Phân lập và xác định các type độc tố lưu hành của vi khuẩn clostridium perfringens trên bê mắc viêm ruột hoại tử tại 3 tỉnh ở việt nam

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ MỸ LINH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CÁC TYPE ĐỘC TỐ LƯU HÀNH CỦA VI KHUẨN CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TRÊN BÊ MẮC VIÊM RUỘT HOẠI TỬ TẠI TỈNH Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Thái Nguyên - 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ MỸ LINH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CÁC TYPE ĐỘC TỐ LƯU HÀNH CỦA VI KHUẨN CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TRÊN BÊ MẮC VIÊM RUỘT HOẠI TỬ TẠI TỈNH Ở VIỆT NAM Ngành: Thú y Mã ngành: 8.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS Phạm Thị Trang TS Nguyễn Thị Thu Hằng Thái Nguyên - 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố luận văn khác Mọi thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đề tài nghiên cứu hoàn thành Luận văn cảm ơn TÁC GIẢ Nguyễn Thị Mỹ Linh ii LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Thị Trang, TS Nguyễn Thị Thu Hằng - Nhà khoa học hướng dẫn, bảo tận tình suốt trình nghiên cứu hồn thành Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện to lớn sở vật chất, nhân lực, vật lực Ban Giám đốc, Ban Đào tạo - Đại học Thái Nguyên; Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, Ban chủ nhiệm Khoa Chăn nuôi thú y, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, tập thể cán giảng dạy Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên Đặc biệt, xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Thị Thu Hằng cán Phịng thí nghiệm tổng hợp Bảo tồn quỹ gen, Viện Thú y tận tình giúp đỡ suốt thời gian triển khai đề tài Một phần nghiên cứu thuộc đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu xác định bệnh viêm ruột hoại tử đột tử gia súc non (lợn, bê) độc tố vi khuẩn Clostridium perfringens typ A, C, D - Chế vắc xin giải độc tố đa giá (toxoid) phịng bệnh”, thời gian nghiên cứu 2020 - 2023 Nhóm tác giả xin trân trọng cảm ơn Bộ Nông Nghiệp Phát triển Nơng thơn hỗ trợ kinh phí cho nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Chi cục Chăn nuôi thú y/Chi cục Chăn nuôi thú y thủy sản tỉnh Thái Nguyên, Hà Tĩnh thành phố Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện lấy mẫu xét nghiệm nghiên cứu Tôi vô biết ơn thành viên gia đình bạn bè ln bên tôi, giúp đỡ động viên suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành Luận văn Thái nguyên, ngày tháng năm 2022 HỌC VIÊN Nguyễn Thị Mỹ Linh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài CHƯƠNG : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số hiểu biết vi khuẩn Clostridium perfringens bệnh Clostridium perfringens gây 1.1.1 Giới thiệu chung genus (giống, chi) Clostridium 1.1.2 Vi khuẩn Clostridium perfringens 1.1.3 Hiểu biết số bệnh đường tiêu hoá chủ yếu C perfringens gây bò 19 1.2 Tình hình nghiên cứu giới việt nam vi khuẩn clostridium perfringens bệnh clostridium perfringens gây 21 1.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 21 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 23 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 27 2.2 Nội dung nghiên cứu 27 iv 2.2.1 Xác định tỷ lệ nhiễm phân lập vi khuẩn Clostridium perfringens bê mắc bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử 03 tỉnh nghiên cứu 27 2.2.2 Giám định đặc tính sinh học định danh vi khuẩn Clostridium perfringens theo API 20 A 28 2.2.3 Xác định gen mã hoá độc lực định type chủng Clostridium perfringens phân lập 28 2.2.4 Đề xuất biện pháp phòng bệnh 28 2.3.1 Mẫu: 28 2.3.2 Mơi trường hóa chất: 28 2.4 Phương pháp nghiên cứu, kỹ thuật sử dụng 29 2.4.1 Xác định tỷ lệ nhiễm phân lập vi khuẩn Clostridium perfringens bê mắc bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử 03 tỉnh nghiên cứu 29 2.4.2 Giám định đặc tính sinh học định danh vi khuẩn Clostridium perfringens theo API 20 A 30 2.4.3 Xác định gen mã hoá độc lực định type chủng Clostridium perfringens phân lập 32 2.4.4 Phương pháp đề xuất biện pháp phòng bệnh 34 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 34 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm phân lập vi khuẩn Clostridium perfringens bê mắc bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử 03 tỉnh Hà Nội, Thái Nguyên, Hà Tĩnh 35 3.1.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê 03 tỉnh nghiên cứu 35 3.1.2 Kết xác định tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo lứa tuổi 37 v 3.1.3 Kết xác định tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo mùa 39 3.1.4 Kết xác định tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo tính biệt 43 3.2 Kết giám định đặc tính sinh học định danh vi khuẩn Clostridium perfringens theo API 20 A 48 3.2.1 Kết kiểm tra giám định đặc điểm hình thái tính chất ni cấy 48 3.2.2 Kết kiểm tra giám định đặc tính sinh hố định danh vi khuẩn Clostridium perfringens theo API 20 A 49 3.3 Kết xác định gen mã hoá độc lực định type chủng Clostridium perfringens phân lập 53 3.3.1 Kết xác định gen mã hoá độc lực định type chủng Clostridium perfringens phân lập 53 3.3.2 Kết kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn Clostridium perfringens phân lập chuột bạch 58 3.4 Đề xuất biện pháp phòng bệnh 64 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 65 Kết luận 65 Khuyến nghị 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CĨ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bệnh vi khuẩn Clostridium gây người động vật Bảng 1.2 Điều kiện ni cấy thích hợp vi khuẩn C perfringens Bảng 1.3: Các loại độc tố vi khuẩn C perfringens sản sinh Bảng 1.4: Bệnh gây độc tố vi khuẩn C perfringens 17 Bảng 2.1 Sơ đồ bố trí lấy mẫu 30 Bảng 3.1 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bò 03 tỉnh nghiên cứu 35 Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo lứa tuổi 37 Bảng 3.3 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo mùa 41 Bảng 3.4 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo tính biệt 43 Bảng 3.5 Kết phân lập vi khuẩn Clostridium perfringens từ mẫu bê nghi mắc viêm ruột hoại tử (theo tỉnh) 45 Bảng 3.6 Kết kiểm tra hình thái, tính chất ni cấy chủng Clostridium perfringens phân lập 48 Bảng 3.7 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa chủng Clostridium perfringens phân lập 50 Bảng 3.8 Kết định type chủng Clostridium perfringens phân lập từ bê nghi mắc bệnh viêm ruột hoại tử theo loại mẫu 53 Bảng 3.9 Kết định type chủng Clostridium perfringens phân lập 53 Bảng 3.10 Thông tin chủng vi khuẩn Clostridium perfringens sử dụng để kiểm tra độc lực độc tố 58 Bảng 3.11 Kết thử độc lực canh khuẩn chuột 59 Bảng 3.12 Kết thử độc lực độc tố chiết tách từ canh khuẩn 60 Bảng 3.13 Kết xác định liều gây chết tối thiểu (MLD) type độc tố 61 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bò 03 tỉnh nghiên cứu 36 Hình 3.2 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo lứa tuổi 38 Hình 3.3 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo mùa 42 Hình 3.4 Tỷ lệ nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử bê theo tính biệt 44 Hình 3.5 Tỷ lệ phân lập Clostridium perfringens từ mẫu bê nghi mắc viêm ruột hoại tử 46 Hình 3.6 Hình thái khuẩn lạc Clostridium perfringens dung huyết môi trường thạch máu 47 Hình 3.7 Hình thái khuẩn lạc Clostridium perfringens màu đen môi trường thạch TSC 47 Hình 3.8 Hình thái khuẩn lạc Clostridium perfringens màu đỏ môi trường thạch CHROMagar™ C.perfringens 47 Hình 3.9 Hình thái vi khuẩn Clostridium perfringens bắt màu nhuộm Gram (+) kính hiển vi độ phóng đại 10X 49 Hình 3.10 Khuẩn lạc có quầng mờ đục, khơng có lớp ngọc trai mơi trường lịng đỏ trứng thử phản ứng kiểm tra đặc tính sinh lethicinase lipase 51 Hình 3.11 Kết điện di đồ sản phẩm PCR với cặp mồi cpa, cpb, Iap etx 54 Hình 3.12 Số lượng type Clostridium perfringens theo địa phương 56 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Vi khuẩn Clostridium perfringens (thuộc giống Clostridium) Welch W Nuttall G phát vào năm 1892 (Welch W Nuttall G 1892) [69], với tên gọi ban đầu Bacillus aerogenes casulatus Từ năm 1980, tên khoa học thức Clostridium perfringens (C perfringens) (Hatheway C L 1990) [34] Vi khuẩn phân bố rộng rãi đường tiêu hóa người gia súc, môi trường (đất, nước, phân, thức ăn…), nguyên nhân gây nhiều bệnh hoại thư sinh hơi, ngộ độc thực phẩm, bệnh nhiễm độc tố ruột huyết, viêm ruột hoại tử hội chứng đột tử (Carter G 1984) [23] Các chủng vi khuẩn C perfringens sản sinh 18 độc tố khác (Smith L D 1979) [57] Sau đó, người ta xác định xác 14 loại độc tố vi khuẩn gây nên 25 loại bệnh khác (Uzal F A cs 2010, [64]; Petit L cs 1999, [47]) Tuy nhiên, số cơng trình nghiên cứu gần cơng bố phát 20 loại độc tố vi khuẩn C perfringens (Revitt-Mills S A cs 2015) [50] Ngồi loại độc tố chính, thường gặp phổ biến alpha (α, cpa), beta (β, cpb), epsilon (ε, etx) iota (I, iA) vi khuẩn C perfringens sản sinh loại độc tố khác như: gama, delta, eta, theta, kappa, Mu, lambda, Nu, beta2, enterotoxin,…, số độc tố này, độc tố epsilon có độc lực mạnh nhất, độc bảng B, xếp sau độc tố botulinum tetanus Căn vào khả sản sinh bốn loại độc tố này, nhà khoa học đã phân chia C perfringens thành type khác nhau, gọi type độc tố (toxinotype) A, B, C, D, E (Bueschel D M cs 2003) [22] Mỗi type sản sinh độc tố khác gây bệnh cho loại gia súc khác 10 Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2010), Nghiên cứu tình hình nhiễm, vai trị vi khuẩn Clostridium perfringens hội chứng tiêu chảy bò, lợn nuôi Hà Nội số vùng phụ cận, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp Hà Nội 11 Nguyễn Ngọc Nhiên, Phạm Bảo Ngọc, Trần Thị Hạnh, Vũ Đình Hưng, Trịnh Ngọc Nhu (2011), "Viêm ruột hoại tử hươu, nai Clostridium perfringens kết phịng bệnh giải độc tố", Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập 3, tr 47 - 49 12 Lê Văn Sơn, Đặng Thanh Hiền, Lê Đình Hải, Lê Lập, Nguyễn Ngọc Nhiên, Nguyễn Viết Khơng (2011), "Xác định gen độc tố tổ hợp chúng với gen mã hóa độc tố Clostridium perfringens phân lập từ dê cừu duyên hải Nam Trung Bộ", Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập 18, tr 38 - 44 13 Lê Văn Tạo, Cù Hữu Phú, Nguyễn Văn Huyên, Âu Xuân Tuấn (2007), "Xác định nguyên nhân vi khuẩn gây đột tử trâu, bị tỉnh phía Bắc", Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XIV, số 2, tr 24 - 32 14 Nguyễn Đức Tân (2006), Nghiên cứu số bệnh đường hô hấp tiêu hóa vi khuẩn ký sinh trùng gây dê cừu nuôi khu vực duyên hải miền Trung xây dựng biện pháp phòng trị, Báo cáo nghiệm thu đề tài trọng điểm cấp Bộ 2004 - 2006 15 Nguyễn Quang Tính (2008), Xác định vai trị gây bệnh đường tiêu hóa vi khuẩn Clostridium perfringens dê tỉnh Thái Nguyên biện pháp phịng trị, Luận án Tiến sỹ Nơng nghiệp, Viện Thú y 16 Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8400:28:2014 Bệnh động vật-Quy trình chẩn đốn-Phần 28: Bệnh viêm ruột hoại tử vi khuẩn clostridium perfringens II Tài liệu tiếng nước 17 Aichelman W Brown G Griner L (1986), "Clostridium perfringens type D (epsilon) enterotoxemia in Brown Swiss dairy calves", Journal of the American Veterinary Medical Association, 129, 375 - 376 18 Anny Camargo, Enzo Guerrero-Araya, Sergio Castañeda, Laura Vega, María X Cardenas-Alvarez, César Rodríguez, Daniel Paredes-Sabja, Juan David Ramírez, Marina Muñoz (2022), "Intra-species diversity of Clostridium perfringens: A diverse genetic repertoire reveals its pathogenic potential", Front Microbiol 2022; 13: 952081 19 Baldassi L Barbosa M Bach E Iaria S (2004), "Virulence exaltation of Clostridium perfringens strains from bovines", Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, 10, 280 - 292 20 Baskerville M Wood M Seamer J (1980), "Clostridium perfringens type E enterotoxaemia in rabbits", Veterinary record, 107, 18 - 19 21 Billington S J Wieckowski E U Sarker M R Bueschel D Songer J G McClane B A (1998), "Clostridium perfringens type E animal enteritis isolates with highly conserved, silent enterotoxin gene sequences", Infection and immunity, 66, 4531 - 4536 22 Blackwell T Butler D Prescott J Wilcock B (1991), "Differences in signs and lesions in sheep and goats with enterotoxemia induced by intraduodenal infusion of Clostridium perfringens type D", American journal of veterinary research, 52, 1147 - 1152 23 Bueschel D M Jost B H Billington S J Trinh H T Songer J G (2003), "Prevalence of cpb2, encoding beta2 toxin, in Clostridium perfringens field isolates: correlation of genotype with phenotype", Veterinary microbiology, 94, 121 - 129 24 Carter G (1984), "Pasteurella, Yersinia, and Francisella", Diagnostic Procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology, 4, 111 - 121 25 Chan G Farzan A Soltes G Nicholson V M Pei Y Friendship R Prescott J F (2012), "The epidemiology of Clostridium perfringens type A on Ontario swine farms, with special reference to cpb2-positive isolates", BMC veterinary research, 8, 156 26 Cleideanny C Galvão, José D Barbosa, Carlos M C Oliveira, Denis Y Otaka, Paulo R O Silva, Marcos R A Ferreira, Clúvis Moreira Jỳnior, Fabricio R Conceiỗóo, Felipe M Salvarani (2021), "Measurement over Year of Neutralizing Antibodies in Cattle Immunized with Trivalent Vaccines Recombinant Alpha, Beta and Epsilon of Clostridium perfringens", Toxins (Basel)., 2021 Sep; 13(9): 594 27 Cooper K K Songer J G (2019), "Necrotic enteritis in chickens: a paradigm of enteric infection by Clostridium perfringens type A", Anaerobe,15, 55 - 60 28 Diab S S Kinde H Moore J Shahriar M Odani J Anthenill L Songer G Uzal F A (2017), "Pathology of Clostridium perfringens type C enterotoxemia in horses", Veterinary pathology, 49, 255 - 263 29 Evy Goossens, Bonnie R Valgaeren, Bart Pardon, Freddy Haesebrouck, Richard Ducatelle, Piet R Deprez, Filip Van Immerseel (2017), "Rethinking the role of alpha toxin in Clostridium perfringensassociated enteric diseases: a review on bovine necro-haemorrhagic enteritis", Vet Res 2017; 48: 30 Frank F (2006), "Clostridium perfringens type B from enterotoxemia in young ruminants", American journal of veterinary research, 17, 492 - 494 31 García-Alvarado J S Rodriguez M A Labbé R G (1992), "Influence of elevated temperature on starch hydrolysis by enterotoxin-positive and enterotoxin-negative strains of Clostridium perfringens type A", Appl Environ Microbiol 58, 326 - 330 32 Gardner D (1973), "Pathology of Clostridium welchii type D enterotoxaemia: II, Structural and ultrastructural alterations in the tissues of lambs and mice", Journal of comparative pathology, 83, 509 - 524 33 Gazdzinski P Julian R (1992), "Necrotic enteritis in turkeys", Avian Diseases, 792 - 798 34 Gill D M (1982), "Bacterial toxins: a table of lethal amounts", Microbiological reviews, 46, 86 35 Hatheway C L (1990), "Toxigenic clostridia", Clinical microbiology reviews, 3, 66 - 98 36 Iman Mehdizadeh Gohari, Jihong Li, Bruce A McClane (2021), "Identifying the Basis for VirS/VirR Two-Component Regulatory System Control of Clostridium perfringens Beta-Toxin Production", J Bacteriol., 2021 Sep; 203(18): e00279 - 21 37 Katia Forti, Laura Ferroni, Martina Pellegrini, Deborah Cruciani, Antonio De Giuseppe, Silvia Crotti, Paola Papa, Carmen Maresca, Giulio Severi, Maria Luisa Marenzoni, Monica Cagiola (2020), "Molecular Characterization of Clostridium perfringens Strains Isolated in Italy", Toxins (Basel), 2020 Oct; 12 (10): 650 38 Kiu R Hall L J (2018), "An update on the human and animal enteric pathogen Clostridium perfringens", Emerg Microbes Infect 2018; 7: 15 39 Mackinnon J (1999), "Enterotoxaemia caused by Clostridium perfringens type C", Pig Veterinary Journal (UK), 10: 112 - 117 40 Malone F (2004), "Clostridial Disease of cattle and sheep, In: Text of a paper presented at the annual meeting of the association of veterinary surgeons practicing in northern", Ireland, Enniskillen, 189 - 195, 41 McGowan B Moulton J Rood S (1958), "Lamb losses associated with Clostridium perfringens type A", Journal of the American Veterinary Medical Association, 133, 219 42 Miserez R Frey J Buogo C Capaul S Tontis A Burnens A Nicolet J (2018), "Detection of alpha-and epsilon-toxigenic Clostridium perfringens type D in sheep and goats using a ADN amplification technique (PCR)", Letters in applied microbiology 26, 382 - 386 43 Moreira G M S G Salvarani F M Da Cunha C E P Mendonỗa M Moreira A N Gonỗalves L A Pires P S Lobato F C.F Conceiỗóo F R (2018), "Immunogenicity of a trivalent recombinant vaccine against Clostridium perfringens alpha, beta, and epsilon toxins in farm ruminants", Scientific reports, 6, 22816 44 Muhammad Umar Zafar Khan,Muhammad Humza, Shunli Yang, Mughees Aizaz Alvi, Muhammad Zahid Iqbal, Hafiza Zain-ul-Fatima, Shumaila Khalid, Tahir Munir, Jianping Cai (2021), "Occurrence and Toxicogenetic Profiling of Clostridium perfringens in Buffalo and Cattle: An Update from Pakistan", Toxins (Basel), 2021 Mar; 13(3): 212 45 Muhammad Umar Zafar Khan, Muhammad Humza, Shunli Yang, Muhammad Zahid Iqbal, Xiao Xu, Jianping Cai (2021), "Evaluation and Optimization of Antibiotics Resistance Profile against Clostridium perfringens from Buffalo and Cattle in Pakistan", Antibiotics (Basel)., 2021 Jan; 10(1): 59 46 Muhammad Umar Zafar Khan, Shumaila Khalid, Muhammad Humza, Shunli Yang, Mughees Aizaz Alvi, Tahir Munir, Waqar Ahmad, Muhammad Zahid Iqbal, Muhammad Farooq Tahir, Yongsheng Liu, Jie Zhang (2022), "Infection Dynamics of Clostridium perfringens Fingerprinting in Buffalo and Cattle of Punjab Province, Pakistan", Front Vet Sci., 2022; 9: 762449 47 Niilo L (1998), "Clostridium perfringens type C enterotoxemia", The Canadian Veterinary Journal 29, 658 48 Petit L Gibert M Popoff M R (1999), "Clostridium perfringens: toxinotype and genotype", Trends in microbiology, 7, 104 - 110 49 Popoff M (1984), "Bacteriological examination in enterotoxaemia of sheep and lamb", Veterinary Record, 114, 324 50 Redondo L M Carrasco J M D Redondo E A Delgado F Miyakawa M E F (2015), "Clostridium perfringens type E virulence traits involved in gut colonization", PloS one, 10, 0121305 51 Revitt-Mills S A Rood J I Adams V (2015), "Clostridium perfringens extracellular toxins and enzymes: 20 and counting", Microbiology Australia 36, 114 - 117 52 Rocha P Assis R Lobato F Cardoso V Heneine L (2008), "Stability and toxicity of Clostridium perfringens type D epsilon prototoxin treated by iodine", Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia 60, 821 - 824 53 Rood J I Adams V Lacey J Lyras D McClane B A Melville S B Moore R J Popoff M R Sarker M R Songer J G (2018), "Expansion of the Clostridium perfringens toxin-based typing scheme", Anaerobe 2018; 53: - 10 54 Sayeed S Li J McClane B A (2007), "Virulence plasmid diversity in Clostridium perfringens type D isolates", Infection and immunity 75, 2391 - 2398 55 Shokoohi R Samadi M T Amani M Poureshgh Y (2018), "Modeling and optimization of removal of cefalexin from aquatic solutions by enzymatic oxidation using experimental design", Braz J Chem Eng 2018; 35: 943 - 956 56 Shreya D Uppalapati S R Kingston J J Sripathy M H Batra H V (2015), "Immunization with recombinant bivalent chimera r-Cpae confers protection against alpha toxin and enterotoxin of Clostridium perfringens type A in murine model", Molecular immunology 65, 51 - 57 57 Smedley J Fisher D Sayeed S Chakrabarti G McClane B (2004), "The enteric toxins of Clostridium perfringens, In: Reviews of physiology, biochemistry and pharmacology", Springer, 183 - 204 58 Smith L D (1979), "Virulence factors of Clostridium perfringens", Reviews of infectious diseases 1, 254 - 262 59 Songer J G (2006), "Bovine enteritis and enterotoxaemia", Clostridia in Medical, Veterinary and Food Microbiology, Diagnosis and Typeing, 51 - 57 60 Songer J G (1996), "Clostridial enteric diseases of domestic animals", Clinical microbiology reviews 9, 216 61 Songer J G Miskimins D W (2005), "Clostridial abomasitis in calves: Case report and review of the literature", Anaerobe 11, 290 - 294 62 Songer J G Uzal F A (2005), "Clostridial enteric infections in pigs", Journal of veterinary diagnostic investigation 17, 528 - 536 63 Tamai E Ishida T Miyata S Matsushita O Suda H Kobayashi S Sonobe H Okabe A (2003), "Accumulation of Clostridium perfringens epsilon-toxin in the mouse kidney and its possible biological significance", Infection and immunity 71, 5371 - 5375 64 Tillotson K Traub-Dargatz J L Dickinson C E Ellis R P Morley P S Hyatt D R Magnuson R J Riddle W T Bolte D Salman M (2002), "Population-based study of fecal shedding of Clostridium perfringens in broodmares and foals", Journal of the American Veterinary Medical Association, 220, 342 - 348 65 Uzal F A Vidal J McClane B Gurjar A (2010), "Clostridium perfringens toxins involved in mammalian veterinary diseases", Open Toxinol J 2: 24 - 42 66 Uzal F A Kelly W (1997), "Effects of the intravenous administration of Clostridium perfringens type D epsilon toxin on young goats and lambs", Journal of comparative pathology 116, 63 - 71 67 Uzal F A Kelly W Morris W Assis R (2002), "Effects of intravenous injection of Clostridium perfringens type D epsilon toxin in calves", Journal of comparative pathology 126, 71 - 75 68 Uzal F A Kelly W Morris W Bermudez J Baison M (2004), "The pathology of peracute experimental Clostridium perfringens type D enterotoxemia in sheep", Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 16, 403 - 411 69 Uzal F A Songer J G (2018), "Diagnosis of Clostridium perfringens intestinal infections in sheep and goats", Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 20, 253 - 265 70 Welch W Nuttall G (1892), "A gasproducing bacillus (Bacillus aerogenes capsulatus, Nov, spec,) capable of rapid development in the body after death", Johns Hopkins Hosp Bull, 3, 81 71 Zhao L Guo Z Wang Z Wang R Li Y Wang L Xu Y Tang L Qiao X (2017), "Recombinant Lactobacillus casei expressing Clostridium perfringens toxoids α, β2, ε and β1 gives protection against Clostridium perfringens in rabbits", Vaccine 35, 4010 - 4021 III Tài liệu từ internet 72 Chi cục thú y vùng (2020), Hà Tĩnh: Bò chết hàng loạt bệnh clostridium perfringens, http://nhachannuoi.vn/ha-tinh-bo-chet-hangloat-do-benh-clostridium-perfringens/, ngày 12/9/2020 73 Merck Animal Health (2019), PROSYSTEM® RCE, https://www,merckanimal-health-usa,com/product/swine/ProSystem-RCE/1 74 Ministry of agriculture and rural development Israel, (2019), Permitted Vaccines 10.03.19 State of Israel, https://www.moag.gov.il/vet/Yechidot/TachshirimTrufot/Pirsumim/201 9/Documents/rishum_tarkivim_13.02.19.pdf 75 Nguyễn Đức Tân (2018), Nghiên cứu thành công vắc xin phòng bệnh viêm ruột hoại tử bò, dê, cừu Việt Nam, https://www.khanhhoa.gov.vn/vi/vi-tin-hoat-dong-trong-tinh0331/nghien-cuu-thanh-cong-vac-xin-phong-benh-viem-ruot-hoai-tu-obo-de-cuu-dau-tien-tai-viet-nam, ngày 09/3/2018 IV Sử dụng cụm từ viết tắt Clostridium perfringens: C perfringens DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CĨ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI Nguyễn Thị Thu Hằng, Trần Thị Thu Hằng, Nguyễn Đức Tân, Nguyễn Thị Thắm, Phạm Thị Trang, Nguyễn Thị Mỹ Linh (2022), “Xác định type độc tố vi khuẩn Clostridium perfringens từ bê nghi mắc bệnh viêm ruột hoại tử sáu tỉnh Việt Nam”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XXIX, số 5, tr.50 - 57 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Ảnh 1, 2: Bò Hà Tĩnh chết nhiễm bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử Ảnh 3, 4: Bệnh tích ruột bê bị bệnh viêm ruột hoại tử, đột tử Ảnh 5, 6: Bảo quản phân tích mẫu bệnh phẩm Phịng thí nghiệm Viện thú y PHỤ LỤC XỬ LÝ THỐNG KÊ Bảng 3.1 So sánh chung tỉnh nghiên cứu Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 21 23,96 208 205,04 229 18 21,14 184 180,86 202 31 24,90 207 213,10 238 70 599 669 All Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 2,596 Likelihood Ratio 2,529 DF 2 P-Value 0,273 0,282 So sánh Thái Nguyên Hà Nội Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 21 20,72 208 208,28 229 18 18,28 184 183,72 202 392 431 All 39 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 0,009 Likelihood Ratio 0,009 DF 1 So sánh Thái Nguyên Hà Tĩnh Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 21 25,50 208 203,50 229 31 26,50 207 211,50 238 52 415 467 All P-Value 0,925 0,925 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 1,753 Likelihood Ratio 1,764 DF 1 P-Value 0,186 0,184 So sánh Hà Tĩnh Hà Nội Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 18 22,50 184 179,50 202 31 26,50 207 211,50 238 391 440 All 49 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 1,869 Likelihood Ratio 1,896 DF 1 P-Value 0,172 0,169 Bảng 3.2 So sánh chung Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 27 12,45 92 106,55 119 23 25,43 220 217,57 243 20 32,12 287 274,88 307 599 669 All 70 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 24,354 Likelihood Ratio 20,868 DF 2 So sánh ≤ tháng tuổi > – tháng tuổi Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm P-Value 0,000 0,000 All 27 16,44 92 102,56 119 23 33,56 220 209,44 243 All 50 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test 312 Chi-Square Pearson 11,735 Likelihood Ratio 11,068 362 DF 1 P-Value 0,001 0,001 So sánh ≤ tháng tuổi > tháng tuổi Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 27 13,13 92 105,87 119 20 33,87 287 273,13 307 379 426 All 47 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 22,857 Likelihood Ratio 20,456 DF 1 P-Value 0,000 0,000 So sánh > – tháng tuổi > tháng tuổi Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 23 19,00 220 224,00 243 20 24,00 287 283,00 307 507 550 All 43 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 1,638 Likelihood Ratio 1,625 DF 1 P-Value 0,201 0,202 Bảng 3.3 So sánh chung Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 17,26 11 14,54 15 18,62 35 156 147,74 128 124,46 163 159,38 152 165 139 178 187 19,57 167,43 All 70 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test 599 Chi-Square Pearson 19,767 Likelihood Ratio 18,448 669 DF 3 P-Value 0,000 0,000 So sánh mùa Xuân mùa hè Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns không nhiễm nhiễm All 10,86 156 154,14 165 11 9,14 128 129,86 139 20 284 304 All Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Pearson Likelihood Ratio Chi-Square 0,742 0,739 DF 1 P-Value 0,389 0,390 So sánh mùa Xuân mùa Thu Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 11,55 156 153,45 165 15 12,45 163 165,55 178 319 343 All 24 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 1,163 Likelihood Ratio 1,177 DF 1 So sánh mùa Xuân mùa Đông Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns không nhiễm All nhiễm 20,63 156 144,38 165 35 23,38 152 163,63 187 44 308 352 All P-Value 0,281 0,278 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 14,096 Likelihood Ratio 15,089 DF 1 So sánh mùa Hè mùa Thu Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm P-Value 0,000 0,000 All 11 11,40 128 127,60 139 15 14,60 163 163,40 178 291 317 All 26 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 0,027 Likelihood Ratio 0,027 DF 1 P-Value 0,869 0,869 So sánh mùa Hè mùa Đông Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 11 19,61 35 26,39 All 46 Cell Contents Count Expected count 128 119,39 152 160,61 280 139 187 326 Chi-Square Test Chi-Square Pearson 7,678 Likelihood Ratio 8,129 DF 1 So sánh mùa Thu mùa Đông Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm P-Value 0,006 0,004 All 15 24,38 163 153,62 178 35 25,62 152 161,38 187 315 365 All 50 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 8,167 Likelihood Ratio 8,391 DF 1 P-Value 0,004 0,004 Bảng 3.4 Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns nhiễm không nhiễm All 29 34,22 298 292,78 327 41 35,78 301 306,22 342 599 669 All 70 Cell Contents Count Expected count Chi-Square Test Chi-Square Pearson 1,737 Likelihood Ratio 1,746 DF 1 P-Value 0,188 0,186