Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy virus: Chương 4 - Kỹ thuật thu nhận và bảo quản virus được biên soạn với các nội dung chính sau đây: Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy; Các kỹ thuật bảo quản virus. Mời quý thầy cô và các em cùng tham khảo!
Click to add text VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Chương 4: Kỹ thuật thu nhận bảo quản virus 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy 4.2 Các kỹ thuật bảo quản virus 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Mục đích: Loại bỏ thành phần khơng mong muốn Có thể thực bằng: + Ly tâm + Lọc + Sắc ký 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Siêu ly tâm: Được sử dụng để tách tinh kháng nguyên sản xuất vaccine Cũng sử dụng để loại bỏ tế bào chết xác tế bào,… Vaccine cúm, dại, viêm gan B, viêm não Nhật Bản Các loại ly tâm sử dụng: + Ly tâm phân đoạn + Ly tâm gradient 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Ly tâm phân đoạn: 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Ly tâm gradient: - - Tách tế bào, bào quan đại phân tử dựa vào kích thước, hình dạng tỷ trọng chúng Có hai kiểu: + Rate-zonal centrifugation: kích thước, hình dạng, tỷ trọng + Isopycnic centrifugation: tỷ trọng 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Lọc: - - Là kỹ thuật tách hạt khỏi dich lỏng cách đưa áp suất cao vào dung dịch để đẩy dung dịch qua màng lọc Siêu lọc: + Lọc vng góc + Lọc dịng ngang (lọc tiếp tuyến) 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Siêu lọc: - Là kỹ thuật tách phân tử hòa tan dung dịch dựa vào kích thước hạt giữ lại bề mặt màng 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Sắc ký: - - Là kỹ thuật phân tách hỗn hợp phân tử dựa vào khác biệt hệ số phân bố chúng hai pha động tĩnh Có loại sắc ký: + Sắc ký lọc gel + Sắc ký trao đổi ion + Sắc ký lực 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Quy mô Công nghiệp Quy mô PTN 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy Kỹ thuật bất hoạt Sự bất hoạt virus làm cho virus khả xâm nhiễm: Tác động vào lớp vỏ capsid làm khả xâm nhiễm tương tác với tế bào chủ Phá hủy DNA/RNA ngăn chặn chép Virus: • 103oC – 90 giây • 65oC – 10 Vi khuẩn: • 65oC – 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy 4.1 Các kỹ thuật thu nhận virus sau nuôi cấy * Formaldehyde - Bất hoạt vi sinh vật độc tố Được loại khỏi vaccine influenza virus, poliovirus, and diphtheria tetanus toxins * β-propiolactone: - Bất hoạt virus dại * Glutaraldehyde: - Bất hoạt thành phần độc tố vaccine ho gà 4.2 Các kỹ thuật bảo quản virus 4.2 Các kỹ thuật bảo quản virus 4.2 Các kỹ thuật bảo quản virus Ưu điểm: - Loại nước nhiệt độ thấp Phù hợp cho vật liệu nhạy cảm với nhiệt Phù hợp để thực vô trùng Phân chia liều lượng xác Khả vơ trùng trì Khả hồn ngun dễ dàng Đặc tính sản phẩm đơng khơ: - Đủ độ rắn Màu đồng Đủ độ khô Đủ độ xốp Vô trùng Khơng chứa hạt Khơng thay đổi tính chất dạng khơ sau hồn ngun Nhược điểm: - - - Kháng nguyên bị phá hủy stress đơng đá, đơng khơ Sản phẩm xảy oxi hóa độ xốp cao bề mặt tiếp xúc lớn Giá thành cao Thời gian dài