Khảo sát bệnh tồn lưu tối thiểu trong bệnh bạch cầu cấp dòng lympho b ở trẻ em bằng kỹ thuật flow cytometry ( 8 màu ) và ig

GI I HỌ Ƣ H H H H H I H - - NGUYỄN THỊ TUY T NHUNG H ỆNH T LƢU I THIỂU TRONG BỆNH B CH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO B Ở TRẺ EM BẰNG KỸ THUẬT FLOW CYTOMETRY (8 MÀU) VÀ Ig/TCR Ở BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUY T HỌC TỪ H G 01/2017 LUẬ H H H N THÁNG 07/2020 Ă H Ĩ H I TRÚ I H– Ă 2020 GI I HỌ Ƣ H H H H H I H - - NGUYỄN THỊ TUY T NHUNG H ỆNH T LƢU I THIỂU TRONG BỆNH B CH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO B Ở TRẺ EM BẰNG KỸ THUẬT FLOW CYTOMETRY (8 MÀU) VÀ Ig/TCR Ở BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUY T HỌC TỪ H G 01/2017 N THÁNG 07/2020 CHUYÊN NGÀNH: HUY T HỌC - TRUYỀN MÁU MÃ S : NT 62 72 25 01 Ă LUẬ Ĩ I TRÚ GƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS PHAN THỊ XINH H H H H H I H– Ă 2020 LỜI A A Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Người làm nghiên cứu Nguyễn Thị Tuyết Nhung M CL C DANH M C CHỮ VI T TẮT DANH M C B NG DANH M C BIỂU DANH M C Ơ DANH M C HÌNH ẶT VẤ Ề HƢƠ G G UA I LIỆU 1.1 B CH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO .4 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Yếu tố nguy .4 1.1.4 Đặc điểm lâm sàng BCCDL trẻ em 1.1.5 Đặc điểm sinh học .6 1.1.6 Chẩn đoán 11 1.1.7 Tiên lượng 11 1.1.8 Điều trị 13 1.1.9 Bệnh tồn lưu tối thiểu 17 12 HƢƠ G H H GI LƢU BÀO ÁC TÍNH 18 1.2.1 Kỹ thuật tế bào dịng chảy 19 1.2.2 Kỹ thuật PCR xác định tổ hợp gen bất thường 23 1.2.3 RQ-PCR TSX gen Ig/TCR 24 1.3 SỰ TSX GEN Ig/TCR 27 1.3.1 Sự TSX Immunoglobulin .27 1.3.2 T-cell receptor 32 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU R G ƢỚC VỀ KH O SÁT BTLTT BỆNH B CH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO BẰNG KỸ THUẬT TSX Ig/TCR VÀ KỸ THUẬT TBDC 35 HƢƠ G I Ƣ G HƢƠ G H GHI ỨU 37 2.1 THI T K NGHIÊN CỨU .37 2.2 THỜI GIA ỊA IỂM THỰC HIỆN NGHIÊN CỨU .37 2.2.1 Thời gian .37 2.2.2 Địa điểm 37 23 I Ƣ NG NGHIÊN CỨU 37 2.3.1 D n số mục tiêu 37 2.3.2 Dân số nghiên cứu 37 2.3.3 Phương pháp chọn mẫu 37 2.3.4 Cỡ mẫu nghiên cứu .38 24 HƢƠ G H GHI ỨU 39 2.4.1 Các c tiến h nh nghiên cứu 39 2.4.2 Lưu đồ nghiên cứu 39 2.4.3 Chẩn đoán xác định 40 2.4.4 Ph n nhóm nguy 40 2.4.5 Phác đồ điều trị 40 2.4.6 Tình trạng tại, OS, EFS RFS 40 2.4.7 Mẫu, hóa chất, thiết bị dụng cụ kỹ thuật TSX gen Ig/TCR 41 2.4.8 Phương pháp tiến hành kỹ thuật TSX gen Ig/TCR .44 2.4.9 Mẫu, hóa chất, thiết bị dụng cụ kỹ thuật TBDC (8 màu) .50 2.4.10 Phương pháp tiến hành kỹ thuật TBDC (8 màu) 51 25 HƢƠ G H HU HẬP VÀ XỬ LÝ S LIỆU 54 2.5.1 Phương pháp thu thập số liệu .54 2.5.2 Công cụ thu thập số liệu .55 2.5.3 Định nghĩa iến số nghiên cứu 55 2.5.4 Phương pháp xử lí số liệu 59 2.5.5 Kiểm sốt sai lệch thơng tin 60 Ề ỨC .60 HƢƠ G T QU NGHIÊN CỨU 61 2.6 VẤ 31 Ặ IỂM CHUNG CỦA DÂN S NGHIÊN CỨU 61 3.1.1 Đặc điểm chung dịch tễ, lâm sàng 61 3.1.2 Đặc điểm chung sinh học .63 3.2 X Ị H IỂU X Ig/TCR IỂU HIỆ H H GI BTLTT TRÊN BN BCCDL B 65 3.2.1 Xác định kiểu TSX gen Ig/TCR biểu mạnh BN BCCDL B 65 3.2.2 Xác định BTLTT BN BCCDL B kỹ thuật TSX gen Ig/TCR 70 33 X ỊNH BTLTT BẰNG KỸ THUẬT TBDC (8 MÀU) 75 3.3.1 Chiến lược phát kiểu hình LAIPs: 75 3.3.2 Đánh giá BTLTT ằng kỹ thuật TBDC (8 màu) 78 3.4 M I ƢƠ G UAN BTLTT GIỮA KỸ THUẬT TBDC (8 MÀU) VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ 80 3.4.1 Đánh giá kết BTLTT kỹ thuật TSX gen Ig/TCR kỹ thuật TBDC (8 màu) .80 3.4.2 Đánh giá kết BTLTT BN BCCDL B trẻ em kỹ thuật RQPCR tổ hợp gen TBDC (8 màu) .81 3.4.3 Đánh giá kết BTLTT BN BCCDL B trẻ em kỹ thuật RQPCR tổ hợp gen TSX Ig/TCR 83 35 H GI IỀU TRỊ H Ỉ LỆ LUI BỆNH, TỈ LỆ TÁI PHÁT CỦA BN BCCDL B FRALLE 2000 RƢỚ HI GIAI N DUY TRÌ 84 3.5.1 Đặc điểm tỉ lệ sống 84 3.5.2 Đánh giá tỉ lệ lui bệnh tỉ lệ tái phát bệnh nh n BCCDL B điều trị phác đồ FRALLE 2000 trư c v o giai đoạn trì .89 HƢƠ G 41 Ặ LUẬN .90 IỂM CHUNG CỦA DÂN S NGHIÊN CỨU 90 4.1.1 Đặc điểm chung dịch tễ, lâm sàng BN BCCDLB trẻ em 90 4.1.2 Đặc điểm chung sinh học BN BCCDL B trẻ em 91 4.2 XÁ Ị H IỂU X Ig/TCR IỂU HIỆ H H GI BTLTT TRÊN BN BCCDL B 93 4.2.1 Xác định kiểu TSX gen Ig/TCR biểu mạnh BN BCCDL B 93 4.2.2 Xác định BTLTT BN BCCDL B kỹ thuật TSX gen Ig/TCR 96 43 X ỊNH BTLTT BẰNG KỸ THUẬT TBDC (8 MÀU) 98 4.3.1 Chiến lược phát kiểu hình LAIPs 98 4.3.2 Đánh giá BTLTT ằng kỹ thuật TBDC (8 màu) 99 4.4 M I ƢƠ G UA L T GIỮA KỸ THUẬT TBDC (8 MÀU) VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ 100 4.4.1 Đánh giá kết BTLTT kỹ thuật TSX Ig/TCR kỹ thuật TBDC (8 màu) 100 4.4.2 Đánh giá kết BTLTT kỹ thuật RQ-PCR tổ hợp gen TBDC (8 màu) 101 4.4.3 Đánh giá kết BTLTT kỹ thuật RQ-PCR tổ hợp gen TSX gen Ig/TCR 102 45 H GI IỀU TRỊ H Ỉ LỆ LUI BỆNH, TỈ LỆ TÁI PHÁT CỦA BN BCCDL B FRALLE 2000 RƢỚ HI GIAI N DUY TRÌ 103 4.5.1 Đặc điểm tỉ lệ sống 103 4.5.2 Đánh giá tỉ lệ lui bệnh tái phát BN BCCDL B điều trị phác đồ FRALLE 2000 trư c v o giai đoạn trì 105 4.6 H N CH CỦA Ề TÀI .106 K T LUẬN 107 KI N NGHỊ 108 TÀI LIỆU THAM KH O PH L C i DANH M C CHỮ VI T TẮT TI NG VIỆT BCC Bạch cầu cấp BCCDL Bạch cầu cấp dòng Lympho BCCDT Bạch cầu cấp dòng tủy BN Bệnh nhân BTLTT Bệnh tồn lưu tối thiểu BV Bệnh viện CS Cộng NBT Người bình thường NST Nhiễm sắc thể TBDC Tế bào dòng chảy TKTU Thần kinh trung ương TLTBAT Tồn lưu tế bào ác tính TSX Tái xếp TI NG ANH ABL Abelson (danh từ riêng) ASO Allele-specific oligonucleotide (danh từ riêng) BCR-ABL1 Breakpoint cluster region - Abelson (danh từ riêng) ii CD Cluster of differentiation/ dấu ấn miễn dịch CNS Central nervous system/ hệ thần kinh trung ương CR Complete remission/ Lui bệnh hoàn toàn CRLF Cytokine receptor ligand factor (danh từ riêng) CSF1R Colony stimulating factor receptor (danh từ riêng) CT Threshold cycle/ chu kỳ ngưỡng DNA Deoxyribonucleic acid (danh từ riêng) DUX (ERG) Double homeobox, (danh từ riêng) EGIL European Group for the Immunological characterization (danh từ riêng) EPOR Erythropoietin receptor/ thụ thể Erythropoietin ETV6 - RUNX1 ETS variant transcription factor - Runt-related transcription factor (danh từ riêng) FC Flow cytometry/ tế bào dòng chảy FISH Fluorescent In Situ Hybridization/ Lai chỗ phát huỳnh quang Ig/TCR Immunoglobulin T-cell receptor (danh từ riêng) IKZF1 IKAROS family zinc finger (danh từ riêng) iAMP21 Intrachromosomal amplification of chromosome 21 JAK2 Janus kinase (danh từ riêng) LAIPs Leukemia-associated immunophenotypes / Kiểu hình liên quan đến bệnh bạch cầu LDH Lactate dehydrogenase (danh từ riêng) 47 Kruse A., Abdel-Azim N., Kim H N., Ruan Y., Phan V., et al (2020), "Minimal Residual Disease Detection in Acute Lymphoblastic Leukemia" Int J Mol Sci, 21 (3) 48 Larson Richard A (2016), "Acute Lymphoblastic Leukemia", In: Williams Hematology, 9e pp 1505-09 49 Locatelli Franco, Schrappe Martin, Bernardo Maria Ester, Rutella Sergio (2012), "How I treat relapsed childhood acute lymphoblastic leukemia" Blood, 120 (14), pp 2807-2816 50 Lovisa F., Zecca M., Rossi B., Campeggio M., Magrin E., et al (2018), "Pre- and post-transplant minimal residual disease predicts relapse occurrence in children with acute lymphoblastic leukaemia" Br J Haematol, 180 (5), pp 680-693 51 Malard F., Mohty M (2020), "Acute lymphoblastic leukaemia" Lancet, 395 (10230), pp 1146-1162 52 Moorman A V., Enshaei A., Schwab C., Wade R., Chilton L., et al (2014), "A novel integrated cytogenetic and genomic classification refines risk stratification in pediatric acute lymphoblastic leukemia" Blood, 124 (9), pp 1434-44 53 O'Connor D., Enshaei A., Bartram J., Hancock J., Harrison C J., et al (2018), "Genotype-Specific Minimal Residual Disease Interpretation Improves Stratification in Pediatric Acute Lymphoblastic Leukemia" J Clin Oncol, 36 (1), pp 34-43 54 Owaidah T M., Rawas F I., Al Khayatt M F., Elkum N B (2008), "Expression of CD66c and CD25 in acute lymphoblastic leukemia as a predictor of the presence of BCR/ABL rearrangement" Hematol Oncol Stem Cell Ther, (1), pp 34-7 55 Patel B., Rai L., Buck G., Richards S M., Mortuza Y., et al (2010), "Minimal residual disease is a significant predictor of treatment failure in non Tlineage adult acute lymphoblastic leukaemia: final results of the international trial UKALL XII/ECOG2993" Br J Haematol, 148 (1), pp 80-9 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 56 Patrick Brown Hiroto Inaba, Colleen Annesley, et al The NCCN Guideline Version 2.2020 Pediatric Acute Lymphoblastic Leukemia 2020 57 Pieters Rob, Groot-Kruseman Hester de, Velden Vincent Van der, Fiocco Marta, Berg Henk van den, et al (2016), "Successful Therapy Reduction and Intensification for Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia Based on Minimal Residual Disease Monitoring: Study ALL10 From the Dutch Childhood Oncology Group" Journal of Clinical Oncology, 34 (22), pp 2591-2601 58 Redwaan Shabaan, Abdelraheem Hesham, Eldin Taghreed, Badrawy Hosny, Nagiub Abdelsalam Eman (2016), "Real-time quantitative polymerase chain reaction detection of minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia: a single-center experience" Journal of Current Medical Research and Practice, (3), pp 31-37 59 Ribera J M., Ribera J., Genescà E (2014), "Treatment of adolescent and young adults with acute lymphoblastic leukemia" Mediterr J Hematol Infect Dis, (1), pp e2014052 60 Rocha J M., Xavier S G., de Lima Souza M E., Assumpỗóo J G., Murao M., et al (2016), "Current Strategies for the Detection of Minimal Residual Disease in Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia" Mediterr J Hematol Infect Dis, (1), pp e2016024 61 Schrappe M., Valsecchi M G., Bartram C R., Schrauder A., Panzer- Grümayer R., et al (2011), "Late MRD response determines relapse risk overall and in subsets of childhood T-cell ALL: results of the AIEOP-BFM-ALL 2000 study" Blood, 118 (8), pp 2077-84 62 Short Nicholas J., Jabbour Elias (2017), "Minimal Residual Disease in Acute Lymphoblastic Leukemia: How to Recognize and Treat It" Current Oncology Reports, 19 (1), pp 63 Stanulla M., Dagdan E., Zaliova M., Möricke A., Palmi C., et al (2018), "IKZF1(plus) Defines a New Minimal Residual Disease-Dependent Very-Poor Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Prognostic Profile in Pediatric B-Cell Precursor Acute Lymphoblastic Leukemia" J Clin Oncol, 36 (12), pp 1240-1249 64 Szczepański T., Willemse M J., Brinkhof B., van Wering E R., van der Burg M., et al (2002), "Comparative analysis of Ig and TCR gene rearrangements at diagnosis and at relapse of childhood precursor-B-ALL provides improved strategies for selection of stable PCR targets for monitoring of minimal residual disease" Blood, 99 (7), pp 2315-23 65 Tembhare P R., Subramanian Pg P G., Ghogale S., Chatterjee G., Patkar N V., et al (2020), "A High-Sensitivity 10-Color Flow Cytometric Minimal Residual Disease Assay in B-Lymphoblastic Leukemia/Lymphoma Can Easily Achieve the Sensitivity of 2-in-10(6) and Is Superior to Standard Minimal Residual Disease Assay: A Study of 622 Patients" Cytometry B Clin Cytom, 98 (1), pp 57-67 66 Theunissen P., Mejstrikova E., Sedek L., van der Sluijs-Gelling A J., Gaipa G., et al (2017), "Standardized flow cytometry for highly sensitive MRD measurements in B-cell acute lymphoblastic leukemia" Blood, 129 (3), pp 347357 67 Thörn I., Forestier E., Botling J., Thuresson B., Wasslavik C., et al (2011), "Minimal residual disease assessment in childhood acute lymphoblastic leukaemia: a Swedish multi-centre study comparing real-time polymerase chain reaction and multicolour flow cytometry" Br J Haematol, 152 (6), pp 743-53 68 Thörn I., Forestier E., Thuresson B., Wasslavik C., Malec M., et al (2010), "Applicability of IG/TCR gene rearrangements as targets for minimal residual disease assessment in a population-based cohort of Swedish childhood acute lymphoblastic leukaemia diagnosed 2002-2006" Eur J Haematol, 84 (2), pp 11727 69 Thörn I., Botling J., Hermansson M., Lönnerholm G., Sundström C., et al (2009), "Monitoring minimal residual disease with flow cytometry, antigen-receptor Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn gene rearrangements and fusion transcript quantification in Philadelphia-positive childhood acute lymphoblastic leukemia" Leuk Res, 33 (8), pp 1047-54 70 van der Velden V H., Szczepanski T., Wijkhuijs J M., Hart P G., Hoogeveen P G., et al (2003), "Age-related patterns of immunoglobulin and T-cell receptor gene rearrangements in precursor-B-ALL: implications for detection of minimal residual disease" Leukemia, 17 (9), pp 1834-44 71 van der Velden V H., Hochhaus A., Cazzaniga G., Szczepanski T., Gabert J., et al (2003), "Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real-time quantitative PCR: principles, approaches, and laboratory aspects" Leukemia, 17 (6), pp 1013-34 72 van Dongen J J., van der Velden V H., Brüggemann M., Orfao A (2015), "Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies" Blood, 125 (26), pp 3996-4009 73 van Dongen J J M., Lhermitte L., Böttcher S., Almeida J., van der Velden V H J., et al (2012), "EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes" Leukemia, 26 (9), pp 1908-1975 74 Vora A., Goulden N., Wade R., Mitchell C., Hancock J., et al (2013), "Treatment reduction for children and young adults with low-risk acute lymphoblastic leukaemia defined by minimal residual disease (UKALL 2003): a randomised controlled trial" Lancet Oncol, 14 (3), pp 199-209 75 Vrooman L M., Blonquist T M., Harris M H., Stevenson K E., Place A E., et al (2018), "Refining risk classification in childhood B acute lymphoblastic leukemia: results of DFCI ALL Consortium Protocol 05-001" Blood Adv, (12), pp 1449-1458 76 Weng X Q., Shen Y., Sheng Y., Chen B., Wang J H., et al (2013), "Prognostic significance of monitoring leukemia-associated immunophenotypes by Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn eight-color flow cytometry in adult B-acute lymphoblastic leukemia" Blood Cancer J, (8), pp e133 77 Yeoh Allen Eng Juh, Ariffin Hany, Chai Elaine Li Leng, Kwok Cecilia Sze Nga, Chan Yiong Huak, et al (2012), "Minimal Residual Disease–Guided Treatment Deintensification for Children With Acute Lymphoblastic Leukemia: Results From the Malaysia-Singapore Acute Lymphoblastic Leukemia 2003 Study" Journal of Clinical Oncology, 30 (19), pp 2384-2392 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PH L C Các cặp mồi sử dụng phản ứng PCR khảo sát 14 kiểu TSX gen TCR kích thước sản phẩm tương ứng Gen TCRD TCRG ích thƣớc sản phẩm PCR (bp) Mồi xi Mồi ngƣợc Vd2-5’ Dd2-3’ 182 Vd2-5’ Dd3-3’ 340 Vd1-5’ Jd1-3’ 452 Vd2-5’ Jd1-3’ 443 Vd3-5’ Jd1-3’ 440 VgI-5’ Jg1.1/2.1-3’ 329 VgII-5’ Jg1.1/2.1-3’ 318 VgIII-5’ Jg1.1/2.1-3’ 318 VgIV-5’ Jg1.1/2.1-3’ 354 VgI-5’ Jg1.3/2.3-3’ 533 VgII-5’ Jg1.3/2.3-3’ 522 VgIII-5’ Jg1.3/2.3-3’ 522 VgIV-5’ Jg1.3/2.3-3’ 558 VgII-5’ Jg1.2-3’ 326 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PH L C Các cặp mồi sử dụng phản ứng PCR khảo sát 25 kiểu TSX gen Ig kích thước sản phẩm tương ứng Gen IgH ích thƣớc sản phẩm PCR (bp) Mồi xuôi Mồi ngƣợc Vh1-5’FR1 Jh-3’ 309 Vh2-5’FR1 Jh-3’ 341 Vh3-5’FR1 Jh-3’ 313 Vh4-5’FR1 Jh-3’ 313 Vh5-5’FR1 Jh-3’ 312 Vh6-5’FR1 Jh-3’ 321 Vh1-5’FR2 Jh-3’ 249 Vh2-5’FR2 Jh-3’ 247 Vh3-5’FR2 Jh-3’ 246 Vh4-5’FR2 Jh-3’ 245 Vh5-5’FR2 Jh-3’ 247 Vh6-5’FR2 Jh-3’ 251 Vh7-5’FR2 Jh-3’ 247 Vh1-5’FR3 Jh-3’ 112 Vh2-5’FR3 Jh-3’ 111 Vh3-5’FR3 Jh-3’ 114 Vh4-5’FR3 Jh-3’ 105 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn IgK Vh5-5’FR3 Jh-3’ 126 Vh6-5’FR3 Jh-3’ 120 Vh7-5’FR3 Jh-3’ 126 VkI-5’ Kde-3’ 433 VkII-5’ Kde-3’ 443 VkIII-5’ Kde-3’ 429 VkIV-5’ Kde-3’ 445 Intron-5’ Kde-3’ 511 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PH L C Danh sách probe dùng đánh giá BTLTT BN STT TÊN PRIMER, PROBE TRÌNH TỰ 5' > 3' ALL.01_Vd2-Dd3 5'FAM-GGTCTTACTACTGTGCCTGTCCCCA-TAMRA3' ALL.02_Vd2-Dd3 5'FAM-TGAAGGGTCTTACTACTGTGCCTGT-TAMRA3' ALL.03_Vd2-Dd3 5'FAM-GAAGGGTCTTACTACTGTGCAAACT-TAMRA3' ALL.09_Vd2-Dd3 5'FAM-ACTGTGCCTGTGACACGGGGGGTCT-TAMRA3' ALL.12_Vd2-Dd3 5'FAM-CTTACTACTGTGCCTGTGACCCGTA-TAMRA3' ALL.14_Vd2-Dd3 5'FAM-GAGAGAGATGAAGGGTCTTACTACT-TAMRA3' ALL.17_Vd2-Dd3 5'FAM-TGAAGGGTCTTACTACTGTGCCTGT-TAMRA3' ALL.18_Vd2-Dd3 5'FAM-GTCTTACTACTGTGTCTGGGGGATA-TAMRA3' ALL.20_Vd2-Dd3 5'FAM-AGAGATGAAGGGTCTTCCTATGGGA-TAMRA3' 10 ALL.22_Vd2-Dd3 5'FAM-GGGTCTTACTACTGTGCCTGTGACA-TAMRA3' 11 ALL.23_Vd2-Dd3 5'FAM-ACTACTGTGCCTGTGACACCGGGGT-TAMRA3' 12 ALL.26_Vd2-Dd3 5'FAM-CCCACAGTGCTACAAAACCTACAGA-TAMRA3' 13 ALL.27_Vd2-Dd3 5'FAM-CTACTGTGCCTGTGACACCGGTACT-TAMRA3' 14 ALL.29_Vd2-Dd3 5'FAM-CTTACTACTGTGCCTGTGTCACGGT-TAMRA3' 15 ALL.30_Vd2-Dd3 5'FAM-CTACTGTGCCTGTGACCCCTGTACT-TAMRA3' 16 ALL.32_Vd2-Dd3 5'FAM-CTTACTACTGTGCCTGTGACACGAT-TAMRA3' 17 ALL.33_Vd2-Dd3 5'FAM-TCTTACTACTGTGCCTGCCGAGGT-TAMRA3' 18 ALL.34_Vd2-Dd3 5'FAM-TTACTACTGTGCCTGTGACACCGG-TAMRA3' 19 ALL.36_Vd2-Dd3 5'FAM-TACTGTGCCTGTGACCCCGAGTACT-TAMRA3' 20 ALL.37_Vd2-Dd3 5'FAM-TTACTACTGTGCCTGTGACACCCT-TAMRA3' Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 21 ALL.39_Vd2-Dd3 5'FAM-CGCACAGTGCTACAAAACCTACAGA-TAMRA3' 22 ALL.40_Vd2-Dd3 5'FAM-CTACTGTGCCTGTGACAGCCTCTCT-TAMRA3' 23 ALL.42_Vd2-Dd3 5'FAM-CTTACTACTGTGCCTGTGACACGAT-TAMRA3' 24 ALL.44_Vd2-Dd3 5'FAM-TTACTACTGTGCCTGTGACACCGG-TAMRA3' 25 ALL.45_Vd2-Dd3 5'FAM-CCATCAGAGAGAGATGAAGGGTCTT-TAMRA3' 26 ALL.46_Vd2-Dd3 5'FAM-CCACAGTGCTACAAAACCTACAGA-TAMRA3' 27 ALL.48_Vd2-Dd3 5'FAM-TGAAGGGTCTTACTACTGTGCCTCT-TAMRA3' 28 ALL.51_Vd2-Dd3 5'FAM-TCTTACTACTGTGCCTGCCGAGGT-TAMRA3' 29 ALL.02_Vk1-Kde 5'FAM-CTTACAATGCCCCTCCGTTGCTAGT-TAMRA3' 30 ALL.39_Vk1-Kde 5'FAM-ATCAGCTGCCTGCAGTCTGAAGATT-TAMRA3' 31 ALL.20_Vk1-Kde 5'FAM-ACTGTCTACAGCATAATAGTCTCCT-TAMRA3' 32 ALL.26_Vk1-Kde 5'FAM-CTACTGTCAACAGAGTTACAGTACC-TAMRA3' 33 ALL.04_Vk2-Kde 5'FAM-TGCATGCAAGGTACACACTGGCCT-TAMRA3' 34 ALL.05_Vk2-Kde 5'FAM-TTACTGCATGCAAGGTACACACTGG-TAMRA3' 35 ALL.38_Vk2-Kde 5'FAM-ACTGCATGCAAGCTCTACAAAGTCC-TAMRA3' 36 ALL.25_Vk3-Kde 5'FAM-CTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCT-TAMRA3' 37 ALL.43_Vk3-Kde 5'FAM-TACTTGTCAGCAGTATGGTACCCCA-TAMRA3' 38 ALL.44_Vk3-Kde 5'FAM-GGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTAC-TAMRA3' 39 ALL.47_Vk3-Kde 5'FAM-TATTACTGTCAGCAGTATAATAACT-TAMRA3' 40 ALL.50_Vk3-Kde 5'FAM-GTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCA-TAMRA3' 41 ALL.21_Vk4-Kde 5'FAM-TGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTA-TAMRA3' 42 ALL.42_Vk4-Kde 5'FAM-TCAGCAGCCTACAGCCTGAAGATGT-TAMRA3' 43 ALL.06_Intro-Kde 5'FAM-CGATTAATGCTGCCGTAGCCAGCTT-TAMRA3' 44 ALL.13_Intro-Kde 5'FAM-GATTGATGCTGCCGTAGCCAGCTTT-TAMRA3' Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 45 ALL.08_Intro-Kde 5'FAM-CGATTAATGCTGCCGTAGCCAGAAT-TAMRA3' 46 ALL.15_Intro-Kde 5'FAM-GTAGCCAGCTTTCCTGATCTGGA-TAMRA3' 47 ALL.25_Intro-Kde 5'FAM-GATTGATGCTGCCGTAGCCAGTAAT-TAMRA3' 48 ALL.31_Intro-Kde 5'FAM-CATTGATCCTGCCGTAGCCAGCTAT-TAMRA3' 49 ALL.35_Intro-Kde 5'FAM-GAATGATGCTGCCGTAGCCACCTAT-TAMRA3' 50 ALL.48_Intro-Kde 5'FAM-GATTCATGCTGCCGTAGCCAGCTAT-TAMRA3' 51 ALL.50_Intro-Kde 5'FAM-CGATTAATGCTGCCGTAGCCAGCTT-TAMRA3' 52 ALL.21_Vg1-Jg1323 5'FAM-GGGTCTATTACTGTGCCACCTGGGA-TAMRA3' 53 ALL.01-Probe2 5'FAM-CAGAGAGAGATGAAGGGTCTTACTA-TAMRA3' 54 ALL.08_Probe2 5'FAM-AGCCAGCTTTCCTGAGGGACTA-TAMRA3' 55 ALL.23_Probe2 5'FAM-TACTACTGTGCCTGTGACGAGGA-TAMRA3' 56 ALL.32_Probe2 5'FAM-CTACTGTGCCTGTGACACCGCTATT-TAMRA3' 57 ALL.34_Probe2 5'FAM-ACTGTGCCTGTGACACAGGATAGCT-TAMRA3' Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PH L C Kết BTLTT kỹ thuật TSX gen Ig/TCR RQ-PCR tổ hợp gen sau giai đoạn công MÃ STT NGHIÊN CỨU RQ-PCR TSX Ig/TCR rƣớc điều trị Sau công RQ-PCR tổ hợp gen rƣớc điều trị Sau công TEL/AML1(+) TEL/AML1 (-) BCR/ABL type BCR/ABL type e1a2 (+) e1a2: 0,0889% TEL/AML1 (+) TEL/AML1 (-) E2A/PBX1 (+) E2A/PBX1 (-) TEL/AML1 (+) TEL/AML1: 0,07% Vk1/Kde: 72,2% 0% Vd2/Dd3: 73,6% 0,005% ALL.04 Vk2/Kde: 75% 0,1% ALL.13 Intron/Kde:100% 0,004% ALL.20 Vk1/Kde: 80% 0,009% Vd2/Dd3: 72% 0,007% ALL.21 Vk4/Kde: 97% 0% Vg1-Jg1.3/2.3:89% 0,02% ALL.22 Vd2/Dd3: 85,2% 0,001% TEL/AML1 (+) TEL/AML1 (-) ALL.36 Vd2/Dd3: 90% 0,17% TEL/AML1 (+) TEL/AML1: 0,29% ALL.38 Vk2/Kde: 85% 0,94% TEL/AML1 (+) TEL/AML1:0,445% ALL.40 Vd2/Dd3: 51% 0,006% E2A/PBX1 (+) E2A/PBX1 (-) 10 ALL.41 Vd2/Dd3: 95,7% 0,14% BCR/ABL type BCR/ABL type e1a2 (+) e1a2 :0,11973% 11 ALL.47 Vd2/Dd3: 52% 0,002% E2A/PBX1 (+) E2A/PBX1 (-) 12 ALL.48 Intron/Kde: 58% 0,001% Vd2/Dd3: 97% 0,001% TEL/AML1 (+) TEL/AML1 (-) 13 ALL.50 Intron/Kde: 67% 0,00013% TEL/AML1 (+) TEL/AML1 (-) 14 ALL.51 Vd2/Dd3: 75% 0,26% BCR/ABL type BCR/ABL type b2a2 (+) b2a2: 0,3459% ALL.02 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PH L C ịnh nghĩa nhóm Nhóm A Nhóm B Nhóm T - BCCDL B chẩn đoán, đặc điểm nguy chuẩn theo tiêu chuẩn NCI - Tuổi lúc chẩn đoán > tuổi < 10 tuổi - Số lượng bạch cầu lúc chẩn đoán < 50 000/mm3 - BCCDL B chẩn đoán tiêu chuẩn: + Tuổi lúc chẩn đốn ≥ 10 tuổi + Bệnh lí thần kinh trung ương đơn lúc chẩn đoán + Số lượng bạch cầu lúc chẩn đoán ≥ 50 000/mm3 + Có t(9;22); t(4;11) thiểu bội ≤ 44 NST + Có BCR/ABL MLL/AF4 + Có TSX gen MLL phát phương pháp Southern Blot FISH - BCCDL T chẩn đoán - Tuổi lúc chẩn đốn > tuổi ịnh nghĩa dƣới nhóm A A1 A2 A3 B B1 B2 T T1 T2 - Tế bào non tủy xương N21 ≤ 5% - BTLTT N35 < 10-2 - Tế bào non tủy xương N21 ≥ 6% ≤ 25% - BTLTT N35 < 10-2 - Tế bào non tủy xương N21 > 5% BTLTT N35 ≥ 10-2 - Khơng có thiểu bội ≤ 44 NST; t(4;11); t(9;22) - Khơng có gen MLL/AF4 BCR/ABL - Nhạy corticoid N8 - Tế bào non tủy xương N21 ≤ 5% - BTLTT N35 < 10-2 Khác - Nhạy corticoid N8 - Tế bào non tủy xương N21 ≤ 5% - BTLTT N35 < 10-2 Khác Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PH L C PHI U THU THẬP S LIỆU Mã nghiên cứu: ALL I Hành chánh Năm sinh: Họ tên (viết tắt tên): Giới: Nam  Nữ  Dân tộc: Số nhập viện: Ngày nhập viện: Cân nặng: kg; Chiều cao: cm BMI: 10 Ngày bắt đầu điều trị hóa trị liệu: 11 Địa (Thành phố/Tỉnh): II Lâm sàng cận lâm sàng 12 Tỷ lệ tế bào non tủy đồ: % 13 Sốt: Có  Khơng  14 Thiếu máu: Có  Khơng  (Nồng độ Hb: g/dL) 15 Xuất huyết: Có  Khơng  16 Gan lách hạch to: Có  Khơng  17 Xâm lấn thần kinh trung ương trước điều trị: Có  Khơng  18 Phân loại nhóm BCCDL B theo DAMD: 19 Số lượng kiểu hình LAIP: 20 Nhóm chiến lược đánh giá LAIP: 21 Kiểu hình LAIP coexpress: Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 22 Kiểu hình overexpress: 23 Tỷ lệ kiểu hình LAIP lúc chẩn đốn: 24 Tổ hợp gen đặc hiệu: E2A/PBX1 MLL/AF4 TEL/AML1 BCR/ABL Không  25 Kiểu tái xếp gen Ig/TCR: 26 Phân nhóm nguy cơ: A1  A2  A3  B1  B2  27 Tỷ lệ MRD (tổ hợp gen) lần 1: 28 Tỷ lệ MRD (Ig/TCR) lần 1: 29 Tỷ lệ MRD (DAMD) lần 1: 30 Kiểu hình MRD+ (DAMD) lần 1: 31 Tỷ lệ MRD (tổ hợp gen) lần 2: 32 Tỷ lệ MRD (Ig/TCR) lần 2: 33 Tỷ lệ MRD (DAMD) lần 2: 34 Kiểu hình MRD+ (DAMD) lần 2: 35 Tỷ lệ MRD (tổ hợp gen) lần 3: 36 Tỷ lệ MRD (Ig/TCR) lần 3: 37 Tỷ lệ MRD (DAMD) lần 3: 38 Kiểu hình MRD+ (DAMD) lần 3: 39 Thời điểm tái phát: 40 Vị trí tái phát: Tủy  TKTU  Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tinh hoàn  Khác 