Khảo sát hiệu quả phòng trừ bệnh đốm lá cercospora citrullina trên cây khổ qua bằng nano đồng trong điều kiện in vitro

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP-TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT HIỆU QUẢ PHÕNG TRỪ BỆNH ĐỐM LÁ (Cercospora citrullina) TRÊN CÂY KHỔ QUA BẰNG NANO ĐỒNG TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO TÔ VĂN THÀNH AN GIANG, 05 - 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP-TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT HIỆU QUẢ PHÕNG TRỪ BỆNH ĐỐM LÁ (Cercospora citrullina) TRÊN CÂY KHỔ QUA BẰNG NANO ĐỒNG TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO TÔ VĂN THÀNH MSSV: DSH173281 LỚP: DH18SH GIÁO VIÊN HƢỚNG DẪN VĂN VIỄN LƢƠNG AN GIANG, 05 – 2021 CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Chuyên đề “Khảo sát hiệu phòng trừ bệnh đốm (Cercospora citrullina) khổ qua nano đồng điều kiện invitro”, sinh viên Tô Văn Thành thực dƣới hƣớng dẫn ThS Văn Viễn Lƣơng Chuyên đề đƣợc chấp thuận giáo viên hƣớng dẫn đƣợc Hội đồng Khoa học Đào tạo thông qua Phản biện Phản biện TS Trƣơng Ánh Phƣơng ThS Trịnh Hoài Vũ Cán hƣớng dẫn ThS Văn Viễn Lƣơng i LỜI CẢM TẠ Sau thời gian bốn năm học tập nghiên cứu Trƣờng Đại học An Giang, hôm hồn thành chƣơng trình đào tạo đại học chun đề tốt nghiệp Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến ba mẹ, đấng sinh thành nuôi dƣỡng, bão bọc, ln dìu dắt động viên tơi đến ngày trƣởng thành nhƣ hôm Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Thầy Văn Viễn Lƣơng tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô Bộ môn Công Nghệ Sinh Học, Trƣờng Đại học An Giang giúp đỡ, truyền đạt cho nhiều kiến thức suốt thời gian học tập nghiên cứu trƣờng Chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trƣờng quý thầy cô, cán phụ trách phịng thí nghiệm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực đề tài Xin gửi lời cảm ơn đến anh chị khóa trƣớc DH15SH, DH16SH, DH17SH tập thể lớp DH18SH tận tình hỗ trợ, giúp đỡ động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! An Giang, ngày 20 tháng 05 năm 2021 Sinh viên thực Tô Văn Thành ii LỜI CAM KỂT Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu cơng trình nghiên cứu có xuất xứ rõ ràng Những kết luận mặt khoa học cơng trình nghiên cứu chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác An Giang, ngày 20 tháng 05 năm 2021 Ngƣời thực Tô Văn Thành iii MỤC LỤC Trang CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG i LỜI CẢM TẠ ii LỜI CAM KỂT iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii CHƢƠNG MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẦN THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 DỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 TỔNG QUAN VỀ NANO 2.1.1 Khái niệm 2.1.3 Các tính chất đặc biệt 2.1.3.1 Hiệu ứng bề mặt 2.1.3.2 Hiệu ứng kích thƣớc 2.1.4 Một số phƣơng pháp chế tạo vật liệu nano 2.1.4.1 Phương pháp bốc bay 2.1.4.2 Phương pháp phún xạ 2.1.4.3 Phương pháp Epitaxy chùm phân tử (MBE) 2.1.4.4 Phương pháp lắng đọng hóa học ( CVD ) 2.1.4.5 Phương pháp sol - gel 2.1.5 Hƣớng ứng dụng chung 2.2 TỔNG QUAN VỀ NANO ĐỒNG 2.2.1 Giới thiệu vật liệu nano nano đồng 2.2.2 Ứng dụng nano đồng nông nghiệp 2.2.3 Cơ chế kháng khuẩn nano đồng 2.3 SƠ LƢỢC VỀ CÂY KHỔ QUA(CÒN ĐƢỢC GỌI LÀ MƢỚP ĐẮNG) iv 2.3.1 Nguồn gốc phân loại thực vật 2.3.2 Thành phần dinh dƣỡng công dụng 10 2.4 SƠ LƢỢC VỀ BỆNH ĐỐM LÁ (Cercospora citrullina) 11 2.4.1 Phân loại khoa học: 12 2.4.2 Triệu chứng 12 2.4.4 Điều kiện phát triển 13 2.4.5 Đặc điểm sinh học nấm Cercospora citrullina 13 2.4.5 Biện pháp phòng trị bệnh đốm 14 2.4.6 Môi trƣờng nuôi cấy nấm Cercospora citrullina 14 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 16 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 16 3.1.2 Vật liệu - thiết bị 16 3.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.2.1 Phân lập dòng nấm 16 3.2.2 Thí nghiệm 1: khả ức chế nấm Cercospora citrullina gây bệnh đốm khổ qua nano đồng điều kiện in vitro 17 3.2.3 Thí nghiệm 2: khảo sát hiệu kháng nấm Cercospora citrullina gây bệnh đốm khổ qua nano đồng điều kiện invitro 18 CHƢƠNG KẾT QUẢ 21 4.1 Kết phân lập dòng nấm Cercospora citrullina 21 4.1.1 Phân lập dòng nấm 21 4.1.2 Hình dạng phát triển sợi nấm 21 4.2 Kết thí nghiệm 1: Khảo sát khả ức chế nấm Cercospora citrullina gây bệnh đốm khổ qua nano đồng điều kiện in vitro 23 4.2.1 Khảo sát khả ức chế nano đồng nấm Cercospora citrullina môi trƣờng dinh dƣỡng PDA chế phẩm sinh học HCL 04, Nano Đồng – Chuyên rửa vƣờn 23 4.2.1.1 Khảo sát khả ức chế nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 23 v 4.2.2 Khảo sát khả ức chế nano đồng nấm Cercospora citrullina môi trƣờng dinh dƣỡng PDA Nano Đồng (Cu) Making Life Better 27 4.2.2.1 Khảo sát khả ức chế nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 27 4.2.2.2 Khảo sát khả ức chế nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 28 4.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát hiệu phịng trừ nấm Cercospora citrullina gây bệnh đốm khổ qua nano oxit đồng điều kiện in vitro 30 4.3.1 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina môi trƣờng dinh dƣỡng PDA chế phẩm sinh học HCL 04, Nano Đồng – Chuyên rửa vƣờn 30 4.3.1.1 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 30 4.3.2 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina môi trƣờng dinh dƣỡng PDA Nano Đồng (Cu) Making Life Better 34 4.3.2.1 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 34 4.3.2.2 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 36 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 5.1 KẾT LUẬN 39 5.2 KIẾN NGHỊ 39 PHỤ LỤC 42 vi DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Độ dài tới hạn số tính chất vật liệu (Lê Văn Hiếu cs., 2017) Bảng 2: Thành phần dinh dƣỡng mƣớp đắng 10 Bảng 3: Ký hiệu nghiệm thức thí nghiệm 18 Bảng 4: Kí hiệu chủng nấm phân lập đƣợc 21 Bảng 5: Đƣờng kính tơ nấm (mm) hiệu kháng nấm (%) Cercospora citrullina qua nồng độ chủng TS2 phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 25 Bảng 6: Đƣờng kính tơ nấm (mm) hiệu kháng nấm (%) Cercospora citrullina qua nồng độ chủng CM1 Xã Hội An huyện Chợ Mới 26 Bảng 7: Đƣờng kính tơ nấm (mm) hiệu kháng nấm (%) Cercospora citrullina qua nồng độ chủng TS2 phân lập đƣợc Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 28 Bảng 8: Đƣờng kính tơ nấm (mm) hiệu kháng nấm (%) Cercospora citrullina qua nồng độ chủng CM1 phân lập đƣợc Xã Hội An huyện Chợ Mới 29 Bảng 9: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 31 Bảng 10: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 33 Bảng 11: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 35 Bảng 12: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 37 vii DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Cơ chế kháng khuẩn nano đồng Hình 2: Tổn thƣơng bệnh hình thành cấy nấm Cercospora citrullina (Mũi tên đỏ) (Tan vs, 2019) 12 Hình 3: Theo Meeboon (2009) Bản vẽ đƣờng nét Cercospora citrullina Ipomoea nil (To-Anun C, Hidayat I, Meeboon J., 2011) 13 Hình 4: Mặt sau khuẩn lạc Cercospora citrullina đƣợc nuôi cấy nhiều loại môi trƣờng khác (Tan cs., 2019) 15 Hình 5: Cách bố trí thí nghiệm đĩa petri 19 Hình 6: Các sợi nấm chủng TS1 phát triển bám sát môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 21 Hình 7: Các sợi nấm chủng TS2 phát triển bám sát môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 22 Hình 8: Các sợi nấm chủng CM1 phát triển bám sát môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 22 Hình 9: Các sợi nấm chủng CM2 phát triển bám sát môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 23 Hình 10: Mặt nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn nghiệm thức 72 sau cấy 24 Hình 11: Mặt nấm Cercospora citrullina chủng CM1 phân lập đƣợc Xã Hội An huyện Chợ Mới nghiệm thức 72 sau cấy 27 Hình 12: Mặt nấm Cercospora citrullina chủng CM1 phân lập đƣợc Xã Hội An huyện Chợ Mới nghiệm thức 72 sau cấy 30 Hình 13: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 48 sau cấy 31 Hình 14: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 72 sau cấy 32 Hình 15: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 96 sau cấy 32 Hình 16: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 72 sau cấy 34 Hình 17: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 48 sau cấy 35 Hình 18: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 96 sau cấy 36 Hình 19: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 48 sau cấy 37 Hình 20: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân lập xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 72 sau cấy 38 viii Đến thời điểm 72 giờ, bán kính nấm phát triển mạnh từ 9,2 mm đến 15,2 mm, nghiệm thức (RidomilGold 68WG) 9,2 mm khác biệt ý nghĩa mức 5% nghiệm thức (14 mm) hai nghiệm thức cịn lại khơng khác biệt mặt ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng Nhƣ sau 72 sau cấy nghiệm thức thuốc RidomilGold 68WG cho khả ức chế nấm Cercospora citrullina tốt A Mặt trước B Mặt sau Hình 14: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 72 sau cấy Quan sát sau 96 phát triển nấm NT1 (210ppmm) 19 mm NT2 (240ppm) 17,2 mm không khác biệt mặt ý nghĩa thống kê so với NT3 (Nƣớc cất) 19 mm NT4 (Thuốc RidomilGold 68WG) 12,8 mm khác biệt ý nghĩa mức 5% nghiệm thức NT3 (nƣớc cất) Nhƣ vậy, nhận thấy khả ức chế nghiệm thức NT4 thuốc RidomilGold 68WG mạnh hai nghiệm thức lại khả ức chế nấm phát triển A Mặt trước B Mặt sau Hình 15: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 96 sau cấy 32 4.3.1.2 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập xã Hội An huyện Chợ Mới môi trường dinh dưỡng PDA Sau xác định đƣợc khả kháng nấm nano đồng thí nghiệm chúng tơi chọn nồng độ có hiệu tốt để tiến hành thí nghiệm Khả ức chế thuốc trừ sâu RidomilGold 68WG nồng độ 210ppm 240ppm lên phát triển nấm đƣợc thể qua bảng sau: Bảng 10: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA Nghiệm thức Nồng độ Bán kính tơ nấm Cercospora citrullina tạo thành (mm) 48 SKC 72 giờSKC 96 SKC NT1 210 6,2a 8,8ab 10,6ab NT2 240 6,2a 7,6ab 10,6ab NT3 Nƣớc cất 6,2a 9,4b 11,8b NT4 Thuốc RidomilGold 5,4a 7a 8,2a ns * * 18,15 21,88 23,16 68WG Mức ý nghĩa CV (%) Ghi chú: cột chữ theo sau số giống khơng khác biệt qua phân tích thống kê mức 5% *: Khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 5% Bán kính nấm Cercospora citrullina phát triển thời điểm 48 sau cấy biến động từ 5,4 mm – 6,2 mm Trong đó, tất nghiệm thức không khác biệt so với nghiệm thức đối chứng Nhƣ so sánh bán kính nấm bốn loại nghiệm thức cho thấy khơng có khả ức chế nấm Cercospora citrullina 33 A Mặt trước B Mặt sau Hình 16: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 72 sau cấy Đến thời điểm 72 giờ, bán kính nấm phát triển từ mm đến 9,4 mm, nghiệm thức TN4 (RidomilGold 68WG) mm có đƣờng kính nhỏ có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, nghiệm thức TN2 (240ppm) 7,6 mm nghiệm thức TN1 (210ppm) 8,8 mm hai nghiệm thức khơng có khác biệt thống kê với Cuối nghiệm thức TN3 (Nƣớc cất) 9,4 mm có bán kính khuẩn ty lớn Quan sát sau 96 phát triển nấm nghiệm thức TN4 (RidomilGold 68WG) 8,2 mm có đƣờng kính nhỏ có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, nghiệm thức TN2 (240ppm) nghiệm thức TN1 (210ppm) có bán kính phát triển 10,6 mm Cuối nghiệm thức TN3 (Nƣớc cất) 11,8 mm có bán kính khuẩn ty lớn Nhƣ vậy, chúng tơi nhận thấy nghiệm thức TN4 (RidomilGold 68WG) có khả ức chế nấm tốt qua ba thời điểm 4.3.2 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina môi trƣờng dinh dƣỡng PDA Nano Đồng (Cu) Making Life Better 4.3.2.1 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trường dinh dưỡng PDA Sau xác định đƣợc khả kháng nấm nano đồng thí nghiệm chúng tơi chọn nồng độ có hiệu tốt để tiến hành thí nghiệm Khả ức chế thuốc trừ sâu RidomilGold 68WG nồng độ 150ppm 210ppm lên phát triển nấm đƣợc thể qua bảng sau: 34 Bảng 11: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA Nghiệm thức Nồng độ Bán kính tơ nấm Cercospora citrullina tạo thành (mm) 48 SKC 72 giờSKC 96 SKC NT1 150 9,6ab 14,8 b 18,6b NT2 210 10b 14,6b 17,8b NT3 Nƣớc cất 10,6b 16c 19b NT4 Thuốc RidomilGold 8a 12a 13,2a * * * 16,46 11,8 14,8 68WG Mức ý nghĩa CV (%) Ghi chú: cột chữ theo sau số giống khơng khác biệt qua phân tích thống kê mức 5% *: Khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 5% Bán kính nấm Cercospora citrullina phát triển thời điểm 48 sau cấy biến động từ mm – 16,6 mm Trong đó, bán kính nấm nƣớc cất 10,6 mm phát triển mạnh nghiệm thức bốn mm phát triển yếu khác biệt thống kê có ý nghĩa 5% Bênh cạch đó, bán kính nấm nghiệm thức (150ppm) nghiệm thức hai (210ppm) không khác biệt so với nghiệm thức ba(Nƣớc cất) Nhƣ so sánh bán kính nấm bốn loại nghiệm thức cho thấy, nghiệm thức thuốc RidomilGold 68WG có khả ức chế nấm Cercospora citrullina tốt A Mặt trƣớc B Mặt sau Hình 17: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 48 sau cấy 35 Đến thời điểm 72 giờ, bán kính nấm phát triển mạnh từ 12 mm đến 14,8 mm, ba nghiệm thức khác biệt mặt ý nghĩa thống kê 5% so với nghiệm thức đối chứng Nhƣ sau 72 sau cấy ba nghiệm thức có khả kháng nấm thuốc RidomilGold 68WG có khả ức chế nấm Cercospora citrullina tốt Quan sát sau 96 phát triển nấm nghiệm thức (150ppm) 18,6 mm nghiệm thức (210ppm) 17,8 mm không khác biệt mặt ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức (Nƣớc cất) 19 mm nghiệm thức (RidomilGold 68WG ) 13,2 mm khác biệt ý nghĩa mức 5% nghiệm thức ( Nƣớc cất) Nhƣ vậy, nhận thấy khả ức chế nghiệm thức thuốc RidomilGold 68WG mạnh hai nghiệm thức lại khả ức chế nấm phát triển A Mặt trƣớc B Mặt sau Hình 18: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 96 sau cấy 4.3.2.2 Khảo sát hiệu phòng trừ nấm nano đồng nấm Cercospora citrullina phân lập xã Hội An huyện Chợ Mới môi trường dinh dưỡng PDA Sau xác định đƣợc khả kháng nấm nano đồng thí nghiệm chúng tơi chọn nồng độ có hiệu tốt để tiến hành thí nghiệm Khả ức chế thuốc trừ sâu RidomilGold nồng độ 150ppm 210ppm lên phát triển nấm đƣợc thể qua bảng sau: 36 Bảng 12: Bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina thời điểm quan sát phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA Nghiệm thức Nồng độ Bán kính tơ nấm Cercospora citrullina tạo thành (mm) 48 SKC 72 giờSKC 96 SKC NT1 150 5,6a 7,8a 9,4b NT2 210 5,8a 7a 8,8ab NT3 Nƣớc cất 5,4a 7,2a 9,6b NT4 Thuốc RidomilGold 5,2a 5,8a 6,8a Mức ý nghĩa ns ns * CV (%) 16,15 32,16 23,2 68WG Ghi chú: cột chữ theo sau số giống khơng khác biệt qua phân tích thống kê mức 5%; ns: Khơng khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 5% ; *: Khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 5% Sau 48 SKC bán khính nấm phát triển từ 5,2mm đến 5,8mm sau 72 SKC bán kính nấm phát triển tăng lên không đáng kể từ 5,8 mm đến 7,8 mm Chúng tơi nhận thấy khơng có ý nghĩa khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% A Mặt trước B Mặt sau Hình 19: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 48 sau cấy 37 Sau 96 SKC thuốc RidomilGold 68WG bắt đầu có hiệu có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% với bán kính khuẩn ty 6,8 mm Kế đến nghiệm thức TN2 (210ppm) 8,8 mm, nghiệm thức TN1 (180mm) 9,4mm cuối nghiệm thức TN3 (Nƣớc cất) 9,6mm Nhƣ vậy, nhận thấy khả ức chế nghiệm thức thuốc RidomilGold 68WG mạnh hai nghiệm thức lại khả ức chế nấm phát triển B Mặt trước B Mặt sau Hình 20: Nấm Cercospora citrullina bốn nghiệm thức đƣợc phân lập xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn 72 sau cấy 38 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Kết thu thập mẫu bệnh đốm khổ qua, phân lập đƣợc chủng nấm Cercospora citrullina từ xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn xã Hội An, huyện Chợ Mới tỉnh An Giang Qua kết nuôi cấy chủng nấm Cercospora citrullina: TS1, TS2, CM1, CM2 môi trƣờng dinh dƣỡng PDA, chọn chủng nấm chủng xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn (TS1) chủng xã Hội An, huyện Chợ Mới (CM2) để tiến hành thí nghiệm Kết thí nghiệm khảo sát khả ức chế nano đồng lên phát triển khuẩn ty dòng nấm Cercospora citrullina đƣợc chọn điều kiện phịng thí nghiệm: Đối với chủng nấm Cercospora citrullina thí nghiệm phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA cho thấy nồng độ có khả ức chế nấm tốt 240ppm với 36,62% hiệu kháng nấm Đối với chủng nấm Cercospora citrullina thí nghiệm phân lập đƣợc xã Hội An, huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA cho thấy nồng độ có khả ức chế tốt 210ppm với 21,48% hiệu kháng nấm Đối với chủng nấm Cercospora citrullina thí nghiệm phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn phân lập đƣợc xã Hội An, huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA cho thấy nghiệm thức Thuốc RidomiGold 68WG cho hiệu ức chế tốt 5.2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu khảo sát hiệu phòng trừ bệnh đốm khổ qua nano đồng, điều kiện nhà lƣới đồng ruộng Tiếp tục nghiên cứu tìm phƣơng pháp sinh học phòng trừ nấm Cercospora citrullina gây đốm khổ qua để hạn chế sử dụng thuốc hóa học, bảo vệ môi trƣờng 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Cercospora Leaf Spot (k.n) Retrieved from https://www.seminisus.com/resources/disease-guides/cucurbit/cercospora-leaf-spot-2/ Cercospora leaf spot (k.n) Retrieved from scout/cucurbit/cercospora-leaf-spot.html https://plantpath.ifas.ufl.edu/u- Cercospora leaf spot (k.n) Retrieved from https://plantdoctor.eastwestseed.com/diagnostic-key/cercospora-leaf-spot Dindo King M Donayre and Lucille T Minguez (2014) Sensitivity of Leaf Spot Causing Pathogen of Bitter Gourd ( Cercospora citrullinaCooke) To Different Fungicides Annals of Tropical Research 36[1]:75-87(2014) Đặng Thị Vân (k.n) Ứng dụng nano đồng nông nghiệp Truy cập từ http://wasi.org.vn/ung-dung-nano-dong-trong-nong-nghiep/ Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung., Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn., Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn & Viện Dƣợc Liệu (2003) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam.Hà Nội: Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật Howard F Schwartz and David H Gent (2007) Cercospora Leaf Spot (Cucumber, Melon, Pumpkin, Squash, and Zucchini) High Plains IPM Guide, a cooperative effort of the University of Wyoming, University of Nebraska, Colorado State University and Montana State University Kathrine Xin Yee Tan, Azlinda Binti Ibrahim, and Hideyuki Nagao (2019) Effects of culture medium and lighting condition on induction of conidiation in Cercospora citrullina Songklanakarin Journal of Science and Technology Lê Văn Hiếu, Trần Thị Thanh Vân, Phạm Văn Việt (2017) Vật liệu nano chức (tập 1) Nhà xuất đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Khắc Thi, Nguyễn Thu Hiền, Ngơ Thị Hạnh, Phạm Mỹ Linh & Dƣơng Kinh Thoa (2008) Rau ăn Nhà xuất khoa khọc tự nhiên công nghệ Parthasarathy Seethapathy (k.n) Cercospora leaf spot (Cercospora citrullina ) on cucurbits Retrieved from https://www.ipmimages.org/browse/detail.cfm?imgnum=5586132 Phạm Thị Hà Vân, Lê Sĩ Ngọc, Nguyễn Thị Thúy Liễu, Nguyễn Hoàng Thảo Ly & Nguyễn Thị Hiếu Trang (2017) Ảnh hưởng nano kẽm oxid (ZnO) lên bệnh đốm (Cercospora sp.) Và chất lượng hoa lan dendrobium sonia An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 15 (3), 12-20 To-Anun C, Hidayat I, Meeboon J (2011) Genus Cercospora in Thailand: Taxonomy and Phylogeny (with a dichotomous key to species) Plant Pathology & Quarantine 40 Wilken et al (2020) Draft genome sequences of Ambrosiella cleistominuta, Cercospora brassicicola, C citrullina, Physcia stellaris, and Teratosphaeria pseudoeucalypti IMA Fungus https://doi.org/10.1186/s43008-020-00039-7 41 PHỤ LỤC Phụ bảng 1: ANOVA đƣờng kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy chế phẩm sinh học HCL 04, Nano Đồng – Chuyên rửa vƣờn Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 16,73 Tổng bình DF phƣơng 289,943 183,2 28 473,143 34 Trung bình F bình phƣơng 48,3238 7,39 6,54286 P 0,0001 Phụ bảng 2: ANOVA hiệu kháng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy chế phẩm sinh học HCL 04, Nano Đồng – Chuyên rửa vƣờn Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 82,63 Tổng bình DF phƣơng 2883,58 2971,75 24 5855,33 29 Trung bình F bình phƣơng 576,715 4,66 123,823 P 0,0041 Phụ bảng 3: ANOVA đƣờng kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy chế phẩm sinh học HCL 04, Nano Đồng – Chuyên rửa vƣờn Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 16,78 Tổng bình DF phƣơng 658,743 98,8 28 757,543 34 Trung bình F bình phƣơng 109,79 31,11 3,52857 P 0,0000 Phụ bảng 4: ANOVA hiệu kháng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy chế phẩm sinh học HCL 04, Nano Đồng – Chuyên rửa vƣờn Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 19,78 Tổng bình DF phƣơng 2124,45 904,502 24 3028,96 29 42 Trung bình F bình phƣơng 424,891 11,27 37,6876 P 0,0000 Phụ bảng 5: ANOVA đƣờng kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy Nano Đồng (Cu) Making Life Better Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 4,19 Tổng bình DF phƣơng 8,57143 32,4 28 40,9714 34 Trung bình F bình phƣơng 1,42857 1,23 1,15714 P 0,3188 Phụ bảng 6: ANOVA hiệu kháng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy Nano Đồng (Cu) Making Life Better Nguồn biến Tổng bình DF động phƣơng Nghiệm thức 123,254 Sai số 1341,08 24 Tổng cộng 1464,34 29 CV (%) = -3523,61 Trung bình F bình phƣơng 24,6508 0,44 55,8784 P 0,8153 Phụ bảng 7: ANOVA đƣờng kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy Nano Đồng (Cu) Making Life Better Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 10,88 Tổng bình DF phƣơng 294,743 70 28 364,743 34 Trung bình F bình phƣơng 49,1238 19,65 2,5 P 0,0000 Phụ bảng 8: ANOVA hiệu kháng nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 sau cấy Nano Đồng (Cu) Making Life Better Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 33,98 Tổng bình DF phƣơng 588,143 698,79 24 1286,93 29 Trung bình F bình phƣơng 117,629 4,04 29,1162 P 0,0084 Phụ bảng 9: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 48 SKC 43 Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 22,96 Tổng bình DF phƣơng 60,15 25,6 16 85,75 19 Trung bình F bình phƣơng 20,05 12,53 1,6 P 0,0002 Phụ bảng 10: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 14,11 Tổng bình DF phƣơng 42,2 26,8 16 69 19 Trung bình F bình phƣơng 14,0667 8,40 1,675 P 0,0014 Phụ bảng 11: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 96 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 17,9 Tổng bình DF phƣơng 128,4 47,6 16 176 19 Trung bình F bình phƣơng 42,8 14,39 2,975 P 0,0001 Phụ bảng 12: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 48 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 18,15 Tổng bình DF phƣơng 2,2 19,6 16 21,8 19 Trung bình F bình phƣơng 0,733333 0,60 1,225 P 0,6251 Phụ bảng 13: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng bình DF phƣơng 18 43,2 16 44 Trung bình F bình phƣơng 2,22 2,7 P 0,1251 Tổng cộng CV (%) = 21,88 61,2 19 Phụ bảng 14: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Hội An huyện Chợ Mới môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 96 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 23,16 Tổng bình DF phƣơng 34,2 74 16 108,2 19 Trung bình F bình phƣơng 11,4 2,46 4,625 P 0,0997 Phụ bảng 15: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 48 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 16,46 Tổng bình DF phƣơng 18,55 28,4 16 46,95 19 Trung bình F bình phƣơng 6,18333 3,48 1,775 P 0,0406 Phụ bảng 16: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 11,7 Tổng bình DF phƣơng 42,55 12 16 54,55 19 Trung bình F bình phƣơng 14,1833 18,91 0,75 P 0,0000 Phụ bảng 17: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 96 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 14,8 Tổng bình DF phƣơng 107,75 14,8 16 122,55 19 45 Trung bình F bình phƣơng 35,9167 38,83 0,925 P 0,0000 Phụ bảng 15: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 48 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 22,96 Tổng bình DF phƣơng 60,15 25,6 16 85,75 19 Trung bình F bình phƣơng 20,05 12,53 1,6 P 0,0002 Phụ bảng 16: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 72 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 14,11 Tổng bình DF phƣơng 42,2 26,8 16 69 19 Trung bình F bình phƣơng 14,0667 8,40 1,675 P 0,0014 Phụ bảng 17: ANOVA bán kính khuẩn ty nấm Cercospora citrullina phân lập đƣợc xã Vĩnh Chánh, huyện Thoại Sơn môi trƣờng dinh dƣỡng PDA 96 SKC Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV (%) = 17,9 Tổng bình DF phƣơng 128,4 47,6 16 176 19 46 Trung bình F bình phƣơng 42,8 14,39 2,975 P 0,0001