiện có nhiều phương pháp nhân giống củ Dòm sử dụng trồng mầm củ, gieo hạt, giâm hom, giâm cành, song trồng bị bệnh phát triển, chất lượng trồng thấp (Trần Cơng Vinh, 2019) Vì việc tìm kiếm phương pháp nhân giống mang lại hiệu cao cần thiết Trong đó, phương pháp nuôi cấy in vitro biết đến phương pháp nhân giống tối ưu, tạo số lượng lớn bệnh áp dụng thành công phổ biến nhiều loài thực vật khác Do nghiên cứu này, chúng tơi thử nghiệm nghiên cứu nhân giống củ Dòm phương pháp in vitro 1.2 Mục đích đề tài Bước đầu xác định số thông số kỹ thuật cho quy trình nhân giống vơ tính thuốc củ Dịm điều kiện in vitro 1        Hình 4.7 Hình ảnh phát sinh mơ   Hình 4.8 Hình ảnh tái sinh chồi sẹo sau tuần nuôi cấy CT1 ( môi sau tuần nuôi cấy CT1 ( môi trường MS + mg/l BAP + 0,1 mg/l trường MS + mg/l BAP + 0,1 mg/l 2,4 D ) 2,4 D ) Hình 4.9 Hình ảnh tái sinh chồi Hình 4.10 Hình ảnh phát sinh mơ sau tuần nuôi cấy CT2 ( môi sẹo sau tuần nuôi cấy CT2 ( trường MS + mg/l BAP + 0,2 mg/l môi trường MS + mg/l BAP + 0,3 2,4 D ) mg/l 2,4 D ) 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro Trong quy trình ni cấy mơ tế vào thực vật, giai đoạn nhân nhanh giai đoạn định hiệu tốc độ của quy trình Cytokinin nhóm chất điều hịa sinh trưởng có khả kích thích tạo chồi, có BAP chất có hoạt tính sinh học cao, nên thường sử dụng để thúc phân chia   23     lớn lên mô tế bào nuôi cấy mô tế bào thực vật Với nguồn vật liệu củ Dịm chúng tơi thu được, việc nghiên cứu với lát cắt mỏng không khả quan, cho hiệu thấp nên thí nghiệm chúng tơi thử nghiệm nhân nhanh đoạn chồi chứa mắt ngủ Thí nghiệm bổ sung BAP với nồng độ 1,2, 3, mg/l Sau tuần theo dõi, thu kết thể bảng 4.3 Bảng Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro Công thức Nồng độ BA (mg/l) Số chồi (chồi/mẫu) Chiều cao chồi (cm) Hình thái chồi ĐC 2,15 1,75 + CT1 2,30 1,79 ++ CT2 3,15 2,00 +++ CT3 3,30 1,62 ++ CT4 3,50 1,63 ++ LSD 0,05 0,451 0,367 CV(%) 5,7 7,5 Ghi chú: (+) chồi vàng, mềm (++) chồi trung bình, xanh, cứng (+++) chồi tốt, xanh vươn, mập, cứng Kết nghiên cứu bảng cho thấy, tăng nồng độ BAP số lượng chồi tăng lên so với môi trường khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng (ĐC) Đặc biệt, nồng độ mg/l BAP đạt 3,5 chồi/mẫu, khác biệt so với cơng thức cịn lại Tuy nhiên, nồng độ đạt số lượng chồi nhiều chiều cao chồi thấp, nhiều chồi nhỏ Trong đó, mơi trường MS bổ sung mg/l BAP đánh giá môi trường phù hợp có hệ số chồi thấp 3,15 cho chất lượng chồi tốt nhiều , chiều cao chồi trung bình 2,00 cm, chồi khỏe mập xanh cứng Sự sai khác tiêu hệ số nhân công thức 2,3,4 ý nghĩa mặt thống kê với P < 0,05 Nguyễn Văn Việt cộng (2018) trước nghiên cứu ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi Củ dòm,   24     nghiên cứu kết hợp BAP, Kinetin NAA Cụ thể môi trường dinh dưỡng MS bổ sung 0,7 mg/l BAP; 0,2 mg/l Kinetin; 0,3 mg/l NAA; 30 g/l sucrose; 6,5 g/l agar cho hiệu nhân nhanh chồi đạt trung bình 3,3 chồi/mẫu , chiều cao trung bình chồi đạt 3,8 cm, chồi mập khỏe, xanh đậm Ở thí nghiệm sử dụng BAP với nồng độ mg/l kết nhân nhanh chồi thu gần tương đồng với kết nghiên cứu sử dụng kết hợp chất ĐHST Điều giải thích nguồn vật liệu, điều kiện thí nghiệm khác Vậy nghiên cứu này, CT2 sử dụng môi trường dinh dưỡng MS bổ sung thêm mg/l BAP + 100 mg/l vitamin C + 30 g/l sucrose + 6,3 g/l agar công thức môi trường nhân nhanh chồi Củ dòm tốt với 3,1 chồi/mẫu chiều cao trung bình chồi cm Qua thí nghiệm ban đầu chúng tơi vật liệu thuốc Củ Dòm thu thập Ba Vì, chúng tơi có số nhận xét sau: - Cây thuốc củ Dịm có chứa nhiều hợp chất thứ cấp nên dễ làm nâu hóa mơi trường Trong q trình ni cấy in vitro cần có biện pháp phù hợp để khắc phục - Nuôi cấy lát cắt mỏng làm tăng hóa nâu mẫu ni cấy đoạn thân chứa mắt ngủ     Hình 4.11 Hình ảnh chồi ni cấy cơng thức ĐC ( khơng bổ sung BAP )   25   Hình 4.12 Hình ảnh chồi ni cấy CT1 ( bổ sung mg/l BAP )   Hình 4.13 Hình ảnh chồi nuôi cấy CT2 ( bổ sung mg/l BAP)   Hình 14 Hình ảnh chồi ni Hình 4.15 Hình ảnh chồi ni cấy cấy CT4 ( bổ sung mg/l BAP) CT5 ( bổ sung mg/l BAP)   26     PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Công thức khử trùng mẫu tốt sử dụng HgCl2 0,1% phút cho tỉ lệ mẫu 66,67 % tỉ lệ mẫu tái sinh 55,56%, mẫu chồi mập, khỏe Môi trường phù hợp để nuôi cấy lát mỏng môi trường dinh dưỡng MS có bổ sung mg/l BAP; 0,3 mg/l 2,4D; 30 g/l sucrose; 6,3 g/l agar Cho tỉ lệ tạo mô sẹo 10 % tỉ lệ tái sinh chồi 13,33 % Môi trường phù hợp để nhân nhanh củ Dịm mơi trường dinh dưỡng MS có bổ sung mg/l BAP; 30 g/l sucrose; 6,3 g/l agar Cho hệ số nhân chồi 3,1 chồi/mẫu ; chiều cao trung bình chồi cm; chồi xanh, mập, khỏe 5.2 Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu hạn chế, luận văn chưa thu nhiều thông tin cho quy trình nhân giống in vitro củ Dịm, cần tiếp tục thí nghiệm thử nghiệm khác: - Nghiên cứu ảnh hưởng chất chống hóa nâu mơi trường tới ni cấy in vitro củ Dịm - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chiếu sáng tới ni cấy lát mỏng in vitro củ Dịm - Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng để kích thích chồi in vitro rễ tạo hồn chỉnh - Nghiên cứu mơi trường, điều kiện in vitro củ Dòm vườn ươm   27     TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tham khảo nước Nguyễn Tiến Bân (2010), Sách Đỏ Việt Nam Phần II: Thực Vật, chủ biên, Sách Đỏ Việt Nam Phần Ii Thực Vật.-Hà Nội: Khoa Học Tự Nhiên Và Công Nghệ Nguyễn Chiều (1982), "Nghiên cứu xác định tên khoa học củ dịm", Tạp chí Dược liệu, tr 15-17 Nguyễn Quốc Huy (2010), "Nghiên cứu thực vật, thành phần hóa học, số tác dụng sinh học số loài thuộc chi Stephania Lour, Việt Nam", Luận án Tiến sĩ chuyên nghành Dược liệu–Dược học cổ truyền, Hà Nội Phạm Thanh Kỳ (2009), "L-Tetrahydropalmatin, Oxostephanin Dehydrocreabanin phân lập từ củ bình vơi Stephania dielsiana Y.C.Wu.", Tạp chí Dược liệu, tr 23-27 Nguyễn Kim Liễn (2011), "Nghiên cứu đặc điểm phân bố, thử nghiệm nhân giống lồi Củ Dịm (Stephania dielsiana Y.C Wu) Vườn Quốc gia Ba Vì, Hà Nội" Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, chủ biên, Y học Trịnh Ngọc Nam (2012), "Nghiên cứu nhân giống in vitro khảo sát hợp chất alkaloid rotunda từ Bình vơi ( Stephania rotunda Lour.) ", Vietnam Journal of Science and Technology 49(4) Hà Thị Mỹ Ngân (2019), "Một số tượng bất thường vi nhân giống thực vật giải pháp khắc phục ", Tạp chí Cơng nghệ sinh học tr 23 - 39 Đỗ Quyên (2015), "Phân lập xác định cấu trúc hợp chất alcaloid ức chế acetyl cholinesterase loài stephania dielsiana Y.C WU phương pháp sắc ký lớp mỏng sử dụng chất màu hoạt tính sinh học", Tạp chí Dược liệu tr 101 - 106 10 Nguyễn Thị Sen (2020), "Nhân giống Bình vơi (stephania glabra (roxb.) miers) in vitro", Journal of Science and Technology 3(2), tr 15-20 11 Sysomephone Tangmany (2020), "Nghiên cứu công thức khử trùng mẫu môi trường nuôi cấy in vitro Bình vơi (Stephania spp.)", TNU Journal of Science and Technology 225(08), tr 239-244 12 Nguyễn Văn Việt (2018), "Xây dựng hệ thống tái sinh từ nuôi cấy Lát mỏng tế bào Củ Dòm (Stephania dielsiana Y.C Wu)" 13 Trần Cơng Vinh (2019), "Nghiên cứu bảo tồn lồi Củ dòm (Stephania dielsiana Y.C Wu.) xã Năng Khả-huyện Na Hang-Tỉnh Tuyên Quang" II Tài liệu tham khảo nước 14 Yecheng Deng, Yanzhen Yu, Haiyu Luo, Ming Zhang, Xuejing Qin Lifeng Li (2011), "Antimicrobial activity of extract and two alkaloids from traditional Chinese medicinal plant Stephania dielsiana", Food Chemistry 124, tr 1556-1560 15 Jaime (2015), "Dendrobium micropropagation: a review", Plant cell reports 34(5), tr 671-704 16 James Knockleby, Bruno Pradines, Mathieu Gendrot, Joel Mosnier, Thanh Tam Nguyen, Thi Thuy Trinh, Hoyun Lee Phuong Mai Le (2020), "Cytotoxic and Anti-Plasmodial Activities of Stephania dielsiana YC Wu Extracts and the Isolated Compounds",   28     Molecules 25(16), tr 3755 17 Chao-Lin Kuo, Jun-Yi Chang, Hung-Chi Chang, Sushim Kumar Gupta, Hsiao-Sung Chan, Emily Chin-Fun Chen Hsin-Sheng Tsay (2011), "In vitro production of benzylisoquinoline from Stephania tetrandra through callus culture under the influence of different additives", Botanical Studies 52(3) 18 Letham (1974), "Regulators of Cell Division in Plant Tissues: XX The Cytokinins of Coconut Milk", Physiologia plantarum 32(1), tr 66-70 19 Zhenling Yan, Hon Guo Wu, Yecheng Deng, Zhengjun Wu, Xiang-ming Xu Xiaowei Li (2020), "Endophytic fungi from the root tubers of medicinal plant Stephania dielsiana and their antimicrobial activity", Acta Ecologica Sinica 40, tr 383-387   29     PHỤ LỤC Kết xử lí số liệu phần mềm IRRISTAT Phụ lục 1: Ảnh hưởng HgCl2 0,1 % đến giai đoạn tạo mẫu invitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE MN FILE H1 22/ 8/21 15:52 :PAGE Thi nghiem khu trung vao mau VARIATE V003 MN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 483.886 * RESIDUAL 241.943 51.8149 28.02 0.001 8.63582 * TOTAL (CORRECTED) 535.701 66.9627 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MS FILE H1 22/ 8/21 15:52 :PAGE Thi nghiem khu trung vao mau VARIATE V004 MS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 483.886 241.943 28.02 0.001   30     * RESIDUAL 51.8149 8.63582 * TOTAL (CORRECTED) 535.701 66.9627 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MTS FILE H1 22/ 8/21 15:52 :PAGE Thi nghiem khu trung vao mau VARIATE V005 MTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2052.08 * RESIDUAL 1026.04 37.0744 166.05 0.000 6.17907 * TOTAL (CORRECTED) 2089.16 261.144 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE H1 22/ 8/21 15:52 :PAGE Thi nghiem khu trung vao mau MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS MN MS MTS CT1 51.1100 48.8900 21.1100 CT2 33.3333 66.6667 55.5567 CT3 40.0000 60.0000 26.6667   31     SE(N= 3) 1.69665 5%LSD 6DF 1.69665 5.86897 1.43516 5.86897 4.96445 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE H1 22/ 8/21 15:52 :PAGE Thi nghiem khu trung vao mau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | MN 41.481 8.1831 2.9387 7.1 0.0012 MS 58.519 8.1831 2.9387 5.0 0.0012 MTS 34.444 16.160 2.4858 | 7.2 0.0000 Phụ lục 2: Ảnh hưởng tổ hợp BAP 2,4 D đến hình thành mơ sẹo tái sinh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTMS FILE T 31/ 8/** 17:28 PAGE Anh huong cua to hop BAP va 2,4 D den hinh mo seo va tai sinh choi VARIATE V003 TLTMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN   32   F RATIO PROB ER   ============================================================================= NL 88.9111 88.9111 ****** 0.000 CT 66.6333 22.2111 ****** 0.000 * RESIDUAL 479461E-04 159820E-04 * TOTAL (CORRECTED) 155.544 22.2206 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTSC FILE T 31/ 8/** 17:28 PAGE Anh huong cua to hop BAP va 2,4 D den hinh mo seo va tai sinh choi VARIATE V004 TLTSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= NL 888178E-15 888178E-15 0.00 0.996 CT 244.356 * RESIDUAL 81.4519 ****** 0.000 3 283606E-04 945353E-05 * TOTAL (CORRECTED) 244.356 34.9079 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE T 31/ 8/** 17:28 PAGE Anh huong cua to hop BAP va 2,4 D den hinh mo seo va tai sinh choi MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS TLTMS TLTSC   33     8.33500 5.00000 1.66750 5.00000 SE(N= 4) 0.199888E-02 0.153733E-02 5%LSD 3DF 0.895769E-02 0.688933E-02 - MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS TLTMS TLTSC 3.33500 2 10.0000 13.3300 3.33500 6.67000 3.33500 SE(N= 2) 5%LSD 3DF 0.000000 0.000000 0.282684E-02 0.217411E-02 0.126681E-01 0.974299E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE T 31/ 8/** 17:28 PAGE Anh huong cua to hop BAP va 2,4 D den hinh mo seo va tai sinh choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 8) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | |   34   |CT |   TLTMS 5.0013 4.7139 0.39978E-02 0.1 0.0000 0.0000 TLTSC 5.0000 5.9083 0.30747E-02 0.1 0.9957 0.0000 Phụ lục 3: Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE H 31/ 8/** 14:23 PAGE Anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh choi in vitro VARIATE V003 SOCHOI LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= NL 399999E-02 399999E-02 0.15 0.715 CT 3.00600 * RESIDUAL 751500 106000 28.36 0.005 265000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 3.11600 346222 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE H 31/ 8/** 14:23 PAGE Anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh choi in vitro VARIATE V004 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= NL 784000E-02 784000E-02 0.45 0.544 CT 192300 480750E-01 2.74 0.176   35     * RESIDUAL 700600E-01 175150E-01 * TOTAL (CORRECTED) 270200 300222E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE H 31/ 8/** 14:23 PAGE Anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh choi in vitro MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS SOCHOI CHIEUCAO 2.90000 1.73200 2.86000 1.78800 SE(N= 5) 0.728011E-01 0.591862E-01 5%LSD 4DF 0.285365 0.231997 - MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS SOCHOI CHIEUCAO 2.15000 1.75000 2 2.30000 1.79000 3.15000 2.00500 3.30000 1.62500 3.50000 1.63000 SE(N= 2) 0.115109 0.935815E-01   36     5%LSD 4DF 0.451201 0.366819 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE H 31/ 8/** 14:23 PAGE Anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh choi in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL (N= 10) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS SOCHOI CHIEUCAO 10 2.8800 0.58841 10 1.7600 0.17327 0.16279 0.13234 | | | | | | | 5.7 0.7150 0.0053 7.5 0.5436 0.1757   37   |CT |