NGHIÊN CỨU LÂM SÀNG 28 TẠP CHÍ NỘI KHOA VIỆT NAM | SỐ 21/2021 Ngày nhận bài 06/10/2020 Ngày phản biện 05/11/2020 Ngày chấp nhận đăng 26/11/2020 Nghiên cứu phân bố kiểu gene CYP1A1 tại vị trí đa hình ([.]
NGHIÊN CỨU LÂM SÀNG Nghiên cứu phân bố kiểu gene CYP1A1 vị trí đa hình (rs4646903) đối tượng phơi nhiễm dioxin Đặng Thành Chung1, Nguyễn Lĩnh Toàn1, Cấn Văn Mão1, Nguyễn Bá Vượng2 Bộ môn Sinh lý bệnh, Học viện Quân y Bộ môn - Trung tâm Nội Dã chiến, Bệnh viện Quân y 103, Học viện Qn y TĨM TẮT Mục tiêu: Phân tích tần số kiểu gene CYP1A1 vị trí đa hình (rs4646903) đối tượng phơi nhiễm dioxin Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Gồm 100 đối tượng sinh sống lâu dài khu vực Sân bay Đà Nẵng Sân bay Biên Hịa, khơng phân biệt giới tính, có xét nghiệm dương tính với dioxin thời gian từ 2009 đến Tất bệnh nhân tự nguyện tham gia nghiên cứu Tthập thông tin chung đối tượng nghiên cứu theo mẫu thống Mẫu máu tách DNA theo qui trình tối ưu sử dụng phương pháp phenol-chloroform Sử dụng phương pháp real time PCR đặc hiệu allele bắt mồi hai đoạn phát đa hình gene Kết quả: Sự phân bố kiểu gen CYP1A1 MspI (rs4646903) người phơi nhiễm dioxin đa hình tỷ lệ tương ứng A/A (29%), A/G (45%), G/G (24%), T/G (2%) Kết luận: Tần suất kiểu gene CYP1A1 MspI (rs4646903) đối tượng phơi nhiễm chất da cam dioxin Việt Nam xác định có ý nghĩa khoa học việc tham chiếu so sánh với Ngày nhận bài: 06/10/2020 Ngày phản biện: 05/11/2020 Ngày chấp nhận đăng: 26/11/2020 28 TẠP CHÍ NỘI KHOA VIỆT NAM | SỐ 21/2021 đối tượng khỏe mạnh, sở để đánh giá mối liên quan với tình trạng ung thư gan đối tượng phơi nhiễm dioxin Từ khóa: Doxin, đa hình, CYP1A ĐẶT VẤN ĐỀ Dioxin nhóm aryl hydrocarbon dạng polychlorinated dibenzo-p-dioxins (PCDDs) bao gồm 75 hợp chất clo hóa cấu trúc đồng đẳng Chúng biết đến chất gây ô nhiễm môi trường độc tính cực mạnh số thành viên họ hợp chất Dioxin tiếp xúc với người chủ yếu qua đường hơ hấp tiêu hố - thơng qua thực phẩm thịt, cá, sữa tích luỹ ruột non tiết phân huỷ qua gan thành sản phẩm trung gian hydroxyl glucuronide hợp chất hợp chất sulfate Q trình chuyển hố có tham dự nhóm enzyme cytochrome P450 (CYP), tiêu biểu CYP1A1 giữ vai trị quan trọng điều hồ tiết dioxin điều hoà tổn thương gan dioxin gây nên CYP1A1 đa hình khác tính chuyển hố khác NGHIÊN CỨU LÂM SÀNG Phương pháp nghiên cứu Thông tin chung đối tượng nghiên cứu thu thập theo mẫu thống Mẫu máu tách DNA theo quy trình tối ưu sử dụng phương pháp phenol-chloroform Sử dụng phương pháp real time PCR đặc hiệu allele bắt mồi hai đoạn phát đa hình gene Bộ mồi xác định thể đa hình rs4646903 bao gồm hỗn hợp primers cho vị chí đa hình: Cặp mồi (Outer-CYP1A1 MSPI-F/ Outer-CYP1A1 MSPI-R) cho phép nhân lên băng nội chuẩn tương ứng với kích thước; Cặp mồi (Outer-CYP1A1 MSPI-F/ ARMS-G430-R) (ARMS-430A-F/Outer-CYP1A1 MSPI-R) cho phép chẩn đoán thể allele A G vị trí đa hình rs4646903 (Trình tự mồi cung cấp bạn đọc quan tâm liên hệ với nhóm tác giả) Sau thơng tin số liệu thu thập đầy đủ tiến hành phân tích trình bày dạng trung bình, độ lệch chuẩn, tần suất tỷ lệ phần trăm Cho đến người ta biết CYP1A1 có đa hình (rs4646903, rs79812015, rs7635427, rs377572943, rs4562713) Tuy nhiên số liệu phân bố kiểu gen CYP1A1 quần thể người khác hạn chế, đặc biệt quần thể người phơi nhiễm dioxin Việt Nam Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm phân tích tần số kiểu gen CYP1A1 MspI rs4646903 nhóm đối tượng phơi nhiễm dioxin, tính tần suất kiểu gen từ số liệu thu được, thảo luận đa dạng tần suất kiểu gen quần thể người gợi ý từ đa dạng quần thể người Việt ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 100 mẫu máu nhân dân sinh sống lâu dài khu vực Sân bay Đà Nẵng Sân bay Biên Hịa (khơng phân biệt giới tính) có xét nghiệm dương tính với dioxin thời gian từ 2009 đến Tất bệnh nhân tự nguyện tham gia nghiên cứu KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Bảng Đặc điểm tuổi đối tượng nghiên cứu Chỉ số X SD Max Min Tuổi 51.05 52 69 25 Nhận xét: Trong 100 đối tượng nghiên cứu, độ tuổi trung bình bệnh nhân nhiễm Dioxin 51.05 ± 9.55 tuổi, tuổi lớn 69, nhỏ 25 Bảng Đặc điểm giới đối tượng nghiên cứu Tỷ lệ n % Nam 88 88 Nữ 12 12 Nhóm Nhận xét: Trong nhóm phơi nhiễm dioxin, nam chiếm tỷ lệ cao nữ Tỷ lệ nam/ nữ = 7.33 Trong nam chiếm 88%, nữ chiếm 12 % TẠP CHÍ NỘI KHOA VIỆT NAM | SỐ 21/20210 29 NGHIÊN CỨU LÂM SÀNG Bảng Thống kê kiểu gene CYP1A1 vị trí đa hình (rs4646903) nhóm đối tượng phơi nhiễm dioxin TT CYP1A1 MSPI (A/T/G) TT CYP1A1 MSPI (A/T/G) TT CYP1A1 MSPI (A/T/G) TT CYP1A1 MSPI (A/T/G) A/G 26 A/G 51 G/G 76 G/G G/G 27 A/A 52 A/G 77 A/G A/A 28 A/A 53 A/G 78 A/A G/G 29 A/G 54 T/G 79 A/A A/G 30 A/A 55 A/G 80 G/G A/G 31 A/G 56 G/G 81 A/A G/G 32 A/G 57 A/G 82 A/G A/A 33 A/A 58 A/A 83 G/G A/G 34 G/G 59 A/A 84 A/G 10 A/A 35 A/G 60 G/G 85 G/G 11 A/A 36 A/A 61 A/A 86 A/G 12 G/G 37 A/G 62 T/G 87 A/G 13 G/G 38 A/G 63 A/A 88 A/G 14 A/G 39 G/G 64 A/G 89 G/G 15 G/G 40 A/G 65 A/G 90 A/G 16 A/G 41 G/G 66 A/A 91 G/G 17 A/A 42 A/A 67 G/G 92 A/G 18 A/A 43 A/A 68 A/A 93 G/G 19 G/G 44 G/G 69 A/G 94 A/A 20 A/A 45 A/A 70 G/G 95 A/G 21 G/G 46 A/G 71 A/G 96 A/G 22 A/G 47 A/G 72 A/G 97 A/G 23 A/G 48 A/G 73 A/G 98 A/G 24 A/A 49 A/A 74 A/G 99 A/A 25 A/G 50 A/G 75 A/A 100 A/G Trên sở thông kê kiểu gene từ 100 mẫu bệnh phẩm chúng tơi có kết luận sơ phân bố kiểu gene CYP1A1 MspI nhóm nhóm đối tượng phơi nhiễm dioxin bảng 30 TẠP CHÍ NỘI KHOA VIỆT NAM | SỐ 21/2021 NGHIÊN CỨU LÂM SÀNG Bảng Tỷ lệ phân bố kiểu gene CYP1A1 MspI mẫu nhóm đối tượng phơi nhiễm dioxin CYP1A1 MSPI (A/G) Kiểu gene Số lượng Tỷ lệ A/A 29 25% A/G 45 63% G/G 24 12% T/G 2% BÀN LUẬN Cho đến người ta ghi nhận nhiều kiểu gene/kiểu allele khác mã hoá cho biến thể CYP1A1 khác nhau, có biến thể phổ biến, với chức tương đối rõ ràng Phân bố kiểu gene khác biệt cộng đồng dân cư [1] Các biến thể có vai trị chuyển hố hợp chất hữu dạng mạnh vòng bao gồm dioxin cấp độ khác tạo gốc tự oxy hố khử cao, gián tiếp làm thay đổi trật tự nucleotide nhiễm sắc thể, làm thay đổi nguy mắc thể ung thư khác đỗi tượng phơi nhiễm Các cá thể mang kiểu gene CYP1A1 khác điều hồ q trình thải độc loại bỏ yếu tố gây đột biến cho thể mức độ khác Điều có nghĩa kiểu gene CYP1A1 có liên quan đến nguy ung thư tình trạng tổn thương gan độc tố hữu gây nên [2] Một số đa hình CYP1A1 mơ tả, thơng tin tìm thấy trang web danh pháp alen CYP người (http://www.cypalleles.ki.se) [3] Các chứng nghiên cứu cho thấy đa hình di truyền CYP1A1 có liên quan đến thay đổi cá nhân có liên quan với ung thư [4, 5] Mẫn cảm với ung thư xác định cách kích hoạt enzyme liên quan đến hoạt hóa hủy kích hoạt chất gây ung thư Những biến thể gen mã hóa enzyme làm thay đổi biểu chức chúng, có khả ảnh hưởng đến cân kích hoạt trao đổi chất loại bỏ chất độc, dẫn đến nhạy cảm cá nhân bệnh ung thư [6] Trên giới, kiểu gen CYP1A1 MSPI cá thể người Đơng Á khơng có khác biệt người Trung Quốc, Nhật Bản quần thể người Đơng Á khác Có thể kết luận số kiểu gen cá thể người Đông Á đặc biệt quần thể người Đơng Á coi nhóm đồng tần số kiểu gen CYP1A1 MSPI So sánh cá thể người Đông Á với người Ấn Độ cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê tần số kiểu gen (p < 0,0001) Các cá thể người châu Phi khơng xem nhóm đồng tần số kiểu gen CYP1A1 MSPI có khác biệt lớn tần số kiểu gen báo cáo cá thể có nguồn gốc khác Đối với cá thể người da trắng, số người Mỹ da trắng có đa dạng đáng kể tần số kiểu gen CYP1A1 MSPI (p