Nghiên cứu ứng dụng các hạt nano phát quang vào việc đánh dấu tế bào để xác định số lượng vi khuẩn gây độc trong thực phẩm

BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI ĐỘC LẬP CẤP NHÀ NƯỚC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG CÁC HẠT NANO PHÁT QUANG VÀO VIỆC ĐÁNH DẤU TẾ BÀO ĐỂ XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG VI KHUẨN GÂY ĐỘC TRONG THỰC PHẨM MÃ SỐ ĐỀ TÀI: 14ĐTĐL2009.T/29 Cơ quan chủ trì đề tài/dự án: Viện Công nghệ sinh học Chủ nhiệm đề tài: PGS. TS. Tống Kim Thuần 9008 Hà Nội - 2011 BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI ĐỘC LẬP CẤP NHÀ NƯỚC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG CÁC HẠT NANO PHÁT QUANG VÀO VIỆC ĐÁNH DẤU TẾ BÀO ĐỂ XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG VI KHUẨN GÂY ĐỘC TRONG THỰC PHẨM MÃ SỐ ĐỀ TÀI: 14ĐTĐL2009.T/29 Chủ nhiệm đề tài/dự án: Cơ quan chủ trì đề tài/dự án: (ký tên) (ký tên và đóng dấu) PGS. TS. Tống Kim Thuần Ban chủ nhiệm chương trình Bộ Khoa học và Công nghệ (ký tên) (ký tên và đóng dấu khi gửi lưu trữ) Hà Nội – 2011 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT BSA Bovine serum albumin CFU Colony forming unit - Đơn vị hình thành khuẩn lạc ĐC Đối chứng DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium E. coli Escherichia coli E. coli O157:H7 Escherichia coli serotype O157:H7 EDAC 1 - ethyl - 3 - (3- dimethylaminopropyl) carbodimide hydrochloride EDC 1 - ethyl - 3 - (3- dimethylaminopropyl) carbodimide hydrochloride ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay FITC Fluorescein isothiocyanate HAT Hypoxanthine-aminopterin-thymidine HQ Huỳnh quang IPTG Isopropylthio-β-D-galactoside KHV HQ Kính hiển vi huỳnh quang KHV QH Kính hiển vi quang học KHVĐT Kính hiển vi đồng tiêu KL Khuẩn lạc KN Kháng nguyên KT Kháng thể KTĐD Kháng thể đơn dòng LB broth Môi trường canh thang Luria - Bertani MDHQ Miễn dịch huỳnh quang MES 2- ( N- morpholino) ethanesulfonic acid monohydrate ml Millilite MPN Most probable number nm Nanomete NP s Hạt nano silica phát quang OD Optical density - Mật độ quang OMP Outer Membrane Protein PBS Phosphate buffered saline PCR Polymerase Chain Reaction - Phản ứng chuỗi trùng hợp PEG Polyethylene glycol PQ Phát quang QD s Chấm lượng tử Quantum dots RhB hoặc RB Tâm màu hữu cơ Rhodamine B. Phát quang màu đỏ, cam. RuBpy Tâm màu hữu cơ RuBpy. Phát quang màu đỏ S. typhimurium Salmonella typhimurium SEM Scanning Electron Microscope - Kính hiển vi điện tử quét SMAC Macconkey sorbitol agar – Môi trường thạch Macconkey sorbitol Stx Shiga toxin – Độc tố shiga TB Tế bào TBL Tế bào lai TEM Transmission electron microscopy - Kính hiển vi điện tử truyền qua TN Thí nghiệm VK Vi khuẩn VN Việt Nam WB WESTERN BLOT XLD Xylose lysine desoxycholate µl Microlite µm Micromete TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam ORMOSIL Organic modified silica DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 So sánh các phương pháp phát hiện E. coli 0157:H7 trong thực phẩm 9 Bảng 1.2 Một số bộ KIT thương mại dựa trên kỹ thuật phân tích kháng thể dùng trong phát hiện tác nhân gây bệnh và độc tố trong thực phẩm 11 Bảng 2.1 Phương án kiểm tra tính đặc hiệu của kháng thể kháng vi khuẩn đích 50 Bảng 2.2 Cách pha loãng các mẫu chứa vi khuẩn E. coli O157:H7 gắn kết phức hợ p để xây dựng đường chuẩn 55 Bảng 3.1 Đánh giá kết quả sử dụng hạt silica chứa tâm màu, hạt keo vàng và chấm lượng tử QD để đánh dấu vi khuẩn E. coli O157:H7 và S. typhimurium 62 Bảng 3.2 Nghiên cứu sự gắn kết của kháng thể đặc hiệu lên bề mặt hạt silica chứa các nhóm chức năng khác nhau 64 Bảng 3.3 So sánh mức độ tương đồng của gen fljB với geneBank 69 Bả ng 3.4 So sánh mức độ tương đồng của gen fliC với geneBank 69 Bảng 3.5 So sánh mức độ tương đồng của gen fljB với geneBank 75 Bảng 3.6 Kết quả tách dòng các tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng 77 Bảng 3.7 Kết quả xác định độ đặc hiệu của các dòng KTĐD với kháng nguyên H7 của vi khuẩn E. coli O157:H7 78 Bảng 3.8 Số lượng KTĐD kháng E. coli O157:H7 và S. typhimurrium sản xuất được 85 Bảng 3.9 Ứng dụ ng KTĐD sản xuất trong nước vào việc phát hiện và xác định số lượng VK đích gây bệnh bằng hạt nano silica 86 Bảng 3.10 Ảnh hưởng của lượng hoạt động bề mặt lên kích thước hạt nano ORMOSIL 91 Bảng 3.11 Ảnh hưởng của lượng amine lên kích thước và chất lượng hạt nano ORMOSIL 92 Bảng 3.12 Kết quả đo pH của các mẫu với lượng amine khác nhau 93 Bảng 3.13 Ảnh hưởng của kích th ước hạt lên độ chói của hạt ORMOSIL 101 Bảng 3.14 Tổng kết số lượng hạt nano silica sản xuất tại Việt Nam 104 Bảng 3.15 Ứng dụng hạt nano silica và kháng thể sản xuất trong nước 104 vào việc phát hiện và xác định VK đích gây bệnh thực phẩm Bảng 3.16 So sánh chất lượng phức hợp KT đặc hiệu + hạt nano silica phát quang được tạo ra từ 2 loại hạt nguyên liệu silica 104 Bảng 3.17 Đánh giá độ bền của phức hợp KT đặc hiệu + hạt silica được tạo ra từ 2 loại vật liệu silica thương phẩm và trong nước. 105 Bảng 3.18 Ảnh hưởng của chất xúc tác EDAC lên sự tạ o thành phức hợp KT + hạt nano silica thông qua số lượng vi khuẩn đích PQ 109 Bảng 3.20 Ảnh hưởng của ánh sáng, nhiệt độ và pH dung dịch đệm chất xúc tác lên khả năng tạo phức hợp KT + hạt nano silica 111 Bảng 3.22 Ảnh hưởng của điều kiện lắc lên khả năng tạo phức hợp KT + hạt silica 113 Bảng 3.23 Ảnh hưởng của thời gian ủ lên việc tạo phức hợ p KT đặc hiệu + hạt silica cho 2 loại vi khuẩn 114 Bảng 3.24 Ảnh hưởng của nhiệt độ ủ lên việc tạo thành phức hợp kháng thể đặc hiệu + hạt silica của 2 loại vi khuẩn 115 Bảng 3.25 Ảnh hưởng của tốc độ ly tâm lên khả năng thu hồi phức hợp KT đặc hiệu + hạt nano silica của 02 loại vi khuẩn đích. 116 Bảng 3.26 Ảnh hưởng của thờ i gian ly tâm lên khả năng thu hồi phức hợp kháng thể đặc hiệu + hạt nano silica 117 Bảng 3.27 Kết quả tạo phức hợp KT đặc hiệu + hạt nano silica phát quang cho 2 loại vi khuẩn đích ở các điều kiện đã lựa chọn 119 Bảng 3.28 Ảnh hưởng của nhiệt độ lên độ bền của phức hợp đặc hiệu E. coli O157: H7 sau 7 ngày bảo quản 120 Bảng 3.29 Độ bền và tỉ lệ tế bào vi khuẩn phát quang theo thời gian bảo quản phức hợp KT + hạt nano silica 121 Bảng 3.30 Bảng tổng kết số lượng 02 loại phức hợp kháng thể đặc hiệu + hạt silica cho 2 loại vi khuẩn E. coli O157:H7 và S. typhimurium sản xuất được trong 3 năm 126 Bảng 3.31 Đánh giá mức độ gắn kết của KT đặc hiệu lên bề mặt hạt nano silica thông qua t ỉ lệ % số lượng VK đích phát quang 128 Bảng 3.32 Đánh giá mức độ gắn kết của KT lên bề mặt hạt nano silica thông qua xác định hàm lượng protein trước và sau khi rửa và ly tâm phức hợp 128 Bảng 3.33 Thời gian nhận biết và liên kết với vi khuẩn đích của phức 132 hợp kháng thể đặc hiệu + hạt nano silica Bảng 3.34 Ảnh hưởng của lượng phức hợp KT + hạt silica : tế bào lên việc nhận biết và liên kết với vi khuẩn đích E. coli O157:H7 và S. typhimurium 133 Bảng 3.35 Ảnh hưởng mật độ tế bào lên khả năng nhận biết và liên kết với vi khuẩn đích của phức hợp kháng thể + hạt nano silica 134 Bảng 3.36 Kết quả ly tâm thu vi khuẩn đích đã gắn kết với phức hợp 135 Bảng 3.37 Phát hiện và xác định tỉ lệ tế bào E. coli O157:H7 phát quang trực tiếp dưới kính huỳnh quang trên 1 hiển vi trường 137 Bảng 3.38 Tỉ lệ % số lượng vi khuẩn đích trong mẫu được phát hiện và xác định bằng phương pháp đếm TB phát quang trên 1 HVT 138 Bảng 3.39 Số lượng tế bào E. coli O157:H7 và S. typhimurium gắn phức hợp trong các dịch pha loãng chuẩn 140 Bả ng 3.40 Kết quả đo cường độ huỳnh quang của các dung dịch chuẩn chứa chính xác số lượng E. coli O157:H7 gắn phức hợp kháng thể đặc hiệu + hạt nano silica 141 Bảng 3.41 Kết quả đo phổ huỳnh quang các dịch chứa chính xác số lượng vi khuẩn S. typhimurium gắn phức hợp 143 Bảng 3.42 Xác định số lượng vi khuẩn đích bằng phép đo phổ HQ 145 Bảng 3.43 Phát hiện và xác định vi khuẩn đích trong thịt bò không tăng sinh bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch đặc hiệu 151 Bảng 3.44 Phát hiện và xác định vi khuẩn đích trong thịt bò tăng sinh 6 giờ bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch đặc hiệu 152 Bảng 3.45 Xác định số lượng vi khuẩn đích trong dịch chiết thịt bò dính đất bằng phương pháp đo phổ huỳnh quang 154 Bả ng 3.46 Đánh giá hiệu lực phương pháp đo phổ huỳnh quang 160 Bảng 3.47 Phát hiện vi khuẩn đích trong thịt bò bằng ELISA và PCR 161 Bảng 3.48 Xác định gen độc tố của vi khuẩn E. coli O157:H7 và S. typhimurium trong thịt bò bằng phương pháp PCR 161 Bảng 3.49 So sánh các phương pháp xác định số lượng vi khuẩn đích E. coli O157:H7 và S. typhimurium có trong thịt bò 163 Bảng 3.50 So sánh các phương pháp phát hiện vi khuẩn đích E. coli O157:H7 và S. typhimurium có trong thịt bò 163 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình Tên hình Trang Hình 1.1a Ảnh vi khuẩn E. coli O157:H7. 7 Hình 1.1b Ảnh vi khuẩn S. typhimurium 7 Hình 1.2 Sơ đồ chế tạo hạt nano silica chứa tâm màu bằng phương pháp miclle đảo 21 Hình 1.3 Các cách gắn kết phân tử sinh học với hạt nano 22 Hình 1.4 Các cách gắn kết đồng hóa trị thông thường giữa phân tử sinh học và hạt nano 23 Hình 1.5 Mô tả cách gắn kết đặc hiệu của hạt nano silica với vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis 23 Hình 1.6 Ảnh các hạt silica với các tâm mầ u khác nhau 24 Hình 1.7a Gắn kết trực tiếp thông qua liên kết amine-carboxylic 25 Hình 1.7b Cơ chế gắn kết trực tiếp giữa nhóm amin bậc 1 và nhóm carboxyl sử dụng chất xúc tác EDAC 25 Hình 1.8 Sự gắn kết nhờ tạo cặp sulfhydryl-amine. 26 Hình 1.9 Gắn kết các nhóm carbon-hydrate bị oxy hóa trên phần Fc của kháng thể 26 Hình 1.10 Gắn kết các peptide được gắn histidine hoặc các kháng thể lên các hạt nano silica được Ni-NIA hóa 27 Hình 1.11 Gắn kết không hóa trị giữa hạt nano silica gắn streptavidin với các kháng thể được biotin hóa 27 Hình 1.12 Gắn kết không hóa trị giữa hạt nano silica gắn NHS-PEG- bion được gắn streptavidin với các kháng thể được biotin hóa 27 Hình 2.1 Cấu trúc hóa học của chất precursor và chất hoạt động bề mặt 41 Hình 2.2 Hình ảnh một số thiết bị, máy móc đã sử dụng trong Đề tài 42 Hình 2.3 Sơ đồ khối hệ đo huỳnh quang 56 Hình 3.1 Khuẩn lạc vi khuẩn trên môi trường thạch sau 24h nuôi cấy. 61 Hình 3.2 Ảnh vi khuẩn E. coli O157:H7. 63 Hình 3.3 Hình ảnh của thực khuẩn thể hình sợi M13 gắn kết với hạt silica 63 Hình 3.4 DNA tổng số của S. typhimurium 65 Hình 3.5 Gen fljB mã hóa H2 của vi khuẩn S. typhimurium 65 Hình 3.6 Gen fljC mã hóa H1 của vi khuẩn S. typhimurium 65 a Hình 3.7 Kết quả kiểm tra tách dòng gen fliC của S. typhimurium 66 Hình 3.8 Kết quả kiểm tra tách dòng gen fljB của S. typhimurium 66 Hình 3.9 Điện di đồ SDS-PAGE kiểm tra sự biểu hiện protein H1 70 Hình 3.10 Điện di đồ SDS-PAGE các phân đoạn protein sau khi tinh sạch bằng cột sắc ký ái lực gắn Ni2+ 70 Hình 3.11 Kết quả WB giữa protein H1 với kháng huyết thanh H1 71 Hình 3.12 Kết quả ELISA trên huyết thanh ở 3 chuột trước và sau khi gây đáp ứng miễn dịch 71 Hình 3.13 Hình thái tế bào sau 7 ngày dung hợp (200X) 71 Hình 3.14 Kết quả sàng lọc các dòng hydridoma có khả năng tạo kháng thể kháng H1 trên 126 giếng tế bào lai ở 15 đĩa 96 giếng. 72 Hình 3.15 Kết quả điện di SDS-PAGE KTĐD sau tinh sạch. 72 Hình 3.16 Kết quả Western blot các KTĐD với protein tái tổ hợp H1 73 Hình 3.17 Kết quả miễn dịch huỳnh quang (488 nm) trên tế bào vi khuẩn S. typhimurium với các KTĐD (100X) 73 Hình 3.18 Gen mã hóa kháng nguyên lông của E. coli O157:H7 74 Hình 3.19 Kết quả điện di SDS-PAGE kiểm tra biểu hiện gen fliC trên E. coliBL21 và phân đoạn protein sau khi tinh sạch 74 Hình 3.20 Kết quả WB giữa protein H7 của E. coli BL21/pET-H7 với kháng huyết thanh 76 Hình 3.21 Kết quả ELISA trên huyết thanh ở 3 chuột khi gây đáp ứng miễn dịch bằng kháng nguyên tái tổ hợp H7 của E. coli BL21/pET-H7 76 Hình 3.22 Dòng tế bào sau 5 ngày tách dòng 77 Hình 3.23 Hình ảnh điện di kháng nguyên E. coli O157:H7 trên gel SDS-PAGE và Western blot với Mab C3.26.IV 79 Hình 3.24 Quy trình sản xuất KTĐD đặc hiệu vi khuẩn E. coli O157:H7 80 Hình 3.25 Quy trình sản xuất KT đơn dòng của vi khuẩn S. typhimurium 83 Hình 3.26 Ánh các loại hạt nano silica ORMOSIL chế tạo tại Viện vật lý, Viện KH & CN VN với kích thước và tâm màu khác nhau 90 Hình 3.27 Ảnh SEM của hạt nano ORMOSIL được chế tạo tại Viện Vật lý. Chụp trênKHV quét SEM Hitachi-S480 90 Hình 3.28 Sơ đồ quy trình chế t ạo hạt nano ORMOSIL chứa tâm màu hữu cơ bằng phương pháp Stober 88 Hình 3.29 Ảnh SEM của các mẫu khi thay đổi lượng hoạt động bề mặt 92 Hình 3.30 Ảnh SEM của các mẫu hạt nano ORMOSIL trong dãy mẫu thay đổi lượng amine 92 Hình 3.31 Phổ tán xạ Raman của hạt nano ORMOSIL 94 Hình 3.32 Phổ hấp thụ hồng ngoại của hạt nano ORMOSIL 94 Hình 3.33 Cấu trúc hoá học bề mặt của hạt nano ORMOSIL 94 Hình 3.34 Phổ hấp thụ và huỳnh quang của hạt nano ORMOSIL chứa RB (mẫu 2SB20,kích thước ∼20nm) và của RB 95 Hình 3.35 Sự ph ụ thuộc của độ hấp thụ RB/Etanol vào nồng độ RB 95 Hình 3.36 Phổ hấp thụ và truyền qua của các mẫu dung dịch hạt nano ORMOSIL trong dãy mẫu thay đổi lượng hoạt động bề mặt 95 Hình 3.37 Phổ hấp thụ và phổ hấp thụ chuẩn hóa của các mẫu dung dịch hạt nano ORMOSIL sau khi đã trừ hấp thụ của nền 95 Hình 3.38 Phổ huỳnh quang và phổ huỳnh quang chuẩn hóa của các mẫ u dung dịch hạt nano ORMOSIL trong dãy mẫu thay đổi lượng hoạt động bề mặt (kích thích 532nm) 97 Hình 3.39 Phổ hấp thụ mẫu hạt ORMOSIL khi thay đổi lượng amine 97 Hình 3.40 Phổ huỳnh quang và phổ huỳnh quang chuẩn hóa của các mẫu hạt nano ORMOSIL trong dãy thay đổi lượng amine 98 Hình 3.41 Cường độ HQ của hạt nano ORMOSIL (màu đỏ) và RhB (xanh lá cây) phụ thuộc thời gian. 98 Hình 3.42 Biến đổi phổ của hạt nano ORMOSIL chứa tâm màu RB 100 Hình 3.43 Phổ huỳnh quang và phổ huỳnh quang chuẩ n của các mẫu dung dịch hạt nano ORMOSIL chứa RB trong dãy mẫu thay đổi lượng hoạt động bề mặt (kích thích 532nm) 100 Hình 3.44 Ảnh huỳnh quang của E. coli O157:H7 được gắn kết với hạt nano ORMOSIL chứa RhB. Kích ở 480 nm 102 Hình 3.45 Ảnh TEM của E. coli O157:H7 gắn hạt nano ORMOSIL chứa tâm màu Rhodamine B. 102 Hình 3.46 Kết quả kiểm tra khả năng tự phát quang của các chủng VK. 107 Hình 3.47 Kiểm tra tính đặc hiệu của kháng thể kháng vi khuẩn E. coli O157:H7 dướ i KHV quang học vật kính dầu x 100 108 Hình 3.48 Kiểm tra tính đặc hiệu của kháng thể kháng vi khuẩn S. typhimurium dưới KHV quang học vật kính dầu x 100 108 [...]... 3.6.2.3 Xác định số lượng vi khuẩn đích bằng thiết bị đếm tế bào tự tạo 3.6.3 Quy trình công nghệ xác định số lượng vi khuẩn gây ngộ độc trong thực phẩm E coli O157:H7 và S typhimurium bằng các hạt nano silica phát quang gắn kháng thể quy mô phòng thí nghiệm 3.6.3.1 Quy trình phát hiện xác định số lượng vi khuẩn E coli O157:H7 3.6.3.2 Quy trình phát hiện và xác định số lượng vi khuẩn S typhimurium 3.7 ỨNG. .. PTN 4 Quy trình ứng dụng hạt nano gắn kháng thể đặc hiệu để xác định số lượng vi khuẩn E.coli 0157:H7 trong các mẫu thịt bò nhiễm khuẩn tại Hà Nội - 01 quy trình ứng dụng hạt nano phát quang gắn kháng thể đặc hiệu để xác định số lượng vi khuẩn E.coli 0157:H7 trong các mẫu thịt bò nhiễm khuẩn tại Hà Nội 5 Bộ ảnh các tế bào - 01 bộ vi khuẩn đích phát huỳnh quang c) Sản phẩm Dạng III: Số TT 1 2 - 02 quy... MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VI T TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI KHUẨN E COLI O157:H7 VÀ S TYPHIMURIUM 1.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN E COLI O157:H7 VÀ S TYPHIMURIUM 1.3 NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG HẠT NANO PHÁT QUANG VÀO VI C ĐÁNH DẤU TẾ BÀO ĐỂ XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG VI KHUẨN GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM 1 6 6 7 13 1.4 CÁC HẠT NANO SỬ DỤNG... bản Trong năm 2005-2008, chúng tôi phối hợp với Vi n Vật lý thực hiện đề tài cấp Bộ” Chế tạo và nghiên cứu tính chất quang phổ của một vài loại chấm lượng tử để sử dụng trong kỹ thuật đánh dấu bằng chấm lượng tử” và đề tài cấp Vi n Nghiên cứu ứng dụng các tinh thể nano chấm lượng tử CdSe vào vi c đánh dấu tế bào vi sinh vật” Kết quả là đã thành công trong vi c lựa chọn các điều kiện thích hợp để đánh. .. dựng PP quang phổ HQ để xác định SLVK 8 ThS Vũ ThS Vũ - Nghiên cứu chế tạo nhóm chức Thị Thùy Thị Thùy năng trên mặt hạt nano silica phát Dương Dương quang chứa tâm màu - Nghiên cứu xây dựng phương pháp quang phổ huỳnh quang để xác định số lượng vi khuẩn Lê 9 Lê - Nghiên cứu ứng dụng thử nghiệm Huỳnh Huỳnh qui trình để xác định số lượng VK Thanh Thanh đích gây bệnh thực phẩm tại một Phương Phương, số điểm... ỨNG DỤNG PHỨC HỢP KHÁNG THỂ + HẠT NANO SILICA VÀO VI C PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG VI KHUẨN ĐÍCH TRONG THỊT BÒ TƯƠI SỐNG Ở HÀ NỘI 3.7.1 Chuẩn bị các dịch chiết thịt bò 3.7.2 Xác định số lượng VK S typhimurium và E coli O157:H7 trong các mẫu thịt bò bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch đặc hiệu 3.7.3 Phát hiện và xác định số lượng vi khuẩn đích trong thịt bò bằng phương pháp đếm tế bào phát. .. NGHỆ VI N CÔNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VI T NAM Độc lập - Tự do - Hạnh phúc Hà Nội, ngày tháng năm 2011 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI/DỰ ÁN SXTN I THÔNG TIN CHUNG 1 Tên đề tài/dự án: Nghiên cứu ứng dụng các hạt nano phát quang vào vi c đánh dấu tế bào để xác định số lượng vi khuẩn gây độc trong thực phẩm Mã số đề tài, dự án: 14 ĐTĐL.2009T/29 Thuộc: Đề tài độc. .. nghị: Số TT 1 Theo kế hoạch Thực tế đạt được Hội thảo về cơ chế gắn kết PTSH lên bề mặt hạt silica G C* Hội thảo: PP phát hiện chính xác số lượng vi khuẩn gây bệnh bằng sử dụng các hạt nano phát quang và hội thảo về kết quả nghiên cứu năm 2009 Địa điểm: Vi n CNSH; KP: 2.000.000 đồng; Thời 8 Thời gian: 2009 Vi nCNSH KP: 2 triệu đ gian: 2009 2 Hội thảo: Nghiên cứu ứng dụng các hạt nano phát quang vào vi c. .. PP quang phổ HQ để xác định số lượng vi khuẩn - Đã chế tạo được nhóm NH2, COOH trên hạt nano silica -Đã xây dựng PP quang phổ HQ để xác định SLVK 6 Nghiêm Nghiêm Thị Hà Thị Hà Liên Liên - Nghiên cứu chế tạo nhóm chức năng trên mặt hạt nano silica phát quang chứa tâm màu -Nghiên cứu xây dựng phương pháp quang phổ huỳnh quang để xác định số lượng vi khuẩn - Đã chế tạo được nhóm NH2, COOH trên hạt nano. .. LUẬN 3.1 NGHIÊN CỨU GẮN KẾT CÁC NHÓM CHỨC NĂNG SINH HỌC TRÊN BỀ MẶT HẠT NANO SILICA THƯƠNG PHẨM VỚI CÁC PHÂN TỬ SINH HỌC 3.1.1 Nghiên cứu một số đặc điểm hình thái của 02 chủng vi khuẩn E coli O157:H7, S typhimurium và chủng ĐC E coli 3.1.2 Nghiên cứu ứng dụng 1 số loại hạt nano (hạt silica chứa tâm màu phát quang, hạt keo vàng, QD) để phát hiện vi khuẩn gây ngộ độc ở thực phẩm 3.1.3 Gắn kết hạt nano silica . tài/dự án: Nghiên cứu ứng dụng các hạt nano phát quang vào vi c đánh dấu tế bào để xác định số lượng vi khuẩn gây độc trong thực phẩm Mã số đề tài, dự án: 14 ĐTĐL.2009T/29 Thuộc: Đề tài độc lập. hiện xác định số lượng vi khuẩn E. coli O157:H7 147 3.6.3.2 Quy trình phát hiện và xác định số lượng vi khuẩn S. typhimurium 149 3.7 ỨNG DỤNG PHỨC HỢP KHÁNG THỂ + HẠT NANO SILICA VÀO VI C PHÁT. ĐÁNH DẤU TẾ BÀO ĐỂ XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG VI KHU ẨN GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM 13 1.4 CÁC HẠT NANO SỬ DỤNG TRONG CÁC PHÂN TÍCH SINH HỌC 14 1.4.1 Hạt vàng: Au NP s 14 1.4.2 Tinh thể nano chấm lượng tử