Đang tải... (xem toàn văn)
Microsoft Word Bao cao Hesperidin sua docx BỘ CÔNG THƯƠNG VIỆN HÓA HỌC CÔNG NGHIỆP VIỆT NAM BBÁÁOO CCÁÁOO TTỔỔNNGG KKẾẾTT ĐĐỀỀ TTÀÀII NNGGHHIIÊÊNN CCỨỨUU KKHHCCNN CCẤẤPP BBỘỘ NNGGHHIIÊÊNN CCỨỨUU QQUUY[.]
BỘ CƠNG THƯƠNG VIỆN HĨA HỌC CƠNG NGHIỆP VIỆT NAM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHCN CẤP BỘ: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT HESPERIDIN TỪ QUẢ PHẬT THỦ LÀM NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT THUỐC 7449 15/7/2009 HÀ NỘI – 2008 BỘ CƠNG THƯƠNG VIỆN HĨA HỌC CÔNG NGHIỆP VIỆT NAM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHCN CẤP BỘ: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT HESPERIDIN TỪ QUẢ PHẬT THỦ LÀM NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT THUỐC Chủ nhiệm Đề tài: Ths Nguyễn Văn Chính Những người tham gia: Ths Trương T Tố Trinh CN Nguyễn Quốc Đạt HÀ NỘI – 2008 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc TÓM TẮT Flavonoid glycosid Hesperidin loại ngun liệu thuốc kháng viêm, chống ơxy hóa, chống dị ứng, chống ung thư, làm bền thành mạch giảm tính thấm mao mạch sử dụng nhiều điều trị bệnh cao huyết áp bệnh trĩ tách chiết từ Phật thủ với suất chiết 1,04% so với nguyên liệu khô Quy trình tách chiết flavonoid hesperidin đạt tiêu chuẩn làm nguyên liệu sản xuất thuốc quy mơ phịng thí nghiệm từ nguyên liệu có chứa hesperidin xây dựng sở kết khảo sát thông số công nghệ nhiệt độ, pH môi trường chiết môi trường kết tinh, tỷ lệ dung môi vv Việc chiết tách hesperidin quy mô lớn 10 lần quy mơ khảo sát nghiên cứu nhằm hồn chỉnh sở liệu phục vụ cho việc phát triển sản xuất quy mô lớn Hesperidin tách chiết được xác định cấu trúc, phân tích định tính, định lượng phương pháp phổ: IR, UV, MS, 1H-NMR, 13 C- NMR, HPLC kiểm nghiệm tiêu Các kết nghiên cứu thu áp dụng vào sản xuất hesperidin từ nguồn nguyên liệu tự nhiên sẵn có phong phú nước quy mô pilot nhằm đáp ứng nguyên liệu sản xuất thuốc cho công nghiệp bào chế dược phẩm nước ii Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc MỤC LỤC TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG, BIỂU, HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi MỞ ĐẦU I TỔNG QUAN I.1 Cây Phật thủ I.1.1 Cây phật thủ tác dụng chữa bệnh Phật thủ I.1.2 Thành phần hóa học Phật thủ I.2 Flavonoid, hợp chất flavonoid họ Cam I.2.1 Flavonoid I.2.2 Flavonoid họ Cam I.3 Hesperidin 11 I.3.1 Tính chất Hesperidin 12 I.3.2 Tác dụng dược lý Hesperidin 12 I.3.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu tách chiết hesperidin 17 I.4 Phân tích hesperidin 19 I.4.1 Phổ tử ngoại hesperidin 20 I.4.2 Phổ khối MS hesperidin 20 I.4.3 Phân tích hesperidin HPLC 20 II PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 21 II.1 II.2 Phương pháp tiếp cận 21 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 22 II.2.1 Nguyên liệu, hóa chất 22 II.2.2 Dụng cụ, thiết bị 22 II.3 Phương pháp chiết tách hesperidin 23 II.3.1 Phương pháp chiết flavonoid toàn phần 23 II.3.2 Phương pháp tách chiết Hesperidin 24 II.4 Phân tích sản phẩm 24 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 iii Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc III.1 III.2 III.3 Tách chiết flavonoid toàn phần từ Phật thủ 25 Tách chiết tinh chế Hesperidin 25 Khảo sát thông số ảnh hưởng đến trình tách chiết hesperidin từ Phật thủ 27 III.3.1 Ảnh hưởng pH dung môi chiết đến hiệu suất tách chiết hesperidin 27 III.3.2 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi chiết 29 III.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 30 III.3.4 Ảnh hưởng thời gian chiết mẫu 32 III.3.5 Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu 34 III.3.6 Ảnh hưởng pH môi trường kết tinh 35 III.4 III.5 Kết tách chiết hesperidin lượng lớn từ Phật thủ, vỏ Cam vỏ Quýt 38 Phân tích kiểm nghiệm sản phẩm 39 III.5.1 Phổ hồng ngoại UV sản phẩm 39 III.5.2 Khối phổ MS hesperidin 40 III.5.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR hesperidin 40 III.5.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR hesperidin 41 III.5.5 Kết kiểm nghiệm 41 III.6 Đề xuất công nghệ sản xuất Hesperidin 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 CÁC PHỤ LUC 50 iv Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc DANH MỤC BẢNG, BIỂU, HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ Bảng 1: Các hợp chất flavanone dạng aglycone Bảng 2: Các hợp chất flavone dạng aglycone Bảng 3: Các hợp chất polymethoxyflavone Bảng 4: Các hợp chất flavanone-O-glycosid Bảng 5: Flavone-C-glucosid flavone-O-glucosid 10 Bảng 6: Ảnh hưởng pH đến hiệu suất tách chiết hesperidin 27 Bảng 7: Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi chiết đến hiệu suất chiết hesperidin 29 Bảng 8: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất chiết hesperidin 31 Bảng 9: Ảnh hưởng thời gian đến hiệu suất chiết hesperidin 33 Bảng 10: Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu đến hiệu suất chiết hesperidin 34 Bảng 11: Ảnh hưởng pH môi trường kết tinh 36 Bảng 12: Hiệu suất chiết hesperidin quy mô nguồn nguyên liệu khác 38 Biểu đồ 1: Ảnh hưởng pH đến hiệu suất trình chiết 28 Biểu đồ 2: Hiệu suất tách chiết hesperidin từ flavonoid toàn phần pH khác 28 Biểu đồ 3: Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi chiết đến hiệu suất chiết hesperidin 30 Biểu đồ 4: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất chiết hesperidin 32 Biểu đồ 5: Ảnh hưởng thời gian đến hiệu suất chiết hesperidin 33 Biểu đồ 6: Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu 35 Biểu đồ 7: Ảnh hưởng pH môi trường kết tinh 36 Hình 1: Cây, hoa Phật thủ Hình 2: Các hợp chất polyphenol phật thủ Hình 3: Khung flavone flavanone Hình 4: Cấu trúc phân tử nhóm flavonoid Hình 5: Rutinose neohesperidose 10 Hình 6: Sơ đồ phân mảnh qua bước chuyển vị nội phân tử hesperidin 40 Hình 7: Sơ đồ cơng nghệ sản xuất Hesperidin 44 v Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CS: Cộng CP: Cổ phần DMF: Dimetyl formamid Gl: Glucose HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao KL/TT: Khối lượng / Thể tích KL: Khối lượng Rh: Rhamnose THF: Tetrahydofuran TT/KL: Thể tích/Khối lượng TP: Tồn phần TT: Thể tích YHCT: Y học cổ truyền vi Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc MỞ ĐẦU Hesperidin Flavonoid có tác dụng kháng viêm, chống ôxy hóa, chống dị ứng, chống ung thư nhờ khả hấp thụ tác nhân gây ung thư Hesperidin có tác dụng làm bền thành mạch giảm tính thấm mao mạch nên sử dụng điều trị bệnh cao huyết áp bệnh trĩ Tác dụng chữa ho hesperidin khả chống dị ứng nhờ tính chất ức chế việc giải phóng histamine từ tế bào lớn Hesperidin dùng phối hợp với vitamin C có tác dụng cộng hưởng hỗ trợ hấp thụ vitamin C Hesperidin hợp chất flavonoid chủ yếu vỏ họ Cửu lý hương (Rutaceace) thường gọi họ Cam như: Cam, Quýt, Chanh, Phật thủ, Thanh yên, Bưởi vv Nhiều phận họ sử dụng làm thuốc y học cổ truyền để điều trị bệnh đặc biệt để chữa ho Đặc biệt thuốc ho đông dược từ Phật thủ dùng cho trẻ em Tuy nhiên, việc nghiên cứu tách chiết hoạt chất có loại dược liệu để làm nguyên liệu sản xuất thuốc nước ta quan tâm chưa nhiều Năm 2007 Viện Hóa học cơng nghiệp Việt Nam hợp tác với Công ty CP Vimedimex nghiên cứu phát triển thuốc ho từ Phật thủ Trong trình triển khai nghiên cứu, chúng tơi nhận thấy phần bã thải chứa lượng lớn flavonoid glycosid mà chủ yếu hesperidin Vì chúng tơi đặt vấn đề nghiên cứu chiết hesperidin từ Phật thủ nhằm tận dụng nâng cao hiệu kinh tế Với lý đề cập trên, việc nghiên cứu chiết xuất Hesperidin từ nguồn nguyên liệu thiên nhiên sẵn có nước sở cơng nghệ tự nghiên cứu cần thiết Hơn nữa, việc tự sản xuất hesperidin nước vừa góp phần đa dạng hóa sản phẩm, vừa góp phần tự chủ, đa dạng hóa nguồn nguyên liệu sản xuất thuốc phù hợp với mục tiêu, chiến lược xây dựng phát triển ngành cơng nghiệp hóa dược Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc Mục tiêu đề tài: • Xây dựng quy trình tách chiết, phân lập Hesperidin làm nguyên liệu sản xuất thuốc từ phật thủ Đề tài tiến hành nội dung nghiên cứu sau: • Xác định điều kiện chiết tách flavonoid toàn phần từ phật thủ • Phân lập tinh chế Hesperidin đạt tiêu chuẩn ngun lieu thuốc • Xây dựng quy trình tách chiết Hesperidin từ phật thủ • Phân tích kiểm nghiệm số tiêu sản phẩm Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc I TỔNG QUAN I.1 I.1.1 Cây Phật thủ Cây phật thủ tác dụng chữa bệnh Phật thủ Cây Phật thủ có tên khoa học Citrus medica L var Sarcodactylis Swingle thuộc chi Cam quýt (Citrus) họ Cửu lý hương (Rutaceace) thường gọi họ Cam; tên thường gọi Buddha's Hand citron, Finger citrom frenit, Phật thủ [5] Cây Phật thủ dạng nhỏ xanh tốt quanh năm, mọc so le, hình trứng, mép có cưa nhỏ, gai ngắn mọc Vào đầu mùa hạ hoa màu trắng, cánh hoa trắng đỏ, chín vào mùa đơng, vỏ ngồi màu vàng, số múi chạy dài dọc phía tách trơng ngón tay nên có tên phật thủ.[5], [4] (Hình 1) Hình 1: Cây, hoa Phật thủ Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc Như vây pH = 4,5 cho hiệu suất kết tinh flavonoid TP hiệu suất chiết hesperidin tương đối cao Kết luận: Qua khảo sát cho thấy, trình tách chiết hesperidin tốt nên thực với thông số sau: • Nguyên liệu nên nghiền kích thước 1- 3mm; • Tỷ lệ dung mơi so với ngun liệu nên trì tỷ lệ: 4/1 – 6/1 (TT/KL); • pH hỗn hợp chiết nên trì giá trị từ 11-12; • Thời gian tiến hành chiết nhiệt độ 30 – 40 oC; • Điều chỉnh pH mơi trường kết tinh giá trị 4-5; • Chiết hesperidin khỏi hỗn hợp flavonoid axêton lần etylaxêtat lần với tỷ lệ rắn / lỏng 1/5 (KL/TT); • Kết tinh lại hesperidin metanol 37 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc III.4 Kết tách chiết hesperidin lượng lớn từ Phật thủ, vỏ Cam vỏ Quýt Trên sở kết nghiên cứu thu được, tiến hành nghiên cứu chiết xuất hesperidin quy mô lớn với nguồn nguyên liệu là: Phật thủ thu mua tự sơ chế, Phật thủ khô, vỏ Cam vỏ Quýt mua phố Lãn Ông; Kết qua thu bảng sau: Bảng 12: Hiệu suất chiết hesperidin quy mô nguồn nguyên liệu khác STT Loại nguyên liệu Nguyên liệu, Hesperidin, Hiệu suất kg g hesperidin, % Phật thủ khô tự sơ chế 0,2 2,14 1,07 Phật thủ khô tự sơ chế 2,0 20,8 1,04 2,0 20,4 1,02 2,0 36,7 1,83 2,0 28,4 1,42 Phật thủ khơ mua phố Lãn Ơng Vỏ Cam mua phố Lãn Ông Vỏ quýt mua phố Lãn Ông Kết nghiên cứu cho thấy, chiết quy mô lớn 10 lần cho hiệu suất chiết hesperidin gần tương tự chiết quy mô 200g / mẻ Hiệu xuất chiết hesperidin từ vỏ Cam (1,83%) vỏ Quýt (1,42%) cao so với chiết từ Quả phật thủ (1,04%) Từ kết nghiên cứu trên, theo sau triển khai sản xuất hesperidin nên tiến hành sản xuất từ vỏ Cam tốt sử dụng vỏ Cam phế liệu từ nhà máy sản xuất nước ép cam 38 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc III.5 Phân tích kiểm nghiệm sản phẩm Sản phẩm hesperidin có nhiệt độ nóng chẩy : 252 – 261 oC III.5.1 Phổ hồng ngoại UV sản phẩm Sản phẩm hesperidin chụp phổ hồng ngoại (xem phụ lục 1) Trên phổ đồ có số sóng đặc trưng 2925 cm-1 dao động liên kết CH Pick đặc trưng với cường độ cao nằm số sóng 3473 cm-1 nhóm OH Pick 1647 nhóm C=O Pick 1606 dao động liên kết C=C vòng thơm Pick 1130 -1195 cm-1 số sóng đặc trưng nhóm chức C-O 100.0 3087.8 1407.9 2925.8 %T 75.0 1240.1 846.7 671.2 445.5 738.7 542.0 769.5 586.3 975.9 813.9 624.9 1363.6 1024.1 1444.6 1278.7 1130.2 1515.9 1195.8 3543.0 1606.6 3431.1 3473.6 1647.1 1068.5 1095.5 50.0 ¾ Phổ UV hesperidin cho pick có cường độ mạnh 284 nm pick có cường độ yếu 320-326 nm phù hợp với tài liệu 25.0 4000.0 3000.0 2000.0 1500.0 Hesperidin_Chinh VHCNVN 1000.0 500.0 1/cm 39 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc III.5.2 Khối phổ MS hesperidin Kết chạy LC-MS (ESI-MS) cho thấy khối phổ hesperidin (xem phụ lục 2) có pick ứng với ion [M+H]+ = 611,1, ion tạo thành đơn vị rhamnose có [M+H-146]+ = 465,2, tiếp đơn vị glucơ có [M+H-146-162]+ = 303,1 pic đặc thù cho lớp chất hình thành chuyển vị nội phân tử ion [M+H]+ tạo thành ion [M+H-162]+ = 449,2 đơn vị glucơ (Xem sơ đồ hình ) Kết hoàn toàn phù hợp với kết nghiên cứu trước [2] Hình 6: Sơ đồ phân mảnh hesperidin III.5.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR hesperidin Hesperidin OH HO H3C OH OH O O O OH 11 CH3 5' 1 O 10 OH 40 3' O O 1' O 4' 6' OH 2' OH Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc Phổ 1H-NMR hesperidin ghi 500 MHz (phụ lục 3) DMSO có: δ: 12,0 (1H, s, 5-OH); 9,09 (1H, s, 3’-OH); 6,93 (3x1H, m, H-2’, H-5’và H-6’); 6,14 6,12 (2x1H, j= 2,1 Hz, H-6 H-8); 5,51 (1H, t, j=3,1Hz, H-2); 5,49 (1H, d, H-1, Gl); 5,16 (1H, d, H-1, Rh); 3,791, (3H, m, OCH3); 3,634, 3,301 (2H, m, H-6, Gl); 3,55 (2x1H, m, H-5, Rh, H-5, Gl); 3,44 (4x1H, m, OH, Gl Rh) 3,386, 3,132 (2x1H, H-3); 1,09 (3H, d, H-6, Rh) Kết hoàn tồn phù hợp với nghiên cứu cơng bố [13] Qua liệu phổ cho thấy có nhóm OH vị trí C5 nhóm OH vị trí C5’ Ở vị trí C2 có proton cịn vị trí có proton III.5.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR hesperidin Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR hesperidin ghi dung mơi DMSO (phụ luc 4) có: δ: 197,0 (s, C=O), 165,146 (s, C-7), 163,039 (s, C-5), 162,499 (s, C-9), 147,98 (s, C-4’), 146,459 (s, C-3’), 130,914 (s, C-1’), 117,964 (d, C-6’), 114,147 (d, C-2’), 112,085 (d, C-5’), 103,338 (d, C-10), 100,597 (d, C-1, Rh), 99,482 (d, C-1, Gl), 96,4 (d, C-6), 95,571 (d, C-8), 78,374 (d, C-2), 76,277 (d, C-3, Gl), 75,539 (d, C-4, Gl), 72,999, d, C-2, Gl), 72,089 (d, C-4, Rh), 70,715 (d, C-3, Rh), 70,276 (d, C-2, Rh), 69,62 (d, C-5, Gl), 68,319 (d, C-5, Rh), 66,035 (t, C-6, Gl), 55,717 (C-11, 4’-O-CH3), 42,05 (t, C-3), 17,820 (CH3, Rh) Với liệu phân tích IR, UV, MS, 1H-NMR 13C-NMR cho phép kết luận chất chiết hesperidin III.5.5 Kết kiểm nghiệm Sản phẩm Hesperidin tách chiết được kiểm nghiệm số tiêu theo tiêu chuẩn sở (Phiếu kiểm nghiệm số 195/08) Kết 41 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc kiểm nghiêm cho thấy Hesperidin tách chiết đạt tiêu chuẩn làm nguyên liệu thuốc (phụ lục 6) Cụ thể sau: • Hàm lượng hesperidin: 94,5%; • pH: 5,55; • Mất khối lượng sấy: 1,67%; • Kim loại nặng: < 20 ppm; • Arsen: < 1ppm; • Tro sunfat: 0,04%; • Độ nhiễm khuẩn (vi khuẩn hiếu khí, nấm mốc, E coli…): Đạt III.6 Đề xuất công nghệ sản xuất Hesperidin Từ số liệu nghiên cứu, thực nghiệm đề xuất quy trình tách chiết Hesperidin từ Phật thủ (hoặc từ ngun liệu có chứa hesperidin) (Hình 7) gồm công đoạn sau: Nghiền mẫu với máy nghiền có kích thước sàng mm; Chiết flavonoid toàn phần dung dịch kiềm với điều kiện sau: • Tỷ lệ dung mơi so với ngun liệu là: 4/1 – 6/1 (TT/KL); • pH hỗn hợp chiết: 11-12; • Nhiệt độ chiết: 30 – 40 oC; • Thời gian tiến hành chiết Kết thúc giai đoạn chiết, lọc loại bỏ bã tạp chất khơng tan thu dịch lọc • Điều chỉnh pH dịch lọc thu giá trị 4-5 Để kết tinh 24 Lọc thu flavonoid toàn phần 42 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc Chiết hesperidin khỏi hỗn hợp flavonoid axêton lần etylaxêtat lần với tỷ lệ rắn / lỏng 1/5 (KL/TT) Thời gian cho lần chiết 0,5 Tinh chế sản phẩm sau: • Hịa tan hesperidin thơ metanol nhiệt độ sôi với tỷ lệ Hesperidin / Metanol 1/200 (KL/TT) Lọc dung dịch thu qua giấy lọc để loại bỏ tạp chất khơng tan • Chỉnh nồng độ dung mơi 85% nước • Để kết tinh 25 oC 24 • Lọc tinh thể hesperidin , rửa lại metanol • Sau sấy 60 oC • Nghiền đóng gói sản phẩm Hesperidin 43 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc N g u y ª n liƯ u M N −íc 10 11 11 M C aO H HCl D ung m «i M M M eO H 5 T h iÕ t T h iÕ t T h iÕ t T h iÕ t T h iÕ t T h iÕ t bÞ bÞ bÞ bÞ bÞ bÞ n g h iỊ n c h iÕ t lä c Ð p k Õ t tin h lä c c h iÕ t r¾ n - n g T h iÕ t b Þ k Õ t tin h , tin h c h Õ T h iÕ t b ị lọ c ly tâ m T h iÕ t b Þ sÊ y T h iÕ t b Þ c Ê t d u n g m « i 11 T hïng chøa Hình 7: Sơ đồ cơng nghệ sản xuất Hesperidin 44 S¶n phÈm Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đề tài hoàn thành mục tiêu đề đăng ký Cụ thể: Đã tách chiết kg Hesperidin làm nguyên liệu thuốc đạt tiêu chuẩn sở Sản phẩm Hesperidin có tiêu sau: Hàm lượng hesperidin: 94,5%; pH: 5,55; Mất khối lượng sấy: 1,67%; Kim loại nặng: < 20 ppm; Arsen: < 1ppm; Tro sunfat: 0,04% Đã xây dựng quy trình tách chiết Hesperidin từ nguyên liệu chứa hesperidin làm nguyên sản xuất thuốc gồm công đoạn chủ yếu sau: 1) Nghiền mẫu với máy nghiền có kích thước sàng mm; 2) Chiết flavonoid toàn phần dung dịch kiềm với điều kiện sau: Chiết nhiệt độ 30 – 40 oC thời gian với tỷ lệ dung môi so với nguyên liệu là: 4/1 – 6/1 (KL/TT); pH=11-12; Kết tinh flavonoid pH= 4-5 24 3) Chiết hesperidin khỏi hỗn hợp flavonoid axêton lần etylaxêtat lần với: Tỷ lệ rắn / lỏng 1/5 (KL/TT;) Thời gian cho lần chiết 0,5 4) Tinh chế sản phẩm với điều kiện sau: Tỷ lệ Hesperidin / Metanol/ H2O 1/200/30 (KL/TT/TT); Nhiệt độ hòa tan 64 oC; Kết tinh 25 oC 24 giờ; Sấy sản phẩm 60 oC Đã phân tích sản phẩm hesperidin phương pháp hóa lý như: IR, LC-MS, 1H-NMR, 13C-NMR thu kết phù hợp với nghiên cứu công bố Đã tiến hành chiết hesperidin từ Phật thủ, vỏ Cam vỏ Quýt quy mô gấp 10 lần quy mô khảo sát cho kết tương tự chiết lượng nhỏ 45 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc Kiến nghị Hesperidin nguyên liệu thuốc nguồn gốc từ tự nhiên có phổ hoạt tính rộng sử dụng nhiều phòng ngừa điều trị bệnh Tuy nhiên, dạng bào chế thuốc chứa hesperidin chưa nhiều tính tan nước dầu Để cải thiện độ hòa tan từ cải thiện khả dung nạp thuốc người ta tiến hành chuyển hesperidin thành dạng dẫn xuất metyl hesperidin có khả tan tốt nước Đề nghị Bộ Cơng Thương tạo điều kiện ủng hộ tài cho đề tài nghiên cứu tiếp quy trình chuyển hóa hesperidin thành dẫn xuất metyl hesperidin để mở rộng khả ứng dụng sản phẩm 46 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] A Di Mauro, B Fallico, A Passerini, P Rapisarda, E Maccarone; J Agric Recovery of hesperidin from orange peel by concentration of extracts on styrene-divinylbenzene resin Food Chem 1999; 47 (10):4391-7 [2] A Garg, S Garg, L J D Zaneveld and A K Singla; Chemistry and Pharmacology of The Citrus Bioflavonoid Hesperidin Phytother Res 15, 655–669 (2001) [3] Azza M El-Shafae, Maher M El-Domiaty; Improved LC methods for the determination of diosmin and/or hesperidin in plant extracts and pharmaceutical formulations; Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis vol 26 (2001) 539–545 [4] Cheng Liang, Yin Feng, Lou FengChang CA 3125677 (2004) [5] Đỗ Tất Lợi; Cây thuốc vị thuốc Việt Nam Tr 748-749 [6] Elisa Tripoli, Maurizio La Guardia, Santo Giammanco, Danila Di Majo, Marco Giammanco Citrus flavonoids: Molecular structure, biological activity and nutritional properties: A review Food Chem Vol 104 No 2, ps 466-479 [7] Erich Grotewold; The Science of Flavonoids; Springer Science and Business Media, Inc 2006 1-123 [8] F I Kanaze, M I Bounartzi, M Georgarakis, I Niopas; Pharmacokinetics of the citrus flavanone aglycones hesperetin and naringenin after single oral administration in human subjects Eur J Clin Nutr 2007, vol 61, no4, pp 472-477 [9] F I Kanaze , C Gabrieli , E Kokkalou , M Georgarakis , I Niopas; Simultaneous reversed-phase high-performance liquid chromatographic method for the determination of diosmin, hesperidin and naringin in different citrus fruit juices and 47 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc pharmaceutical formulations J Pharm Biomed Anal 2003 Sep 19;33 (2):243-249 [10] H Scarborough Observation on nature of vitamin P and the vitamin P potency of certain Foodstuffs The Nature, vol 39, London (1945), ps 271-278 [11] Hoàng Thị Kim Dung, Nguyễn Cửu Khoa, Nguyễn Ngọc Hạnh, So sánh hoạt tính chống ơxy hố số flavonoid (dạng glucosid genin) chiết từ hoa hoè vỏ quýt; TC Dược liệu -2006 Vol 11 -No -p 185-188 [12] J, L Nieto, A M, Gutierez 1H-NMR spectra at 360MHz of diosmin and hesperidin in DMSO solution Spect Lett, 19 (5) 1986, ps 427433 [13] M J Masbimbye, M C Maumela, The X-ray structure and the 13CNMR data of chelerythrine acetonate from Zanthoxylym davyi Nig J Nat Prod And Med Vol 04 2000, ps 57-61 [14] Manthey, J A; Grohmann, K; Phenols in citrus peel byproducts Concentrations of hydroxycinnamates and polymethoxylated flavones in citrus peel molasses J-Agric-Food-Chem 2001 Jul; 49(7); ps 3268-73 [15] Maria de Lourdes Mata Bilbao et al Determination of flavonoids in a Citrus fruit extract by LC–DAD and LC–MS Food Chem Vol 101 ps 1742 – 1747 [16] Nguyễn Hương Thảo, Võ Văn Lẹo CS Khảo sát flavonoid từ vỏ quýt (P Citri Reticulatae Blanco) TC Dược học, số 5/2001 Trang 9-11 [17] Peterson, J M S., Dwyer, J Flavonoids: Dietary occurrence and biochemical activity Nutrition Research, 18, ps 1995–2018 48 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc [18] R H Higby, The chemical nature of hesperidin and its experimental medicinal use as a source of vitamin P A review Jour Amer Pharm Assoc Sci Ed 30:629-34, 1941 [19] Robert J Nijveldt, Els van Nood, et al Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and potential applications Am J Clin Nutr 2001;74:418–25 [20] The Meck Index CD-ROM v 13.5 , 2004 [21] Unitted States Patent 2,152,827 (1936) [22] Unitted States Patent 2,348,215 (1940) [23] Unitted States Patent 2,421,061 (1944) [24] Unitted States Patent 2,442,110 (1947) [25] Unitted States Patent 2,681,907 (1952) [26] Unitted States Patent 4,497,838(1985) [27] Unitted States Patent 7,015339 B2 (2006) [28] Y C Wang et al The flavonoid, carotenoid and pectin content in peels of citrus cultivated in Taiwan Food Chemistry 106 (2008) 277–284 [29] Yaqin Ma, Xingqian Ye, Yunbin Hao, Guoneng Xu, Guihua Xu, Donghong Liu; Ultrasound-assisted extraction of hesperidin from Penggan (Citrus reticulata) peel; Ultrasonics Sonochemistry 15 (2008) 227–232 [30] Yoichi Nogata D, Hideaki Ohta, Koh-Ichi Yoza, Mark Berhowb, Shin Hasegawab; High-performance liquid chromatographic determination of naturally occurring flavonoids in Citrus with a photodiodearray detector J Chrom A, 667 (1994) 59-66 49 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc CÁC PHỤ LUC Phụ lục 1: Phổ hồng ngoại IR Hesperidin Phụ lục 2: Phổ LC-MS Hesperidin Phụ lục 3: Phổ 1H-NMR Hesperidin Phụ lục 4: Phổ 13C-NMR Hesperidin Phụ lục 5: Phổ HPLC Hesperidin Phụ lục 6: Kết kiểm nghiệm Hesperidin Phụ lục 7: Hợp đồng nghiên cứu phát triển công nghệ 50 Nghiên cứu quy tr̀nh tách chiết hesperidin từ phật thủ làm nguyên liệu sản xuất thuốc 120.0 %T 100.0 80.0 3087.8 60.0 2925.8 40.0 3543.0 20.0 4000.0 3431.1 3473.6 3000.0 2000.0 Hesperidin_Chinh VHCNVN 1240.1 1407.9 1363.6 10 1444.6 1130 1515.9 1195.8 1278.7 1606.6 106 1095 1647.1 1500.0 Phụ lục 1: Phổ IR hesperidin chiết từ Phật thủ 51 1000.0 500.0 1/cm