Nghiên cứu tính phù hợp sinh học tính kháng khuẩn và khả năng liền mô của keo phẫu thuật lepamed

1 Đặt vấn đề Trong thập niên gần đây, giới đà nghiên cứu, tổng hợp sử dụng số keo dính sinh học có thành phần hãa häc chđ u lµ cyanoacrylate nh Glubran vµ Glubran Italia, keo dán ngoại khoa Bioglue Surgical Adhesive (BSA) Cryolife ( Mỹ), hồ chống viêm, kháng khuẩn dùng ngoại khoa sulfacrylate Nga v.v gần đây, tháng 2- 2008, Viện trang thiết bị công trình Y tế thuộc Bộ Y tế (Việt Nam) đà sản xuất thành công keo phẫu thuật LEPAMED vi s giỳp ca chuyờn gia Nga Bên cạnh tác dụng cầm máu thay cho dùng kẹp, khâu, đốt điện dùng cỏc hoạt chất sinh học dạng keo có chứa thrombin, keo sinh học tổng hợp có tác dụng bịt kín vết thơng mà không cần khâu, giúp bệnh nhân rút ngắn thời gian nằm viện chờ cắt Keo sinh học giúp Bác sĩ số thao tác khó phẫu thuật nội soi Nếu sử dụng đúng, vết thơng có sẹo đẹp, đảm bảo tính thẩm mỹ cao Tuy nhiên, số yếu tố học cần phải có nh độ kết dính, khả polymer hoá, tất loi keo đa vào thể phải không độc vi t bo, không gây nhiễm khuẩn, cú tớnh phự hp sinh hc cao, có khả cầm máu làm liền vết thơng Nhằm đánh giá đặc tính keo Lepamed, tiến hành nghiên cứu đề tài: "Nghiên cứu tính phù hợp sinh học, tính kháng khuẩn khả liền mô keo phẫu thuật Lepamed" Đề tài nhằm mục tiêu: 1 Đánh giá tính phù hợp sinh học ( độc tính với tế bào, tiêu huyết học, sinh hoá, mô học) keo phu thut LEPAMED §¸nh gi¸ khả kh¸ng khn cđa keo phẫu thuật LEPAMED Đánh giá khả cầm máu liền m« cđa keo phẫu thuật LEPAMED Những kết thu đề tài bổ sung cho mục tiêu nghiên cứu đề tài cấp Bộ làm sở cho việc ứng dụng keo phẫu thuật Lepamed lâm sàng Tỉng quan 2.1 Ngn gèc, thµnh phần hoá học, tên gọi Keo dán ngoại khoa hay hồ dán sinh học đợc tìm Harry Coover t năm chiến tranh th gii th với mục đích gn vt thng n bắn để cầm máu tạm thời Trong chin tranh Vit Nam, 1966, quân đội Mỹ đà sử dụng keo dới dạng xịt để cm máu vết thơng chuyn thơng binh v BV tuyến sau Keo sinh học đợc lu thông thị trờng từ tháng 2- 1955, với nhiều tên gọi khác nhng dựa thành phần hoá học giống nhau: Cyanoacrylate (From Wikipedia) Keo phẫu thuật LEPAMED Viện trang thiết bị công trình y tÕ - Bé Y tÕ ViƯt Nam chÕ t¹o 2/ 2008 dựa thành phần hoá học hồ d¸n sinh häc cđa LB Nga sulphaacrylate Keo phÉu tht Lepamed cha đợc thử nghiệm Việt Nam Thành phÇn hãa häc: - N-Butyl cyanoacrylat 99,99 % - SO2 0,005% - Acide acetic CH3COOH 0,005% Tªn gäi: Keo phÉu tht lepamed 2.2 Mét sè nghiªn cøu cđa thÕ giíi vỊ keo sinh häc 2.2.1.Nghiên cứu thực nghiệm nối khí quản hàn vết thủng phổi cừu keo sinh học Bioglue [7] Georg W Herget, Mulugeta Kassa.Viện phẫu thuật lồng ngực Freiburg, Đức sử dụng 24 cừu chia nhóm: - cừu phẫu thuật nối khí quản khâu Để tuần - 18 cừu phẫu thuật nối khí quản, bịt kín lỗ thủng nhỏ nhu mô phổi keo Để 2, 4, 12 tuần Kết qu: Đại thể: Quan sỏt i th thy vựng ni kín, tổ chức chặt chẽ tất giai đoạn thời gian Vi thể: Phản ứng viêm với xuất tế bào viêm xung quanh vùng keo sau tuần Sau tuần phản ứng mô đặc trưng mô hạt Các đặc trưng không quan sát thấy mô cừu dùng khâu 12 tuần khơng cịn thấy dấu hiệu phản ứng với vật l, không mụ ht Kt lun: Bioglue nh mt vật liệu hỗ trợ hàn gắn mối nối khí quản và tổn thương nhu mô phổi cõu với kích thước bé 2.2.2 So sánh phục hồi đứt dây thần kinh phương pháp khâu cổ điển dùng keo dán sinh học Jin Y, Dehesdin Hemet J Labor tạo hình thực nghiệm, U.F.R Pháp Gây tổn thương dây thần kinh hông 70 chuột, 22 chuột phục hồi phương pháp khâu vi phẫu, 47 keo dán sinh học chết Để 120 ngày Đánh giá mơ học, khơng thấy hình ảnh viêm thải loại vật lạ nhóm sử dụng keo [6] 2.2.3 Tóm tắt số nghiên cứu Cryolife keo sinh học: - Phẫu thuật phục hồi đứt động mạch chủ keo Bioglue surrgical adhesive [7] Sử dụng 26 cõu chia lµm nhãm: 13 phương pháp khâu nối, 13 keo Bioglue Để 90 ngày Kết quả: Phẫu thuật dùng Bioglue giảm tỷ lệ phải mổ lại từ 30% đến 0% - Nối động mạch vành keo Bioglue.[7] - In Vitro: Dùng keo Bioglue nối tĩnh mạch hiển người bảo quản lạnh sâu động mạch vành vào 12 điểm tim bò nguyên Bơm thử áp lực Tất mảnh ghép gắn keo chịu áp lực 300mmHg, 10 mảnh chu n 560 mmHg.(áp suất tâm thu: 90-110 mmHg) - In Vivo: Nối nhánh động mạch chủ ngực trái dª b»ng keo Đánh giá sau sau 24 giờ, 10 tháng, năm Tất chỗ nối liền tốt, lịng khơng bị chít hẹp 2.2.4 Nối dây TK keo: So sánh mô học dïng fibrin keo cyanoacrylate.[6] K Wieken, MD, Angioi Dupprez sư dơng 18 chuột cèng tr¾ng (500-600g/con), gây mê, bộc lộ dây TK hông to bên Bên trái cắt nối lại keo fibrin (Tissucol), bên phải keo cyanoacrylate(Glubran) Theo dõi đại thể, vi thể, siêu vi thể sau 1,2,3,4 tuần Kết quả: dây TK gắn keo cyanoacrylate khơng thể phục hồi gây phản ứng viêm thải loại vật lạ, làm co rút xơ hoá 2.2.5 Kết nghiên cứu thực nghiệm bước đầu tính phù hợp sinh học keo gắn xương [7] C Heiss, P.Pokinskyj Khoa chấn thương, Viện Justus-Liebig, LB Đức vµ Viện vật liệu sinh học Darmstadt, Đức sư dơng 36 thỏ, chia nhóm: 7, 21, 42 84 ngày Mỗi nhóm chứng, thực nghiệm Mỗi thỏ tạo mảnh khuyết đầu xương đùi sau gắn trở lại Nhóm chứng gắn khơng dùng keo, nhóm thực nghiệm gắn keo, thời gian cố định 60 giây, chờ đợi phút Đánh giá vi thể, siêu vi thể Kết quả: Keo đảm bảo tính phù hợp sinh học cao Các giai đoạn trình liền xương diễn qui luật Mảnh ghép liền hồn tồn sau 84 ngày nhóm chứng v thc nghim 2.2.6 Nghiên cứu độc tính tế bào, tính tơng thích máu khả kháng khuẩn hai loại keo phẫu thuật Glubran Glubran [3] Đánh giá độc tính tế bào yêu cầu quan trọng loại keo chøa cyanoacrylate Mét sè keo chøa c¸c chÊt methyl, ethyl, alkyl đà đợc thông báo khả độc với tế bào Ngoài tính độc mặt hoá học, loại keo đợc biết đến với tính độc toả nhiệt trình polymer hoá Một số công trình nghiên cứu cho thấy nhóm cyanoacrylate không ®éc víi tÕ bµo mét sè nång ®é pha loÃng Kết thử nghiệm Glubran Glubran Italia, loại keo đà đợc thơng mại hoá, cho thấy tỷ lệ sống sót tế bào nồng độ pha loÃng 1/10 > 70% [3] Đây đợc coi không độc với tế bào Về tính tơng thích với máu: theo L Montanaro cộng hai loại keo phẫu thuật Glubran Glubran sau thử nghiệm không làm thay đổi có ý nghĩa tiêu hoạt động prothrombin, fibrinogen, số lợng hồng cầu, tiểu cầu nh công thức bạch cầu [3] Nhiễm khuẩn yếu tố quan trọng làm cản trở liền vết thơng Theo Nguyễn Trọng Lu số lợng vi khuẩn vợt 100000/1gram mô trình liền vết thơng bị cản trở nghiêm trọng [1] Bởi vậy, tất vật liệu sinh học đa vào thể phải đảm bảo vô trùng Một số loại keo dùng phẫu thuật đà đợc đánh giá khả vô trùng có khả ức chế số loại vi khuẩn Theo James V vµ céng sù, keo sinh häc N-2 Butylcyanoacrylate cã khả ức chế phát triển số cầu khuẩn gram dơng nhng không làm ức chế phát triển vi khuẩn gram âm Hai loại keo sử dụng rộng rÃi giới Glubran Glubran đợc thông báo có khả ức chế phát triển vi khuẩn Tại Việt Nam, cha tìm thấy nghiên cứu keo sinh học Quá trình liền vết thơng vai trò nguyên bào sợi [1] Quá trình liền vết thơng trình phức tạp, trải qua giai đoạn với tham gia nhiều loại tế bào vào thời điểm khác đông máu: tiểu cầu, fibrin viêm : bạch cầu trung tính, đại thực bào, lympho bào tạo mô xơ: proteoglycan, nguyên bào sơị, collagen biểu mô hóa: tạo mạch sửa chữa: collagen liên kết chéo, sẹo trởng thành Mỗi loại tế bào đảm nhiệm chức qui trình từ vết thơng xuất đến vết thơng liền hoàn toàn Tiểu cầu lọai tế bào đến vết thơng làm nhiệm vụ cầm máu khởi phát hàng loạt cho trình sửa chữa làm lành vết thơng Bạch cầu trung tính đến sau với chức thực bào, loại bỏ mô tổn thơng, dị vật, gây giÃn mạch, tăng tính thấm mao mạch, tạo điều kiện cho tế bào khác có nguồn gốc từ máu vào vết thơng Chúng thờng chết theo chơng trình sau đà kết thúc nhiệm vụ Nguyên bào sợi loại TB chiếm u mô liên kết, chúng giữ vai trò quan trọng việc thành lập khung mô liên kết có khả tạo loại sợi liên kết nh collagen, elastin, proteoglycan, glycoprotein Nguyên bào sợi đóng vai trò quan trọng trình tạo sẹo, làm lành vết thơng Khi mô liên kết bị huỷ hoại, nguyên bào sợi di chuyển đến, tăng sinh, tạo mét lỵng lín chÊt nỊn collagen gióp cho viƯc cô lập sửa chữa vết thơng.[2] Đối tợng phơng pháp nghiên cứu 3.1 Đối tợng nghiên cứu 3.1.1 VËt liÖu Keo phÉu thuËt LEPAMED ViÖn Trang thiết bị công trình y tế - Bộ Y tÕ chÕ t¹o H.1 Keo Lepamed 3.1.2 Động vật nghiên cứu cách phân lô - Động vật nghiên cứu: Thỏ đực, giống nội địa, nặng khoảng 2kg Trung tâm nghiên cứu dê thỏ Sơn Tây cung cấp Thỏ đợc sử dụng nghiên cứu đánh giá số sinh hóa, huyết học, gây sốt thí nghiệm vết thơng da vïng lng  Cht cèng tr¾ng thÝ nghiƯm, 180 – 200 g/con, Häc viƯn qu©n y cung cÊp Cht cống đợc sử dụng nghiên cứu vết thơng tạng - Phân lô thỏ sử dụng kü tht g©y sèt thùc nghiƯm  15 thá chia lô: để tuần sau mổ, để tuần sau mổ Lấy máu định lợng số huyết học, sinh hóa, lấy tiêu mô học sau tạo vết thơng da có sử dơng keo Lepamed  Cht cèng tr¾ng 12 sư dụng thí nghiệm cắt xẻ gan (6 cắt gan, xẻ gan) sử dụng keo Lepamed dính vết thơng, chứng (không sử dụng keo) 3.2 Phơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm thể động vật (in vivo) èng nghiƯm (in vitro) 3.3 Cách thức tiến hành nghiªn cứu 3.3.1 Gây sốt thực nghiệm - Cố định thỏ lên bàn mổ, cho nghỉ nghơi hoàn toàn phòng tối 90 phút - Đo nhiệt độ hậu môn - Rạch da vùng lng, nhỏ lên vết thơng vừa rạch giọt keo Lepamed - Tiếp tục cho thỏ nghỉ nghơi hoàn toàn phòng tối 90 phút - Đo lại nhiệt độ hậu môn So sánh nhiệt độ trớc sau nhỏ keo Kỹ thuật đợc thực Bộ môn Mô - Phôi trờng Đại học Y Hµ Néi 3.3 Đánh giá độc tính tế bào 10 - ë vÕt th¬ng da cã dïng keo Lepamed Biểu mô sinh dày biểu mô vùng xung quanh Nhú chân bì phẳng, chân bì chủ yếu mô liên kết, cụm nang lông (H 16) H.16 Hình ảnh vi thể vết thơng da thá cã dïng keo Lepamed sau tn thÝ nghiƯm (H.E x 50) 4.4.5 Hình ảnh phục hồi vết thơng gan chuột cống trắng sau tuần thí nghiệm - Vết xẻ dọc thùy gan không phủ keo Lepamed Hai mép đờng xẻ đà liền hoàn toàn mô liên kết mỏng Mô gan xung quanh dải mô liên kết bình thờng Đỉnh mép vết thơng mô liên kết dày hẳn tiếp nối với bao xơ gan (H 17 H.E x50) 33 H.17 Hình ảnh vi thể vết thơng gan chuột sau xẻ tuần không phủ keo Lepamed (H.E x50) - Vết thơng xẻ dọc thïy gan cã sư dơng keo Lepamed: M« gan hai bên đờng xẻ đà liền hoàn toàn, liên kết với dải mô liên kết mỏng Các tế bào gan quanh vết thơng hoàn toàn bình thờng ( H4.10 A H.E x 50 B H.E x 200) A B H.18 Hình ảnh vi thể vết thơng gan chuột sau xẻ tuần có dùng keo Lepamed (A: H.E x 50; B: H.E x 200) - M« gan thuộc phần lại sau thủ thuật cắt bỏ phần thùy gan không phủ keo Lepamed sau tuần Phần nhu mô bị cắt đợc che phủ mô liên kết mỡ mạc nối, có trờng hợp che phủ mô tụy Diện che phủ 34 thờng không phẳng Các tế bào gan vùng có bào tơng sáng màu, cấu trúc nhu mô gan bình thờng ( H.19) H.19 Hình ảnh vi thể phần lại gan chuột đà bị cắt không phủ keo Lepamed sau tuần Mặt cắt lại đà liền nhng không phẳng, mô mạc nối tụy đến che phủ (H.E x 50) - Mô gan thuộc phần lại sau thủ thuật cắt bỏ phần thùy gan có phủ keo Lepamed sau tuần Tầng mô liên kết sinh che phủ mô gan tơng đối phẳng, dày, có tế bào limpho xâm nhập, liên hệ chặt chẽ với mô gan Mô gan tiếp xúc với tầng mô liên kết có cấu trúc hoàn toàn bình thờng Tuy nhiên tế bào gan có bào tơng sáng màu Phía tầng mô liên kết mô mạc nối (H.20 A, B) 35 A B H.20 Hình ảnh vi thể phần lại gan chuột đà bị cắt đợc phủ keo Lepamed sau tuần Tầng mô liên kết che phủ mặt cắt phẳng tơng đối phẳng, liên hệ chặt chẽ với mô gan, tế bào gan có bào tơng sáng màu (A.H.E x 50 B H.E 400) 36 BµN LUËN Keo phẫu thuât Lepamed Viện trang thiết bị Y tế sản xuất thử nghiệm thể động vật (in vivo) ống nghiệm (in vitro) Bộ môn Mô Phôi với phối hợp số Bộ môn khác Trường Đại học Y Hà Nội Mơ hình thử nghiệm có tham khảo mét sè kü thuật phơng pháp ca cỏc nc v da trờn kt qu th nghim mu keo có thành phần hãa häc t¬ng tù keo Lepamed Italia sử dụng từ lâu giới Glubran Glubran Kt qu th nghim chỗ động vËt cho thấy keo phẫu thuật Lepamed có khả kết dính cao sau khoảng phút sử dụng mơ động vật Q trình kết dính có tác dụng cầm m¸u tøc thêi, thay khâu nối vết thương Những yếu tố đáp ứng vai trò thay mũi khâu phẫu thuật Bệnh nhân dùng keo thay cho việc khâu rút ngắn thời gian nằm viện, quay lại bệnh viện để cắt chỉ, vết mổ có sẹo đẹp Vì có khả cầm máu nhanh nên keo dùng để sơ cứu bước đầu vết thương mạch máu lớn chuyển trung tâm ngoại khoa Cỏc kt qu nghiờn cu khả gây sốt, c tớnh tế bào, tính tơng thích với máu, kh nng khỏng khun, khả phù hợp liền mô ca keo phu thut Lepamed cho thy khơng có khác biệt nhiều so với loại keo Italia Glubran Glubran 4.1 Nhiệt độ thể thỏ tríc vµ sau dïng keo Lepamed Sau nhỏ keo vào vết thương phần mềm vùng lưng thỏ cho nghỉ nghơi 90 phút phòng tối nhiệt độ thể thỏ khơng tăng, chí có xu hướng giảm nhẹ so với lúc chưa nhỏ keo Điều chứng tỏ keo Lepamed không gây phản ứng viêm cấp dị ứng cho thể, không làm thay 37 đổi điểm đặt nhiệt độ ( Rơ le) thể thân não Việc nhiệt độ thể giảm nhẹ thỏ nghỉ nghơi hồn tồn phịng tối Chúng tơi chọn thỏ làm động vật thí nghiệm thỏ loại động vật có thân nhiệt nhạy cảm Lượng keo dùng để gây sốt cho thỏ giọt/con 2kg theo đủ để gây phản ứng có Kết chúng tơi phù hợp với kết nghiên cứu thử nghiệm gây sèt thỏ keo Bioglue surgical Adhesive Cty Cryolife (Mỹ) chế tạo : nhiệt độ chênh lệch < 0,5 độ C - (non pyrogenic ) – coi khơng sốt (3) 4.2 Độc tính cđa keo Lepamed nguyên bào sợi Độc tính t bào yếu tố cho quan trọng tất loại keo sinh học đưa vào thể Với nồng độ pha loãng 1/10, tỷ lệ sống sót tế bào L929 ni cấy > 70% keo Glubran Glubran [3] Đối với Lepamed tû lƯ nµy 71% (đối với nguyên bào sợi) Như vậy, độc tính tế bào, keo Lepamed có tỷ lệ sống tế bào tương đương Glubran Glubran2 Së dÜ chóng t«i sư dụng nguyên bào sợi nuôi cấy thay cho L 929 theo nguyên bào sợi loại tế bào đóng vai trò chủ yếu trình làm liền vết thơng Mặc dù kết nghiên cứu cho thấy với nồng độ pha loÃng 1/10 keo Lepamed đợc cho không độc với nguyên bào sợi nuôi cấy, song loại keo sử dụng thêng keo dạng chưa pha loãng, đậm đặc 100%, kể loại keo sử dụng giới Glubran Mức độ đậm đặc có thĨ làm chết mét líp tế bào tiếp xúc trực tiếp với keo mµ nguyên nhân lµ trình polymer húa, keo ó làm phỏt sinh nhit khoảng 45 độ C Bởi vậy, việc hạn chế đến mức thấp lợng keo lần sử dụng cần thiết, cho lớp keo mỏng tốt 4.3 Các số huyết học hãa sinh 38 Kết lần xÐt nghiƯm m¸u 15 thỏ cách ngày (6; vµ 12 ngµy) cho kết khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với mẫu máu trước sử dụng keo Chúng đặc biệt ý đến số hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, men gan Tuy nhiên có ghi nhận s khác biệt số lượng huyết sắc tố hồng cầu (giảm) nhóm chứng (trước sử dụng keo) v hai nhúm s dng keo Đề nghị tiếp tục nghiên cứu thêm Còn số khác, đặc biệt bạch cầu (số lợng, công thức), men gan - số có liên quan nhiều đến khả phù hợp sinh học vật liệu thay đổi ý nghĩa thống kê Kết phù hợp với kết L Montanaro cộng đà nghiên cứu hai loại keo phẫu thuật Glubran Glubran [3] Vì qui mơ đề tài có hạn nên chúng tơi chưa có điều kiện nghiên cứu ảnh hưởng keo lên thêi gian hoạt hóa prothrombin fibrinogen 4.4 Khả kháng khuẩn keo Lepamed Trên thực tế sử dụng, nhận thấy tất vết thương có sử dụng keo Lepamed ổ bụng ngồi da khơ, khơng chảy mủ, dịch Mặc dù trước sử dụng keo không hấp, sấy tiệt trùng Các kết nghiên cứu vi sinh vật phương pháp khuyếch tán thạch cho thấy keo Lepamed cho hai vùng kháng khuẩn Vùng tác động học polymer hóa gõy làm ức chế phát triển tất vi khuẩn Vùng không sử dụng để đánh giá khả kháng khuẩn keo Vùng hai cho thy Lepamed có khả ức chế phát triển loi cầu khun gram dng: S.aureus; S.epidermidis; S pneumoniae Tuy nhiên kết cho thấy Lepamed khả nng kháng với loại vi khuẩn gram âm E.coli P 39 aeruginosa Nội dung nghiên cứu dựa theo phơng pháp James V cộng keo N-2 Butylcyanoacrylate [4] Kết phù hợp với kết nhóm tác giả Tuy nhiên đờng kính vùng lớn 4.5 Khả cầm máu v kt dớnh vết thơng Hình ảnh vết thơng da sau cắt, thấm máu nhanh phủ keo Lepamed sau đa hai mép vết thơng áp sát vào nhau, giữ vòng 30 giây cho thấy vết thơng gần nh hoàn toàn không chảy máu nhờ miệmg vết thơng đà bịt kÝn sù kÕt dÝnh cđa keo, c¸c vết thơng không dùng keo máu chảy (H.9, A,B) Th nghim ny chng t Lepamed có khả cầm máu tốt mô da, tổ chức dới da Tuy nhiên, mô chứa nhiều máu nh gan, thao tác thờng gặp khó khăn máu chảy nhiều Mặt khác, thời gian polymer hóa keo để tạo kết dính nhanh nên phẫu thuật viên cần kết hợp lúc động tác: thấm máu, nhỏ keo ép hai mép vết thơng dàn keo lên mặt cắt (H 10,11) Vết thơng da mô mềm có chiều dài vợt 2cm, nên khâu tăng cờng, không nên dùng keo 4.6 Các kết đại thể, vi thể mô thử nghiệm - i vi vết thương da sau tuần có biểu hin lin hai nhóm có sử dụng keo không sử dụng keo Tt c cỏc vt thương khơ, khơng chảy dịch, khơng có mủ, khơng sưng tấy, phù nề Mặt da vùng da thử nghiệm khơng có biểu khác thường Dưới kính hiển vi quang học, phương pháp nhuộm màu Hematoxylin 40 Eosin, vùng da rạch có sử dụng keo để dính mép vết thương, sau tuần cấu trúc tái tạo gần hoàn toàn Các tế bào lớp đáy tăng sinh làm cho biểu bì vùng dày lên so với vựng chung quanh Từ hai mép vết thơng biểu bì có hình lỡi rìu, bò dần vào trung tâm Có thÓ quan sát thấy tập trung tế bo viờm nh lympho bo, tơng bào phía dới lớp vẩy máu hoại tử Tuy nhiờn nhóm có sử dụng keo cho thấy bề mặt vết thơng phẳng, ngợc lại vết thơng không dùng keo, bề mặt lõm xuống - Đối với vết thơng da sau tuần, mặt đại thể khác biệt nhiều nhóm có sử dụng keo nhóm không sử dụng keo Tuy nhiên hình ảnh vi thể cho thấy biểu bì vết thơng nhóm không dùng keo dày hơn, không phẳng không đồng so với vùng chung quanh Ngợc lại biểu bì vết thơng da có sử dụng keo phẳng, độ dày tơng đơng với độ dày biểu bì da vùng chung quanh, (H.15;16) Tất vết thơng da có sử dụng keo không thấy tăng sinh nhiều tế bào viêm Điều chứng tỏ Lepamed không gây phản ứng viêm thải loại, đợc mô thử nghiệm chấp nhận Kết phù hợp với số tác giả nghiên cứu phế quản, phổi dây thần kinh cừu keo sinh học có thành phần tơng tự Lepamed [5,6] Sở dĩ không dùng khâu phẫu thuật làm vật liệu chứng ảnh hởng đến độ xác kết nội dung nghiên cứu khác, đặc biệt số sinh hóa, huyết học 41 Kết với vt thương sau xẻ rời hoàn toàn với đường xẻ dài 1cm gan chuột dùng keo Lepamed dính hai mặt xẻ, tuần sau hình ảnh đại thể cho thấy đường xẻ biÕn thµnh sĐo Hai vùng gan xẻ liền hoàn toàn lại với nhau, đường xẻ biến thành màng liên kết mỏng nối hai vùng gan bị xẻ lại với Xung quanh màng cấu trúc nhu mơ gan bình thường Khơng thấy tËp trung tế bào viêm Vì thời gian kinh phí có hạn nên cơng trình chưa sâu nghiên cứu số phận màng liên kết theo thời gian, liÖu nã mỏng dần biến sau nhiều tháng Hình ảnh đại thể vi thể vÕt th¬ng gan chuột bị cắt phần dùng keo phủ bề mặt cho thấy mặt cắt mơ liên kết che phủ bình diện phẳng so với mặt cắt không phủ keo Các tế bo gan mi tỏi to, bào tơng cú phn nht màu hn tế bào gan vùng xung quanh Nhu m« gan kh«ng có biến đổi cấu trúc, khơng thấy tế bào viêm Trong nhiỊu trêng hỵp mổ chúng tơi thấy có mạc nối lớn bò đến che phủ vùng gan bị cắt Theo phản ứng tự nhiên thể trước tạng bụng bị tổn thương, chảy máu Tất chuột thực nghiệm mổ để lấy mẫu sau tuần không thấy có máu hay dịch ổ bụng Chúng tơi gặp trường hợp dính tạng lại với Nguyên nhân phẫu thuật Mặc dù khuyến cáo nên tuân thủ theo nguyên tắc sử dụng keo Như vậy, kết nghiên cứu hình thái học, kể đại thể vi thể cho thấy vết thương dùng keo phẫu thuật Lepamed liền, không gây phản ứng viêm thải loại chỗ thể sử dụng Keo Lepamed vật liệu sinh học dạng nước, polymer hóa gặp mơi trường ẩm Khi vào thể, sau polymer hóa để tạo khả kết dính, phân tử cấu thành bị cắt dần mạch liên kết Quá trình 42 giống tượng đục lỗ màng keo kÕt nèi hai mặt vết thơng, cho phộp h thng mch, thần kinh hai mặt mô bị cắt liên hệ nối lại với Keo tồn khoảng tun c th nờn õy nguyên nhân làm giảm kh nng gõy phn ng viờm thi loại Vì keo khơng phải vật liệu rắn, khơng cố định mô thời gian dài nên việc nghiên cứu hình thái học mơ tiếp xúc trực tiếp với keo khó khăn Theo chúng tôi, kết nghiên cứu độc tính tế bào, khả tương thích với máu, khả kháng khuẩn cần xem yếu tố quan trọng để đánh giá khả phù hợp sinh học vật liệu Khả liền mơ, tình trạng mô vùng tiếp xúc với keo mặt hình thái học, xem yếu tố đánh giá hiệu sử dụng keo th sng Kết luận Nghiên cứu tiền lâm sàng tính phù hợp sinh học, tính kháng khuẩn khả làm liền vết thơng keo phẫn thuật Lepamed, đến kết luận sau: Không độc với nguyên bào sợi nuôi cấy Có khả ức chế vi khuẩn gram(+) phát triển 43 Không làm thay đổi (có ý nghĩa) sè sinh hãa, huyÕt häc ë thá thùc nghiÖm Khi dùng keo phẫu thuật Lepamed để gắn vết thơng da tạng đặc: Cầm máu tức thời mặt cắt Kết dính hai bờ mép vết thơng, bề mặt vết thơng phẳng Sau tuần thử nghiệm: Vết thơng da khô, cấu trúc tầng mô da gần nh trạng thái bình thờng Hai bờ mép vết thơng gan xẻ đà liền lại với màng mô xơ mỏng Một lớp mô xơ mỏng đà phủ lên mặt cắt gan lại Không thấy thay đổi cấu trúc mô gan xung quanh vùng gan bị xẻ cắt Kiến nghị 44 Kết thúc nghiên cứu tiền lâm sàng, đề nghị cho nghiên cứu lâm sàng diện hÑp Tiếp tục nghiên cứu thêm số tạng rỗng mô cứng (như nối ruột, bịt lỗ thủng dày, gắn kết xương gãy, trộn keo với bột xương lấp ổ khuyết xương) Tæ chøc tËp hn c¸c thao t¸c kü tht vỊ c¸ch sư dụng keo Cải tiến hình thức bao gói tạo ®iỊu kiƯn thn lỵi tèi ®a cho ngêi sư dơng Tài liệu tham khảo 45 Nguyễn Trọng Lu (2001) Đặc điểm sinh học liền vết thơng trích luận án Tiến sĩ y học Huỳnh Duy Thảo Phân lập tạo dòng nguyên bào sợi (Fibroblast) ngời từ bánh rau Luận văn tốt nghiệp cử nhân khoa học chuyên nghành công nghệ sinh học Y Dợc TP Hå ChÝ Minh, 2004 Montanaro L C.R Arciola, E Cenni, G Ciapetti, F Savioli, F.Filippini, L.A Barsanti Cytotoxicity, blood compatibility and antimicrobial activity of two cyanoacrylate glue for surgical use 2001 Biomaterials 22(2001) 59-66 James V Quinn,MD, Martin H Osmond, MD, John A Yurack, PhD and Peter J Moir, N-2 Butylcyanoacrylate: Risk of bacterial contamination with an appriaisal of its antimicrobial effect, The Journal of Emergency Medicine, Vol: 13, 1995 581-585 Summury of safety and effectivenss Cryolife, inc., Bioglue, From internet network Wieken K M.D; K Angio-Dupez, MD Nerve Anatomosis with glue: Comparative histologic study of fibrin and cyanoacrylate glue From Internet Summary of safety and effectiveness Cryolife, Bioglue Surgical Adhesive - Cryolife company 1655 Roberts Bulevard, NW Kennesaw, Georgia 30144 tin từ internet) 46 47 ... giá tính phù hợp sinh học ( độc tính với tế bào, tiêu huyết học, sinh hoá, mô học) keo phu thut LEPAMED Đánh gi¸ khả kh¸ng khn cđa keo phẫu thuật LEPAMED Đánh giá khả cầm máu liền mô cña keo phẫu. .. Nghiªn cứu tiền lâm sàng tính phù hợp sinh học, tính kháng khuẩn khả làm liền vết thơng keo phẫn thuật Lepamed, đến kết luận sau: Không độc với nguyên bào sợi nuôi cấy Có khả ức chế vi khuẩn gram(+)... máu, khả kháng khuẩn cần xem yếu tố quan trọng để đánh giá khả phù hợp sinh học vật liệu Khả liền mơ, tình trạng mơ vùng tiếp xúc với keo mặt hình thái học, xem yếu tố đánh giá hiệu sử dụng keo