Khảo sát tác động giảm đau của các ph n đoạn nọc bò cạp heterometrus laoticus scorpionidae

45 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số Khảo sát tác động giảm đau ph n đoạn nọc bò cạp heterometrus laoticus scorpionidae Nguyễn Thị Thu Hiền Khoa Dược, Đại học Nguyễn Tất Thành ntthuhien@ntt.edu.vn Tóm tắt Lồi bị cạp Heterometrus laoticus Scorpionidae Việt Nam đ nghiên cứu cho thấy kết có chứa thành phần g y độc với động vật tr ng, có tác động kháng viêm, giảm đau Ngồi ra, nọc bị cạp cịn chứa thành phần tác động đến q trình đơng máu Từ nọc bị cạp thơ, chúng tơi đ tách ph n đoạn sắc ký lọc gel qua cột gel sephadex G-50 thử nghiệm tác động ph n đoạn cho tác động giảm đau tốt Ph n đoạn thứ cấp ph n đoạn tách phương pháp sắc ký l ng cao áp tiến hành thử nghiệm tác dụng giảm đau ngoại biên mơ hình g y đau qu n acid acetic Kết thu ph n đoạn 4.6 (2,38 mg/kg, sc), 4.7 (9,5 mg/kg, sc), 4.12 (9,5 mg/kg, sc), 4.15 (9,5 mg/kg, sc), 4.16 (9,5 mg/kg, sc), 4.20 (9,5 mg/kg, sc) có tác động giảm đau ngoại biên Trong đó, ph n đoạn 4.6, 4.7 cho tác động giảm đau ngoại biên tốt Các ph n đoạn lại 4.3, 4.4, 4.5, 4.8, 4.11, 4.13, 4.14, 4.23, 4.24, 4.25 chưa có tác động giảm đau ngoại biên liều 9,5 mg/kg tiêm da Nhận Được duyệt Cơng bố 14.12.2017 26.01.2018 01.02.2018 Từ khóa Taxus wallichiana, endophyte, Pestalotiopsis, kháng khu n, hoạt tính sinh học ® 2018 Journal of Science and Technology - NTTU Đ t vấn đề Bị cạp Đơng y từ lâu đ sử dụng làm thuốc với tên gọi toàn yết, yết tử, toàn trùng, yết v để trị động kinh tr em, uốn ván, bán thân bất toại, thiên đầu thống, tràng nhạc, quai bị… Bộ phận dùng làm thuốc tồn bị cạp phơi khơ ho c phần đuôi [1] Tuy nhiên, thành phần ch nh có tác động nọc bị cạp v n chưa nghiên cứu nhiều Trên giới, nhiều cơng trình nghiên cứu đ công bố thành phần ứng dụng y dược nọc bò cạp như: kaliotoxin, chất có tác động ức chế kênh Kali có nọc nhiều lồi bị cạp đ nghiên cứu cho thấy có tác động kháng viêm ng n xương [9] Chlorotoxin từ nọc bò cạp Leiurus quinquestriatus hebraeus có tác động điều trị ung thư n o [4] tiềm n ng tương lai công cụ phát không xâm lấn ung thư da, c tử cung, thực quản, trực tràng ung thư ph i [8] Lồi bị cạp H laoticus thuộc họ Scorpionidae, cịn có tên gọi khác bò cạp rừng Việt Nam, bò cạp kh ng lồ Thái Lan Phân bố chủ yếu Việt Nam, Thái Lan, Lào, Campuchia [6] Tại Việt Nam, lồi có nhiều thành phố Hồ Ch Minh, T y Ninh, Biên H a (Đồng Nai), An Giang (khu vực núi Thất Sơn), Bình Định, Quy Nhơn [7] Ở Việt Nam, số nghiên cứu bò cạp Heterometrus laoticus phân bố Tây Ninh An Giang cho thấy nọc loại bị cạp c ng có tác động đến thần kinh giảm đau, kháng viêm [3 Liều LD50 nọc bò cạp H laoticus chuột nhắt trắng 190 mg/kg thể trọng với đường tiêm da 12 mg/kg với đường tiêm t nh mạch [4] Nọc bị cạp H laoticus có tác động giảm đau trung ương ngoại biên hai mơ hình nh ng chuột g y đau qu n acid acetic có tác động kháng viêm in vivo mơ hình g y sưng ph bàn ch n carrageenan hai liều 9,5 mg/kg liều 19 mg/kg đường tiêm da [3] Tiếp theo nghiên cứu đó, ch ng tơi tiếp tục s u phân tích nọc bị cạp Heterometrus laoticus đuợc thu mua từ vùng An Giang khảo sát tác động giảmđau chúng Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 46 acethylsalicylat dl-lysin tương đương với 100 mg acid acethylsalicylic, thuốc giảm đau hạ sốt nhóm salicylat Aspirin dùng làm chất đối chứng thử nghiệm giảm đau ngoại biên Hình Lồi Heterometrus laoticus An Giang Hình Thu nọc phương pháp k ch th ch điện n Sắc ký lọc gel sephadex G-50 nọc b cạp Heterometrus laoticus Phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Động vật thí nghiệm Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino – tuần tu i, giống đực, trọng lượng từ 18 – 25 g, kh e mạnh, không dị tật, cung cấp Viện Vắc-xin sinh ph m y tế Nha Trang Chuột ni n định hai ngày phịng thí nghiệm Bộ mơn Dược lý trước tiến hành thử nghiệm Trong suốt trình thử nghiệm, chuột cung cấp thức n viên nước uống đầy đủ Các thử nghiệm tiến hành từ đến 17 m i ngày 2.1.2 Hóa chất - Các ph n đoạn nọc bị cạp H laoticus (An Giang) TS Hồng Ngọc Anh – Viện Khoa Học Công Nghệ Việt Nam cung cấp Nọc pha chế nước muối sinh lí, tiến hành siêu m lần, m i lần ph t đồng đều, cho vào chai, đậy nắp Dung dịch nọc ph n đoạn pha trước tiến hành thử nghiệm - Nọc bò cạp H laoticus tách thành ph n đoạn (PĐ): PĐ 1, PĐ 2, PĐ 3, PĐ 4, PĐ sắc ký lọc gel qua cột gel sephadex G-50 Ph n đoạn thứ cấp tiến hành phân tích với phương pháp sắc ký l ng cao áp Trong nghiên cứu tác động giảm đau nọc bị cạp H.laoticus, ch ng tơi đ chọn ph n đoạn có độc t nh để khảo sát tác động giảm đau chúng - Acid acetic (Nhà máy hóa học Guangdong Guanghua, Trung Quốc) acid hữu yếu, dễ bay hơi, có t nh n m n cao, tan nước, rượu ete theo t lệ Dung dịch acid acetic 0,7% pha từ dung dịch - Aspirin (Aspegic®, Sanofi Sythelabo): gói chứa 180 mg Đại học Nguyễn Tất Thành n Sắc ký l ng cao áp cột C18 b cạp Heterometrus laoticus 2.2 Phương pháp thử nghiệm tác động giảm đau Mơ hình g y đau qu n acid acetic Chuột chia ng u nhiên thành 19 nhóm, m i nhóm con, cho thuốc với lượng 0,1 ml/10 g thể trọng - Lô chứng: tiêm da dung dịch muối sinh lý 0,9% - Lô đối chứng: uống dung dịch aspirin liều 50 mg/kg - Lô thử nghiệm: tiêm da dung dịch ph n đoạn ,3,4 15 ph n đoạn thứ cấp 4.3, 4.4, 4.5, 4.7, 4.8, 4.11, 4.12, 4.13, 4.14, 4.15, 4.16, 4.20, 4.23, 4.24, 4.25 - Sau dùng thuốc 30 phút, tất chuột tiêm phúc mô dung dịch acid acetic 0,7% - M i chuột đ t vào bocal riêng, ghi nhận số lần đau qu n (chuột hóp bụng đồng thời du i chân sau) Quan sát ghi nhận số lần đau khoảng thời gian – 10 phút, 20 – 25 phút, 35 – 40 phút So sánh số lần đau qu n chuột nhóm thời điểm Sự giảm số lần đau qu n chuột nhóm thử so với nhóm chứng cho thấy tác động giảm đau ngoại biên chất thử nghiệm 47 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 2.3 Phân tích thống kê kết Các số liệu trình bày dạng số trung bình (Mean) ± SEM (Standard Error of Mean – sai số chu n số trung bình) Sự khác biệt lô xác định ph p kiểm Kruskal – Wallis Nếu có khác biệt lô, xác định khác biệt hai lô ph p kiểm MannWhitney với phần mềm thống kê Minitab 17.0 Sự khác xem có ý ngh a thống kê giá trị p < 0,05 Đồ thị v phần mềm SigmaPlot 12.0 Kết thảo luận 3.1 Tác dụng giảm đau ngoại biên ph n đoạn nọc b cạp Bảng Số lần đau qu n trung bình chuột lô vào thời điểm Thời điểm Lô TN - 10 phút 20 – 25 phút 35 - 40 phút Chứng 17,25 ± 2,92 12,375 ± 2,387 6,5 ± 2,204 9,31 ± 3,71 * 6,08 ± 3,68 * 0,375 ± 0,518 *# 1,5 ± 1,414 *# 0,375 ± 1,061 *# 0,375 ± 0,518 *# 3,846 ± 2,512 * 1,125 ± 0,354 *# 0,125 ± 0,354 *# 0±0 0±0 0±0 0±0 0,167±0,167 * 0±0 0±0 0±0 0±0 Aspirin (50mg/kg) Nọc bò cạp (19 mg/kg) Nọc bò cạp (9,5mg/kg) Ph n đoạn (19 mg/kg) Ph n đoạn (5 mg/kg) Ph n đoạn (19 mg/kg) (*), p