(Luận văn) nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả năng sinh bacteriocin cao từ các sản phẩm lên men truyền thống

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HỒNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CÓ KHẢ an lu NĂNG SINH BACTERIOCIN CAO TỪ CÁC SẢN PHẨM LÊN MEN TRUYỀN THỐNG n va tn to p ie gh KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC d oa nl w : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ thực phẩm Khoa : CNSH – CNTP Khóa học : 2013 – 2017 ll u nf a nv a lu Hệ đào tạo oi m a nh tz THÁI NGUYÊN, NĂM 2017 z om l.c gm @ ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HỒNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CÓ KHẢ NĂNG SINH BACTERIOCIN CAO TỪ CÁC SẢN PHẨM LÊN MEN an lu TRUYỀN THỐNG va n KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC p ie gh tn to d oa nl w : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ thực phẩm Lớp : K45 - CNTP Khoa : CNSH – CNTP a lu Hệ đào tạo a nv : 2013 – 2017 Khóa học u nf Giảng viên hƣớng dẫn: TS Trần Văn Chí ll oi m a nh THÁI NGUYÊN, NĂM 2017 tz z om l.c gm @ i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực tập phịng Cơng nghệ Lên Men, Khoa Cơng nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, em nhận nhiều giúp đỡ từ Ban chủ nhiệm Khoa CNSH – CNTP, thầy hướng dẫn, bạn bè gia đình Trước hết, em xin chân thành cảm ơn TS Trần Văn Chí, giảng viên Khoa CNSH – CNTP, tạo điều kiện, hướng dẫn tận tình giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS Vi Đại Lâm giảng viên Khoa CNSH- CNTP, người hướng dẫn em thao tác thực hành cho em sai lầm giúp em hồn thành tốt khóa luận Em xin chân thành cảm ơn đến thầy cô Khoa CNSH – CNTP, lu an trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tận tình bảo, giúp đỡ em va trình học tập hồn thành khóa luận n tn to Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, người ie gh bên cạnh động viên giúp đỡ em suốt thời gian thực p khóa luận d oa nl w Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2017 ll u nf a nv a lu Sinh viên thực oi m Nguyễn Thị Hồng tz a nh z om l.c gm @ ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Phân loại bacteriocin theo Jack Bảng 2.2: Bacteriocin lớp IIc theo phân loại Klaenhammer 10 Bảng 2.3: Độ bền nhiệt, pH enzym thủy phân số bacteriocin sinh tổng hợp vi khuẩn lactic 12 Bảng 2.4: Sự đa dạng giống vi khuẩn lactic (Gasson Michad J, 1993) 26 Bảng 3.1: Môi trường thạch MRS (de Man, Rogosa and Sharpes) (g/l) 32 Bảng 3.2: Các nguồn mẫu phân lập 34 Bảng 4.1 Kết xác định hình thái khuẩn lạc chủng LAB từ mẫu 39 Bảng 4.2 Hoạt tính kháng vi khuẩn Staphylococcus aureus chủng vi lu khuẩn Lactic 44 an Bảng 4.3 Khảo sát điều kiện tách bacteriocin từ chủng nghiên cứu 47 n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf a nv a lu oi m tz a nh z om l.c gm @ iii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Cấu trúc nisin ( Nguồn: Ruiz-Larrea cộng sự, 2005) Hình 2.2 : Cấu trúc sakacin P Hình 2.3: Cơ chế hoạt động bacteriocin(Nguồn Fidel Toldrá, 2009) 15 Hình 2.4: Cơ chế tổng hợp bacteriocin nhóm I 19 Hình 2.5: Cơ chế tổng hợp bacteriocin nhóm II(Nguồn P.Michael Davidson, 2005) 20 Hình 3.1 : Vùng kháng khuẩn dịch Bacteriocin đĩa petri 36 Hình 4.1 Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic sinh tổng hợp bacteriocin 43 Hình 4.2 Kiểm tra hoạt tính bacteriocin vi khuẩn lactic phương pháp khuyếch tán đĩa thạch với chủng kiểm định Staphylococcus lu aureus 45 an Hình 4.3 Biểu đồ đường kính kháng khuẩn chủng SC2 SC3 va n Samonella 45 tn to Hình 4.4 Đường kính kháng khuẩn SC2 SC3 với chủng kiểm định ie gh Samonella 46 p Hình 4.5 Ảnh hưởng tốc độ ly tâm đến khả kháng khuẩn dịch d oa nl w bacteriocin 48 ll u nf a nv a lu oi m tz a nh z om l.c gm @ iv DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT DNA : Deoxyribonucleic acid LAB : Lactic acid Bacteria MRS : de Man, Rogosa and Sharpes an lu n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf a nv a lu oi m tz a nh z om l.c gm @ v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn lu an PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU va 2.1 Bacteriocin n tn to 2.1.1 Khái niệm ie gh 2.1.2 Các chủng vi sinh vật sinh bacteriocin p 2.1.3 Phân loại d oa nl w 2.1.4 Tính chất bacteriocin 11 2.1.5 Cơ chế hoạt động 14 a lu 2.1.7 Ứng dụng Bacteriocin 20 a nv 2.2 Vi khuẩn Lactic 23 u nf 2.2.1 Khái quát lịch sử phát triển vi khuẩn lactic 23 ll 2.2.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa vi khuẩn lactic 23 oi m 2.3 Tình hình nghiên cứu 27 a nh 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 27 tz z 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 30 om l.c gm @ vi PHẦN ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên 32 3.1.1 Đối tương nghiên cứu 32 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 32 3.1.3 Môi trường sử dụng 32 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 33 3.3 Nội dung nghiên cứu 33 3.4 Phương pháp nghiên cứu 33 3.4.1 Phương pháp phân lập tuyển chọn vi sinh vật 33 3.4.2 Khảo sát chọn lọc dịng vi khuẩn lactic sinh bacteriocin có tính kháng khuẩn cao phương pháp khuyếch tán giếng thạch 35 3.4.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ ly tâm tới độ tinh lu an dịch bacteriocin thô 37 n va 3.4.4 Phương pháp nghiên cứu khả kháng khuẩn chế phẩm tn to bacteriocin thô 37 ie gh PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 p 4.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn lactic 39 d oa nl w 4.2 Kết chọn lọc dòng vi khuẩn lactic sinh Bacteriocin có tính kháng khuẩn cao phương pháp khuyếch tán giếng thạch 43 a lu 4.3 Nghiên cứu khả kháng khuẩn chế phẩm bacteriocin thô 46 a nv PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 u nf 5.1 Kết luận 49 ll 5.2 Kiến nghị 49 oi m TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 tz a nh PHỤ LỤC z om l.c gm @ PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Vi khuẩn lactic (LAB) sử dụng nhiều thực phẩm lên men dưa muối, cà muối, lên men rượu, sữa chua, nem chua, phomai, bia [5] Chúng có vai trị quan trọng đời sống tăng cường miễn dịch, ức chế vi sinh vật có hại, bổ sung vi sinh vật có lợi, tác dụng kháng khuẩn… Và gần có nhiều nghiên cứu chứng minh LAB có khả sinh tổng hợp bacteriocin Bacteriocin chất kháng khuẩn có chất protein tổng hợp riboxom từ chuỗi peptit protein vi khuẩn Gram âm Gram dương [9] Bacteriocin có khả tiêu diệt vi khuẩn tạo thành kênh làm thay đổi tính thấm màng tế bào, nhiều loại bacteriocin cịn có lu an khả phân giải DNA, RNA công vào peptidoglycan làm suy yếu n va thành tế bào vi khuẩn gây hại [7] Vì bacteriocin có nhiều ứng tn to dụng, mỹ phẩm, xử lí mơi trường, chế biến thức ăn chăn nuôi, y gh học công nghệ thực phẩm [4] Trong y dược, bacteriocin p ie ứng dụng chế phẩm sinh học để điều trị số bệnh viêm d oa nl w đường tiết niệu, hay nhiễm trùng đường tiêu hóa cịn sử dụng điều trị kháng sinh đồ [6]… Trong ngành mỹ phẩm, bacteriocin sử dụng a lu thành phần số loại mỹ phẩm chăm sóc da có tính diệt khuẩn giữ a nv ẩm Trong công nghệ thực phẩm, bacteriocin nghiên cứu ứng dụng u nf rộng rãi chế biến bảo quản số loại thực phẩm phomat, xúc ll xích, sữa chua, số loại sản phẩm thịt, rau đóng hộp [2] m oi Ở Việt Nam bacteriocin sử dụng công nghiệp thực phẩm sản a nh xuất chủ yếu công ty Châu Âu, Mỹ gần Trung Quốc, có tz z giá thành cao, nước ta có nhiều sản phẩm lên men om l.c gm @ truyền thống tương, chao, mắm tôm, dưa muối… Nhận thấy tiềm ứng dụng Bacteriocin sản xuất từ vi khuẩn LAB nên em chọn tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả sinh bacteriocin cao từ sản phẩm lên men truyền thống” 1.2 Mục tiêu đề tài Nghiên cứu, tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả sinh bacteriocin cao từ sản phẩm lên men truyền thống 1.3 Yêu cầu đề tài - Từ sản phẩm lên men tự nhiên phân lập chủng LAB có khả sinh tổng hợp bacteriocin - Tuyển chọn số chủng có khả sinh bacteriocin cao - Nghiên cứu khả kháng vi khuẩn kiểm định (Staphylococcus aureus, Samonella, E coli) chế phẩm bacteriocin thô lu an 1.4 Ý nghĩa đề tài n va 1.4.1 Ý nghĩa khoa học tn to Giúp sinh viên củng cố hệ thống lại kiến thức học vào nghiên Biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lý, phân p ie gh cứu khoa học d oa nl w tích số liệu trình bày báo cáo khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn a lu Tuyển chọn số chủng LAB có khả sinh bacteriocin cao, a nv giúp làm phong phú thêm sưu tập chủng vi sinh vật sinh chất kháng khuẩn, ll u nf tạo nhiều lựa chọn cho việc tuyển chọn chủng oi m tz a nh z om l.c gm @ 40 lồi, kích thước khoảng 1mm Màu trắng trong, hình trịn, kích thước khoảng 4mm Màu trắng trong, trịn đều, hình trịn, kích thước khoảng 7mm Trắng sữa, trơn bóng, hình trịn, kích thước khoảng 2mm Trắng đục vơi ngả vàng,lồi, hình trịn, kích thước khoảng 7mm Trắng trong, có nhân lồi, hình trịn, kích thước khoảng 8mm Màu trắng trong, hình trịn, có nhân sáng, nhân lồi, có kích thước khoảng 2mm Màu trắng đục ngả vàng,hình trịn, bề mặt lồi, kích thước khoảng 5mm Màu trắng đục, nhẵn bóng, mép trơn đều, hình trịn, kích thước khoảng 2mm Màu trắng đục,nhẵn, mép viền cưa, hình trịn, kích thước khoảng 4mm Màu trắng đục, bề mặt nhám lồi, hình trịn, kích thước khoảng 3mm Kim chi I KC I.4 KC I.5 10 KC I.6 11 KC I.7 12 KC I.8 13 KC II.1 14 KC II.2 Kim chi II 15 KC II.3 17 KC II.6 KC II.8 an KC II.5 gh lu 16 n va tn to 18 p ie Màu trắng trong, trơn bóng, hình trịn, kích thước khoảng 3mm Màu trắng đục ngả vàng, viền ngồi màu trắng ngà,hình trịn, bề mặt nhăn, kích thước khoảng 5mm Màu trắng đục, viền mép tròn đều, có nhân, hình trịn, kích thước khoảng 3mm M1 a nv a lu Mẻ Màu trắng trong, trịn đều, kích thước khoảng 6mm M2 ll u nf 21 KC II.9 d oa nl w 20 19 M4 tz 23 Màu trắng ngà, có lớp màng phía trên,hình trịn kích thước khoảng 2mm Màu trắng trong, hình trịn, kích thước khoảng 6mm a nh M3 oi m 22 z om l.c gm @ 41 24 M5 25 M6 26 M7 27 DChM1 Dưa chuột muối 28 DChM3 29 DChM4 30 DChM5 31 XHM1 32 XHM2 lu an Xu hào muối XHM3 34 XHM4 n va 33 gh tn to XHM5 p ie 35 38 Bắp cải muối XHM6 BCM1 a nv a lu 37 d oa nl w 36 BCM4 u nf 40 DCM2 DCM4 tz 41 oi m Dưa cải muối a nh DCM1 ll 39 Màu trắng trong, nhân lồi bóng, hình trịn, kích thước khoảng 3mm Màu trắng đục, bề mặt trơn, nhân lồi, hình trịn, kích thước khoảng 7mm Màu trắng đục ngả vàng, viền ngồi màu trắng ngà, hình trịn, kích thước khoảng 4mm Màu trắng đục, nhẵn bóng,hơi nhầy, hình trịn, kích thước khoảng 5mm Màu trắng đục, mép trơn đều, lồi ít, hình trịn, kích thước khoảng 1mm Màu trắng sữa, trơn bóng, hình trịn, kích thước khoảng 8mm Màu trắng sữa, trơn bóng, có tạo ria, kích thước khoảng 5mm Màu trắng đục, nhẵn bóng, nhầy, hình trịn, kích thước khoảng 10mm Màu trắng đục, bề mặt nhăn,hình trịn, có lớp màng, kích thước khoảng 7mm Màu trắng sữa, trơn bóng, hình trịn, kích thước khoảng 6mm Màu trắng sáng, có nhân,có lớp màng, hình trịn, kích thước khoảng 5mm Màu trắng ngà, có lớp màng phía trên, hình trịn, kích thước khoảng 2mm Trắng trong, nhân lồi bóng, hình trịn, kích thước khoảng 12mm Màu trắng đục ngả vàng, bề mặt lồi, hình trịn, kích thước khoảng 9mm Màu trắng trong, có nhân lồi, hình trịn, kích thước khoảng 5mm Màu trắng đục ngả vàng, bề mặt lồi, hình trịn, kích thước khoảng 7mm Màu trắng sữa, trơn bóng, hình trịn, kích thước khoảng 6mm Màu trắng sáng, bề mặt nhăn, hình trịn, kích thước khoảng 5mm z om l.c gm @ 42 42 DCM6 43 DCM7 44 DCM8 45 MM1 46 MM4 Màu trắng ngà, mép bờ cưa, có lớp màng, hình trịn, kích thước khoảng 9mm Màu trắng đục, mép viền cưa, hình trịn, kích thước khoảng 2mm Màu trắng đục, nhân lồi, hình trịn, kích thước khoảng 6mm Màu trắng sữa, trơn, hình trịn, kích thước khoảng 6mm Màu trắng ngà,có lớp màng, hình trịn, kích thước khoảng 5mm Màu trắng sáng, bề bặt nhăn, có nhân, hình trịn, kích thước khoảng 8mm Màu trắng sữa, trơn, hình trịn, kích thước khoảng 6mm Màu trắng đục, bề mặt nhăn, có lớp màng, hình trịn, kích thước khoảng 7mm Màu trắng đục, viền ngồi trắng đục, bên trắng ngà, hình trịn, kích thước khoảng 9mm Màu trắng sáng, bề mặt nhăn, hình trịn, kích thước khoảng 5mm Hình trịn, trắng sữa, nhẵn bóng, có kích thước khoảng 12mm Măng muối 47 MM5 48 SM1 49 SM2 Sung muối 50 SM3 an lu SM4 52 ST2 n va 51 ie gh tn to Trắng sữa,hình trịn, trơn bóng, có nhân lồi, kích thước khoảng 7mm Màu trắng sữa,hình trịn, lồi, trơn bóng, có kích thước khoảng 4mm Trắng sữa, trơn, hình trịn, có tạo ria, kích thước khoảng 7mm Trắng sữa, có nhân, hình trịn, kích thước khoảng 2mm ST5 p 53 SĐ1 a nv 56 PrB2 a lu 55 Sữa tươi để lên men chua tự nhiên d oa nl w 54 SĐ5 ll u nf tz SC2 a nh 58 Màu trắng sữa,láng bóng, lồi, hình trịn, kích thước khoảng 4mm Màu trắng sữa, lồi ít, có ria, hình trịn, kích thước khoảng 7mm oi SC3 m 57 z om l.c gm @ 43 59 SC5 60 ST VNM1 61 ST VNM4 62 ST VNM5 Màu trắng đục, trơn bóng, có nhân, hình trịn, kích thước khoảng 4mm Màu trắng sữa, bề mặt trơn, có ria, hình trịn, kích thước khoảng 5mmn Màu trắng sữa, trơn bóng, hình trịn, kích thước khoảng 8mm Màu trắng đục, có nhân, hình trịn, kích thước khoảng 5mm Kết phân lập cho thấy đặc điểm hình thái khuẩn lạc phong phú, kích thước khuẩn lạc từ nhỏ khoảng 1mm đến lớn 12mm mọc riêng rẽ Sau phân lập 62 chủng vi khuẩn em tiến hành tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả sinh bateriocin cao an lu n va p ie gh tn to d oa nl w Hình 4.1 Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic sinh tổng hợp bacteriocin 4.2 Kết chọn lọc dòng vi khuẩn lactic sinh Bacteriocin có tính a nv a lu kháng khuẩn cao phƣơng pháp khuyếch tán giếng thạch Kết khảo sát hoạt tính kháng vi khuẩn Staphylococcus aureus ll u nf thể bảng 4.2 oi m tz a nh z om l.c gm @ 44 Bảng 4.2 Hoạt tính kháng vi khuẩn Staphylococcus aureus chủng vi khuẩn Lactic Chủng khảo sát an lu n va p ie gh tn to Chủng khảo sát d oa nl w a lu SC3 SC2 KC II.1 CPM4 XHM2 DChM4 KC I.4 XHM3 M7 DChM5 DChM1 KC I.5 M5 ST5 XHM1 CPM1 XHM5 KC I.6 KC I.3 CPM3 PrB2 ST2 M2 KC I.8 DChM3 XHM6 SC5 M6 CPM5 M3 ll u nf a nv oi m Đƣờng kính vịng kháng khuẩn (R-r)(mm) 22 12 _ 11 10 _ _ _ _ _ _ _ _ 10 _ _ 11 tz a nh SĐ5 SĐ1 KC II.6 KC I.2 DCM2 BCM4 ST VNM1 MM1 ST VNM4 BCM1 SM2 ST VNM5 XHM4 KC II.2 SM3 DCM1 DCM7 SM1 SM4 DCM4 MM5 DCM6 MM4 DCM8 M4 KC II.5 KC II.8 KC II.3 M1 CPM2 SĐ4 KC II.9 Đƣờng kính vịng kháng khuẩn (R-r)(mm) 11 11 _ 11 10 _ _ 6 _ _ _ _ 10 3 11 z Ghi chú: Không đối kháng ( - ): 0mm om l.c gm @ 45 Từ 62 chủng vi khuẩn kiểm tra tính kháng khuẩn, có 25 chủng thể tính kháng tích cực (d ≥6mm) Vịng kháng khuẩn Hình 4.2 Kiểm tra hoạt tính bacteriocin vi khuẩn lactic phƣơng pháp khuyếch tán đĩa thạch với chủng kiểm định Staphylococcus aureus Trong có hai chủng: SC2, SC3, có tính kháng khuẩn lớn 10 mm, thể tính kháng mạnh chủng cịn lại nên chọn để tiến hành thí nghiệm Tiếp tục tiến hành khảo sát khả kháng khuẩn hai chủng chọn lu an SC2, SC3 có sở để chọn chủng có khả kháng khuẩn tốt n va em triển khai thí nghiệm – thử khả kháng Samonella 20 p ie gh tn to Đƣờng kính (mm) 10 SC2 SC3 ll oi m Chủng u nf a nv a lu d oa nl w 15 a nh Hình 4.3 Biểu đồ đƣờng kính kháng khuẩn chủng SC2 SC3 đối tz với Samonella z om l.c gm @ 46 Dựa vào kết nghiên cứu thể biểu đồ hình 4.3 cho thấy chủng SC3 có khả kháng lại vi sinh vật kiểm định tốt SC2 nên em lựa chọn chủng SC3 để tiến hành cho nghiên cứu Vịng kháng khuẩn Hình 4.4 Đƣờng kính kháng khuẩn SC2 SC3 với chủng kiểm định Samonella lu an 4.3 Nghiên cứu khả kháng khuẩn chế phẩm bacteriocin thơ n va Các thí nghiệm nội dung chứng minh khả kháng khuẩn tn to dịch nuôi cấy SC3 Tuy nhiên, kết nuôi cấy tổng hợp gh chủng SC3 chủng kiểm định p ie Để tách bacterocin khỏi dịch nuôi cấy kiểm tra khả kháng d oa nl w khuẩn dịch nuôi cấy sau loại bỏ sinh khối vi sinh vật, phương pháp thông thường sử dụng ly tâm thu dịch trên, em tiến hành thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ ly tâm tới độ dịch a lu a nv bacteriocin thô khả kháng khuẩn u nf Do điều kiện phịng thí nghiệm máy ly tâm nên em khảo sát ll ảnh hưởng tốc độ ly tâm đến khả kháng khuẩn dịch thu kết m oi thể bảng 4.3 Qúa trình khảo sát tốc độ từ 5000-14000 a nh vòng/phút thực nhiệt độ thời gian cố định tz z om l.c gm @ 47 Bảng 4.3 Khảo sát điều kiện tách bacteriocin từ chủng nghiên cứu Tốc độ ly tâm(vòng/phút) 5000 6000 7000 8000 9000 10000 11000 12000 13000 14000 Vòng kháng khuẩn (R-r)(mm) ST aureus E coli Samonella * * 16 17 20* 18* 18* 20* 15* 20* 18* 15* 17* 17* 16* 18* 22* 17* 20* 18* 16* 21* 15* 14* 15* 17* 16* 20* 18* 17+ 18+ 20+ Ghi chú: Vòng kháng khuẩn khuẩn lạc nghiên cứu phát triển (*) Vịng kháng khuẩn khơng cịn khuẩn lạc nghiên cứu phát triển (+) lu Kết từ bảng 4.3 cho thấy tốc độ ly tâm dịch nuôi cấy vi khuẩn an không ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn, ảnh hưởng đến độ tinh va n dịch chứa bacteriocin to tn Kết thí nghiệm thực tế cho thấy tốc độ ly tâm từ 5000 – 13000 ie gh vịng/phút đĩa ni cấy kiểm nghiệm xuất khuẩn lạc chủng p nghiên cứu Tuy nhiên, với tốc độ 14000 vịng/phút khơng thấy có xuất d oa nl w khuẩn lạc chủng nghiên cứu Vậy tốc độ ly tâm cho việc tách bacteriocin từ dịch cấy để loại bỏ sinh a lu khối 14000 vòng/phút a nv Cũng từ bảng 4.3 ta thấy khả kháng khuẩn dịch bacteriocin thô ll u nf khác với chủng kiểm định khác Trong thí nghiệm bố oi m trí sử dụng 03 chủng kiểm định Staphylococcus aureus, Samonella, E.coli, a nh khả kháng Samonella dịch ni cấy sau ly tâm 14000 vịng tốt tz (20mm), E.coli (18mm), cuối Staphylococcus z om l.c gm @ aureus (17mm) 48 Vịng kháng khuẩn Hình 4.5 Ảnh hƣởng tốc độ ly tâm đến khả kháng khuẩn dịch bacteriocin an lu n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf a nv a lu oi m tz a nh z om l.c gm @ 49 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu em đưa số kết luận sau : Đã phân lập 62 chủng có 25 chủng có hoạt tính kháng khuẩn tính cực (d ≥ 6mm) Từ chủng phân lập tuyển chọn chủng SC3 sinh bacteriocin có tính kháng khuẩn mạnh - Tốc độ ly tâm thích hợp cho tách chiết bacteriocin 14000 vịng/phút - Chế phẩm bacteriocin thơ thể tính kháng khuẩn chủng (Staphylococcus aureus, Samonella, E.coli) kiểm định, nhiên lu an mức độ kháng khác n va 5.2 Kiến nghị tn to Nghiên cứu sâu đặc điểm sinh hóa chủng SC3 định dạng Xác định điều kiện nuối cấy tối ưu để chủng SC3 phát triển sinh p ie gh đến chủng loài d oa nl w trưởng tối ưu a lu Nghiên cứu khả ứng dụng bacteriocin lĩnh vực ll u nf a nv khác y học, công nghiệp thực phẩm… oi m tz a nh z om l.c gm @ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt [1] Nguyễn La Anh-Nghiên cứu công nghệ sản xuất chất bảo quản sinh học bacteriocin phương pháp vi sinh có ứng dụng công nghệ thực phẩm [2] Kiều Hữu Anhr (1999), Vi sinh vật học công nghiệp [3] Lê Huệ Anh (2007), Phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm, Nxb Giáo Dục [4] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyền, Phạm Văn Ty (1997), Vi sinh vật học,Nxb Giáo Dục [5] Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Muộn, Nguyễn Phùng Tiến, Phạm Văn an lu Ty(1972), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 1, Nxb khoa học kỹ thuật Hà Nội va n [6] Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo (1996), Cơ sở sinh học vi sinh vật, to tn Nxb Giáo Dục ie gh [7] Bằng Hồng Lam, Nguyễn Hữu Hiệp, “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn p lactic chịu nhiệt sinh bacteriocin từ thục phẩm lên men truyền thống‖ d oa nl w [8] Đào Thị Lương cs (2010), “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lacticdùng chế biến bảo quản thức ăn thô xanh phụ phẩm nông nghiệp nghệ sinh học a nv a lu cho gia súc nhai lại ”, Di truyền học ứng dụng – Chuyên san Công ll u nf [9] Lê Thị Hồng Tuyết (2004) “Nghiên cứu bcateriocin sản xuất tz a nh ĐHQG TpHCM oi m Lactobacillus acidophilus NrrlB – 2092” Luận văn thạc sĩ Sinh học, z om l.c gm @ 51 II.Tài liệu tiếng Anh [10] Axelsson L, Holck A (1995) “The genes involved in production of and immunity to sakacin A, a bacteriocin from Lactobacillus sake Lb706” [11] Broadbent JR, Chou YC, Gillies K, Kondo JK (1989) “Ninsin inhitbits several gram – positive, mastitis–causing pathogens” [12] Brötz H and Sahl H-G (2000) “New insights into the mechanism of action of lantibiotics—diverse biological effects by binding to the same molecular target” [13] Crupper S S., Iandolo J J (1996), "Purification and partial characterization of a novel antibacterial agent (Bac1829) produced by Staphylococcus aureus KSI1829", Applied and Environmental Microbiology, pp 3171–3175 [14] Desriac F, Defer D, Bourgougnon N, Brillet B, Le Chevalier P, Fleury Y lu an (2010) “Bacteriocin as Weapons in the Marine Animal-Associated va Bacteria Warfare: Inventory and Potential Applications as an n tn to Aquaculture Probiotic” ie gh [15] Davidson P.M, Hoover D.G (1993) “Antimicrobial components from p lactic acid bacteria” d oa nl w [16] Dobson A., Cotter P D., Ross R P., Hill C (2012), "Bacteriocin Production: a lu a Probiotic Trait?",Applied Environmental Microbiology, pp - a nv [17] D.G Hoover, Bacteriocin: Activities and Applications; Encyclopedia of u nf Microbiology, 1992 ll [18] El-Ziney M.G.,Debevere J., Jakosen M (2000), Reuterin, In: Naidu, oi m A.S(Ed), Natural Food Antimicrobial Systerms, CRC Press, London tz a nh z om l.c gm @ 52 [19] E Sablon, B Contreras, E.Vandamme; Antimicrobial Peptides of Lacic Acid Bacteria: Mode of Action, Genetics and Biosynthesis; Biochemical Engineering/Biotechnology, 2000 [20] Gert N.Moll, Wil N.Konings, Arnold J.M.Driessen (1999) “Bacteriocin: mechanism of membrane insertion and pore formation” [21] Gasson Michad J (1993), “Genetics of bacteriocin produced by lactic acid bacteria” [22] Harranz C., Chen Y., Chung H.J., Cintas L.M., hermander P.E., Montvillet.j., Chikindas M.L (2001), “Enterocin P selectively dissipates the membrane potential ò Enterococcus faecium T136” Appl, Environ, Microbiol [23] Huhne K, Axelsson L, Holck A, Krockel L (1996).― Analysis of the sakacin P gene cluster from Lactobacillus sake Lb674 and its expression lu an in sakacin-negative Lb sake strains‖ Microbiology (Reading, Engl.) n va [24] Hühne K, Axelsson L, Holck A, Kröckel L (1996) “Analysis of the gh tn to sakacin P gene cluster from Lactobacillus sake Lb674 and its expression in sakacin-negative Lb sake strains" p ie [25] H.chen, D.G.Hoover (2003) “Bacteriocin and their food applications” d oa nl w Comprehensive review in food sience and food safety 2, 82 – 85 [26] Héchard Y., Sahl H.-G (2002), "Mode of action of modified and a nv 545 - 557 a lu unmodified bacteriocins from Gram-positive bacteria", Biochimie , pp u nf [27] Juan C Oscáriz, Antonio G Pisabarro (2010) “Classification and mode ll of action of membrane-active bacteriocin produced by gram positive oi m bacteria‖ a nh [28] Jack RW, Tagg JR, Ray B (1995) “bacteriocin of gram-positive tz z bacteria” om l.c gm @ 53 [29] Jofré A, Garriga M, Aymerich T (2007) “Inhibition of Listeria monocytogenes in cooked ham through active packaging with natural antimicrobials and high-pressure processing” [30] Joerger MC, Klaenhammer TR (1986) “Characterization and purification of helveticin J and evidence for a chromosomally determined bacteriocin produced by Lactobacillus helveticus 481” [31] John R Tagg, Adnan S Dajani, and Lewis W Wannamaker; Bacteriocins of Gram-Positive Bacteria; American Society for Microbiology [32] Katla T, Moretro T, Sveen I, Aasen IM, Axesson L, Rorvik LM, Naterstad K (2002),― Inhibition of Listeria monocytogenes in chicken cold cuts by addition of sakacin P and sakacin P-producing Lactobacillus sakei‖ lu an [33] Monthon Lertcannawanichakul and Songtham Sawangnop (2008) A va comparison of two methods used for measuring the antagonistic activity n tn to of Bacillus species ie gh [34] Neysens, P; Messens, W; De Vuyst, L.(2003).Effect of sodium chloride p on growth and bacteriocin production by Lactobacillus amylovorus DCE d oa nl w 471 International Journal of food microbiology [35] Poeta P, Costa D, Sáenz Y, Klibi N, Ruiz-Larrea F, Rodrigues J, Torres a lu C (2005) “Characterization of antibiotic resistance genes and virulence a nv factors in faecal enterococci of wild animals in Portugal” u nf [36] Parente, E & Hill, C (1992), “A comparison of factors affecting the ll production of two bacteriocin from lactic acid bacteria”, Journal of m oi Applied Microbiology, 73, p.290 – 298 a nh [37] Parada ctv (2007), “Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria”, pp 521- tz z 542 om l.c gm @ 54 [38] R Yang and B Ray “Factors influencing production of bacteriocin by lactic acid bacteria; Food Microbiology,(1994)” [39] Riley M.A., Wertz J.E (2002), “Bacteriocin: evolution, ecology, and application”, Annu, Rev, Microbiol [40] Soomro, A.H., T Masud and Kiran Anwaar Role of lactic acid Bacteria (LAB) in food Preservation and Human Health – A Review Pakistan Journal of Nutrition 1(1), pp, 20 – 24, 2002) [41] Schlegel R., Slade H D (1972), "Bacteriocin Production by Transformable Group H Streptococci", Journal of Bacteriology, pp 824–829 [42] Vesterlund S, Paltta J, Lauková A, Karp M, Ouwehand AC (2004) “Rapid screening method for the detection of antimicrobial substances” J.Microbiol Methods, 2004 , Apr;57(1):23-31 an lu n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf a nv a lu oi m tz a nh z om l.c gm @