Knvs Nhóm 5.Pdf

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH KIỂM NGHIỆM VI SINH TRONG THỰC PHẨM Tháng 5 năm 2023 Ngành học CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành CÔ[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH KIỂM NGHIỆM VI SINH TRONG THỰC PHẨM Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Nhóm thực : NHĨM Niên khóa : 2021-2025 Tháng năm 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH KIỂM NGHIỆM VI SINH TRONG THỰC PHẨM Người hướng dẫn thực Sinh viên thực TS TRƯƠNG PHƯỚC THIÊN HỒNG HEN RÍCH THS LÊ PHƯỚC THỌ LÊ THỊ NGỌC THI VÕ TRẦN QUỐC THẮNG NGUYỄN LƯƠNG THẢO NHI VÕ HOÀNG PHONG NGUYỄN ĐỨC LỢI Tháng năm 2023 MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH VIẾT TẮT ii DANH SÁCH HÌNH ẢNH iii Bài ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS VÀ E COLI 1 Định lượng Coliforms E.coli phương pháp đếm khuẩn lạc 1.1.1 Kết 1.1.2 Biện luận tính tốn kết .2 1.2.1 Kết 1.2.2 Biện luận Định lượng Coliforms E Coli phương pháp MPN 2.1.1 Định lượng Colifroms: môi trường BGBL .5 2.1.2 Định lượng E.coli môi trường EC Bài ĐỊNH TÍNH SALMONELLA Kết 1.1 Kết thu sau cấy vào môi trường tăng sinh chọn lọc RV .7 1.2 Kết thu sau cấy vào HE 1.3 Kết thu sau thực phản ứng sinh hóa Biện luận Bài ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN HIẾU KHÍ VÀ TỔNG NẤM MEN NẤM MỐC Mẫu: Bị khơ chợ Kết quả: 2.1 Tổng vi khuẩn hiếu khí: .9 2.2 Tổng nấm men, nấm mốc: 10 i DANH SÁCH VIẾT TẮT BPW: Buffered Pepton WaterS DRBC: Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol Agar HE: Hektoen Entric Agar KIA: Kliger Agar PCA: Plate agar RV: Rappaport Vassiliadis Pepton TBX: Thạch trypton- mật- glucuronid VRBL: Thạch lactoza mật đỏ trung tính tím tinh thể VP: Voges-Proskauer ii DANH SÁCH HÌNH ẢNH Hình .Trang Hình 1.1 Đĩa thạch mơi trường VRBL ủ 37oC 24 nồng độ 10-1 Hình 1.2 Đĩa thạch mơi trường VRBL nồng độ 10-2 .1 Hình 1.3 Đĩa thạch môi trường VRBL nồng độ 10-3 .2 Hình 1.4 Đĩa thạch môi trường TBX nồng độ 10-1 ủ 370C, 24 Hình 1.5 Đĩa thạch mơi trường TBX nồng độ 10-2 ủ 370C, 24 Hình 1.6 Đĩa thạch mơi trường TBX nồng độ 10-3 ủ 370C, 24 Hình 1.7Mơi trường LSB sau ủ 37oC 48 .4 Hình 1.8 Mơi trường BGBL sau ủ 37oC 48 .5 Hình 1.9 Môi trường EC sau ủ 44,5oC 24 Hình 1.10 Môi trường thạch EMB ủ 37oC 24 .6 Hình 2.1 Mẫu để vào môi trường BPW kết sau cấy vào VR Hình 2.2 Đĩa thạch môi trường HE sau ủ 370C, 24 .7 Hình 2.3 Các ống nghiệm sau thực phản ứng sinh hóa Hình 3.1 Chuẩn bị dịch mẫu Hình 3.2 Đĩa thạch mơi trường PCA nồng độ 10-2 sau ủ 300C 24 .9 Hình 3.3 Đĩa thạch mơi trường PCA nồng độ 10-3 sau ủ 300C 24 .10 Hình 3.4 Đĩa thạch môi trường PCA nồng độ 10-4 sau ủ 300C 24 .10 Hình 3.5 Đĩa thạch cấy môi trường DRBC ủ 250C 48 .11 iii Bài ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS VÀ E COLI Định lượng Coliforms E.coli phương pháp đếm khuẩn lạc 1.1 Định lượng Coliforms phương pháp đếm khuẩn lạc 1.1.1 Kết a) b) Hình 1.1 Đĩa thạch mơi trường VRBL ủ 37oC 24 nồng độ 10-1 Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần b) a) Hình 1.2 Đĩa thạch mơi trường VRBL nồng độ 10-2 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần a) b) Hình 1.3 Đĩa thạch môi trường VRBL nồng độ 10-3 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-3 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-3 lần Nhận xét: đĩa thạch mơi trường VRBL có xuất khuẩn lạc đặc trưng (màu đỏ tía) đĩa cấy nồng độ 10-1 1.1.2 Biện luận tính tốn kết Biện luận: kết cho thấy khuẩn lạc mọc lên với mật độ giảm dần theo hệ pha loãng mẫu từ 10-1 đến 10-3 Đối với nồng độ pha lỗng 10-2 10-3, bốn đĩa cấy khơng có khuẩn lạc hay cấy chưa dẫn đến khơng thể đếm khuẩn lạc, q trình thao tác môi trường dịch cấy chưa trộn Tính tốn kết quả: nồng độ pha lỗng 10-1 hai đĩa có số khuẩn lạc mọc 69 94 Ở nồng độ pha loãng 10-2 10-3 khơng có khuẩn lạc Ta tính mật độ tổng khuẩn theo công thức sau: A= N (n1.V f1 ) + + (ni V f i ) A: số tế bào (đơn vị hình thành khuẩn lạc) vi khuẩn (hay nấm mốc nấm men) 1g hay 1ml mẫu (CFU/g CFU/ml) N: tổng số khuẩn lạc đếm đĩa chọn Ni: số lượng đĩa cấy độ pha loãng thứ i V: thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào đĩa fi: độ pha loãng tương ứng A= 69 + 94 = 0, 8.103 (CFU / ml ) −1 2.1.10 1.2 Quy trình định lượng E.coli phương pháp đếm khuẩn lạc 1.2.1 Kết a) b) Hình 1.4 Đĩa thạch môi trường TBX nồng độ 10-1 ủ 370C, 24 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần c) d) Hình 1.5 Đĩa thạch mơi trường TBX nồng độ 10-2 ủ 370C, 24 (c) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-2 lần 1; (d) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-2 lần f) e) Hình 1.6 Đĩa thạch mơi trường TBX nồng độ 10-3 ủ 370C, 24 (e) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-3 lần 1; (f) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-3 lần 1.2.2 Biện luận Đối với kết cho thấy, với nồng độ pha lỗng 10-1,10-2 10-3, sáu đĩa cấy khơng có khuẩn lạc hay cấy chưa dẫn đến đếm khuẩn lạc, q trình thao tác mơi trường dịch cấy chưa trộn Định lượng Coliforms E Coli phương pháp MPN 2.1 Ghi nhận kết LSB dương tính nồng độ pha lỗng: a) b) c) d) Hình 1.7 Môi trường LSB sau ủ 37oC 48 (a) ống nghiệm LSB nồng độ 10-1; (b) ống nghiệm LSB nồng độ 10-2; (c) ống nghiệm LSB nồng độ 10-3; (d) ống nghiệm LSB đối chứng Nhận xét: ống có tượng sinh hơi, sủi bọt bị đục so với ống đối chứng Biện luận: nghi ngờ mẫu có Coliforms E.Coli 2.1.1 Định lượng Colifroms môi trường BGBL Định lượng Colifroms: môi trường BGBL sau ủ 37oC 48 giờ, bắt đầu dùng Micropipet lấy 0,1ml dung dịch mẫu dương tính cho vào ống nghiệm chứa mơi trường BGBL, nồng độ lập lại lần a) d) c) b) Hình 1.8 Mơi trường BGBL sau ủ 37oC 48 (a) ống nghiệm nồng độ 10-1; (b) ống nghiệm nồng độ 10-2; (c) ống nghiệm nồng độ 10-3; (d) ống nghiệm đối chứng Nhận xét: tất ống sủi bọt sinh hơi, màu bị đục ta kết luận mẫu dương tính với Colifroms Số lượng ống dương tính 9/9 tổng số ống nghiệm Mật độ vi sinh vật MPN/100ml là: lớn 1,1.103 2.1.2 Định lượng E.coli mơi trường EC a) b) c) d) Hình 1.9 Môi trường EC sau ủ 44,5oC 24 (a) ống nghiệm nồng độ 10-1; (b) ống nghiệm nồng độ 10-2; (c) ống nghiệm nồng độ 10-3; (d) ống nghiệm đối chứng Nhận xét: tất ống nghiệm sinh hơi, sủi bọt đục màu so với ống đối chứng Suy mẫu dương tính với EC có vi sinh vật Số lượng ống nghiệm dương tính 9/9 tổng số ống nghiệm a) b) Hình 1.10 Mơi trường thạch EMB ủ 37oC 24 (a) Đĩa thạch EMB nồng độ 10-2; (b) Đĩa thạch EMB nồng độ 10-3 Dùng que cấy vịng nhúng vào ống nghiệm có chứa dung dịch dương tính với EC Cấy ria sang mơi trường thạch EMB ủ 37oC 24 để chọn khuẩn lạc điển hình Nhận xét: Trong mơi trường thạch EMB nồng độ 10-2 10-3 khơng có vi khuẩn lạc điển hình (có màu xanh ánh kim), nên khơng có diện E.coli mẫu ban đầu Bài ĐỊNH TÍNH SALMONELLA Kết 1.1 Kết thu sau cấy vào môi trường tăng sinh chọn lọc RV ủ 420C 24 b) b a) c) Hình 2.1 Mẫu để vào môi trường BPW kết sau cấy vào VR (a) mẫu để vào môi trường tăng sinh BPW; (b) kết sau cấy vào môi trường tăng sinh chọn lọc RV ủ 420C 24 giờ; (c) môi trường RV chưa cấy dịch tăng sinh PMW 1.2 Kết thu sau cấy vào HE ủ 370C, 24 a) b) Hình 2.2 Đĩa thạch mơi trường HE sau ủ 370C, 24 giờ.(a) Đĩa thạch cấy lần 1; (b) Đĩa thạch cấy lần Nhận xét: theo kết cho thấy, hai đĩa cấy (a),(b) khuẩn lạc đặc trưng nghi ngờ Salmonella chưa phân lập kĩ thuật cấy chưa 1.3 Kết thu sau thực phản ứng sinh hóa b) a) c) Hình 2.3 Các ống nghiệm sau thực phản ứng sinh hóa (a) ống sau thử nghiệm Indol; (b) ống sau thử nghiệm VP; (c) ống sau thử nghiệm KIA c b Nhận xét: Theo kết cho thấy: thử bnghiệm Indol dương tính, thử nghiệm VP âm a tính, thử nghiệm KIA dương tính Nên mẫu thử nghiệm khơng có Samonella Biện luận TH1: mẫu có Salmonella quy trình bỏ qua bước làm thuần, dẫn đến lấy sai khuẩn lạc nên kết Indol sai TH2: mẫu Salmonella quy trình bỏ qua bước làm dẫn đến kết KIA sai Bài ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN HIẾU KHÍ VÀ TỔNG NẤM MEN NẤM MỐC Mẫu: Bị khơ chợ b) a) Hình 3.1 Chuẩn bị dịch mẫu (a) Cân 10 g bị khơ; (b) Bị khơ sau để vào 90 g nước hấp Kết quả: 2.1 Tổng vi khuẩn hiếu khí: a) b) Hình 3.2 Đĩa thạch mơi trường PCA nồng độ 10-2 sau ủ 300C 24 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-2 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-4 lần Nhận xét: hình 3.2 (a) mẫu nồng độ 10-2 có mọc khuẩn lạc Hình 3.2 (b) mẫu nồng độ 10-2 có mật độ khuẩn lạc vượt 250 nên đếm a) b) Hình 3.3 Đĩa thạch mơi trường PCA nồng độ 10-3 sau ủ 300C 24 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-3 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-4 lần a) b) Hình 3.4 Đĩa thạch mơi trường PCA nồng độ 10-4 sau ủ 300C 24 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-4 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-4 lần Biện luận: Hình 3.2 (a) mẫu nồng độ 10-2 bị nhiễm nấm nên ức chế sinh trưởng khuẩn lạc vi khuẩn hiếu khí, lúc thao tác cấy xa đèn cồn bước khử khuẩn cho que cấy chưa diệt hết vi khuẩn Hình 3.2 (b) mẫu nồng độ 10-2 lại có mật độ khuẩn lạc vượt 250 nên đếm 2.2 Tổng nấm men, nấm mốc: Nhận xét: Trong mẫu khô bị khơng có nấm men nấm mốc, nên cấy môi trường DRBC ủ 250C 48 không thấy xuất nấm men nấm mốc 10 a) b) Hình 3.5 Đĩa thạch cấy mơi trường DRBC ủ 250C 48 (a) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần 1; (b) Đĩa thạch cấy nồng độ 10-1 lần 11