BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH MAI NGUYỄN NGỌC TRÁC NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG DƯỢC LÝ HƯỚNG BẢO VỆ GAN, THẬN CỦA BÍ KỲ NAM (Hydnophytum formicarum Jack , Rubiaceae) LUẬN[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH MAI NGUYỄN NGỌC TRÁC NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG DƯỢC LÝ HƯỚNG BẢO VỆ GAN, THẬN CỦA BÍ KỲ NAM (Hydnophytum formicarum Jack., Rubiaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH, Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH MAI NGUYỄN NGỌC TRÁC NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG DƯỢC LÝ HƯỚNG BẢO VỆ GAN, THẬN CỦA BÍ KỲ NAM (Hydnophytum formicarum Jack., Rubiaceae) NGÀNH: DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 62720405 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI PGS TS NGUYỄN PHƯƠNG DUNG TP HỒ CHÍ MINH, Năm 2020 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ v MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN .1 1.1 BÍ KỲ NAM 1.2 STRESS OXY HÓA 10 1.3 GAN VÀ TRESS OXY HÓA .20 1.4 THẬN VÀ STRESS OXY HÓA 23 1.5 CÁC MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG BẢO VỆ GAN 26 1.6 CÁC MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN 35 1.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ 41 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .45 2.1 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 45 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 46 2.3 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 46 2.4 DUNG MƠI , HĨA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ .47 2.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .50 2.6 PHÂN TÍCH KẾT QUẢ VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ .69 CHƯƠNG KẾT QUẢ 70 3.1 ĐỊNH DANH LOÀI BÍ KỲ NAM 70 3.2 CHIẾT XUẤT VÀ SÀNG LỌC CÁC CAO TỒN PHẦN BÍ KỲ NAM 76 3.3 CHIẾT XUẤT VÀ KHẢO SÁT CHẤT LƯỢNG CAO CỒN 50% 80 3.4 CÁC CAO PHÂN ĐOẠN VÀ HOẠT TÍNH CAO PHÂN ĐOẠN 82 3.5 ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG CỦA CAO CỒN 50% 84 3.6 TÁC ĐỘNG BẢO VỆ GAN CỦA BÍ KỲ NAM 85 3.7 TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN CỦA BÍ KỲ NAM 98 3.8 ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN ĐƯỜNG UỐNG CỦA CAO CỒN 50% BÍ KỲ NAM 111 CHƯƠNG BÀN LUẬN 117 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .148 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án Mai Nguyễn Ngọc Trác ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ADH Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase rượu AND Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic AIN Acute intersititial nephritis Viêm ống thận mô kẽ cấp AKI Acute kidney injury Tổn thương thận cấp ALD Alcoholic liver disease Bệnh gan rượu ALDH Aldehyde dehydrogenase Aldehyd dehydrogenase ALT Alanine aminotransferase Alanin aminotransferase AO Acridine orange Acridin cam ARE Antioxidant response element Yếu tố đáp ứng chống oxy hóa ARF Acute renal failure Suy thận cấp ARN Ribonucleic acid Acid ribonucleic AST Aspartate aminotransferase Aspartat aminotransferase ATN Acute tubular necrosis Hoại tử ống thận cấp BSA Bovine Serum Abumin Albumin huyết bò CAT Catalase Catalase CCl4 Carbon tetrachloride Cacbon tetraclorua CKD Chronic kidney disease Bệnh thận mãn CYP Cytochrome Cytochrom DAMPS Damage-associated molecular patterns Thành phần phân tử kèm tổn thương DCM Dichloromethane Dichloromethan DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxit DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DTNB 5,5’-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid) Acid 5,5’-dithio-bis-(2nitrobenzoic) EDTA Ethylene Diamine Tetracetic Acid Acid Ethylen Diamin Tetracetic ii EGCG Epigallocatechin gallate Epigallocatechin gallat EMEM Eagle's Minimum Essential Medium Môi trường thiết yếu tối thiểu Eagle EPO Erythropoietin Erythropoietin ERA-EDTA European Renal Association - Tổ chức cấy ghép, lọc thận – Hiệp European Dialysis and Transplant hội thận Châu Âu Association ERK Extracellular signal-regulated kinase Kinase điều hịa tín hiệu ngoại bào EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat GPx Glutathione peroxidase Glutathion peroxidase GSH Glutathione Glutathion GGT Gamma-glutamyl transpeptidase Gamma-glutamyl transpeptidase Hb Hemoglobin Hemoglobin HCC Hepatocellular carcinoma Ung thư biểu mô tế bào gan HE Hematoxylin Eosin Hematoxylin Eosin HO-1 Heme oxygenase-1 Heme oxygenase-1 HSOS Hepatic sinusoidal obstruction Hội chứng tắc nghẽn xoang gan syndrome HTCO Hoạt tính chống oxy hóa IL Interleukin Interleukin iNOS Inducible nitric oxide synthase Cảm ứng tổng hợp nitric oxid I.P Intraperitoneal injection Tiêm phúc mô ISN International Society of Nephrology Hiệp hội thận quốc tế Keap1 Kelch-like ECH-associated protein Protein liên kết với ECH giống Kelch LDH Lactate dehydrogenase Lactat dehydrogenase MAPK Mitogen-activated protein kinase Protein kinase hoạt hóa phân bào MDA Malondialdehyde Malondialdehyd ii MTT 3-(4,5-Dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5- 3-(4,5-Dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5- Diphenyltetrazolium bromide Diphenyltetrazolium bromid) NAC N-acetyl cysteine N-acetyl cystein NAFLD Non-alcoholic fatty liver disease Bệnh gan nhiễm mỡ không rượu NADH Nicotinamide adenine dinucleotide Nicotinamid adenin dinucleotid NALFD Nonalcoholic fatty liver disease Bệnh gan nhiễm mỡ không rượu NAPQ1 N-acetyl-p-benzoquinone imine N-acetyl-p-benzoquinon imin NF-κB Nuclear Factor-kappa B Yếu tố nhân kappa B NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân NOQ1 NAD(P)H-quinone oxidoreductase NAD(P)H-quinon oxidoreductase Nrf2 Nuclear erythroid 2-related factor Yếu tố liên quan nhân erythroid NSAID Non-steroidal anti-inflammatory drug Thuốc kháng viêm không steroid OD Optical Density Mật độ quang P.O Per os Đường uống PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp PEG Polyethylene glycol Polyethylen glycol PVDF Polyvinylidene difluoride Polyvinyliden difluorid rbcL Ribulose-1,5-biphosphate carboxylate Gen ribulose-1,5- biphosphat carboxylat RNS Reactive nitrogen species Các gốc chứa ni tơ hoạt động ROS Reactive oxygen species Các gốc chứa oxy hoạt động S.C Subcutaneous Dưới da SOD Superoxide Superoxid TAA Thioacetamide Thioacetamid TGF Transforming growth factor Yếu tố tăng trưởng TNB 5'- Thio - 2-nitrobenzoic acid Acid 5'- Thio - 2-nitrobenzoic TNF-α Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u WHO World Health Organisation Tổ chức Y tế Thế giới iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các ngun tố vơ có Bí kỳ nam Bảng 1.2 Hoạt tính kháng khuẩn Bí kỳ nam Bảng 1.3 Một số mô hình in vitro gây tổn thương gan CCl4 tế bào HepG2 .28 Bảng 1.4 So sánh mơ hình đánh giá tác động bảo vệ gan 29 Bảng 1.5 Một số mơ hình in vivo gây tổn thương gan CCl4 .32 Bảng 1.6 Một số nghiên cứu mơ hình in vitro gây độc tế bào thận 36 Bảng 1.7 Một số nghiên cứu mơ hình in vivo gây độc thận 40 Bảng 2.1 Danh mục dung mơi, hóa chất sử dụng nghiên cứu 47 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng nghiên cứu 49 Bảng 3.1 Trình tự cặp mồi rbcL sử dụng phản ứng PCR 73 Bảng 3.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa học dược liệu Bí kỳ nam 74 Bảng 3.3 Độ ẩm độ tro dược liệu Bí kỳ nam 75 Bảng 3.4 Hàm lượng polyphenol toàn phần dược liệu Bí kỳ nam .76 Bảng 3.5 Phương trình tuyến tính, IC50 cao Bí kỳ nam (DPPH) 77 Bảng 3.6 Phương trình tuyến tính, IC50 cao Bí kỳ nam (MDA) 77 Bảng 3.7 Hoạt tính cao Bí kỳ nam tăng trưởng dòng tế bào .78 Bảng 3.8 Giá trị hồi quy đa thức IC50 cao toàn phần Bí kỳ nam 80 Bảng 3.9 Độ ẩm độ tro cao cồn 50% từ thân củ Bí kỳ nam 81 Bảng 3.10 Giá trị IC50 cao phân đoạn Bí kỳ nam (DPPH) 82 Bảng 3.11 Giá trị IC50 cao phân đoạn Bí kỳ nam (MDA) 82 Bảng 3.12 Tác động Bí kỳ nam lên tăng trưởng tế bào gan HepG2 .85 Bảng 3.13 Tác động Bí kỳ nam phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào gan HepG2 CCl4 gây .85 Bảng 3.14 Tác động Bí kỳ nam phịng ngừa tình trạng hoại tử tế bào gan HepG2 CCl4 gây .89 Bảng 3.15 Trọng lượng chuột khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam 91 Bảng 3.16 Hoạt tính TNF-α khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam .93 Bảng 3.17 Kết vi thể gan chuột thử nghiệm bảo vệ gan Bí kỳ nam 96 iii Bảng 3.18 Tác động cisplatin nồng độ thời gian xử lý khác lên tế bào HEK 293 nuôi cấy mật độ khác 98 Bảng 3.19 Tác động cisplatin 25 µM sau 24 xử lý lên tế bào HEK 293 100 Bảng 3.20 Tác động Bí kỳ nam lên tăng trưởng tế bào HEK 293 101 Bảng 3.21 Tác động phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào thận HEK 293 cisplatin gây 102 Bảng 3.22 Tác động Bí kỳ nam phòng ngừa hoại tử tế bào thận HEK 293 cisplatin gây 104 Bảng 3.23 Trọng lượng thể chuột tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 106 Bảng 3.24 Nồng độ ure creatinin máu khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 107 Bảng 3.25 Hàm lượng GSH thận khảo sát tác động bảo vệ thận in vivo 110 Bảng 3.26 Vi thể thận chuột khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 111 Bảng 3.27 Trọng lượng chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn 112 Bảng 3.28 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số hồng cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn 113 Bảng 3.29 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số bạch cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn 114 Bảng 3.30 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số tiểu cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn 114 Bảng 3.31 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số chức gan thận thử nghiệm độc tính bán trường diễn 115 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Các chi Tổ kiến thuộc họ Rubiaceae Hình 1.2 Vị trí phân loại Bí kỳ nam .2 Hình 1.3 Bí kỳ nam (H formicarum) .3 Hình 1.4 Bí kỳ nam (H formicarum Jack.) Kỳ nam gai (M tuberosa) .3 Hình 1.5 Một số hợp chất phân lập từ Bí kỳ nam Hình 1.6 Stress oxy hóa 14 Hình 1.7 Mối tương quan stress oxy hóa viêm 17 Hình 1.8 Cấu trúc vùng Keap1 18 Hình 1.9 Cấu trúc vùng Nrf2 .18 Hình 1.10 Vai trị Nrf2 chế điều hịa stress oxy hóa 19 Hình 1.11 Cấu tạo gan .20 Hình 1.12 Cấu trúc thận nephron 23 Hình 1.13 Stress oxy hóa viêm chế tổn thương gan CCl4 32 Hình 1.14 Tế bào HEK 293 nhuộm miễn dịch huỳnh quang mơi trường 37 Hình 1.15 Stress oxy hóa viêm tổn thương thận cisplatin .38 Hình 2.1 Sơ đồ tiến hành nghiên cứu 45 Hình 3.1 Bí kỳ nam 70 Hình 3.2 Cấu tạo giải phẫu rễ Bí kỳ nam 71 Hình 3.3 Cấu tạo giải phẫu thân Bí kỳ nam 72 Hình 3.4 Cấu tạo giải phẫu Bí kỳ nam 72 Hình 3.5 Bột thân củ Bí kỳ nam 73 Hình 3.6 Kết điện di ADN mẫu tươi Bí kỳ nam sản phẩm PCR .73 Hình 3.7 Kết định tính polyphenol dược liệu Bí kỳ nam 75 Hình 3.8 Các cao tồn phần từ thân củ Bí kỳ nam 76 Hình 3.9 Cao cồn 50% từ thân củ Bí kỳ nam 81 Hình 3.10 Cấu trúc hợp chất BK1 (a) BK2 (b) 84 Hình 3.11 Tế bào HepG2 sau 24 xử lý .87 iv Hình 3.12 Tác động phịng ngừa tăng sinh gốc tự tế bào gan HepG2 gây CCl4 mẫu thử Bí kỳ nam 88 Hình 3.13 Tác động Bí kỳ nam kích hoạt protein Nrf2 tế bào HepG2 90 Hình 3.14 Hoạt tính AST, ALT tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam 92 Hình 3.15 Hoạt tính LDH khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam 93 Hình 3.16 Hàm lượng GSH gan khảo sát tác động bảo vệ gan in vivo Bí kỳ nam CCl4 gây .95 Hình 3.17 Hàm lượng MDA gan khảo sát tác động bảo vệ gan in vivo Bí kỳ nam CCl4 gây 95 Hình 3.18 Đại thể gan chuột khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam 96 Hình 3.19 Vi thể mô gan khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam (40X) 97 Hình 3.20 Tỷ lệ ức chế tế bào HEK 293 nồng độ cisplatin, thời gian nuôi cấy mật độ tế bào khác 100 Hình 3.21 Tế bào HEK 239 sinh lý sau 24 xử lý với cisplatin 25 µM 101 Hình 3.22 Tế bào HEK 293 sau 24 xử lý 103 Hình 3.23 Tác động Bí kỳ nam phịng ngừa tăng sinh gốc tự tế bào thận HEK 293 cisplatin gây 105 Hình 3.24 Tác động Bí kỳ nam kích hoạt protein Nrf2 tế bào HEK 293 105 Hình 3.25 Nồng độ LDH khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 108 Hình 3.26 Hoạt tính TNF-α khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 108 Hình 3.27 Đại thể thận chuột khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 110 Hình 3.28 Vi thể thận chuột khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 111 Hình 3.29 Hình ảnh gan thận chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Bí kỳ nam 112 Hình 3.30 Hình ảnh vi thể gan chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn 116 Hình 3.31 Hình ảnh vi thể thận thử nghiệm độc tính bán trường diễn cao cồn 50% Bí kỳ nam 116 v DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao phân đoạn Bí kỳ nam 57 Sơ đồ 2.2 Quy trình phân lập chất từ cao phân đoạn Bí kỳ nam 58 MỞ ĐẦU Gan thận đóng vai trị quan trọng q trình chuyển hóa tiết thể Do cửa ngõ tiếp xúc đồng thời nơi chuyển hóa, tiết chất nên gan thận hai quan chịu ảnh hưởng nhiều tác nhân gây tổn thương Các bệnh gan thận chiếm tỷ lệ mắc bệnh tử vong lớn giới Theo báo cáo gánh nặng bệnh tật giới năm 2019, bệnh gan chiếm khoảng triệu ca tử vong năm [32] Trong đó, theo báo cáo năm 2018 Hiệp hội thận quốc tế (International Society of Nephrology, ISN) Tổ chức cấy ghép, lọc thận – Hiệp hội thận Châu Âu (European Renal Association - European Dialysis and Transplant Association, ERA - EDTA), ước tính khoảng 850 triệu người toàn giới mắc bệnh thận [323], số gần gấp đôi số người mắc bệnh đái tháo đường (422 triệu, [234]) gấp 20 lần số người nhiễm HIV/AIDS (37,9 triệu [327]) Stress oxy hóa chứng minh chế chính dẫn đến tổn thương gan, thận cấp mạn tính [20], [131], [205] Nhiều hợp chất polyphenol từ dược liệu với tiềm chống oxy hóa tốt chứng minh tác động bảo vệ gan silymarin từ Kế sữa (Silybum marianum L.) [290], curcumin từ Nghệ (Curcuma longa) [102], andrographolid neoandrographolid từ Xuyên tâm liên (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees), phyllanthin glycyrrhizin từ Diệp hạ châu (Phyllanthus niruri L.) [185]; bảo vệ thận ginsenoside Rb3 từ Sâm (Panax quonthefolius) [306]; ginsenoside Rh4 Rk3 từ Nhân sâm (Panax ginseng) [34], hesperidin trái họ Cam quýt [240]; isoliquiritigenin từ loài Glycyrrhiza [151] Theo Tổ chức Y tế giới (WHO), ước tính khoảng 60 – 90% dân số nước phát triển sử dụng y học cổ truyền để đáp ứng nhu cầu chăm sóc sức khỏe ban đầu [300] Xu hướng sử dụng y học cổ truyền hỗ trợ điều trị bệnh thúc đẩy nhà khoa học tiến hành nhiều nghiên cứu loại dược liệu hợp chất chiết xuất thiên nhiên với hoạt tính sinh học tiềm khác Với khí hậu nhiệt đới gió mùa, Việt Nam có nguồn dược liệu phong phú đa dạng, có bề dày kinh nghiệm việc sử dụng thuốc để chữa bệnh, kho tàng giúp phát triển nghiên cứu tạo sản phẩm từ thiên nhiên phục vụ cơng tác chăm sóc sức khỏe phát triển kinh tế Một loài dược liệu quý Việt Nam biết đến Bí kỳ nam (Hydnophytum formicarum Jack.), loài thuộc nhóm “Tổ kiến” (ant-plants), họ Cà phê (Rubiaceae) Một vài lồi Tổ kiến có giá trị chữa bệnh H formicarum Jack., Myrmecodia pendens, M tuberosa Jack [123], [165] Bí kỳ nam (H formicarum) thuộc chi Hydnophytum thường phân bố nước châu Á Indonesia, Thái Lan, Malaysia, Việt Nam Một số nghiên cứu bước đầu cho thấy lồi có thành phần polyphenol, có tác dụng chống oxy hóa in vitro [223], kháng khuẩn [222], ức chế α-glucosidase [84], ức chế tăng trưởng tế bào u xơ HT1080 [285], tế bào ung thư cổ tử cung Hela [248] bảo vệ tế bào thần kinh [97] Tại Việt Nam, Bí kỳ nam tìm thấy Vườn quốc gia Phú Quốc, trung tâm đa dạng sinh học nước Đây nơi có hệ động thực vật phong phú chứa nhiều nguồn gen quý cần lưu trữ, phát triển bảo tồn [10] Từ xa xưa, dân gian Việt Nam dùng Bí kỳ nam chữa viêm gan, vàng da, đau nhức gân xương, bong gân, thấp khớp, đau bụng, tiêu chảy… cách sắc nấu cao uống [5] Tuy nhiên, đến chưa có nhiều nghiên cứu tác động dược lý tính an toàn dược liệu Với mong muốn nghiên cứu cách khoa học công dụng dân gian, tác dụng dược lý tính an tồn dược liệu từ góp phần tạo sở cho việc bảo tồn, phát triển, sản xuất sản phẩm thiên nhiên có chất lượng gia tăng giá trị sử dụng Bí kỳ nam, “Nghiên cứu tác động dược lý hướng bảo vệ gan, thận Bí kỳ nam (Hydnophytum formicarum Jack., Rubiaceae)” thực với nội dung cụ thể: Phân tích thực vật định danh loài Bí kỳ nam thu hái Vườn quốc gia Phú Quốc, tỉnh Kiên Giang Chiết xuất sàng lọc cao toàn phần Bí kỳ nam Lựa chọn khảo sát chất lượng cao chiết Chiết xuất cao phân đoạn từ cao toàn phần phân lập chất Khảo sát tác dụng dược lý in vitro in vivo theo hướng bảo vệ gan, thận Bí kỳ nam Khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn đường uống cao Bí kỳ nam 1 Chương 1.1 TỔNG QUAN BÍ KỲ NAM 1.1.1 Vị trí phân loại Bí kỳ nam có tên khoa học Hydnophytum formicarum Jack lồi thuộc chi Hydnophytum, thuộc nhóm ‘Tổ kiến’ (ant-plants), họ Cà phê (Rubiaceae) Tên gọi ‘Tổ kiến’ tượng trưng cho nhóm thực vật sống phụ sinh lồi cổ thụ, có thân phình to tạo khoang chằng chịt, nơi cộng sinh lồi kiến Các ‘Tổ kiến’ cung cấp mơi trường sống, chất dinh dưỡng cho kiến; đổi lại, kiến cung cấp chất dinh dưỡng cho cách để lại chất thải đường hầm bên tổ Sự cộng sinh cho phép thực vật thu thập chất dinh dưỡng hiệu từ diện tích lớn nhiều so với rễ che phủ [82] Hydnophytum chi lớn năm chi nhóm Tổ kiến, bốn chi cịn lại Anthorrhiza, Myrmecodia, Myrmephytum Squamellaria (Hình 1.1) [126] Hình 1.1 Các chi Tổ kiến thuộc họ Rubiaceae “Nguồn: Jebb Huxley, 2009” [126] Trong chi Tổ kiến, chi lớn biết đến Hydnophytum gồm 94 lồi, có phân bố rộng nhất, kéo dài từ quần đảo Andaman, Nam Thái Lan, Myanmar, Campuchia, Việt Nam, Malaysia, Indonesia, Philippines, Papua đảo, quần đảo Solomon, Vanuatu, Fiji Peninsula Úc Người dân Sumatra gọi Tổ kiến rumah semut; Jawa: ulek-ulek polo; Papua: Lokon; Malaysia: periok hantu; Thái Lan: Hua roi roo Việt Nam: Bí kỳ nam, Kì nam kiến [114] Ở Việt Nam, Bí kỳ nam thường phân bố tỉnh: Kontum, Gia Lai, Đắk Lắk, Đồng Nai, Lâm Đồng, Quảng Ngãi, Bà Rịa - Vũng Tàu, Vườn quốc gia Bù Gia Mập, Bình Phước, Vườn quốc gia Phú Quốc (Kiên Giang) Vị trí phân loại Bí kỳ nam: Giới thực vật Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa môi (Lamiidae) Bộ Long Đởm (Gentianales) Họ Cà Phê (Rubiaceae) Chi Hydnophytum Bí kỳ nam (Hydnophytum formicarum Jack.) Hình 1.2 Vị trí phân loại Bí kỳ nam “Nguồn: Jebb Huxley, 2009” [126] 1.1.2 Đặc điểm thực vật Bí kỳ nam có thân nhỏ, sống phụ sinh bám cành gỗ cao Thân phình thành củ lớn, dày to đến 30 cm, mặt sần sùi, màu nâu xám bên có lỗ hổng chằng chịt kiến sống cộng sinh hình thành nhiều lỗ tổ ong (Hình 1.3a) Từ thân củ mọc rễ nhỏ phía vài cành mang phía Cành ngắn mập, màu nâu Lá mọc đối, phiến dày, dai, mép ngun, gốc thn, đầu tù, hai mặt có màu lục nhạt, mặt nhẵn bóng, hình bầu dục hình trái xoan dài - 10 cm, rộng 2,5 - cm, gân bên - 10 đôi, kèm rụng sớm Hoa không cuống, tập hợp - nách lá, màu trắng, đài có ống hình trụ - trứng, cụt đầu; tràng cánh thn nhọn, dài nửa ống tràng, có túm lông họng, nhị 4, đính đáy ống tràng, nhị ngắn, bầu ô, đầu nhị xẻ đơi Hoa mẫu Quả hạch nhỏ, hình thn, chín màu da cam hay đỏ, bóng, chứa hai hạt, dài - 1,5 cm (Hình 1.3b) Bí kỳ nam (H formicarum) thường dễ nhầm lẫn với Kỳ nam gai (M tuberosa) thuộc chi Myrmecodia với thân củ có gai xếp thành hàng, cành mọc dài to (Hình 1.4) [123] a b Hình 1.3 Bí kỳ nam (H formicarum) (a) Bí kỳ nam bổ đôi (b) Hoa Bí kỳ nam “Nguồn: Cactus Jungle, 2020” [322] Hình 1.4 Bí kỳ nam (H formicarum Jack.) “Nguồn: Alchetron, 2018” [328] Kỳ nam gai (M tuberosa) “Nguồn: Leonardo, 2011” [329] 1.1.1 Bộ phận dùng Bộ phận dùng Bí kỳ nam thường phần thân củ với hốc nhỏ kiến đục làm tổ Thân củ Bí kỳ nam thu hái, thái mỏng, phơi đến gần khơ, phơi tiếp bóng râm Khi dùng, đem tẩm qua nước sôi, vàng 4 1.1.2 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.1.2.1 Nghiên cứu thành phần hóa thực vật Thành phần hóa học vô Nghiên cứu nhóm tác giả Prachayasittikul (2012) cho thấy dựa kết phổ phát xạ nguyên tử plasma cao tầng cảm ứng, cao n-hexan, cao ethanol, cao methanol Bí kỳ nam có chứa 22 nguyên tố kim loại, nguyên tố thiết yếu (Mn, Fe, Ca, Zn, Cr P) có cao n-hexan với nồng độ mức ppm Nguyên tố trị liệu Li có cao cloroform Một số kim loại nặng Hg, Pb, Cd tìm thấy cao cloroform Đặc biệt nguyên tố quan trọng cho thể K, Ca, Mg, Fe, Zn tìm thấy Bí kỳ nam [223] Bảng 1.1 Các ngun tớ vơ có Bí kỳ nam Mẫu Ngun tớ Cao hexan Be (ppm) Al Cr Mn Fe Zn Ba P 0,15 1,47 0,74 0,23 0,14 0,20 0,05 0,09 7,57 Cao chloroform Li Hg (ppm) 0,34 0,03 8,31 1,18 9,67 9,42 2,59 0,08 4,99 1910,00 Cao methanol Na Sr Ca Rb K (ppm) 35,6 40,6 Thành phần hóa học hữu Tl In Pb Cd As Mg Mn Fe 0,49 0,02 0,19 Cs Năm 2008, theo kết nghiên cứu Prachayasittikul cộng [222], hợp chất phân lập gồm: stigmasterol từ cao n-hexan, dicloromethan hợp chất phenol từ cao EtOAc: isoliquiritigenin, protocatechualdehyd, butin butein (Hình 1.5) Isoliquiritigenin tìm thấy lần tự nhiên vào năm 1953 từ Dahlia variabilis (Compositae) Hợp chất phân lập từ Glycyrrhiza glabra (Cam thảo), Sinofranchetia chinensis Broussonetia paccorifera Các hoạt tính sinh học isoliquiritigenin báo cáo bao gồm tác dụng tim mạch, chống kết tập tiểu cầu, vận mạch, chống oxy hóa, chống ung thư khả ức chế yếu tố hoại tử khối u TNF-α [222] 5 Isoliquiritigenin Protocatechualdehyd Butein Acid asperulosidic Acid sinapinic β-Sitosterol acetat β-Sitosterol Stigmasterol 6α-Hydroxygeniposide 10-Hydroxyloganin Butin Acid deacetylasperulosidic Hình 1.5 Một sớ hợp chất phân lập từ Bí kỳ nam Procatechualdehyd phân lập từ Amomun tsao-ko, rễ Salvia miltiorrhiza, Salvia officinalis Ganoderma applanatum Hợp chất có hoạt tính sinh học đa dạng ức chế tăng trưởng, chống oxy hóa chống ung thư, giảm đường huyết ức chế chép HIV-1 nhiễm trùng tế bào cấp tính [222] Butin phân lập từ hạt Butea frondosa chứng minh có hoạt tính chống nhiễm trùng Butin tìm thấy Vernonia antmusintica ... TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH MAI NGUYỄN NGỌC TRÁC NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG DƯỢC LÝ HƯỚNG BẢO VỆ GAN, THẬN CỦA BÍ KỲ NAM (Hydnophytum formicarum Jack. , Rubiaceae) NGÀNH: DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM... dụng Bí kỳ nam, ? ?Nghiên cứu tác động dược lý hướng bảo vệ gan, thận Bí kỳ nam (Hydnophytum formicarum Jack. , Rubiaceae)? ?? thực với nội dung cụ thể: Phân tích thực vật định danh loài Bí kỳ nam thu... ĐƯỜNG UỐNG CỦA CAO CỒN 50% 84 3.6 TÁC ĐỘNG BẢO VỆ GAN CỦA BÍ KỲ NAM 85 3.7 TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN CỦA BÍ KỲ NAM 98 3.8 ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN ĐƯỜNG UỐNG CỦA CAO CỒN 50% BÍ KỲ NAM