TIỂU LUẬN CÔNG NGHỆ ENZYME đề tài ENZYME ALKALINE PHOSPHOTASE

ĐỀ TÀI: ENZYME ALKALINE PHOTASE ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA HĨA □□ TIỂU LUẬN CƠNG NGHỆ ENZYME ĐỀ TÀI: ENZYME ALKALINE PHOSPHOTASE GVHD: TS Nguyễn Hoàng Minh SVTH : Nguyễn Hồ Tây Đoàn Thanh Nguyên Ngô Đăng Nhân Hà Thị Thùy Trang Lê Thị Kim Ngân Võ Văn Thiên LỚP : 19SH2 NHÓM : 19.49 ĐỀ TÀI: ENZYME ALKALINE PHOTASE MỤC LỤC Giới thiệu Alkaline phosphotase Lịch sử phát Alkaline phosphotase Cấu trúc Alkaline phosphotase Cơ chế phản ứng Enzyme Các nguồn thu nhận Alkaline phosphatase a Alkaline phosphatase từ vi khuẩn b Alkaline phosphatase từ động vật c Alkaline phosphatase từ người 10 Phương pháp xác định hoạt tính Alkaline phosphatase 10 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme 10 Ứng dụng Alkaline Phosphatase 11 a Xét nghiệm đo hoạt độ Alkaline Phosphatase máu để phát bệnh gan xương 11 b Sử dụng nghiên cứu 11 Tình hình nghiên cứu 13 a Trong y học 13 b Ngành sữa 13 LỜI CẢM ƠN Môn Công nghệ Enzyme bước đầu giúp chúng em tìm hiểu rõ thiết bị ứng dụng thực tế, chúng em tiếp xúc sâu với báo khoa học cụ thể, học cách lấy tài liệu xác, nguồn, cách trích suất tài liệu, cách tổng quan, tổng quát để đề xuất quy trình cơng nghệ cụ thể Từ đây, giúp em nâng cao kĩ để hồn thiện tốt báo cáo hay đồ án khác cịn lại q trình học tập trường Để thực seminar chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới giảng viên hướng dẫn TS Nguyễn Hồng Minh nhiệt tình bảo cho chúng em suốt thời gian thực seminar, cho chúng em lời khuyên hữu ích để chúng em thực đề tài tốt Trong suốt q trình làm việc chúng em khơng thể tránh khỏi thiếu sót mong thơng cảm bỏ qua Em xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày 26 tháng năm 2023 Sinh viên thực Nguyễn Hồ Tây Đồn Thanh Ngun Ngơ Đăng Nhân Hà Thị Thùy Trang Lê Thị Kim Ngân Võ Văn Thiên Giới thiệu Alkaline phosphotase Alkaline phosphatase (ALP) enzyme kẽm phát ba ion kim loại có khoảng cách gần (hai ion Zn ion Mg) có mặt vị trí hoạt động Mặc dù trung tâm kim loại xếp chặt chẽ, có phối tử cầu nối carboxyl Asp51, cầu nối Zn2 Mg3 Hình 1 Alkaline phosphotase Alkaline phosphotase có vai trị sinh lý hợp chất khử phospho Enzyme tìm thấy vơ số sinh vật, sinh vật nhân sơ sinh vật nhân chuẩn, có nhiều dạng cấu trúc khác để phù hợp với môi trường hoạt động khác mà giữ nguyên chức vốn có Alkaline phosphotase tìm thấy khơng gian chu chất E colivi khuẩn Enzyme ổn định nhiệt hoạt động tối đa pH cao Ở người, tìm thấy nhiều dạng tùy thuộc vào nguồn gốc thể, đóng vai trị khơng thể thiếu q trình trao đổi chất gan phát triển xương Lịch sử phát Alkaline phosphotase Sự xuất tài liệu enzyme Alkaline phosphotase bắt đầu vào khoảng năm 1907 Suzuki cộng lần đề xuất phos-phatase tạo thành lớp enzyme nhân chuẩn riêng biệt Đến năm 1912, enzyme mà ngày biết Alkaline phosphotase xác định cơng trình Grosser & Husler von Euler, người có nhiều mơ enzyme thủy phân glycerophosphate fructose 1-6 diphosphate diện với lượng cao niêm mạc ruột Mãi đến năm 1961, Engstrom phát enzym ruột hình thành dư lượng phosphoseryl ủ với este phosphat độ pH thấp Vào cuối năm 1950 đầu năm 1960, nhà điều tra phát E coli sở hữu loại phosphotase kiềm bị ức chế thiếu phosphat Năm 1962, phosphatase kiềm E coli gia nhập nhóm enzyme kim loại kẽm với chứng minh Plocke cộng Cấu trúc Alkaline phosphotase a Cấu trúc tổng thể Phosphatase kiềm (ALP) nhóm glycoprotein gắn màng thủy phân nhiều loại este monophosphate pH kiềm tối ưu Hình Cấu trúc tổng thể ALP enzym đồng phân hình thành hai đơn phân (A B) lõi trung tâm ALP (các vị trí hoạt động) hình thành liên kết hai đơn phân Đặc tính cho phép đạt khả gia nhiệt ổn định với công suất tối đa độ pH cao Tương tự, vị trí hoạt động tìm thấy enzyme nơi có ion magiê hai ion kẽm có chức hoạt động vị trí xúc tác Điều xảy mg zn tương ứng kích hoạt ức chế protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) Millan mô tả xuất mô động lực học phân tử, siêu động lực học tính tốn hóa học lượng tử kết hợp với nghiên cứu thực nghiệm chứng minh mg zn cạnh tranh cho vị trí liên kết vị trí hoạt động cấu trúc khép kín enzyme trạng thái phosphoryl hóa Tại thời điểm này, cation có tác dụng khác trình thủy phân dẫn đến khác biệt việc thiết lập cấu trúc enzyme PTP1B b Cấu trúc người 2+ 2+ 2+ 2+ Phosphatase kiềm (ALP) nhóm glycoprotein gắn màng thủy phân nhiều loại este monophosphate pH kiềm tối ưu Ở người, có ba dạng ALP riêng biệt (nhau thai, đường ruột gan/xương/thận (L/B/K ALP)) Cấu trúc tổng thể PLAP dimer monome chứa 484 dư lượng, bốn nguyên tử kim loại, ion photphat 603 phân tử nước Hai monome có liên quan với trục tinh thể hai lần Hình Cấu trúc 3D enzyme Alkaline phosphotase Monome A hiển thị dạng biểu tượng ruy băng có màu lục lam, monome B hiển thị dạng biểu diễn bề mặt có màu vàng Chỉ loại kim vị trí hoạt động, Zn1, Zn2 Mg, vị trí kim loại thứ tư lạ Ca chiếm giữ, miền vương miện nhánh đầu cuối amino Vị trí tương đối neo GPI enzyme xử lý xác định PLAP sở hữu phần tử cấu trúc thứ cấp bổ sung bao gồm chuỗi xoắn ốc Nterminal (dư lượng 9–25), tạo thành nhánh ôm lấy monome khác; chuỗi xoắn α chuỗi β vùng khác biệt (dư lượng 208–280) tổ chức khác tờ β nhỏ miền 365–430 Ngồi ra, PLAP có hai vị trí glycosyl hóa Asn-122 Asn-249 khác mức độ glycosyl hóa tùy thuộc vào mẫu thai Hai cầu nối disulfide nằm vị trí khác với vị trí enzyme E coli Một gần vị trí glycosyl hóa làm cứng vịng mang chuỗi carbohydrate Cái lại nằm gần Asp-481, nơi neo glycosylphosphatidylinositol gắn vào ổn định hướng PLAP so với màng Ở vị trí hoạt động, gốc cần thiết cho xúc tác bảo tồn, tức serine xúc tác, ba vị trí ion kim loại (Zn1, Zn2 Mg3) phối tử chúng, hầu hết gốc xung quanh khác Phần vị trí hoạt động chứa số lượng lớn dư lượng phần chủ yếu chứa dư lượng aliphatic kỵ nước Trong số dư lượng kỵ nước này, quan sát thấy Tyr-367, thuộc monome thứ hai c Cấu trúc ALP E.coli Phosphatase kiềm tồn không gian chu chất E coli dạng dimer gồm tiểu đơn vị giống hệt nhau, tiểu phần chứa 429 axit amin Bốn dư lượng Cys diện dạng hai disulfua nội chuỗi Các monome tổng hợp dạng tiền enzyme chứa peptide tín hiệu giàu Leu gồm 22 dư lượng Q trình xử lý xảy thơng qua peptidase tín hiệu sau tiết qua màng Dữ liệu gần cho thấy hình thành enzyme hoạt động dime hóa q trình phức tạp liên quan đến số phân tử điều biến (J F Chlebowski, giao tiếp cá nhân) So sánh trình tự axit amin peptide phosphoryl hóa phân lập từ enzyme với trình tự axit amin hồn chỉnh cho thấy dư lượng phosphoryl hóa Serl02 Hình la cho thấy tổng thể hình dạng cấu trúc polypeptide tìm thấy cấu trúc tinh thể mờ Hình Cấu trúc E.coli Dấu vết carbon-alpha chất làm mờ E coli phosphatase kiềm Trục hai nếp gấp không kết tinh trục dọc kích thước tối đa dimer nằm ngang Ba ion kim loại trung tâm hoạt động hiển thị dạng hình cầu hai hoạt động vị trí dimer cách 30 A Bản vẽ dải đơn phân E coli kiềm photphataza Ba ion kim loại hiển thị dạng cầu có vân, Znl, Zn2 Mg dạng Trung tâm monome bao gồm 10 sợi bao quanh 15 vịng xoắn có độ dài khác Một sợi thứ hai chuỗi xoắn ốc tạo thành đỉnh phân tử theo quan điểm Cơ chế phản ứng Enzyme Hình Cơ chế phản ứng enzyme Enzyme tự tương tác với phosphomonoester (ROP) để tạo thành phức hợp enzyme-cơ chất Michaelis (E·ROP) Do hình thành phức hợp enzyme-cơ chất (E.ROP), nguyên tử oxy este phối hợp với Zn1 Zn2, tạo thành cầu phosphat Znl Zn2 Hai oxygen phosphat hình thành liên kết hydro với nhóm guanidinium Arg166 Ser102 tác nhân nucleophile nửa đầu phản ứng chiếm vị trí đối diện với nhóm rời RO- Do liên kết phosphomonoester (ROP) để tạo thành phức hợp enzyme-cơ chất (E.ROP), Ser102 bị khử proton hoàn toàn để cơng nucleophin với chuyển proton sang nhóm hydroxit phối hợp với Mg để hình thành phân tử nước phối trí với Mg Phối hợp Zn2 ổn định Ser102 trạng thái nucleophin Nhóm hydroxyl kích hoạt Ser102 công trung tâm phospho chất phức hợp enzyme-cơ chất (E-ROP) để tạo thành chất trung gian serinephosphate cộng hóa trị (E-P) dẫn đến đảo ngược trung tâm phospho làm RO Sau hình thành EP, photphat (dưới dạng dianion dư lượng phosphoseryl) di chuyển nhẹ vào khoang trung tâm hoạt động, trì liên kết tọa độ Zn2 oxy este hai liên kết hydro với Arg166 Một phân tử nước tọa độ Znl vị trí ban đầu bị chiếm giữ oxy este chất Ở pH kiềm, ion hydroxit nucleophilic phối hợp với Zn1 công chất trung gian serine-phosphate cộng hóa trị (E-P) Nước phân ly proton để trở thành Zn- -OH vị trí nucleophile cho trình thủy phân este phosphoseryl Hình thành phức hợp enzymephosphate khơng cộng hóa trị photphat di chuyển khỏi serine oxi photphat lại phối hợp với Znl để thiết lập lại cầu photphat Các nguồn thu nhận Alkaline phosphatase Alkaline phosphatase enzyme phổ biến tự nhiên, chúng tìm thấy vi sinh vật, động vật thể người a Alkaline phosphatase từ vi khuẩn Phosphatase kiềm tìm thấy khoang chu chất, bên màng tế bào bên phần peptidoglycan thành tế bào vi khuẩn E coli Enzyme ổn định nhiệt hoạt động tối đa pH cao Độ pH tối ưu cho hoạt động enzyme E coli 8,0 Ngồi ra, Alkaline phosphatase cịn diện nhiều loài vi sinh vật khác vi khuẩn bền nhiệt tìm thấy sữa b Alkaline phosphatase từ động vật Alkaline có mặt nhiều lồi động vật khác tơm, cá, ruột bê,… Ở tơm, người ta thu nhận từ lồi tơm Bắc Cực có tên Pandalus borealis Phosphatase dễ dàng bị bất hoạt nhiệt, đặc điểm hữu ích nhiều ứng dụng Ở ruột bị, loại phosphatase kiềm xúc tác cho việc loại bỏ nhóm phosphate từ đầu 5' sợi DNA phosphomonoesters khỏi RNA Enzyme thường sử dụng trình nhân phụ DNA, đoạn DNA thiếu nhóm 5' photphate khơng thể nối lại c Alkaline phosphatase từ người Ở người, alkaline phosphatase có mặt tất mơ khắp thể, đặc biệt tập trung gan, ống mật, thận, xương, niêm mạc ruột thai Trong huyết thanh, hai loại isozyme alkaline phosphatase chiếm ưu thế: xương gan Alkaline phosphatase ruột tiết tế bào ruột đóng vai trị then chốt việc bảo vệ cân nội môi đường ruột ức chế viêm Phương pháp xác định hoạt tính Alkaline phosphatase Hoạt tính thử nghiệm cách sử dụng chất không màu p nitrophenyl photphat (p -NPP) theo phương pháp, tạo p -nitrophenol màu vàng (p NP) Hỗn hợp phản ứng bao gồm 1,0 mL mmol L −1 p -NPP (được điều chế dung dịch đệm cacbonat chứa mmol L −1 MgCl 2), 1,0 mL dung dịch đệm cacbonat (10 mmol L −1, pH 10,5), 1,0 mL dung dịch thô dung dịch enzyme nước cất, với thể tích cuối cố định 5,0 mL Sau thời gian phản ứng 60 phút 37°C, phản ứng dừng lại cách thêm 3,0 mL dung dịch đệm kết thúc (0,1 mol L -1 NaOH mmol L -1EDTA) P -NP tạo đo máy quang phổ PC UV-2401 (Tập đoàn Shimadzu, Kyoto, Nhật Bản) bước sóng 405nm Một đơn vị (U) hoạt tính phosphatase định nghĩa lượng enzyme giải phóng μmol p -NP phút 37°C Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme • Nhiệt độ: · Để xác định độ ổn định nhiệt, ALP ủ nhiệt độ khoảng −20 đến 67 °C đo hoạt tính ALP cịn lại tương đối · Nhiệt độ môi trường tối ưu để ứng dụng enzym xác nhận 37°C Enzyme nhạy cảm với nhiệt sau ủ nhiệt độ khác Hoạt tính enzyme ổn định 27 °C, với hoạt tính tương đối 80% so với mẫu −20 °C Hoạt tính giảm nhanh nhiệt độ 37°C · Nhiệt độ môi trường tối ưu để ứng dụng enzyme xác định 37oC · Hoạt tính enzyme ổn định 32oC · Hoạt tính giảm nhanh nhiệt độ 37oC • pH: · Để đạt độ pH tối ưu ALP, hoạt động enzyme thử nghiệm dung dịch đệm dung dịch đệm thích hợp đệm phốt phát (pH 6– 8, 20 mmol L −1), Gly–NaOH (pH 8,5–9,5, 50 mmol L − 1), NaHCO –Na CO (pH 10–11, 10 mmol L -1) · Hoạt động tối đa pH 8,5 với p-NPP làm chất · Hoạt tính ALP trì mức 80% độ pH – 9,5 · Khi pH lớn nhỏ 8,5 dẫn đến hoạt tính xúc tác enzyme giảm • Ảnh hưởng EDTA ion kim loại đến hoạt tính ALP: · Để xác định độ ổn định pH, mẫu ủ dung dịch đệm khác từ pH 6–11 4°C giờ, hoạt tính dư tương đối thử nghiệm điều kiện tiêu chuẩn mô tả · Ca2+ Mg2+ có tác dụng kích hoạt rõ ràng với ALP, kết hợp ion kim loại trung tâm hoạt động enzyme để thúc đẩy kết hợp khớp nối enzyme chất, để tăng phản ứng xúc tác enzyme · Hoạt tính ALP giảm xuống gần có mặt EDTA, hất chelate hóa ion để phá hủy vị trí hoạt động ALP dẫn đến hoạt tính enzyme · Tác dụng nhạy cảm chọn lọc cao Zn 2+ , Cu 2+ , Mg 2+ Ca 2+ enzyme dựa tác dụng ức chế, kích hoạt kích hoạt lại hoạt tính xúc tác ALP Mg 2+ kiểm sốt chiếm chỗ vị trí liên kết xúc tác cấu trúc, đồng thời điều chỉnh hoạt động enzym Ứng dụng Alkaline Phosphatase a Xét nghiệm đo hoạt độ Alkaline Phosphatase máu để phát bệnh gan xương Xét nghiệm đo hoạt độ ALP máu thực nhằm kiểm tra khả mắc bệnh gan hay xương Khi nồng độ enzym tăng cao máu, gợi ý đến tình trạng tổn thương gan xương Lượng ALP huyết nguồn gốc từ gan xương có tỷ lệ · Đối với gan xét nghiệm kiểm tra chức gan Khi thể có tổn thương gan hay xuất dấu hiệu đau bụng, buồn nơn, vàng da vàng mắt xét nghiệm thực giúp bác sĩ chẩn đoán bệnh Xét nghiệm định trường hợp bệnh nhân bị bệnh xơ gan, viêm gan, viêm túi mật · Đối với xương: xét nghiệm thực hỗ trợ bác sĩ chẩn đốn bệnh xương cịi xương, nhuyễn xương, bệnh Paget (xương yếu dễ gãy) Xét nghiệm thường sử dụng để theo dõi chuyển hóa xương bệnh nhân suy thận, đánh giá thiếu hụt vitamin D b Sử dụng nghiên cứu Bằng cách thay đổi axit amin enzyme phosphatase kiềm kiểu hoang dã Escherichia coli sản xuất, phosphatase kiềm đột biến tạo khơng có hoạt tính enzyme tăng gấp 36 lần mà cịn giữ ổn định nhiệt [2] Các ứng dụng điển hình phịng thí nghiệm phosphatase kiềm bao gồm loại bỏ monoeste phốt phát để ngăn chặn trình tự thắt, điều khơng mong muốn q trình nhân DNA plasmid [3] Phosphatase kiềm phổ biến sử dụng nghiên cứu bao gồm: ● ● ● ● ● Phosphatase kiềm tôm (SAP), từ lồi tơm Bắc Cực (Pandalus borealis ) Phosphatase dễ dàng bị bất hoạt nhiệt, tính hữu ích số ứng dụng Phosphatase kiềm ruột bê (CIP) Phosphatase kiềm thai (PLAP) phiên cắt ngắn C thiếu 24 axit amin cuối (cấu thành miền nhắm mục tiêu neo màng GPI) – phosphatase kiềm tiết (SEAP) Nó thể số đặc điểm ổn định nhiệt, tính đặc hiệu chất khả chống lại bất hoạt hóa học [4] Phosphatase kiềm ruột người Cơ thể người có nhiều loại phosphatase kiềm, xác định tối thiểu ba locus gen Mỗi ba locus kiểm soát loại isozyme phosphatase kiềm khác Tuy nhiên, phát triển enzyme điều chỉnh chặt chẽ yếu tố khác khả điều nhiệt, điện di, ức chế miễn dịch [5] Phosphatase kiềm ruột người cho thấy khoảng 80% tương đồng với enzyme đường ruột bò, điều với nguồn gốc tiến hóa chung chúng Enzyme bị tương tự có 70% tương đồng với enzyme thai người Tuy nhiên, men gan người men thai có 20% tương đồng chúng có cấu trúc tương đồng [6] Alkaline phosphatase trở thành cơng cụ hữu ích phịng thí nghiệm sinh học phân tử , DNA thường sở hữu nhóm phosphate đầu 5' Việc loại bỏ phốt phát ngăn không cho DNA nối lại (đầu 5' gắn với đầu 3' ), giữ cho phân tử DNA thẳng hàng bước quy trình mà chúng chuẩn bị; đồng thời, việc loại bỏ nhóm phốt phát cho phép đánh dấu phóng xạ (thay nhóm phốt phát phóng xạ) để đo diện DNA đánh dấu thông qua bước quy trình thử nghiệm Đối với mục đích này, phosphatase kiềm từ tơm hữu ích nhất, dễ bị vơ hiệu hóa sau hồn thành cơng việc Một ứng dụng quan trọng khác phosphatase kiềm làm chất đánh dấu cho xét nghiệm miễn dịch enzym Các tế bào gốc đa không biệt hóa có nồng độ phosphatase kiềm cao màng tế bào chúng , nhuộm phosphatase kiềm sử dụng để phát tế bào để kiểm tra tính đa (tức tế bào gốc phôi tế bào ung thư biểu mô phôi ) [7] Có mối tương quan thuận nồng độ phosphatase kiềm xương huyết hình thành xương người, việc sử dụng dấu ấn sinh học thực hành lâm sàng khơng khuyến khích Tình hình nghiên cứu a Trong y học Alkaline Phosphatase enzyme quan trọng có thể người nghiên cứu ngành để phát loại bệnh liên quan đến máu thận Các nhà nghiên cứu xem xét gia tăng yếu tố hoại tử khối u-α ảnh hưởng trực tiếp biểu phosphatase kiềm tế bào trơn mạch máu cách phosphatase kiềm (AP) ảnh hưởng đến phản ứng viêm đóng vai trị trực tiếp việc ngăn ngừa quan hư hại [8] Phosphatase kiềm (AP) ảnh hưởng đến phản ứng viêm bệnh nhân mắc bệnh thận mãn tính có liên quan trực tiếp đến thiếu máu đề kháng với tác nhân kích thích tạo hồng cầu [9] Phosphatase kiềm ruột (IAP) chế mà sử dụng để điều chỉnh độ pH trình thủy phân ATP tá tràng chuột [10] b Ngành sữa Phosphatase kiềm thường sử dụng ngành công nghiệp sữa số cho q trình trùng thành cơng Điều vi khuẩn bền nhiệt Mycobacterium paratuberculosis tìm thấy sữa , bị tiêu diệt nhiệt độ thấp nhiệt độ cần thiết để làm biến tính enzymee Do đó, diện lý tưởng để q trình trùng không thành công [11] Xác minh trùng thường thực cách đo huỳnh quang dung dịch trở thành huỳnh quang tiếp xúc với phosphatase kiềm hoạt động Các nhà sản xuất sữa Anh yêu cầu xét nghiệm đo huỳnh quang để chứng minh phosphatase kiềm bị biến tính, xét nghiệm p-Nitrophenylphosphate khơng coi đủ xác để đáp ứng tiêu chuẩn sức khỏe [12] Tài liệu tham khảo: https://medlatec.vn/tin-tuc/y-nghia-cua-xet-nghiem-alkaline-phosphatase-la-gi2 Mandecki W, Shallcross MA, Sowadski J, Tomazic-Allen S (tháng 10 năm 1991) "Sự đột biến dư lượng bảo tồn vị trí hoạt động Escherichia coli kiềm phosphatase tạo enzyme có kcat tăng" Kỹ thuật Protein (7): 801– doi : 10.1093/protein/4.7.801 PMID 1798702 Giải trình tự DNA đánh dấu cuối phân tách hóa học đặc trưng cho bazơ Các phương pháp Enzymology tập 65 trang 499–560 doi : 10.1016/S0076-6879(80)65059-9 ISBN 978-0-12-181965-1 PMID 6246368 ^ Birkett DJ, Done J, Neale FC, Posen S (tháng năm 1966) "Phosphatase kiềm huyết thai kỳ; nghiên cứu miễn dịch" Tạp chí Y học Anh (5497): 1210–2 doi : 10.1136/bmj.1.5497.1210 JSTOR 25407775 PMC 1845009 PMID 5933831 ^ Benham FJ, Harris H (tháng năm 1979) "Dòng tế bào người biểu phosphatase kiềm ruột" ; Kỷ yếu Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia Hoa Kỳ 76 (8): 4016–9 Bibcode : 1979PNAS 76.4016B doi : 10.1073/pnas.76.8.4016 JSTOR 69758 PMC 383967 PMID 291061 ^ Hua JC, Berger J, Pan YC, Hulmes JD, Udenfriend S (tháng năm 1986) "Giải trình tự phần phosphatase kiềm ruột người trưởng thành, bào thai người bò: so sánh với isozyme gan thai người" ; Kỷ yếu Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia Hoa Kỳ 83 (8): ^ "Phụ lục E: Dấu hiệu tế bào gốc" Thông tin tế bào gốc Viện Y tế Quốc gia, Bộ Y tế Dịch vụ Nhân sinh Hoa Kỳ Được lưu trữ từ gốc vào ngày 2109- 2015 Szulc P, Seeman E, Delmas PD (2000) "Các phép đo sinh hóa chu chuyển xương trẻ em thiếu niên" Loãng xương quốc tế 11 (4): 281–94 doi : 10.1007/s001980070116 PMID 10928217 S2CID 8223812 ^ Charnow JA, biên tập (16/04/2010) "Phosphatase kiềm dấu hiệu viêm nhiễm bệnh nhân CKD" Tin tức thận tiết niệu 10 ^ Badve SV, Zhang L, Coombes JS, Pascoe EM, Cass A, Clarke P, Ferrari P, 11 "BS EN ISO 11816-1:2013 - Sữa sản phẩm sữa Xác định hoạt tính phosphatase kiềm Phương pháp đo huỳnh quang sữa đồ uống từ sữa" Viện tiêu chuẩn Anh (BSI) 12 ^ Kay H (1935) "Một số kết việc áp dụng phép thử đơn giản hiệu trình trùng" Mũi giáo 225 (5835): 1516–1518 doi : 10.1016/S0140-6736(01)12532-8 Các Alkaline phosphatase có tính đặc hiệu chất rộng thủy phân chuyển hóa nhiều loại hợp chất phosphate ống nghiệm Tuy nhiên, nay, số hợp chất chọn lọc số xác nhận có tác dụng làm chất tự nhiên cho số isozyme alkaline phosphatase Người ta đề xuất vai trị phosphatase kiềm khơng đặc hiệu (TNAP) chất xương tạo phosphate vơ (Pi) cần thiết cho q trình kết tinh hydroxyapatite Tuy nhiên, phosphatase kiềm không đặc hiệu đưa giả thuyết để thủy phân chất ức chế khống hóa pyrophotphat vơ (PPi) để tạo điều kiện thuận lợi cho kết tủa tăng trưởng khống chất Trên thực tế, lỗi chuyển hóa bẩm sinh ảnh hưởng đến chức TNAP, giảm phosphatase, dẫn đến còi xương nặng nhuyễn xương Các nghiên cứu gần cung cấp chứng thuyết phục chức TNAP mơ xương bao gồm pyrophotphat vơ thủy phân để trì nồng độ thích hợp chất ức chế khống hóa nhằm đảm bảo q trình khống hóa xương diễn bình thường