THÔNG TIN TÀI LIỆU
Phần MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề Hồ tiêu có danh pháp hoa học Pipernigrum thuộc họ hồ tiêu (Piperaceae), trồng chủ yếu để dùng làm gia vị dạng khô tươi Hiện hồ tiêu cơng nghiệp lâu năm, có giá trị kinh tế giá trị xuất cao trồng nhiều nơi giới Ấn Độ, Indonesia, Mã Lai, Thái Lan, Sri Lanka, Brazli, Trung Quốc Việt Nam (Nair 2004) Cây tiêu dù có mặt Việt Nam từ kỷ 18, trồng nhiều Phú Quốc Vĩnh Linh biết đến Cả trăm năm Việt Nam khơng có tên đồ gia vị giới Mãi đến kỷ 20, khoảng năm 1986, Việt Nam thực sách đổi với chế thị trường, tiêu bắt đầu phát triển mạnh Mạnh không ạt cà phê khơng biết điều kiện thổ nhưỡng hay khả chăm sóc mà hộ trồng tiêu thường trồng vài sào hay nhiều 1-2 hécta Tuy nhiên, với suất ngày cao, từ - tạ/ha đạt tấn/hécta, cá biệt hộ kỹ thuật canh tác tốt đạt tấn/hécta; chi phí giá thành khoảng 15.000 20.000đ/kg giá bán khoảng 40.000 - 50.000đ/kg, có lúc lên tới 60.000đ/kg đến 75.000đ/kg nên nguời trồng tiêu n tâm giá hồ tiêu thị trường ổn định Có thể khẳng định tiêu loại nơng sản phụ có giá trị kinh tế cao, lúc có thị trường tiêu thụ Hạt tiêu sản phẩm gia vị quý, sử dụng với khối lượng lớn công nghiệp chế biến đồ hộp thực phẩm sử dụng rộng rãi bửa ăn hàng ngày nhiều nơi, ngồi hạt tiêu cịn dùng cơng nghiệp hương liệu dược liệu [3] Mặt khác, hạt tiêu khơ bảo quản kho nhiều năm mà khơng giảm chất lượng, người trồng tiêu giữ lại sản phẩm để bán giá phù hợp Ở nước ta, từ sau năm 1995 trở lại đây, tiêu phát triển với tốc độ lớn Trong năm qua nhà nước ta chủ trương sản xuất nơng nghiệp hàng hóa, viêc xác định chuyển đổi cấu trồng phù hợp trọng Phát huy mạnh trồng có tiềm đưa lại hiệu kinh tế cao đồng thời gắn với việc bảo vệ mơi trường tiêu nước ta mạnh to lớn nhiều địa phương có điều kiện thuận lợi khí hậu, đất đai Hiện tiêu trồng nhiều tỉnh Bình Dương, Bình Phước, Đồng Nai, Gia Lai, Đắc Lắc, Quảng Trị… Quảng Trị vùng trồng tiêu tiếng, nằm phía nam Bắc Trung Bộ, trọn vẹn khu vực nhiệt đới ẩm gió mùa, vùng chuyển tiếp miền khí hậu: Mùa đơng lạnh phía Bắc nóng ẩm quanh năm phía Nam Ở vùng khí hậu khắc nghiệt, chịu hậu nặng nề gió tây nam khơ nóng, bão, mưa lớn, khí hậu biến động mạnh theo mùa Nằm vành đai nhiệt đới Bắc bán cầu, nước, Quảng Trị thừa hưởng chế độ xạ dồi độ cao mặt trời độ dài ban ngày định Kết điều tra đánh giá phân hạng tài nguyên đất tỉnh Quảng Trị năm 2001 Viện Quy hoạch Thiết kế Nông nghiệp rõ: tổng diện tích đất thích nghi phát triển hồ tiêu 46.824 Trong đó, mức độ thích nghi có 18.039 thuộc vùng đất đỏ bazan Cồn Tiên - Dốc Miếu (thuộc huyện Gio Linh), Khe Sanh (huyện Hướng Hóa), huyện Cam Lộ huyện Vĩnh Linh Kết đánh giá đất đai xã: Gio An, Gio Sơn, Hải Thái (Cồn Tiên - Dốc Miếu) huyện Gio Linh; xã Vĩnh Hòa, Vĩnh Hiền, Vĩnh Nam huyện Vĩnh Linh xã Cam Thành, Cam Nghĩa, Cam Chính huyện Cam Lộ có mức độ thích nghi tiêu cao Vì khí hậu thời tiết tỉnh Quảng Trị khắc nghiệt mùa đơng khí hậu ẩm ướt, nhiệt độ thấp, mùa hè nhiệt độ cao, khơ nóng điều kiện thuận lợi để nhiều dịch hại phát sinh Bên cạnh biện pháp nơng hộ chưa hợp lý, hiểu biết bảo vệ thực vật cho tiêu bị hạn chế, yếu tố làm cho dịch hại phát triển trầm trọng Sâu bệnh hại nguyên nhân gây gây giảm suất suy thối nhiều vườn tiêu Quảng Trị Theo Nguyễn Ngọc Châu (1995) Tân Lâm – Quảng Trị có khoảng 36 lồi sâu bệnh hại tiêu [2] Trong năm với mở rộng khơng ngừng diện tích hồ tiêu tình hình sâu bệnh phá hại ngày trở nên nghiêm trọng bệnh chết nhanh (Phytopthora), chết chậm (Fusarium.spp), bệnh khô đầu (Collectotrichum sp), bệnh khô vằn (Rhizoctonia sp), sâu đục thân, tuyến trùng, rệp sáp…gây thiệt hại nhiều vùng sản xuất tiêu nước Trong năm 2005, 2006 đầu năm 2007 dịch hại hồ tiêu phát sinh gây hại đáng kể cho nhiều vùng sản xuất hồ tiêu tập trung Một bệnh nguy hiểm làm giảm suất tiêu diện rộng bệnh chết chậm Bệnh chết chậm hồ tiêu nấm Fusarium.spp gây Cây tiêu có biểu sinh trưởng chậm, úa vàng Lá, hoa, đốt trái rụng dần từ gốc lên ngọn, không rụng héo từ đọt xuống bệnh chết nhanh Gốc thân bệnh có vết nâu đen, vết bệnh lan rộng làm thối lớp vỏ gốc, bó mạch thân hóa nâu Khi bệnh nặng, tồn gốc rễ tiêu bị thâm đen, hư thối, sau chết khơ Cũng có trường hợp làm chết chậm nấm Fusarium mà nguyên nhân kết hợp với nấm khác Lasiodiplodia, Pythium, Rhizoctonia làm thối gốc gây tượng chết chậm tiêu Trước diễn biến phức tạp sâu bệnh hại nói chung bệnh chết chậm nói riêng hồ tiêu, để có sở cho việc phịng trừ góp phần phục vụ tốt cho sản xuất, tiến hành đề tài: “ Nghiên cứu nấm Fusarium spp gây hại hồ tiêu Quảng Trị ”. Nhằm nghiên cứu đặc điểm sinh học, tính gây bệnh từ đưa hướng phịng trừ bảo vệ hiệu khơng tiêu mà trồng có ích khác Việc cần thiết có ý nghĩa với phát triển hồ tiêu tỉnh Quảng Trị nói riêng Việt Nam nói chung 1.2 Mục đích đề tài: Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấm Fusarium spp Nghiên cứu tính gây bệnh nấm Fusarium spp điều kiện in vivo 1.3 Yêu cầu đề tài: Thu thập mẫu đất mẫu rễ vùng trồng tiêu bị bệnh chết chậm Cam Lộ Quảng Trị Sơ đánh giá phân loại chủng nấm Fusarium spp thơng qua hình thái nấm Đánh giá tốc độ sinh trưởng chủng nấm Đánh giá tính gây bệnh chủng Fusarium Phần TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh hồ tiêu nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới Các nhà khoa học giới tiến hành nghiên cứu nhiều vấn đề liên quan đến nấm Fusarium.spp gây Điển hình như: Takayuki cs (1999) nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng khác lên hình thành bào tử F globosum phân lập từ lúa mì vùng cận nhiệt đới Nhật Bản, đồng thời đưa điều kiện chiếu sáng tối ưu để phân lập Fusarium [7] Ellner (2002) nghiên cứu độc tố củ khoai tây gây độc F sambucinum Kết cắt bỏ phần mô thối khoai tây (chứa nhiều độc tố) mà loại hết độc tố [11] Hussein cs (2002) nghiên cứu xuất phân bố lồi Fusarium ngơ New Zealand Bằng cách sử dụng phương pháp pha loãng cấy trực tiếp, tác giả phân lập 15 loài Fusarium spp từ hạt vỏ lồi ngơ vùng Manawatu [16] Ghiasian cs (2005) nghiên cứu sản xuất Fumonisin từ loài Fusarium phân lập từ ngũ cốc tươi Iran Kết phân lập 3619 chủng F verticillioides F proliferatum từ 92 mẫu ngũ cốc thu hoạch vùng địa lý khác Iran, đồng thời xác định hàm lượng Fumonisin mà chúng tạo mơi trường ngũ cốc [14] Ngồi ra, năm qua tình hình bệnh hại xuất khắp vùng trồng tiêu giới gây thiệt hại đáng kể trở thành yếu tố quan trọng hạn chế diện tích sản lượng tiêu Vì diễn biến bệnh hại hồ tiêu nghiên cứu nước sản xuất tiêu giới sau: Ở Ấn Độ, báo cáo bệnh hại rễ tiêu Barber công bố năm 1902, 1903, 1905 Butler (1906) đẫ tiến hành điều tra bệnh hại vùng Wynad (Tây Nam Ấn Độ) Ông dẫ phát tuyến trùng hại rễ nấm Fusarium oxysporium Later (1918) bác bỏ kết Buler cho nguyên nhân gây bệnh chưa rõ ràng Venkara Rau (1929) phân lập Phytophthora sp từ mẫu tiêu bị chết héo chủ yếu vùng khai hoang Nhưng tiến sĩ Ramaskishen (1957) cho khơng có lồi phytophthora phân lập từ tiêu bị bệnh nước Ở Indonesia, tài liệu xuất tình hình bệnh chết tiêu có từ năm 1885 phía Nam đảo sumatra Đến năm 1899, Zimmerman tường trình loại bệnh rễ làm chêt tiêu Bệnh xuất thành dịch Teluk Betong thuộc đảo sumatra Đến năm 1901 Zimmerman thấy dạng bệnh tương tự xt hiên Đơng Java Ơng tìm Được lồi tuyến trùng Meloidogyne sp Gây tượng bệnh lý Một số tác giả nghiên cứu bệnh tiêu Java sau cho tuyến trùng gây bướu rễ nguyên nhân gây bệnh Một số tác giả khác lưu ý điều kiên canh tác gây bệnh cho tiêu Tình hình bệnh tương tự thấy Lampong, phía Nam đảo Sumatra Cịn đảo Bangka, giáp bờ phía đơng Sumatra từ năm 1916, Rutger phát thấy tượng suy thoái dần tiêu, sau gọi bênh vàng tiêu, tuyến trùng Radôphlus similis gây Bệnh phát triển mạnh năm 1937 Năm 1936, Muller cho tượng chết rũ tiêu Java sumatra nói có liên quan đến bệnh thối gốc tiêu mà ơng tìm thấy nấm gây bệnh Phytophthora palmivora var.piperis Vào năm 1962-1964, sản lượng tiêu hàng năm Indonesia đạt khoảng 50.000 Nhưng tình hình dịch bệnh phát triển mạnh năm sau làm tiêu chết hàng loạt, sản lượng tiêu tụt xuống 15.000 Chỉ sau có nghiên cứu giống, phân bón phịng trừ sâu bệnh cho tiêu với việc tổ chức số hợp tác xã trồng tiêu biên pháp hỗ trợ tích cực nhà nước, sản lượng tiêu phục hồi đạt năm khoảng 30.000 năm gần Ở Malaysia, bệnh chết tiêu phat Sarawak từ năm 1952-1953 Holiday Mowat xác định nguyên nhân gây bệnh nấm Phytophthora palmivora Hiên tượng bệnh tương tự phát Sumatranawm 1952 mà Muller gọi bênh thối gốc Bệnh phát triển mạnh năm 1953-1956 gây thiệt hại khoảng 7.000 tiêu, trị giá 1,7 triệu bảng Anh theo thời giá lúc Blacklock (1954) ghi nhận số loại sâu bệnh khác phát Sarawak nấm gây thối gốc, rễ Fomes lignosus, Ganoderma lucidum; bệnh rỉ tảo Cephaleuros parasiticus, tuyến trùng rễ heterodera sp Các nước khác, vùng Tây Nam Ấn Độ, Sumatra Banka cịn có số vùng trồng tiêu khác tiếng Brazil nước bán đảo Đông Dương Barat (1952) người nghiên cứu bệnh thối rễ hồ tiêu vùng Ông giống Muller, nghiên cứu ông nghiên cứu tuyến trùng Meloidogyne sp Barat phân lập nấm Phytophthora sp từ tiêu bị bệnh ông không xem nguyên nhân gây bệnh Ở Sarawak có báo cáo bệnh thối rễ trước có điều tra tiến hành Newman (1941), mẫu rễ bệnh gởi đến Malaysia để phân lập phân lập nấm Phytophthora sp Điều cho thấy nguyên nhân gây bệnh nấm nghiên cứu sâu chưa tiến hành Từ kết nghiên cứu vùng trồng tiêu khác tác giả, có Muller người chứng minh tác nhân gây bệnh hang loạt nấm Phytophthora palmivora var piperis; tuyến trùng Meloidogyne Jamaica xem tác nhân tạo vết thương tạo điều kiện cho nấm xâm nhập Các nghiên cứu gần Tsao (1991) kết luận nguyên nhân gây bệnh thối chết gốc tiêu nấm Phytophthora palmivora MF4 xác định lại công nghệ sinh học đại nấm Phytophthora capsici Ewin Ribiro (1996) cho nấm Phytophthora capsici khó phân lập từ bệnh Tuy nhiên, với môi trường chọn lọc phân lập nấm từ bị bệnh 2.1.2 Tình hình nghiên cứu hồ tiêu Việt Nam Vấn đề làm giảm suất, diện tích chất lượng hồ tiêu nước ta sâu bệnh, đặc biệt bệnh hại tiêu Theo CABI có khoảng 44 lồi dịch hại hồ tiêu, riêng Việt Nam theo nghiên cứu Diệp Hồ Tùng CTV (1999) có 22 lồi sâu bệnh hại tiêu Phú Quốc Theo nghiên cứu Võ Mai Nguyễn Hữu Huân (1987) huyện Đức Linh - Thuận Hải có 10 giống tuyến trùng hại rễ hồ tiêu, có tuyến trùng Meloidogyne incognita gây tượng sần rễ hồ tiêu phổ biến nhất; có 12 loại bệnh thân, gốc tiêu thán thư (Gloosporium sp.), rụng đốt (Điploia sp.), thối gốc (Fusarium sp., Sclorofium sp…) Hồ Ngọc Thành tiến hành nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh chết nhanh hồ tiêu Xuân Lộc- Đồng Nai nấm Phytophthora sp Gây Ông phân lập nấm từ tiêu bị bệnh lây bệnh nhân tạo cho tiêu vườn ươm tiêu sản xuất hai trường hợp bị chết nhanh sau 7-9 ngày Theo Nguyễn Ngọc Châu (1995) thành phần bệnh hại hồ tiêu Tân LâmQuảng Trị có tới 65 lồi, tuyến trùng 49 lồi, nấm bệnh loài Trong số 49 loài tuyến trùng ký sinh có lồi ký sinh gây hại nặng hồ tiêu Meloidogyne incognita gây sần rễ có khả gây thành dịch diện rộng, lồi Radơphlus reniformis gây đen nụ, loài Xyphenema amenicanum mang virus gây vàng tiêu, loài Pratrichodorus nanus mang virus gây bệnh xắn tiêu Trong lồi nấm bệnh có loại gây bệnh chủ yếu thán thư (Collectotrium goeosprioides), đen (Lasiodiplodia theobromae), thối rễ (Fusarium solani) Theo Nguyễn Vĩnh Trường cộng tác viên (2001) phân tích mẫu đất bị bệnh chết héo hồ tiêu Tân Lâm- Quảng trị Long Khánh- Đồng Nai xác định nấm gây chết héo Phytophthora capsicil Một số nghiên cứu tuyến trùng hại rễ hồ tiêu Vũ Thị Nga Bình Long cho thấy giống Meloidogyne encognita, Criconemoides sp., helicotylenchus sp., Tylencherhynchus sp có tỷ lệ xuất 100% mẫu đất phân lập Nhìn chung tình hình bệnh hại hồ tiêu Việt Nam có diễn bến tương tự khu vực giới, đơi lúc cịn phức tạp Đó khó khăn, thách thức địi hỏi phải có nghiên cứu chắn xây dựng chiến lược phòng trừ bệnh hại hồ tiêu có hiệu 2.2 Giới thiệu chung bệnh chết chậm Việt Nam đất nước có vùng khí hậu khác biệt Vùng khí hậu Á nhiệt đới từ phía Bắc đèo Hải Vân với mùa rõ rệt vùng khí hậu nhiệt đới phía Nam đèo hải Vân với mùa là: mùa khơ mùa mưa Sự có mặt dãy núi miền Trung miền Bắc Việt Nam làm gia tăng khác vùng khí hậu, điều cho phép trồng nhiều loại khác Những vùng khác Việt Nam đem lại khí hậu lý tưởng cho lồi Fusarium phát triển mạnh dòng Fusarium gây thiệt hại kinh tế lớn cho hàng loạt trồng khác nước, bao gồm ăn quả, rau, công nghiệp nông nghiệp khác Hồ tiêu thân thảo, rễ mềm yếu phản ứng nhạy bén với điều kiện môi trường chế độ chăm sóc, bón phân nên dễ bị loại bệnh hại như: bệnh tuyến trùng, bệnh chết nhanh, bệnh chết chậm, bệnh thán thư, bệnh khô vằn, bệnh virus (bệnh tiêu điên, bệnh xoắn lùn), bệnh thiếu dinh dưỡng… Bệnh chết chậm nấm Fusarium.spp nhiều trường hợp kết hợp với nấm khác Lasiodiplodia, Pythium, Rhizoctonia làm thối gốc gây tượng chết chậm tiêu Trong bệnh chết chậm nấm Fusarium gây ảnh hưởng nhiều đến sinh trưởng phát triển 2.2.1 Triệu chứng Hình 2.1: Cây tiêu bị bệnh chết chậm Bệnh chết chậm thường có triệu chứng vàng từ từ, thời gian từ có biểu bị bệnh đến chết kéo dài năm Bệnh làm chết khóm chết 1-2 dây.[8] Cây bị bệnh phát triển, suất thấp, rễ thường bị hủy hoại Quan sát thấy rễ có nhiều mụn u sưng, vết thâm đen rễ tập đoàn tuyến trùng gây Gốc thân, cổ rễ bị thâm đen, thối khơ Các bó mạch thân bị chuyển màu thâm đen [Báo cáo dịch hại hồ tiêu biện pháp phòng trừ Viện Bảo vệ thực vật Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam] Do rễ bị tổn hại, q trình nước, vận chuyển muối khống bị gián đoạn nên bị bệnh có biểu sinh trưởng kém, bị vàng rụng dần dần, cịn nhỏ bị chết khơ hồn tồn Trường hợp tiêu bị bệnh nhẹ dây tiêu khơng chết sinh trưởng khơng bình thường cằn cỗi 2.2.2 Nguyên nhân gây bệnh Có nhiều tác nhân tham gia gây bệnh chết chậm tuyến trùng vùng rễ, rệp sáp, mối, nấm Fusarium spp, Phytophthora, Pythium….Một số nghiên cứu cho rằng, tuyến trùng ký sinh gây thương tổn cho rễ, sau nấm Fusarium loại nấm khác ký sinh theo nguyên nhân gây tượng chết chậm Ở vùng có mật độ rệp sáp hại rễ cao mối gây hại làm cho triệu chứng bệnh thêm rõ ràng phát triển nhanh hơn.[Báo cáo dịch hại hồ tiêu biện pháp phòng trừ Viện Bảo vệ thực vật Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam] 2.2.3 Biện pháp phịng trừ Các bệnh héo Fusarium nói chung chết chậm hồ tiêu nói riêng khó phòng trừ bào tử hậu tồn qua thời gian dài đất, phải: Luân canh trồng có khả kháng bệnh năm trước trồng lại trồng mẫn cảm giúp làm giảm nguồn bệnh Bón nhiều phân hữu bón đủ phân NPK bón thêm vôi cho gốc tiêu Đồng thời không để gốc tiêu đọng nước mùa mưa Tiêu hủy bị bệnh rắc vôi vào gốc diệt mầm bệnh.Tuy nhiên, loại nấm tồn cách xâm nhiễm vào vỏ rễ trồng kí chủ khơng biểu triệu chứng Việc nêu cần thiết nghiên cứu đặc tính sinh học loại nấm quốc gia, vùng, địa phương nhằm xác định vai trị trồng khơng phải kí chủ thời gian tồn bào tử hậu đất.Có giống trồng có khả kháng bệnh héo Fusarium Tuy nhiên giống kháng bệnh khơng có nghĩa có khả kháng với tất chủng dạng lồi đó.Một số bệnh héo Fusarium phịng trừ thành cơng phương pháp sử dụng gốc ghép có khả kháng bệnh Ví dụ, phương pháp áp dụng để phòng trừ bệnh héo Fusarium dưa hấu Hiện chưa có thuốc trừ nấm hữu hiệu để phịng trừ 2.3 Giới thiệu chung nấm Fusarium spp Nấm Fusarium spp Thuộc: Ngành Ascomycota Lớp Deuteromycetes Họ Tuberaulariaceae Bộ Moniliales Chi Fusarium Chi Fusarium bao gồm nhiều loài gây bệnh cho héo tắc bó mạch, thối rễ, thân bắp, thối cổ rễ thối củ Một số loài gây bệnh sản sinh độc tố nấm lẫn tạp hạt ngũ cốc Nhiều loài Fusarium khác hoại sinh phổ biến đất Các lồi hoại sinh thường có mặt rễ thân bệnh Những loài hoại sinh mọc nhanh môi trường phân lập dễ dàng từ rễ thân bị bệnh, khiến cho việc phân lập tác nhân gây bệnh trở nên khó khăn Vì việc lây bệnh nhân tạo mẫu Fusarium phân lập từ rễ bệnh cần thiết Đây phần quan trọng q trình chẩn đốn, lí chẩn đốn bệnh rễ lại khó khăn Ví dụ, Fusarium oxysporum bao gồm nhiều dạng loài gây bệnh héo tắc bó mạch số bệnh thối rễ Tuy nhiên, F oxysprorum bao gồm nhiều dạng hoại sinh có mặt phổ biến rễ bệnh sau tác nhân gây bệnh làm thối mô rễ Một số lồi hoại sinh sống nội sinh tế bào lớp ngồi rễ mà khơng làm tổn thương rễ Theo nghiên cứu gần nhà khoa học, bệnh héo Fuasarium vấn đề quan trọng Việt Nam Những bệnh héo dạng loài F.oxysporum gây Một vài dạng F.oxysporum gây thối dưa hấu củ khoai tây bị sâu dụng cụ gặt hái làm tổn thương Thối bắp ngô, chủ yếu F.graminearum F verticilliodes gây ra, ngày trở nên nghiêm trọng Việt Nam Cả hai loài sản sinh độc tố nấm tồn hạt Một số dạng Fusarium solani gây thối cổ rễ họ đậu đậu Hà Lan, đậu cô ve, thối rễ trưởng thành Các dạng khác gây hại khu vực gố than lớn, vải, bị yếu yếu tố môi trường làm stress bệnh khác Fusraium decemcellulare phân lập từ cành nhãn bị thối miền bắc Việt Nam ( L Burgess, thong tin chưa xuất bản) từ cà phê tỉnh Đắc Lắc (TS Trần Kim Loang) Nghiên cứu sinh địa lý học rằng, loài Fusarium khác phân bố vùng địa lý khác Sự thay đổi cấu trúc đa dạng nấm kết hợp với vùng khí hậu đặc biệt giới [19] Phổ kí chủ: Mỗi dạng lồi thường gây héo tắc bó mạch lồi kí chủ định Chẳng hạn F oxysporum f sp Niveum gây héo dưa hấu 10 Bảng 4.1 Số chủng Fusarium phân lập từ mẫu rễ tiêu bị bệnh chết chậm Cam Lộ - Quảng Trị STT Địa điểm lấy mẫu Số mẫu lấy Số chủng Fusarium phân lập Ký hiệu chủng CC1.1 CC1 CC1.2 CC1.3 CC2 CC3 CC4 2 CC5 CC6 CC2.4 CC4.5 CC4.6 CT1.7 CT1.8 CT1 CT1.9 CT1.10 CT1.11 CT1.12 CT2 CT2.13 CT3 CT3.14 10 CT4 CT5.15 11 CT5 CT5.16 CT5.17 CT5.18 CT6.19 12 CT6 2 13 CT7 CT7.21 14 CT8 CT8.22 Tổng cộng CT6.20 22 22 Kết nghiên cứu cho thấy, phân bố nấm Fusarium spp tập trung nhiều Cam Thành (Cam Thành phân lập 16 chủng, Cam Chính phân lập chủng) Trong nhiều CT1, CT5 CC1 Những vườn phân lập nhiều chủng Fusarium nhiều nguyên nhân thành phần giới đất nặng ; độ pH đất thấp, mật độ tuyến trùng, mối rệp sáp hại rễ cao cao vườn khác Ngồi ra, qua đánh giá chung chúng tơi hộ nơng dân Cam Thành có chế độ chăm sóc tiêu chưa hợp lý bón nhiều phân hóa học khơng bổ xung phân xanh hay phân chuồng, số hộ không quan tâm chăm sóc, có số vườn bón sát gốc làm đứt nhiều rễ dẫn đến hậu sinh trưởng yếu, tạo điều kiện cho Fusarium spp xâm nhiễm dễ dàng Ngày lấy mẫu rễ củng ảnh hưởng nhiều đến số chủng Fusarium phân lập Phần lớn chủng Fusarium phân lập từ mẫu rễ lấy ngày 20/01/2010 (15 chủng) Có thể thời điểm lấy mẫu rễ khoảng thời gian có nhiều đợt mưa gây nên tình trạng ứ nước tạm thời, làm cho hoạt động sinh lý bị thay đổi đột ngột, bị suy yếu tạo điều kiện cho chủng Fusarium xâm nhiễm dễ dàng sinh trưởng mạnh rễ 4.1.2 Làm mẫu nấm cấy đơn bào tử Hình 4.1 Làm pha lỗng cấy đơn bào tử Các rễ mảnh, nhỏ, rễ phụ làm nhiệm vụ hấp thụ dinh dưỡng cho phát triển quan trọng cho sức khỏe Các tác nhân gây bệnh đất thường gây bệnh phận Trên mẫu rễ phân lập khơng có chủng nấm Fusarium mà có diện số chủng khác nên việc phân lập Fusarium phương pháp pha loãng cấy đơn bào tử nhằm mục đích chọn chủng mẫu Kết làm 23 22 chủng Fusarium phân lập từ mẫu rễ tiêu bị bệnh chết chậm Cam Lộ - Quảng Trị 4.2 Đặc điểm hình thái chủng nấm Fusarium spp phân lập 4.2.1 Đặc điểm hình thái nấm Fusarium spp Sau phân lập thành công 22 chủng nấm Fusarium, tiến hành kiểm tra hình thành bảo từ chủng Tiếp tục quan sát kính hiển vi để xem hình thái chúng, hình ảnh bảo tử nhỏ, bào tử lớn bào tử hậu thấy rõ qua hình 4.2 24 Bảng 4.2 Sự hình thành bào tử nấm Fusarium spp phân lập Cam Lộ Quảng Trị Nhóm Phân nhóm III số vách ngăn CT5.15 + 2-3 + 0-1 + CT5.16 + + 0-1 + A CT2.13 + 3–4 + 0–2 - B CT3.14 + 4-5 + 0-3 + CC1.3 + 1-2 + + CC2.4 - - + + CT1.7 - - + + CT5.18 + + + CT6.20 + - - + CT1.10 + 3-5 + 2-3 + CC1.2 + -4 + 0-1 - CC1.1 + 2-4 + 0-1 + CC4.6 + 4-5 + 0-3 - CT1.9 + 3-4 + 0-2 + CT1.11 + 2-4 + 0-1 - CT7.21 + 2-3 + 0-1 - CT1.8 + 2-4 + 0-1 - CT6.19 + -3 + 0-1 - CT8.22 + 2-3 + 0-1 + CT5.17 + 1-4 + 0-1 + CC4.5 + 2-4 + 0-1 - CT1.12 + -5 + 1-2 - A A V VI A B C VIII Ghi chú: Bào tử hậu +/- B VII Bào tử nhỏ số vách ngăn B IV Bào tử lớn +/- I II Kí hiệu chủng +: có bào tử - : khơng có bào tử 25 Nhóm Tên chủng I CT5.16 II CT3.14 IV CT1.10 VI CC4.6 Bào tử lớn Bào tử nhỏ Bào tử hậu Khơng có CT1.9 VII VIII CT1.8 Khơng có CC4.5 Khơng có CT1.12 Khơng có Hình 4.2 Hình thái bào tử chủng Fusarium spp đại diện Quan sát 45 chủng phân lập kính hiển vi, thơng qua đặc điểm nhận dạng hình thái, xác định 22 chủng Fusarium Kết quan sát kính hiển vi vật kính x40 kết hợp với kết phân nhóm dựa màu sắc thể bảng 4.2 Các chủng Fusarium phân lập có đặc điểm: Bào tử lớn có từ đến vách ngăn Riêng CC1.3 có đến vách ngăn, CT5.17 có đến vách ngăn Đặc biệt, chủng CC2.4 CT1.7 khơng có diện bào tử lớn Các bào tử lớn có dạng hình lưỡi liềm hay hình trụ; phần đầu có dạng hình đầu tù, hình nón, hình núm vú; phần cuối có dạng hình đầu tù, hình bàn chân Bào tử nhỏ có từ đến vách ngăn Riêng CT1.10 có từ đến vách ngăn; CC4.6 có từ đến vách ngăn; CT1.9 có từ đến vách ngăn; CT1.12 có đến vách 26 ngăn Đặc biệt, chủng CT6.20 CC1.1 khơng có diện bào tử nhỏ Bào tử nhỏ có dạng hình cầu với đầu nhọn, hình thận, hình chùy hay hình liềm Bào tử hậu nằm ở đầu tận sợi nấm; có dạng đơi, dạng hay dạng chuỗi Trong số 22 chủng xác định Fusarium, chủng khơng có khả hình thành bào tử hậu CT2.13, CC1.2, CC4.6, CT1.11, CT1.8, CT6.19, CC4.5 CT1.12 4.2.2 Đặc điểm hình thái màu sắc tản nấm Fusarium spp Từ 22 chủng xác định Fusarium sau 12 ngày nuôi 28 0C, điều kiện chiếu sáng, chúng tơi phân thành nhóm Kết trình bày bảng 4.3 Tám nhóm Fusarium phân biệt dựa vào hình dạng hệ sợi nấm (tơi, xốp); khả hình thành khuẩn ty khí sinh nhiều hay (tản nấm dày hay mỏng); màu sắc hệ sợi nấm (trắng, trắng ngà, trắng đục, trắng trong, vàng); màu sắc mặt tản nấm (lục, nâu, nâu nhạt, vàng, vàng nâu, xanh đậm, tím, hồng cam) Đây sắc tố chính, tập trung tản nấm, cịn xung quanh tản nấm có màu tương đương với sắc tố nhạt Trong số nhóm này, có nhóm phân nhỏ thành nhóm phụ (II, III, IV, VII) Các phân nhóm phụ giống màu sắc, hình thái tản nấm mặt khác màu sắc mặt tản nấm Qua bảng 4.2, 4.3, nhận thấy : Các chủng thuộc phân nhóm phụ hay nhóm có đặc điểm hình thái, màu sắc tản nấm giống có đặc điểm hình thái bào tử giống khác Cụ thể: 27 Bảng 4.3 Phân nhóm chủng Fusarium dựa vào hình thái màu sắc tản nấm Phân Nhóm nhóm phụ I chủng trên) (mặt dưới) CT5.16 khơng xốp, có viền vịng B CT3.14 II B Sắc tố nấm tiết môi trường Sợi nấm trắng ngà, tơi mỏng, CT2.13 III Màu sắc, hình thái tản nấm (mặt CT5.15 A A Mơ tả hình thái nấm (sau 12 ngày) Kí hiệu CC1.3 CC2.4 CT1.7 Sợi nấm trắng ngà, tơi, tản nấm phát triển không Sợi nấm trắng ngà, tơi dày, khơng xốp, có viền vịng Giữa lục, cam Giữa nâu, xanh lục Vàng Sợi nấm màu trắng, tơi, xốp mỏng Xanh đậm Sợi nấm trắng đục, tơi xốp,mỏng Tím Sợi nấm vàng, xốp bơng Vàng Sợi nấm trắng đục, xốp Giữa hồng cam, ngồi vàng Sợi nấm trắng trong, xốp mịn, có Giữa vàng nâu nhạt, viền xanh, viền vòng trắng đục Sợi nấm trắng ngà, tơi dày Nâu nhạt CT5.18 A CT6.20 IV B V CT1.10 CC1.2 CC1.1 VI CC4.6 CT1.9 A CT1.11 CT7.21 VII Sợi nấm trắng trong, tơi, có viền vòng Lục CT1.8 B CT6.19 Sợi nấm trắng ngà, tơi Vàng nhạt CT8.22 C VIII CT5.17 Sợi nấm trắng ngà, tơi, tản nấm CC4.5 phát triển không CT1.12 Sợi nấm màu vàng, bông, xốp dày Vàng nâu Vàng 28 Nhóm Phân nhóm phụ I II III IV Tên chủng A CT2.13 B CT3.14 A CC1.3 B CT1.7 A CT5.18 B CT1.10 CC1.2 VI CC4.6 VIII Mặt Mặt CT5.16 V VII Hình thái nấm (sau 12 ngày) A CT7.21 B CT1.8 C CC4.5 CT1.12 Hình 4.3 Màu sắc chủng nấm Fusarium 29 chủng CT5.15 CT5.16 thuộc nhóm I, có bào tử lớn (2 -3 vách ngăn), bào tử nhỏ (0 – 1) vách ngăn có mặt bào tử hậu chủng CC1.1 CC4.6 thuộc nhóm VI chủng CC1.1 có bào tử lớn với – vách ngăn, bào tử nhỏ có – vách ngăn có mặt bào tử hậu Trong đó, chủng CC4.6 có bào tử lớn với – vách ngăn, bào tử nhỏ có – vách ngăn khơng có mặt bào tử hậu Các chủng CC2.4 CT1.7 dù khơng có bào tử lớn qua quan sát hình thái, màu sắc tản nấm (CC2.4 có sợi nấm màu trắng, xốp, tơi mỏng, tiết sắc tố xanh đậm; CT1.7 có sợi nấm màu trắng đục, xốp tơi mỏng, tiết sắc tố tím) với diện bào tử nhỏ bào tử hậu, nấm Fusarium Theo số nghiên cứu, bào tử lớn loài Fusarium spp F poae, F subgluninas, F moniliform, F lansethiae khó phát chúng sản sinh điều kiện có tia UV [12], [18] Chủng CT6.20 khơng có bào tử nhỏ có bào tử lớn với vách ngăn có diện bào tử hậu, qua khẳng định nấm Fusarium số lồi Fusarium F equiseti F acuminatum khơng hình thành bào tử nhỏ q trình sinh sản vơ tính [12] 4.2.3 Quan sát tốc độ sinh trưởng hệ sợi nấm Tốc độ sinh trưởng hệ sợi nấm có liên quan mật thiết đến khả gây bệnh nhanh hay chậm nấm Đo tốc độ sinh trưởng chủng nấm sau 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 biết khả gây bệnh chủng nấm nghiên cứu Kết trình bày bảng 4.4 Sau 24 giờ, chủng CT1.12 có tốc độ sinh trưởng nhanh nhất, chủng CT2.13 có tốc độ sinh trưởng chậm Sau 48 giờ, 72 96 giờ, chủng CT1.12 sinh trưởng nhanh nhất, chủng CT1.10 sinh trưởng chậm Như vậy, sau ngày (96 giờ) kết luận chủng CT1.12 có tốc độ sinh trưởng nhanh nhất, chủng CT1.10 có tốc độ sinh trưởng chậm nhất, cịn 20 chủng cịn lại có tốc độ sinh trưởng trung bình tương đương 30 Bảng 4.4 Tốc độ sinh trưởng chủng Fusarium phân lập Nhóm Kí hiệu nhóm chủng 24 48 72 96 CT5.15 1,21hij 2,43fg 3,83hij 5,03j CT5.16 1,26fghij 2,51ef 3,75ij 5,14 ij A CT2.13 1,10j 2,25gh 3,64j 5,18ij B CT3.14 1,23ghij 2,21h 3,36k 4,61 k CC1.3 1,20ij 2,59def 4,04efgh 5,25 hij CC2.4 1,41cdef 2,76cd 3,78ij 5,21 ij CT1.7 1,44cde 3,06b 4,36bc 6,10 bc CT5.18 1,46bcd 2,75cd 3,93 ghi 5,18 ij CT6.20 1,24ghij 2,64de 3,28 k 4,36 l CT1.10 1,23ghij 2,00i 2,80 l 3,70 m CC1.2 1,28efghi 2,73cd 4,36 bc 5,78 de CC1.1 1,38defgh 2,89bc 4,29 bcd 5.78 de CC4.6 1,39cdefg 2,71cde 4,16 bcdef 5,59 efg CT1.9 1,55abc 2,78cd 4,23 bcdef 5,83de CT1.11 1,30defghi 2,66de 4,09 defg 5,94 cd CT7.21 1,39cdefg 2,58def 4,13 cdefg 5,46 fgh CT1.8 1,46bcd 2,88bc 4,28 bcde 5,75de CT6.19 1,25fghij 2,64de 4,03 fgh 5,35 ghi CT8.22 1,60ab 3,00b 4,40 b 6,20 b CT5.17 1,31defghi 2,73cd 4,09 defg 5,49 fgh CC4.5 1,33defghi 2,78cd 4,25 bcdef 5,68 ef CT1.12 1,70a 3,34a 5,01a 6,71 a I II A III B A IV B V VI A VII B C VIII Tốc độ sinh trưởng đường kính tản nấm (cm) Phân ( a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m: sai khác trung bình, p < 0,05 sai khác có ý nghĩa) Cả chủng CT1.10 CT1.12 phân lập từ vườn CT1 khác thời điểm lấy mẫu rễ: CT1.10 phân lập từ mẫu rễ lấy ngày 08/01/2010 CT1.12 phân 31 lập từ mẫu rễ lấy ngày 20/01/2010 Nhưng chủng CT1.12 lại chủng có tốc độ sinh trưởng mạnh cịn CT1.10 chủng có tốc độ sinh trưởng yếu Sau 24 Sau 48 Sau 72 Sau 96 Hình 4.4 Tốc độ sinh trưởng hệ sợi nấm CT5.17 4.3 Lây bệnh nhân tạo Sau tháng trồng từ tháng 9/2009 đến tháng 4/2010, tiến hành lây bệnh nhân tạo tiêu Hình 4.5: Tiêu ươm tuần tuổi 32 Hình 4.6 : Dịch bào tử nấm ni Hình 4.7: Khu bố trí thí nghiệm Thí nghiệm tiếp tục theo dỏi hàng ngày để quan sát xuất triệu chứng bệnh 33 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Đã phân lập 22 chủng Fusarium từ 14 vườn tiêu nguyên nhân gây bệnh chết chậm xã Cam Chính, Cam Thành - Cam Lộ - Quãng Trị Từ 22 chủng phân lập được, sử dụng phương pháp cấy đơn bào tử phương pháp pha loãng làm 22 chủng Fusarium Quan sát hình thái bào tử 22 chủng Fusarium nhìn chung: bào tử lớn có tử 2-5 vách ngăn, bào tử nhỏ hầu hết có từ 0-1 vách ngăn, số chủng có từ 1- vách ngăn Trong 22 chủng, có chủng có khả hình thành bào tử hậu Dựa vào hình dạng hệ sợi nấm màu sắc tản nấm, phân thành nhóm Trong đó, có nhóm phân nhỏ thành nhóm phụ ( II, III, IV, VII ) Dựa vào tốc độ sinh trưởng 22 chủng Fusarium, xác định chủng nấm có khả sinh trưởng, phát triển nhanh CT1.12 Ngược lại, chủng CT1.10 chủng sinh trưởng phát triển chậm 5.2 Đề nghị Tiếp tục theo dõi kết bố trí thí nghiệm để khẳng định chủng có khả gây bệnh cao Tiếp tục nghiên cứu nấm Fusarium với số lượng mẫu đại diện cho nhiều vùng trồng tiêu có nhiều đặc điểm thổ nhưỡng điều kiện thời tiết khác Sử dụng kỹ thuật phân tử đại vùng ITS 5,8S rDNA để nhận dạng cách dễ dàng loài Fusarium Hạn chế đề tài : Đề tài tiến hành thời gian quy định từ 06/01/2009 đến ngày 09/5/2010 Với khoảng thời gian 18 tuần để hoành thành tất nội dung đề Tuy nhiên, trình thực đề tài địi hỏi xác tính cẩn thận cao đến thời điểm này, nội dung đê tài là: Lây bệnh nhân tạo tiến hành vào ngày 4/5 chưa cho kết rõ ràng 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Ngô Anh 2009 Nấm học NXB Đại học Huế Huế Nguyễn Ngọc Châu 1995 Thành phần sâu bệnh hại hồ tiêu Tân Lâm – Quảng Trị Tạp chí bảo vệ thực vật 1/1995 Trần Văn Hòa 2001 Trồng tiêu cho hiệu quả? Tập 9: 101 câu hỏi thường gặp sản xuất nơng nghiệp NXB Trẻ Tp Hồ Chí Minh Vũ Triệu Mân, Lê Lương Tề 1998 Bệnh nông nghiệp NXB Nông nghiệp Hà Nội Hà Nội Lê Xuân Phương 2001 Nấm mốc Vi sinh vật công nghiệp NXB Xây dựng, Hà N Nguyễn Văn Thành, Cao Ngọc Điệp, Nguyễn Văn Bá Giáo trình mơn Nấm học Tài liệu tiếng anh Aoki T, Nirenberg H.I 1999 Fusarium globosum from subtropical Japan and the effect of different light conditions on its conidiogenesis Mycoscience 40: 1-9 Booth C 1971 Fusarium nomenclature The genus Fusarium Commonweath Mycological Institute, Kew, Surrey Burgess L.W, Knight T.E, Len Tesoriero, Hien Thuy Phan 2008 Diagnostic manual for plant diseases in Vietnam Australian Centre for International Agricultural Research 10 201 Dropkin V.H 1980 Introduction to Plant Nematology John Wiley and Sons N.Y 293pp 11 Ellner F.M 2002 Mycotoxins in Potato Tubers infected by Fusarium sambucinum Mycotoxin Research 18: 57-61 12 Gagkaeva T 2008 Introduction to Fusarium taxonomy St Petersburg, Russia 13 Gerlach W, Nirenberg HI 1982 The genus Fusarium - a pictorial atlas Mitt Biol Bundesanst Land-u Forstwirsch Berlin-Dahlem 209: 1-406 14 Ghiasian S.A, Rezayat S.M, Kord B.P, Maghsood A.H, Yazdanpanah H, Shephard G.S, Westhuizen L, Vismer H.F, Walter F.O.M 2005 Fumonisin production by Fusarium species isolated from freshly harvested corn in Iran Mycopathologia 159: 31– 40 35 15 Guadet J, Julien J, Lajay J.F, Brygoo Y 1989 Phylogeny of some Fusarium, as determined by large_subumit rRNA sequence comparison Mol Biol 6(3): 227-242 16 Hussein H.M Christensen M.J, Baxter M 2002 Occurrence and distribution of Fusarium species in maize fields in New Zealand Mycopathologia 156: 25–30 17 Lin X, Heitman J 2005 Chlamydospore Formation during Hyphal Growth in Cryptococcus neoformans American Society for Microbiology 18 Seifert K 1996 Fusarium interactive key Agriculture and Agri-Food Canada 19 Vujanovic V, Hamel C, Yergeau E, Arnaud M.S 2006 Biodiversity and Biogeography of Fusarium Species from Northeastern North American Asparagus Fields Based on Microbiogical and Molecular Approaches Springer Science and Business Media 51: 242-255 20 Wollenweber H.W, Reinking O.A 1935 Die Fusarien, Ihre Beschreibung, Schad_wirbung und Bekampfung Paul Parey, Berlin 36 ... hồ tiêu tỉnh Quảng Trị nói riêng Việt Nam nói chung 1.2 Mục đích đề tài: Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấm Fusarium spp Nghiên cứu tính gây bệnh nấm Fusarium spp điều kiện in vivo 1.3 Yêu cầu đề. .. VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh hồ tiêu ngồi nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới Các nhà khoa học giới tiến hành nghiên cứu nhiều vấn đề liên quan đến nấm Fusarium. spp gây. .. dịch hại hồ tiêu phát sinh gây hại đáng kể cho nhiều vùng sản xuất hồ tiêu tập trung Một bệnh nguy hiểm làm giảm suất tiêu diện rộng bệnh chết chậm Bệnh chết chậm hồ tiêu nấm Fusarium. spp gây Cây
Ngày đăng: 15/03/2023, 15:13
Xem thêm: