TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 11TCNCYH 158 (10) 2022 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA VIÊN NANG MỀM TECAN LÊN CHỨC NĂNG GAN, THẬN CHUỘT CỐNG THỰC NGHIỆM Vũ Việt Hằng*, Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội Từ k[.]
TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA VIÊN NANG MỀM TECAN LÊN CHỨC NĂNG GAN, THẬN CHUỘT CỐNG THỰC NGHIỆM Vũ Việt Hằng*, Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội Đánh giá ảnh hưởng viên nang mềm Tecan theo đường uống lên chức gan, thận chuột cống chủng Wistar thực nghiệm Chuột cống trắng uống liên tục viên nang mềm Tecan với mức liều 93,6 mg/kg/ngày 280,8 mg/kg/ngày vòng tuần Trước lúc uống thuốc, sau tuần tuần uống thuốc, chuột đánh giá chức gan chức thận Giải phẫu bệnh gan, thận đánh giá kết thúc nghiên cứu tuần thứ Kết nghiên cứu cho thấy viên nang Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày 280,8 mg/kg/ngày dùng đường uống liên tục tuần không ảnh hưởng đến hoạt độ AST, hoạt độ ALT, nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol tồn phần, albumin, creatinin máu hình ảnh mô bệnh học thận chuột cống trắng mức liều Hình ảnh mơ bệnh học gan lơ uống Tecan có tăng thối hóa so với lô chứng sinh học Tuy nhiên, số sinh hóa đánh giá chức gan lơ giới hạn bình thường Viên nang mềm Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày 280,8 mg/kg/ngày uống liên tục tuần không làm ảnh hưởng đến chức gan, thận chuột cống trắng Từ khóa: Viên nang mềm Tecan, chức gan, chức thận, chuột cống chủng Wistar I ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, việc nghiên cứu thuốc có nguồn gốc tự nhiên ngày phát triển mạnh mẽ.1 Xạ can vị dược liệu sử dụng từ lâu đời cho thấy hiệu chống viêm, giảm đau, giảm ho, long đờm lâm sàng nghiên cứu in vivo in vitro.2 Tuy nhiên, giới Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu tính an tồn Xạ can thực nghiệm Vì vậy, để đánh giá tính an tồn viên nang mềm Tecan với thành phần Xạ can, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài với hai mục tiêu: (1) Đánh giá ảnh hưởng viên nang mềm Tecan lên chức gan chuột cống thực nghiệm (2) Đánh giá ảnh hưởng viên nang mềm Tecan lên chức thận chuột cống thực nghiệm Tác giả liên hệ: Vũ Việt Hằng Trường Đại học Y Hà Nội Email: vhangyhct@gmail.com Ngày nhận: 25/07/2022 Ngày chấp nhận: 25 /08/2022 TCNCYH 158 (10) - 2022 II ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP Đối tượng Chất liệu nghiên cứu - Viên nang mềm Tecan, đạt tiêu chuẩn sở - Thành phần: Cao khô xạ can 130 mg chứa 60 mg Tectoridin 5mg Tectorigenin chiết xuất từ thân rễ sấy khô xạ can (Rhizoma Belamcandae) có tên khoa học: Belamcanda chinensis (L.) DC Iridaceae - Nơi sản xuất: Công ty cổ phần thương mại Dược Vật tư y tế Khải Hà - Dạng bào chế: Viên nang mềm - Liều dùng người: uống viên/ngày chia lần Đối tượng nghiên cứu Chuột cống trắng chủng Wistar, cân nặng 180 ± 20 g Trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng - Hà Nội cung cấp Động vật thí nghiệm ni điều kiện đầy đủ thức ăn nước uống phịng thí nghiệm Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội từ 11 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu Máy móc, hóa chất phục vụ nghiên cứu Kit định lượng enzym chất chuyển hoá máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần, creatinin hãng Hospitex Diagnostics (Italy) hãng DIALAB GmbH (Áo), định lượng máy Screen master hãng Hospitex Diagnostics (Italy) Các hoá chất xét nghiệm làm tiêu mô bệnh học Phương pháp Theo hướng dẫn WHO.3 Chuột cống trắng, giống, chia làm lô, lô 10 + Lô chứng: uống nước cất mL/100 g/ngày + Lô trị 1: Uống viên nang mềm Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày (liều tương đương liều điều trị dự kiến lâm sàng), uống mL/100 g/ngày + Lô trị 2: Uống viên nang mềm Tecan liều 280,8 mg/kg/ngày (gấp lần liều tương đương liều điều trị dự kiến lâm sàng), uống mL/100 g/ngày Chuột uống nước thuốc thử liên tục tuần, ngày lần vào buổi sáng Các tiêu theo dõi trước trình nghiên cứu - Đánh giá chức gan thông qua định lượng số chất chuyển hố máu: bilirubin tồn phần, albumin cholesterol toàn phần - Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzym máu: AST, ALT - Đánh giá chức thận thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết thanh: Các thông số theo dõi kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau tuần tuần uống thuốc Mô bệnh học: Sau tuần uống thuốc, chuột mổ để quan sát đại thể toàn quan Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận 30% số chuột lô Xử lý số liệu Các số liệu thu thập xử lý phương pháp thống kê y sinh học theo T test-Student test trước-sau (Avant-après) Kết trình bày dạng X ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 III KẾT QUẢ Đánh giá chức gan Bảng Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan đến nồng độ bilirubin toàn phần 12 Bilirubin tồn phần (mmol/L) Lơ chứng Lơ trị Lô trị p (so với chứng) Trước uống thuốc 13,41 ± 0,45 13,48 ± 0,45 13,45 ± 0,51 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 13,38 ± 0,59 13,48 ± 0,39 13,40 ± 0,48 > 0,05 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 13,53 ± 0,42 13,72 ± 0,43 13,25 ± 0,73 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian > 0,05 TCNCYH 158 (10) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Kết bảng cho thấy: sau tuần tuần uống Tecan, nồng độ bilirubin tồn phần máu chuột lơ trị (uống Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) lô trị (uống Tecan liều 280,8 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Bảng Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan đến nồng độ albumin Nồng độ albumin (g/dL) Lô chứng Lô trị Lô trị p (so với chứng) Trước uống thuốc 3,20 ± 0,22 3,32 ± 0,37 3,14 ± 0,37 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 3,29 ± 0,22 3,09 ± 0,53 3,18 ± 0,24 > 0,05 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 3,32 ± 0,27 3,11 ± 0,28 3,08 ± 0,39 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian Kết bảng cho thấy: sau tuần tuần uống viên nang mềm Tecan, nồng độ albumin máu chuột lô trị (uống Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) lô trị (uống > 0,05 Tecan liều 280,8 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Bảng Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan đến nồng độ cholesterol tồn phần Cholesterol (mmol/L) Lơ chứng Lô trị Lô trị p (so với chứng) Trước uống thuốc 1,50 ± 0,33 1,65 ± 0,30 1,54 ± 0,35 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 1,52 ± 0,21 1,43 ± 0,30 1,45 ± 0,27 > 0,05 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 1,58 ± 0,27 1,51 ± 0,32 1,44 ± 0,23 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian Kết bảng cho thấy: sau tuần tuần uống viên nang mềm Tecan, nồng cholesterol toàn phần máu chuột lô trị (uống Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) TCNCYH 158 (10) - 2022 độ > 0,05 lô trị (uống viên nang mềm Tecan liều 280,8 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) 13 4 Hoạtđộ độAST AST(UI/L) (UI/L) Hoạt TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 120 120 100 100 80 80 60 60 40 40 20 20 0 Trước uống thuốc Trước uống thuốc Lô chứng Lô chứng Sau tuần uống thuốc Sau tuần uống thuốc Lô trị Lô trị Sau tuần uống thuốc Sau tuần uống thuốc Lô trị Lô trị Hoạtđộ độALT ALT(UI/L) (UI/L) Hoạt Biểu Ảnh mềm Tecan đếnhoạt hoạt độAST AST Biểuđồ đồ1 Ảnhhưởng hưởngcủa viên viên nang nang mềm mềm Tecan Biểu đồ 1.1.Ảnh hưởng viên nang Tecanđến đến hoạtđộ độ AST Kết biểu 3.1 thấy: sau tuần tuần uống Tecan, hoạt độ AST máu chuột Kết ở đồ biểu đồcho cho thấy: sau tuần mềmuống TecanTecan, liều 280,8 không Kết ởquả biểu đồ 3.1 cho thấy: sau tuần tuần hoạtmg/kg/ngày) độ AST máucóchuột (uống tuần uống AST máu mg/kg/ngày) khác biệt có trị ý nghĩa so viên với lơnang chứng so lô trị viênTecan, nang hoạt mềmđộTecan liều 93,6 lô (uống mềm Tecan lô trị (uống viên nang mềm Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) lô trị (uống viên nang mềm Tecan chuột lô trị (uống viên nang mềm Tecan sánh hai thời điểm trước sau uống liều 280,8 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh hai thời điểm liều 280,8 khơng cótrịsự khácviên biệtnang có ý nghĩa so với liềumg/kg/ngày) 93,6 mg/kg/ngày) lô (uống thuốc thử lô (pchứng > 0,05).và so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) 50 50 45 45 40 40 35 35 30 30 25 25 20 20 15 15 10 10 55 00 Trước Sau uống thuốc thuốc Sau Sau 4 tuần tuần uống uống thuốc thuốc Trước uống uống thuốc thuốc Sau 2 tuần tuần uống Lô Lô trị 1 Lô trị trị 2 Lô chứng chứng Lô trị Lô Biểu đồ2 Ảnh hưởng hưởng viên viên nang mềm mềm Tecan Biểu Tecanđến đếnhoạt hoạtđộ độALT ALT Biểu đồ đồ Ảnh Ảnh hưởng của viên nang nang mềm Tecan đến hoạt độ ALT Kết biểu2 đồ cho thấy: sau tuần tuần ngày) khác cótrong ý nghĩa so với Kết uống Tecan, hoạt độbiệt ALT máu chuột ở Kết quả ở biểu biểu đồ đồ cho cho thấy: thấy: sau sau 2 tuần tuần và tuần uống Tecan, hoạt độ ALT máu chuột tuần uống Tecan, hoạt độ ALT máu lô chứng so sánh hai thời điểm trước 11 (uống Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) (uống (uống Tecan Tecan liều liều 280,8 280,8 mg/kg/ngày) mg/kg/ngày) khơng khơng có có lơ lơ trị trịchuột (uống 93,6 mg/kg/ngày) lô lô trị trị cảTecan lô trị liều (uống Tecan liều 93,6 mg/kg/ sau uống thuốc thử (p > 0,05) biệt ýý nghĩa so lô sánh hai thời thời điểm điểm trước trước và sau sau khi uống uống thuốc thuốc thử thử khác khácngày) biệt có có lô nghĩa so với với lô chứng chứng so so sánh giữa hai trị (uống Tecan liều 280,8 mg/kg/ (p (p > > 0,05) 0,05) 3.2 3.2 Đánh Đánh giá giá chức chức năng thận thận Bảng đến nồng nồng độ độ creatinin creatinin Bảng 4 Ảnh Ảnh hưởng hưởng của viên viên nang nang mềm mềm Tecan Tecan đến Thời Thời gian gian Trước uống Trước14 uống thuốc thuốc Sau uống thuốc Sau uống thuốc 2 tuần tuần Lô Lô chứng chứng 0,81 0,81 ± ± 0,17 0,17 0,85 ± 0,16 0,85 ± 0,16 Creatinin (mg/dL) Creatinin (mg/dL) Lô trị trị 1 Lô 0,79 ± ± 0,17 0,17 0,79 0,80 ± ± 0,17 0,17 0,80 p (so (so với với p chứng) Lô trị trị 2 chứng) Lô TCNCYH 158 (10) 0,78 ± 0,17 >- 2022 0,05 0,78 ± 0,17 > 0,05 0,83 ± ± 0,15 0,15 > 0,05 0,05 0,83 > TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Đánh giá chức thận Bảng Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan đến nồng độ creatinin Creatinin (mg/dL) Lô chứng Lô trị Lô trị p (so với chứng) Trước uống thuốc 0,81 ± 0,17 0,79 ± 0,17 0,78 ± 0,17 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 0,85 ± 0,16 0,80 ± 0,17 0,83 ± 0,15 > 0,05 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau uống thuốc tuần 0,83 ± 0,19 0,82 ± 0,10 0,75 ± 0,16 p (test trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian Kết bảng cho thấy: sau tuần tuần uống Tecan, lô trị (uống Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) lô trị (uống Tecan liều 280,8 mg/kg/ngày), nồng độ creatinin máu chuột khơng có thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan đến hình thái cấu trúc vi thể gan, thận chuột Sau tuần uống thuốc: > 0,05 Hình thái đại thể gan thận: Trên tất chuột thực nghiệm (cả lô chứng lô trị), không quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể gan thận Hình thái vi thể gan thận: Sau tuần uống thuốc thử, viên nang Tecan mức liều làm tăng mức độ thối hóa cấu trúc vi thể gan so với lơ chứng sinh học (Hình 1) Trên hình thái vi thể thận, khơng có khác biệt so sánh lô dùng viên nang Tecan lơ chứng sinh học (Hình 2) Lơ chứng Lơ trị Hình Hình ảnh vi thể gan (HE × 400) Lô trị Lô chứng Lô trị Lô trị Hình Hình ảnh vi thể thận (HE × 400) TCNCYH 158 (10) - 2022 15 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC IV BÀN LUẬN Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan lên chức gan chuột cống thực nghiệm Trong thể, gan có nhiều chức quan trọng Việc đưa thuốc vào thể gây độc với gan, làm ảnh hưởng đến chức quan Vì vậy, đánh giá độc tính thuốc nghiên cứu ảnh hưởng thuốc chức gan cần thiết Để đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan, nồng độ enzym có nguồn gốc gan (AST, ALT) huyết thường định lượng Ngoài ra, người ta đánh giá chức gan qua số nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần albumin máu.4 Kết cho thấy sau tuần tuần uống viên nang Tecan, số hoạt độ AST, ALT, nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol tồn phần albumin máu khơng thay đổi có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan lên chức thận chuột cống thực nghiệm Thận quan tiết thể, nhu mô thận dễ tổn thương chất nội sinh ngoại sinh.5 Vì vậy, đưa thuốc vào thể thuốc gây tổn thương thận, từ ảnh hưởng đến chức thận Creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phục thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin máu tăng sớm ure Do vậy, creatinin máu tiêu tin cậy quan trọng ure máu, nên dùng để đánh giá theo dõi chức thận.6 Kết nghiên cứu cho thấy nồng độ creatinin máu chuột sau dùng viên nang Tecan khơng có thay đổi khác biệt với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử 16 Ảnh hưởng viên nang mềm Tecan lên hình thái cấu trúc vi thể gan, thận chuột cống thực nghiệm Theo hướng dẫn WHO, giải phẫu đại thể vi thể gan thận số bắt buộc đánh giá độc tính bán trường diễn.3 Ngồi ra, xét nghiệm vi thể cịn tiêu chuẩn vàng để đánh giá tổn thương quan chịu trách nhiệm chuyển hóa thải trừ thuốc gan thận.7 Trên tất chuột nghiên cứu, khơng quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan Như vậy, viên nang Tecn không ảnh hưởng đến cấu trúc đại thể gan thận sau tuần dùng thuốc Kết giải phẫu bệnh cho thấy, viên nang mềm Tecan liều dùng đường uống chuột cống liên tục tuần không làm ảnh hưởng đến cấu trúc vi thể thận; nhiên, hình ảnh mơ bệnh học gan có thay đổi so với lơ chứng sinh học Mặc dù có tổn thương xét nghiệm vi thể gan lô trị lô trị chức gan thông qua số sinh hóa máu giới hạn bình thường Điều cho thấy tổn thương tế bào gan mức độ nhẹ số tế bào, phát mức độ vi thể, cịn lại đa số tế bào bình thường nên có tượng hoạt động bù trừ Do đó, số sinh hóa chuột hồn tồn bình thường sau dùng thuốc thử Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu độc tính Xạ can công bố giới Tectorienin hoạt chất Xạ can Tectorienin dùng liều lên đến 300 mg/kg cho chuột cống uống liên tục 28 ngày độc tính chức gan chức thận chuột.8 TCNCYH 158 (10) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC V KẾT LUẬN Viên nang mềm Tecan liều 93,6 mg/kg/ ngày (tương đương với liều điều trị dự kiến lâm sàng) 280,8 mg/kg/ngày (gấp lần liều tương đương với liều điều trị dự kiến lâm sàng) dùng đường uống liên tục tuần không làm ảnh hưởng đến chức gan, thận chuột cống thông qua không làm thay đổi hoạt độ AST, ALT, nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần, albumin, creatinin máu hình ảnh mơ bệnh học thận chuột cống trắng mức liều Hình ảnh mơ bệnh học gan có thay đổi so với lô chứng sinh học nhiên xét nghiệm sinh hóa đánh giá chức gan giới hạn bình thường TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Trung Đàm Phương pháp xác định độc tính thuốc Nhà xuất Y học 2014 Viện dược liệu Cây thuốc động vật làm thuốc Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật 2007 World Health Organization Working group on the safety and efficacy of herbal medicine Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 2000 World Health Organization Global report on traditional and complementary medicine 2019 OECD Guidelines for the testing of chemicals repeated dose oral toxicity study in rodents Environmental Health and Safety Monograph Series on Testing and Assesment 2008; No 407 National Research Council Toxicity testing for assessing environmental agents Interim Report Washington, DC, USA: National Academies Press 2006 Olson H, Betton G, Robinson D, et al Concordance of the toxicity of pharmaceuticals in humans and in animals Regulatory Toxicology and Pharmacology 2000; 32(1): 56–67 Ha LM, Que DTN, Huyen DTT, et al Toxicity, analgesic and anti-inflammatory activities of tectorigenin Immunopharmacology and Immunotoxicology 2013; 35(3) Summary EVALUATION OF THE INFLUENCE OF TECAN CAPSULES ON LIVER AND KIDNEY FUNCTION IN EXPERIMENTAL RATS The research was conducted to evaluated the influence of Tecan capsules on liver and kidney function of experimental Wistar rats Rats were given continuous oral administration of Tecan capsules at 93.6 mg/kg and 280.8 mg/kg during weeks Hepato-renal toxicity was assessed before, at weeks and weeks of taking capsules Micro-histological images of liver and kidney were obtained at the end of the experiment The research showed that Tecan capsules at 93.6 mg/kg and 280.8 mg/kg taken continuously during weeks had no effecton AST, ALT, total bilirubin, total cholesterol, albumin, creatinine in serum and micro-histological images of the kidney However, there was a slight change in micro-histological images of the liver in rats treated with Tecan capsules but the liver function parameters remained in the safe range Conclusion: Tecan capsules at 93.6 mg/ kg and 280.8 mg/kg taken continuously during weeks had no effect on liver function and kidney function of experimental rats Keywords: Tecan capsules, liver function, kidney function, Wistar rats TCNCYH 158 (10) - 2022 17 ... độALT ALT(UI/L) (UI/L) Hoạt Biểu Ảnh mềm Tecan đếnhoạt hoạt độAST AST Biểuđồ đồ1 Ảnhhưởng hưởngcủa viên viên nang nang mềm mềm Tecan Biểu đồ 1.1 .Ảnh hưởng viên nang Tecan? ?ến đến hoạtđộ độ AST Kết... chứng chứng Lô trị Lô Biểu đồ2 Ảnh hưởng hưởng viên viên nang mềm mềm Tecan Biểu Tecan? ?ến đếnhoạt hoạtđộ độALT ALT Biểu đồ đồ Ảnh Ảnh hưởng của viên nang nang mềm Tecan đến hoạt độ ALT Kết biểu2... nghĩa so viên với l? ?nang chứng so lô trị viênTecan, nang hoạt mềm? ?? ?Tecan liều 93,6 lô (uống mềm Tecan lô trị (uống viên nang mềm Tecan liều 93,6 mg/kg/ngày) lô trị (uống viên nang mềm Tecan chuột