Tối ưu hóa điều kiện trích ly các hợp chất sinh học trong lá ổi rừng bằng phương pháp có hỗ trợ sóng siêu âm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGÀNH CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM TỐI ƯU HĨA ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CĨ HỖ TRỢ SĨNG SIÊU ÂM CÁC HỢP CHẤT SINH HỌC TRONG LÁ ỔI RỪNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁP ỨNG BỀ MẶT GVHD: ĐẶNG THỊ NGỌC DUNG NGUYỄN QUANG VINH SVTH: NGUYỄN HOÀNG TẤN TÀI SKL008888 Tp Hồ Chí Minh, tháng 08/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP MÃ SỐ: 2022-18116173 TỐI ƯU HĨA ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CĨ HỖ TRỢ SĨNG SIÊU ÂM CÁC HỢP CHẤT SINH HỌC TRONG LÁ ỔI RỪNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁP ỨNG BỀ MẶT GVHD: ThS ĐẶNG THỊ NGỌC DUNG PGS.TS NGUYỄN QUANG VINH SVTH: NGUYỄN PHI HÙNG MSSV: 18116173 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 08/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP MÃ SỐ: 2022-18116173 TỐI ƯU HĨA ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CÓ HỖ TRỢ SÓNG SIÊU ÂM CÁC HỢP CHẤT SINH HỌC TRONG LÁ ỔI RỪNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁP ỨNG BỀ MẶT GVHD: ThS ĐẶNG THỊ NGỌC DUNG PGS.TS NGUYỄN QUANG VINH SVTH: NGUYỄN PHI HÙNG MSSV: 18116173 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 08/2022 LỜI CÁM ƠN Chúng xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô ThS Đặng Thị Ngọc Dung thầy PGS.TS Nguyễn Quang Vinh đồng hướng dẫn đề tài nghiên cứu Trong suốt trình thực đề tài thầy cô trang bị cho nhiều kiến thức, kĩ ln tận tình, chu chúng tơi hồn tất đề tài nghiên cứu Chúng tơi xin cảm ơn Khoa cơng nghệ hóa học thực phẩm trường đại học Sư phạm kĩ thuật thành phố Hồ Chí Minh viện cơng nghệ sinh học trường đại học Tây Nguyên tạo điều kiện cho chúng tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Trong q trình nghiên cứu đề tài, chúng tơi cịn nhiều thiếu sót tìm hiểu, đánh giá trình bày đề tài Rất mong nhận quan tâm, góp ý thầy/cơ giảng viên môn để đề tài đầy đủ hồn chỉnh Chúng tơi xin chân thành cảm ơn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài “TỐI ƯU HĨA TRÍCH LY CÁC HỢP CHẤT SINH HỌC TRONG LÁ ỔI RỪNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP CÓ HỖ TRỢ SÓNG SIÊU ÂM” tiến hành cách minh bạch, công khai Mọi thứ dựa cố gắng nỗ lực thân với giúp đỡ lớn từ cô ThS Đặng Thị Ngọc Dung thầy PGS.TS Nguyễn Quang Vinh Các số liệu kết nghiên cứu đưa đồ án trung thực không chép hay sử dụng kết đề tài nghiên cứu tương tự Nếu phát có chép kết nghiên cứu đề đề tài khác thân tơi xin chịu hồn toàn trách nhiệm Ngày 09 tháng 08 năm 2022 Ký tên ii iii iv v vi Sau xử lý số liệu Design Expert, phương trình hồi quy thể ảnh hưởng ba biến đến hoạt tính chống oxy hóa thơng qua khả trung hịa gốc tự ABTS sau: Y = 188,05 + 11,78X1 – 0,7663X2 + 23,29X3 + 6,99X1X2 – 9,05X1X3 + 4,33X2X3 – 14,74X12 – 21,34X22 – 34,33X32 Sau loại bỏ hệ số hồi quy không đảm bảo độ tin cậy khỏi mơ hình, phương trình hồi quy mơ hình đưa ra: Y = 188,05 + 11,78X1 – 0,7663X2 + 23,29X3 – 14,74X12 – 21,34X22 – 34,33X32 Trong đó: Hàm mục tiêu (Y, hoạt tính chống oxy hóa thơng qua khả trung hịa gốc tự ABTS); nồng độ methanol (X1, %); thời gian (X2, phút); tỉ lệ dung môi/nguyên liệu (X3, ml/g) 57 (a) (b) (c) Hình 4.9 Bề mặt đáp ứng thể tương quan khả kháng oxy hóa thơng qua khả trung hoà gốc tự ABTS với yếu tố (a) Bề mặt đáp ứng tương tác nồng độ dung môi thời gian, (b) Bề mặt đáp ứng tương tác nồng độ dung môi tỷ lệ dung môi/nguyên liệu, (c) Bề mặt đáp ứng tương tác thời gian tỷ lệ dung môi/nguyên liệu Quan sát hình 4.9 thấy yếu tố tỉ lệ dung mơi/ngun liệu có ảnh hưởng lớn đến hoạt tính chống oxy hóa phương pháp ABTS Yếu tố nồng độ dung mơi chiết ảnh hưởng tích cực đến hoạt tính chống oxy hóa phương pháp ABTS, nhiên 58 mức độ ảnh hưởng thấp tỉ lệ dung mơi/ngun liệu Ngồi yếu tố thời gian góp phần ảnh hưởng đến hoạt tính chống oxy hóa phương pháp ABTS tác động yếu tố không tỉ lệ dung môi/nguyên liệu nồng độ dung môi chiết độ tin cậy 95% Các thí nghiệm ức chế gốc ABTS DPPH phương pháp sử dụng rộng rãi để đánh giá khả thu dọn gốc tự mẫu khác nhau, bao gồm chất chiết xuất từ thực vật Thử nghiệm ABTS dựa việc khử gốc ABTS + • chất chống oxy hóa mẫu thử nghiệm, thử nghiệm DPPH dựa khả loại bỏ cation gốc 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) chất chống oxy hóa (Litescu cộng sự, 2010) Như thể bảng 4.1, giá trị khả chống oxy hóa chất có chiết xuất ổi nằm khoảng 37,377 đến 125,627 (mgTE/g dw) DPPH; 43,582 đến 193,155 (mgTE/g dw) ABTS Điều cho thấy khả ức chế gốc ABTS tốt so với DPPH Kết nghiên cứu có hoạt tính chống oxy hóa thấp hẳn so với nghiên cứu Quang-Vinh Nguyen cộng (2022) việc trích ly hợp chất phenolic có ổi ảnh hưởng đến hoạt động chống oxy hoá, cụ thể khả ức chế gốc tự DPPH 1313,72 (mgTE/g), ức chế gốc ABTS 344,74 (mgTE/g) Nguyên nhân phương pháp đo khác ổi thu hái khác độ tuổi nên hàm lượng hợp chất sinh học có khả ức chế gốc DPPH khác Trong nghiên cứu Witayapan Nantitanon Songwut Yotsawimonwat (2010) ảnh hưởng hoạt động chống oxy hoá tổng hàm lượng polyphenol dịch chiết ổi chứng minh non có khả chống oxy hố đạt giá trị cao Hình 4.8 hình 4.9 cho thấy yếu tố tỉ lệ dung mơi/ngun liệu có tác động đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết ổi Đối với giá trị khả ức chế gốc tự ABTS yếu tố nồng độ dung mơi chiết có tác động đáng kể đến hàm mục tiêu Yếu tố thời gian có tác động đến hoạt tính chống oxy hóa khơng đáng kể Nhiều nghiên cứu có mối tương quan chặt chẽ hàm lượng polyphenol với hoạt tính chống oxy hóa (Suganya cộng 2007) Chính hàm lượng polyphenol có dịch chiết có ảnh hưởng trực tiếp đến hoạt tính chống oxy hoá ❖ Xác định kiểm chứng điều kiện tối ưu Do hàm mục tiêu mơ hình giá trị R2 hiệu chỉnh chênh lệch 0.2 so với R2 dự đoán chênh lệch mức cho thấy có vấn đề xảy với mơ hình liệu để kiểm tra chạy xác nhận mẫu thực đồng thời điều kiện tối 59 ưu để trích ly hợp chất sinh học có ổi rừng phương pháp có hỗ trợ sóng siêu âm Từ liệu thu được, phần mềm Design Expert 12 cho thông số tối ưu yếu tố xác định như: nồng độ dung môi chiết 51,242%, thời gian 9,597 (phút), tỷ lệ dung môi/nguyên liệu 10,755 (ml/g) Giá trị mức độ mong đợi (Desirability = 0,982) thể khả đạt hiệu suất tối đa từ điểm tối ưu mà mơ hình dự đốn 98,20% Bảng 4.14 So sánh kết từ mơ hình thực nghiệm Phần trăm Mơ hình 95% PI low Thực nghiệm 95% PI high chênh lệch (%) TPC (mg GAE/g 154,954 141,6 152,954 168,309 1,291 114,717 89,156 113,871 140,279 0,737 0,0353 -0,007 0,0350 0,078 0,850 0,0114 0,008 0,0119 0,015 4,386 121,872 97,060 124,954 146,684 2,592 192,596 161,244 194,684 223,948 1,084 dw) TFC (mg QE/g dw) α-amylase (IC50, mg/ml) α-glucosidase (IC50, mg/ml) DPPH (TE/g dw) ABTS (TE/g dw) Kết từ bảng 4.14, thấy kết thực nghiệm thu nằm khoảng tin cậy 95% từ giá trị thấp đến giá trị cao phần mềm dự đoán gần với kết mơ hình dự đốn, phần trăm chênh lệch kết từ mơ hình dự đốn thực nghiệm cho thấp 5% điều chứng minh mơ hình kết tối ưu sử dụng thực nghiệm 60 Kết luận: Các kết cho ta thấy rõ ảnh hưởng yếu tố nồng độ dung môi chiết, thời gian, tỉ lệ dung môi/nguyên liệu Với mục đích cuối xác định giá trị tối ưu cho biến để đạt hiệu xuất trích ly hợp chất sinh học cao Trong thí nghiệm tối ưu hóa này, điều kiện tối ưu yếu tố nồng độ dung môi chiết 51,242%, thời gian 9,597 (phút), tỷ lệ dung môi/nguyên liệu 10,755 (ml/g) Sau thực nghiệm điều kiện tối ưu, hiệu suất trích ly hợp chất sinh học khơng có khác biệt q lớn so với kết thu từ mơ hình 61 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Nghiên cứu tối ưu thông số công nghệ để chiết suất hợp chất có hoạt tính sinh sau: nồng độ dung môi chiết 51,242%, thời gian 9,597 (phút), tỷ lệ dung môi/nguyên liệu 10,755 (ml/g) Kết phân tích mơ hình đáp ứng bề mặt cho thấy yếu tố nồng độ dung môi, thời gian, tỷ lệ dung mơi/ngun liệu có ảnh hưởng đến hàm mục tiêu 5.2 Kiến nghị Quá trình nghiên cứu thực quy mơ phịng thí nghiệm với khả thời gian hạn chế Vì vậy, đề tài nên tiếp tục nghiên cứu thêm thông số công nghệ công suất siêu âm, kích thước ngun liệu nâng quy mơ khảo sát để tiệm cận với quy mô pilot quy mô sản xuất Đồng thời, nghiên cứu điều kiện bảo quản cao chiết ứng dụng cao chiết sản phẩm bảo vệ sức khoẻ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO A M Metwally, A A Omar, F M Harraz, & Sohafy, S M El (2010) Phytochemical investigation and antimicrobial activity of Psidium guajava L leaves Phcog Mag, 212– 228 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2950385/ Adeyemi, Stephen 0., Akanji M.A., O S A (2009) Ethanolic leaf extract of Psidium guajava : Phyto- chemical and trypanocidal activity in rats infected with Trypanosoma brucei brucei 3(5), 420–423 Ahmed, M I., Xu, X., Sulieman, A A., Mahdi, A A., & Na, Y (2020) Effect of extraction conditions on phenolic compounds and antioxidant properties of koreeb (Dactyloctenium aegyptium) seeds flour Journal of Food Measurement and Characterization, 14(2), 799–808 https://doi.org/10.1007/s11694-019-00328-9 Baby Joseph (2011) REVIEW ON NUTRITIONAL , MEDICINAL AND PHARMACOLOGICAL PROPERTIES OF GUAVA (PSIDIUM GUAJAVA LINN) 53– 64 Bàng Nghiêm (2021) Tổng quan ổi https://nongnghiep.vn/Tổng+quan+về+cây+ổisearch/from-to-sign-/ Beckstrom Sternberg S M (1994) The phytochemical database National Germplasm Resources Laboratory (NGRL), Agricultural Research Service (ARS), U.S Department of Agriculture Benchikh, Y., & Louailèche, H (2014) Effects of extraction conditions on the recovery of phenolic compounds and in vitro antioxidant activity of carob (Ceratonia siliqua L.) pulp Acta Botanica Gallica, 161(2), 175–181 https://doi.org/10.1080/12538078.2014.909325 Bích, Đ H (2008) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam (tập II) Nhà xuất Khoa học - Kỹ Thuật Che Sulaiman, I S., Basri, M., Fard Masoumi, H R., Chee, W J., Ashari, S E., & Ismail, M (2017) Effects of temperature, time, and solvent ratio on the extraction of phenolic compounds and the anti-radical activity of Clinacanthus nutans Lindau leaves by response surface methodology Chemistry Central Journal, 11(1), 1–11 https://doi.org/10.1186/s13065-017-0285-1 Cracolice, M S., & Peters, E I (2020) An Active Learning Approach (Vol 15, Issue 2) Đái Thị Xuân Trang, Phạm Thị Lan Anh, T T M B T A (2012) Khảo sát khả 63 điều trị bệnh tiểu đường cao chiết ổi (Psidium guajava L.) Tạp Trí Khoa Học, 163–170 Đào Quang Nghị, Nguyễn Quốc Hùng, & Đào Thị Liên (2017) Khảo nghiệm số giống ổi vùng đồng sông Hồng In Kết nghiên cứu khoa học chuyển giao công nghệ Rau, Quả, Hoa - Cây cảnh giai đoạn 2011-2015 (pp 3–8) Nhà xuất Nông nghiệp Deguchi Y, Osada K, Uchida K, Kimura H, Yoshikawa M, Kudo T, Yasui H, & Watanuki M (1998) Effects of extract of guava leaves on the development of diabetes in the db/db mouse and on the postprandial blood glucose of human subjects Nippon Nogeikagaku Kaishi, 72(8), 923–931 Đoàn Thị Ngân, Lê Trần Thảo Nguyên, Hoàng Hồng Hạnh, Bùi Minh Quang, Nguyễn Lê Tuyên, & Lê Văn Minh (2018) Ứng dụng lưu chất CO2 siêu tới hạn nghiên cứu sản xuất Journal of Science and Technology Fan, G., Han, Y., Gu, Z., & Chen, D (2008) Optimizing conditions for anthocyanins extraction from purple sweet potato using response surface methodology (RSM) LWT - Food Science and Technology, 41(1), 155–160 https://doi.org/10.1016/j.lwt.2007.01.019 Gam, D H., Kim, S Y., & Kim, J W (2020) Optimization of ultrasound-assisted extraction condition for phenolic compounds, antioxidant activity, and epigallocatechin gallate in lipid-extracted microalgae Molecules, 25(3), 1–17 https://doi.org/10.3390/molecules25030454 Gertenbach, D (2002) Solid - liquid extraction technologies formanufacturing nutraceuticals In Mazza G, Maguer ML Shi J (Eds.) Functional foods: biochemical and processing aspects CRC Press Guan, X., & Yao, H (2008) Optimization of Viscozyme L-assisted extraction of oat bran protein using response surface methodology Food Chemistry, 106(1), 345–351 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2007.05.041 Hồ Bá Vương, Nguyễn Xuân Duy, & Nguyễn Anh Tuấn (2015) Tối ưu hóa chiết Polyphenol từ ổi phương pháp bề mặt đáp ứng Tạp Chí Khoa Học Phát Triển, 13(7), 1144–1152 http://www.vnua.edu.vn/tapchi/Upload/30112015-TC so7.2015 30.11_10.pdf Hsiao-Wen Huang, Chiao-Ping Hsu, Binghuei Barry Yang, & Chung-Yi Wang (2013) 64 Advances in the extraction of natural ingredients by high pressure extraction technology 33(1), 54–62 https://doi.org/10.1016/j.tifs.2013.07.001 IDF-International Diabetes Federation (2021) Annual Report Isela Lavilla, & Carlos Bendicho (2017) Fundamentals of Ultrasound-Assisted Extraction In Water Extraction of Bioactive Compounds (pp 291–316) Plants to Drug Development https://doi.org/10.1016/B978-0-12-809380-1.00011-5 J.M., R M A and P (2013) Natural Product Extraction Principles and Applications RSC Green Chemistry https://doi.org/10.1039/9781849737579-fp001 Joseph B., P R M (2011) Phytochemical and Biopharmaceutical Aspects of Psidium guajava (L.) Essential Oil: A Review Research Journal of Medicinal Plant, 5(4), 432– 442 Ju, Z Y., & Howard, L R (2003) Effects of solvent and temperature on pressurized liquid extraction of anthocyanins and total phenolics from dried red grape skin Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51(18), 5207–5213 https://doi.org/10.1021/jf0302106 Kallel, F., Driss, D., Chaari, F., Belghith, L., Bouaziz, F., Ghorbel, R., & Chaabouni, S E (2014) Garlic (Allium sativum L.) husk waste as a potential source of phenolic compounds: Influence of extracting solvents on its antimicrobial and antioxidant properties Industrial Crops and Products, 62, 34–41 https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2014.07.047 Lim, Y P., Pang, S F., Yusoff, M M., Abdul Mudalip, S K., & Gimbun, J (2019) Correlation between the extraction yield of mangiferin to the antioxidant activity, total phenolic and total flavonoid content of Phaleria macrocarpa fruits Journal of Applied Research on Medicinal and Aromatic Plants, 14, 100224 https://doi.org/10.1016/J.JARMAP.2019.100224 Litescu, S C., Eremia, S., & Radu, G L (2010) Methods for the Determination of Antioxidant Capacity in Food and Raw Materials Liu, C W., Wang, Y C., Lu, H C., & Chiang, W D (2014) Optimization of ultrasoundassisted extraction conditions for total phenols with anti-hyperglycemic activity from Psidium guajava leaves Process Biochemistry, 49(10), 1601–1605 https://doi.org/10.1016/j.procbio.2014.06.009 Luo You, Peng Bin, Liu Yan, Wu Yanan, W Z (2018) Ultrasound extraction of 65 polysaccharides from guava leaves and their antioxidant and antiglycation activity Process Biochemistry Manosroi J P Dhumtanom, A M (2005) Anti-proliferative activity of essential oil extracted from Thai medicinal plants on KB and P388 cell lines Cancer Lett, 235, 114– 120 Metwally A.M Omar A.A., Harraz F.M., and S S M (2010) Phytochemical investigation and antimicrobial activity of Psidium guajava L leaves Pharmacogn Mag, 6(23), 212– 288 Miller, A L (1996) Antioxidant flavonoids: Structure, function and clinical usage Alternative Medicine Review, 1(2), 103–111 Naczk, M., & Shahidi, F (2004) Extraction and analysis of phenolics in food Journal of Chromatography A, 1054(1–2), 95–111 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2004.08.059 Nepote, V., Grosso, N R., & Guzmán, C A (2005) Optimization of extraction of phenolic antioxidants from peanut skins Journal of the Science of Food and Agriculture, 85(1), 33–38 https://doi.org/10.1002/jsfa.1933 Pinelo, M., Rubilar, M., Jerez, M., Sineiro, J., & Núñez, M J (2005) Effect of solvent, temperature, and solvent-to-solid ratio on the total phenolic content and antiradical activity of extracts from different components of grape pomace Journal of Agricultural and Food Chemistry, 53(6), 2111–2117 https://doi.org/10.1021/jf0488110 Pommer, C V., & Murakami, K R N (2009) Breeding guava (Psidium guajava L.) Breeding Plantation Tree Crops: Tropical Species, 83–120 https://doi.org/10.1007/978-0-387-71201-7_3 Premi, M., & Sharma, H K (2017) Effect of extraction conditions on the bioactive compounds from Moringa oleifera (PKM 1) seeds and their identification using LC– MS Journal of Food Measurement and Characterization, 11(1), 213–225 https://doi.org/10.1007/s11694-016-9388-y QIAN He, N V (2004) Antioxidant power of phytochemicals from Psidium guajava leaf Journal of Zhejiang University Science, 5(6), 676–683 https://doi.org/10.1631/jzus.2004.0676 Quang-Vinh Nguyen, Bich Huyen, B T., Minh-Dinh Tran, Minh-Trung Nguyen, ManhDung Doan, Anh-Dzung Nguyen, Tam Minh Le, Van-Cuong Tran, & Tri-Nhut Pham (2022) Impact of Different Drying Temperatures on In Vitro Antioxidant and 66 Antidiabetic Activities and Phenolic Compounds of Wild Guava Leaves Collected in the Central Highland of Vietnam Natural Product Communications, 17(4) https://doi.org/10.1177/1934578X221095349 Samavardhana, K., Supawititpattana, P., Jittrepotch, N., Rojsuntornkitti, K., & Kongbangkerd, T (2015) Effects of extracting conditions on phenolic compounds and antioxidant activity from different grape processing byproducts International Food Research Journal, 22(3), 1169–1179 Sebaugh, J L (2011) Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation Pharmaceutical Statistics, 10(2), 128–134 https://doi.org/10.1002/pst.426 Shirur Dakappa Shruthi, Adhikari Roshan, Timilsina Sanjay Sharma, & Sajjekhan Sunita (2013) A REVIEW ON THE MEDICINAL PLANT PSIDIUM GUAJAVA LINN (MYRTACEAE) In Journal of Drug Delivery & Therapeutics (Vol 2013, Issue 3, pp 162–168) http://jddtonline.info Silva, E M., Souza, J N S., Rogez, H., Rees, J F., & Larondelle, Y (2007) Antioxidant activities and polyphenolic contents of fifteen selected plant species from the Amazonian region Food Chemistry, 101(3), 1012–1018 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2006.02.055 Spigno, G., Tramelli, L., & De Faveri, D M (2007) Effects of extraction time, temperature and solvent on concentration and antioxidant activity of grape marc phenolics Journal of Food Engineering, 81(1), 200–208 https://doi.org/10.1016/j.jfoodeng.2006.10.021 Suganya Tachakittirungrod, Siriporn Okonogi, S C (2007) Study on antioxidant activity of certain plants in Thailand : Mechanism of antioxidant action of guava leaf extract 103, 381–388 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2006.07.034 Venâncio Alves Amaral, Thais Francine Ribeiro Alves, Juliana Ferreira de Souza, Fernando Batain, Kessi Marie de Moura Crescencio, Victória Soares Soeiro, Cecília Torqueti de Barros, M V C (2021) Phenolic Compounds from Psidium guajava (Linn.) Leaves: Effect of the Extraction-Assisted Method Upon Total Phenolics Content and Antioxidant Activity 11(2), 9346–9357 https://doi.org/10.33263/BRIAC112.93469357 Viljem Vek, Oven, P., & Poljanšek, I (2017) Comparison of two extraction and two chromatographic methods in analysis of beech wood extractives Springer-Verlag GmbH Germany https://doi.org/10.1007/s00107-017-1216-5 67 Vivekananda Mandal, Yogesh Mohan, & S Hemalatha (2007) Microwave Assisted Extraction-An Innovative and Promising Extraction Tool for Medicinal Plant Research Pharmacognosy Reviews, 1(1), 7–18 Vuong, Q V., Hirun, S., Roach, P D., Bowyer, M C., Phillips, P A., & Scarlett, C J (2013) Effect of extraction conditions on total phenolic compounds and antioxidant activities of Carica papaya leaf aqueous extracts Journal of Herbal Medicine, 3(3), 104–111 https://doi.org/10.1016/j.hermed.2013.04.004 Wang, L., Yang, B., Du, X., & Yi, C (2008) Optimisation of supercritical fluid extraction of flavonoids from Pueraria lobata Food Chemistry, 108(2), 737–741 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2007.11.031 Witayapan Nantitanon, Songwut Yotsawimonwat, S O (2010) Factors influencing antioxidant activities and total phenolic content of guava leaf extract LWT - Food Science and Technology, 43(7), 1095–1103 https://doi.org/10.1016/j.lwt.2010.02.015 Yoriko Deguchi, K M (2010) Anti-hyperglycemic and anti-hyperlipidemic effects of guava leaf extract 1–10 Yu, J., Ahmedna, M., & Goktepe, I (2005) Effects of processing methods and extraction solvents on concentration and antioxidant activity of peanut skin phenolics Food Chemistry, 90(1–2), 199–206 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2004.03.048 Zeng, W., Li, F., Wu, C., Ge, Y., Yu, R., Wu, X., Shen, L., Liu, Y., & Li, J (2020) Optimization of ultrasound-assisted aqueous extraction of polyphenols from Psidium guajava leaves using response surface methodology Separation Science and Technology (Philadelphia), https://doi.org/10.1080/01496395.2019.1574830 68 55(4), 728–738 PHỤ LỤC Phụ lục Kết thí nghiệm sàng lọc nồng độ dung mơi chiết Nồng độ dung Thời gian Tỉ lệ dung môi/nguyên TPC (phút) liệu (ml/g) (mg GAE/g dw) 40 20 10 133,657a 50 20 10 147,261b 60 20 10 138,747c môi methanol (%) (Các giá trị trung bình có mẫu tự khác thể khác biệt khơng có ý nghĩa mặt thống kê mức độ tin cậy 95%) Phụ lục Kết thí nghiệm sàng lọc thời gian chiết Nồng độ dung Thời gian Tỉ lệ dung môi/nguyên TPC (phút) liệu (ml/g) (mg GAE/g dw) 50 10 138,578a 50 10 10 158,873b 50 15 10 149,487c 50 20 10 143,121d môi methanol (%) (Các giá trị trung bình có mẫu tự khác thể khác biệt khơng có ý nghĩa mặt thống kê mức độ tin cậy 95%) Phụ lục Kết thí nghiệm sàng lọc tỉ lệ dung mơi/ngun liệu chiết Nồng độ dung Thời gian Tỉ lệ dung môi/nguyên TPC (phút) liệu (ml/g) (mg GAE/g dw) 50 10 113,5372a 50 10 7,5 124,8369 b 50 10 10 151,1594c 50 10 12,5 145,2037d 50 10 15 136,8395e môi methanol (%) (Các giá trị trung bình có mẫu tự khác thể khác biệt khơng có ý nghĩa mặt thống kê mức độ tin cậy 95%) 69 70 X1 TPC 4,3876 p-values 0,0187 TFC 112,6550 4,8379 p-values 0,1376 Amylase 0,0386 -0,0069 p-values 0,1958 Glucosidase 0,0119 -0,0016 p-values 0,0017 DPPH 118,5676 0,8279 p-values 0,7818 ABTS 188,0503 11,7762 p-values 0,0094 p-value shading: p < 0,05 Intercepts 154,0262 X2 X3 X1X2 -2,4314 7,0400 -0,3332 0,1516 0,0012 0,8690 -6,5549 10,0047 2,3670 0,0536 0,0075 0,5441 0,0101 -0,0118 -0,0094 0,0693 0,0396 0,1639 0,0009 -0,0015 0,0006 0,0422 0,0033 0,2664 -5,6740 16,1018 3,8891 0,0798 0,0002 0,3128 -0,7663 23,2931 6,9902 0,8391 < 0,0001 0,1615 0,05 ≤ p < 0,1 p ≥ 0,1 X1X3 -0,6702 0,7406 -4,9763 0,2162 0,0175 0,0190 0,0008 0,1188 -6,4235 0,1097 -9,0538 0,0787 X2X3 4,9040 0,0320 5,8817 0,1497 -0,0095 0,1605 0,0003 0,4947 3,9329 0,3077 4,3320 0,3709 X12 -10,7500 < 0,0001 -12,6897 0,0029 0,0104 0,0816 0,0021 0,0005 -13,8440 0,0013 -14,7449 0,0041 Phụ lục Hệ số hồi quy biến mơ hình X22 -11,4037 < 0,0001 -15,7138 0,0007 0,0112 0,0646 0,0022 0,0004 -13,1232 0,0019 -21,3393 0,0003 X3 -17,0839 < 0,0001 -15,7567 0,0007 0,0080 0,1680 0,0009 0,0626 -15,8261 0,0005 -34,3309 < 0,0001 S K L 0