Luận án ảnh hưởng của sử dụng kết hợp thuốc bảo vệ thực vật hoạt chất chlorpyrifos ethyl và fenobucarb đến hoạt tính enzyme cholinesterase ở cá lóc (channa striata)

LỜI CẢM TẠ Lời cảm ơn đầu tiên, xin chân thành gửi đến Thầy hƣớng dẫn PGs Ts Nguyễn Văn Cơng - ngƣời dìu dắt, động viên, giúp đỡ hƣớng dẫn chuyên môn cho lời khuyên quý báu suốt thời gian học tập nhƣ thực nghiên cứu viết luận án Xin cảm ơn Thầy dành nhiều thời gian, cơng sức ln giúp em có đƣợc định hƣớng đắn công việc nhƣ học tập Xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến TS Phạm Văn Tồn – ngƣời góp ý cho tơi nhiều từ kinh nghiệm quý báu phân tích thuốc BVTV viết luận án nhƣ hƣớng dẫn thực chuyên đề nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến tất quý Thầy, Cô giảng dạy, hƣớng dẫn học tập, nghiên cứu suốt thời gian qua Trong suốt thời gian học tập nghiên cứu thực luận án, đƣợc đồng hành hỗ trợ Anh, Chị nghiên cứu sinh khóa 18, học viên cao học sinh viên đại học chuyên ngành Khoa học Môi trƣờng Các bạn khơng ngại khó khăn, thời gian để tơi thực nghiên cứu phịng thí nghiệm ngồi đồng Tơi xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến tất ngƣời Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, Ban Chủ Nhiệm Khoa Mơi trƣờng Tài ngun thiên nhiên, Phịng Quản Lý Khoa Học Khoa Sau Đại Học Trƣờng Đại Học Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi để đƣợc học tập, nghiên cứu nâng cao trình độ năm qua Tôi xin đƣợc gởi lời cảm ơn đến Sở Khoa học Công nghệ tỉnh Hậu Giang tài trợ kinh phí giúp đỡ tơi hồn thành tốt nghiên cứu Sau cùng, tơi xin ghi nhớ cảm ơn đến gia đình với tất tình u thƣơng, ủng hộ khích lệ dành cho tơi suốt q trình học tập hồn thành luận án nghiên cứu; đặc biệt ba mẹ tôi, vợ tơi Nguyễn Văn Tồn i TĨM TẮT Luận án “Ảnh hƣởng sử dụng kết hợp thuốc bảo vệ thực vật hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến hoạt tính enzyme Cholinesterase cá lóc (Channa striata)” đƣợc thực điều kiện phịng thí nghiệm đồng ruộng từ tháng năm 2012 đến tháng 12 năm 2016 nhằm đánh giá ảnh hƣởng riêng lẻ, phối trộn hai hoạt chất đến enzyme ChE cá lóc khả sử dụng ChE cá lóc nhƣ phƣơng pháp sinh học để đánh giá phơi nhiễm cá lóc với thuốc BVTV lân hữu Chlorpyrifos ethyl Carbamate Fenobucarb Nội dung điều tra trạng sử dụng thuốc BVTV số vùng canh tác lúa ĐBSCL đƣợc thực qua vấn 939 hộ dân trồng lúa tỉnh Long An, Tiền Giang, Đồng Tháp Hậu Giang Ảnh hƣởng đơn lẻ phối trộn thuốc BVTV chứa hoạt chất Fenobucarb Chlorpyrifos ethyl đến hoạt tính ChE điều kiện phịng thí nghiệm đƣợc thực bốn mức nồng độ 1%, 2%, 5% 10% LC50-96 hỗn hợp chúng đối chứng đƣợc bố trí hồn toàn ngẫu nhiên Ảnh hƣởng phun Fenobucarb, Chlorpyrifos Ethyl hay kết hợp hai hoạt chất đến ChE cá lóc đƣợc triển khai ruộng lúa vụ Hè Thu 2013 Phụng Hiệp, Hậu Giang Kết nghiên cứu cho thấy có 232 tên thƣơng mại thuốc BVTV khác đƣợc nơng dân sử dụng nhóm thuốc trừ côn trùng, trừ nấm bệnh phổ biến (60%) Trung bình thuốc BVTV đƣợc phun khoảng 6,0 lần/vụ; số lần phun thuốc trừ sâu bệnh cao (4,0 lần/vụ), trừ cỏ, trừ ốc (1,0 lần/vụ) Đa số nông dân hỗn hợp nhiều loại thuốc trừ sâu với thuốc trừ sâu với trừ bệnh cho lần sử dụng Trung bình có 60% nông dân sử dụng thuốc liều cao dẫn nhãn thuốc Ở điều kiện phòng thí nghiệm, hoạt tính ChE não cá lóc cỡ giống nhạy cảm với Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb Ở nồng độ 0,54µg/L (2%LC50 – 96 giờ), Chlorpyrifos ethyl ức chế ChE từ 0,1% đến 20,0% Trong nồng độ 36µg/L (1% LC50 – 96 giờ), Fenobucarb ức chế ChE từ 6,0% đến 16,1% Hoạt chất Fenobucarb gây ức chế cao ChE cá lóc khoảng – 12 phơi nhiễm, tỷ lệ ức chế từ 53,8% – 57,8% nồng độ 10% LC50 – 96 Hoạt chất Chlorpyrifos ethyl gây ức chế cao ChE khoảng 24 – 60 phơi nhiễm, tỷ lệ ức chế từ 48,1% – 58,9% nồng độ 10% LC50 – 96 Khi phối trộn Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb khơng làm tăng hay giảm tỷ lệ ức chế ChE cá lóc so với đơn chất nhƣng làm tăng thời gian ChE bị ức chế cao nên làm cá bị ảnh hƣởng nghiêm trọng phơi nhiễm riêng lẻ hoạt chất Kết thí nghiệm đồng ruộng cho thấy ii sử dụng Mondeo 60EC (chứa hoạt chất Chlorpyrifos ethyl), Bascide 50EC (chứa hoạt chất Fenobucarb) hay kết hợp loại thuốc với liều lƣợng tối đa khuyến cáo (0,8L/ha Mondeo 60EC 1,5L/ha Bascide 50EC) làm ảnh hƣởng đến ChE cá lóc Sử dụng đơn Bascide 50EC theo liều dẫn làm ức chế ChE não cá lóc từ 1,2% đến 28% Sử dụng đơn Mondeo 60EC hay kết hợp Mondeo 60EC với Bascide 50EC khơng làm chết cá mà cịn ảnh hƣởng nghiêm trọng lâu dài đến ChE; tỷ lệ ức chế lần lƣợt từ 22,4% đến 79,1% từ 25,8% đến 86,2% Đo ChE cá lóc đánh dấu ảnh hƣởng sử dụng Bascide 50EC cho lúa đến loài cá giới hạn ngày sau phun nhƣng Mondeo 60EC hay kết hợp Mondeo 60EC với Bascide 50EC 14 ngày Áp dụng đo ChE kỹ thuật tái kích hoạt 2-PAM phƣơng pháp tối ƣu để quan trắc, cảnh báo nhiễm bẩn Chlorpyrifos ethyl sau - ngày phơi nhiễm Từ khóa: Channa striata, Cholinesterase, Chlorpyrifos Ethyl, Fenobucarb, sử dụng kết hợp, Đánh dấu sinh học, ruộng lúa, tái kích hoạt iii ABSTRACT This dissertation "Effects of applying mixture of insecticide chlorpyrifos ethyl and fenobucarb on cholinesterase (ChE) activity in snakehead fish (Channa striata)" was carried out from August, 2012 to December, 2016 at laboratory and rice field conditions to evaluate the effects of using single and mixture of these two active ingredients on activity of ChE in snakehead fish and the use of ChE in this fish species as a biomaker of exposure and effects from Organophosphate and carbamate pesticides Status of pesticides use in rice cultivation areas in Mekong Delta was carried out through interviewing 939 rice farming farmers in four provinces, including Long An, Tien Giang, Dong Thap and Hau Giang Effects of single and mixture of fenobucarb and chlorpyrifos ethyl on ChE of snakehead fish in the laboratory condition was conducted with four treatments, including 1%, 2%, 5% and 10% LC50-96h Effects of single and mixture applying fenobucarb and chlorpyrifos ethyl for rice on ChE in snakehead fish living in rice paddy was conducted in Summer 2013 in Phung Hiep, Hau Giang province The results showed that 232 trade names of pesticides have been used in rice cultivation; insecticides and fungicides were most common (60%) The averaged spraying frequency was 6.0 times per crop In which, insecticides and fungicides are times per crop; herbicides and snailicides is about 1.0 time per crop The results also show that pesticides are often mixed together before spraying and more than 60% of households sprayed at concentrations above recommended doses In the laboratory conditions, the activity of ChE in snakehead fish brains is very sensitive to Chlorpyrifos ethyl and Fenobucarb At a concentration of 0.54 μg/L (2% LC50 - 96 hours), Chlorpyrifos ethyl inhibited ChE activity from 0.1% to 20.0% While at 36 μg/L (1% LC50 - 96 hours), Fenobucarb suppressed ChE activity from 6.0% to 16.1% Fenobucarb quick inhibit ChE within 12 hrs after exposure, the rate of inhibition from 53.8% to 57.8% at 10% LC50-96 hrs whereas Chlorpyrifos ethyl is 24 - 60 hrs with the rate of inhibition from 48.1% to 58.9% at 10% LC50-96 hrs The study shown that no synergy or antagonist was found in term of ChE inhibition in snakehead fish as mixed these two ingredients but the duration of high ChE inhibition is longer In rice field conditions, using Mondeo 60EC (containing Chlorpyrifos ethyl), Bascide 50EC (containing Fenobucarb) or combination of these two insecticides at the recommended maximum dose (0.8L/ha for Mondeo 60EC and 1.5L/ha for Basecide50C) maybe all cause severe and longiv term harmful on cholinessterase activity of snakehead fish Using Bascide 50EC at the recommended maximum dose didn‟t cause seriously effect for snakehead fish, the rate of ChE inhibition from 1,2% - 28% Using Mondeo 60EC and mixture Bascide 50EC with Mondeo 60EC at the recommended maximum doses didn‟t only lead to occur dead fish but also cause high and prolong ChE inhibition, the rate of inhibition from 22,4% - 79,1% (single Mondeo 60EC) and 25,8% - 6,2% (mixture), respectively The measurement ChE activty of snakehead fish can be marked by the use of Bascide 50EC for ricefield within days after spraying, but Mondeo 60EC or mixture of two these pesticides is more than 14 days Applying 2-PAM re-activation technique after one day of exposure is the best method for monitoring and warning of organophosphate pesticide contamination Key words: Channa striata, Cholinesterase, Chlorpyrifos Ethyl, Fenobucarb, Combination, Bio-marker, Rice field, Reactivation v CAM KẾT KẾT QUẢ Tôi xin cam kết cơng trình nghiên cứu “Ảnh hƣởng sử dụng kết hợp thuốc bảo vệ thực vật hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến hoạt tính enzyme cholinesterase cá lóc (Channa striata)” riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chƣa đƣợc công bố luận văn cấp trƣớc Cần Thơ, ngày 20 tháng năm 2018 Ngƣời hƣớng dẫn Nghiên cứu sinh PGs.Ts Nguyễn Văn Cơng Nguyễn Văn Tồn vi MỤC LỤC CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Phạm vi đối tƣợng nghiên cứu 1.5 Ý nghĩa luận án 1.6 Điểm luận án CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình sử dụng thuốc bảo vệ thực vật 2.1.1 Tình hình sử dụng thuốc BVTV giới 2.1.2 Tình hình sử dụng thuốc BVTV Việt Nam Đồng Bằng Sơng Cửu Long 2.1.2.1 Tình hình sử dụng thuốc BVTV Việt Nam 2.1.2.2 Tình hình sử dụng thuốc BVTV Đồng Bằng Sông Cửu Long 2.2 Sự phát tán thuốc BVTV môi trƣờng yếu tố ảnh hƣởng 11 2.2.1 Sự phát tán thuốc BVTV môi trƣờng 11 2.2.2 Các yếu tố ảnh hƣởng đến dƣ lƣợng thuốc BVTV môi trƣờng 12 2.3 Dƣ lƣợng thuốc BVTV môi trƣờng đất, nƣớc 15 2.3.1 Dƣ lƣợng thuốc BVTV môi trƣờng đất 15 2.3.2 Dƣ lƣợng thuốc BVTV môi trƣờng nƣớc 16 2.4 Độc tính thuốc BVTV ảnh hƣởng phối trộn 16 2.4.1 Độc tính thuốc BVTV 16 2.4.2 Ảnh hƣởng hỗn hợp thuốc BVTV đến độc tính thuốc BVTV 18 2.5 Tổng quan enzyme cholinesterase yếu tố ảnh hƣởng đến enzyme 20 2.5.1 Sơ lƣợc Cholinesterase 20 vii 2.5.2 Cơ chế ảnh hƣởng thuốc BVTV đến ChE 22 2.5.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến hoạt tính Cholinesterase 24 2.5.3.1 Nhiệt độ 24 2.5.3.2 Giới tính tuổi 25 2.5.3.3 Giữa phận thể 25 2.5.3.4 Điều kiện trữ mẫu 25 2.5.4 Phƣơng pháp tái kích hoạt enzyme ChE 2-PAM pha loãng mẫu 26 2.5.4.1 Các phƣơng pháp tái kích hoạt ChE 26 2.5.4.2 Ý nghĩa áp dụng kỹ thuật tái kích hoạt phục hồi ChE 27 2.5.5 Những nghiên cứu nƣớc có liên quan đến sử dụng ChE 29 2.6 Giới thiệu cá lóc (Channa striata) 35 2.6.1 Phân loại 35 2.6.2 Phân bố phát triển 35 2.7 Giới thiệu hai hoạt chất Fenobucarb Chlorpyrifos ethyl đƣợc sử dụng nghiên cứu 36 2.7.1 Hoạt chất Fenobucarb 36 2.7.2 Hoạt chất Chlorpyrifos ethyl 37 2.8 Giới thiệu vùng nghiên cứu khảo sát tình hình sử dụng thuốc BVTV 40 CHƢƠNG 3: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 42 3.2 Sinh vật thí nghiệm 42 3.3 Vật tƣ, thiết bị hóa chất sử dụng 42 3.3.1 Vật tƣ thiết bị 42 3.3.2 Thuốc bảo vệ thực vật sử dụng cho thí nghiệm 43 3.3.3 Hóa chất sử dụng để phân tích ChE 44 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 44 viii 3.4.1 Nội dung 1: Khảo sát tình hình sử dụng thuốc BVTV số vùng canh tác lúa ĐBSCL 44 3.4.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng phối trộn thuốc BVTV Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến ChE cá lóc điều kiện phịng thí nghiệm 45 3.4.3 Nội dung 3: Bố trí thí nghiệm xác định ảnh hƣởng phối trộn thuốc BVTV Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến ChE cá lóc ngồi đồng ruộng 47 3.5 Xử lý mẫu phân tích ChE, tái kích hoạt 48 3.6 Tính hoạt tính ChE, tỷ lệ ức chế xử lý kết 50 3.6.1 Xác định hoạt tính ChE 50 3.6.2 Xác định tỷ lệ ức chế: 50 3.6.3 Xác định tỷ lệ tái kích hoạt ChE: 50 3.6.4 Xử lý kết 51 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 53 4.1 Nội dung 1: Hiện trạng sử dụng thuốc BVTV số vùng canh tác lúa Đồng sông Cửu Long 53 4.1.1 Các loại thuốc sử dụng đồng ruộng vùng nghiên cứu 53 4.1.1.1 Các loại thuốc trừ côn trùng sử dụng vùng nghiên cứu 54 4.1.1.2 Các loại thuốc trừ bệnh sử dụng vùng nghiên cứu 56 4.1.1.3 Các loại thuốc trừ cỏ sử dụng vùng nghiên cứu 57 4.1.1.4 Các loại thuốc trừ ốc sử dụng vùng nghiên cứu 57 4.1.1.5 Các loại thuốc trừ chuột thuốc điều hòa sinh trƣởng 58 4.1.2 Tần suất liều lƣợng thuốc BVTV sử dụng canh tác lúa 58 4.1.2.1 Tần suất phun thuốc BVTV canh tác lúa 58 4.1.2.2 Liều lƣợng sử dụng thuốc BVTV 61 4.2 Nội dung 2: Ảnh hƣởng phối trộn thuốc BVTV Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến ChE cá lóc điều kiện phịng thí nghiệm 63 4.2.1 Nhiệt độ, DO, pH thời gian phơi nhiễm thuốc BVTV 63 ix 4.2.2 Nồng độ thuốc Fenobucarb Chlorpyrifos ethyl bố trí thí nghiệm 65 4.2.3 Ảnh hƣởng phối trộn hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến ChE cá lóc điều kiện phịng thí nghiệm 66 4.2.4 Nhiệt độ, DO, pH thời gian phục hồi nƣớc máy 76 4.2.5 Phục hồi ChE nƣớc máy sau phơi nhiễm với Chlorpyrifos ethyl, Fenobucarb hỗn hợp hai hoạt chất điều kiện phòng thí nghiệm 77 4.2.6 Khả tái kích hoạt ChE sau xử lý 2-PAM hỗn hợp hai hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb điều kiện phịng thí nghiệm 80 4.3 Nội dung 3: Ảnh hƣởng sử dụng phối trộn thuốc BVTV Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb cho lúa đến ChE cá lóc sống ruộng lúa 86 4.3.1 Nhiệt độ, pH, DO thời gian thí nghiệm 86 4.3.2 Nồng độ Fenobucarb, Chloryrifos Ethyl nƣớc ruộng sau phun thuốc 88 4.3.3 Ảnh hƣởng sử dụng Bascide 50EC (hoạt chất Fenobucarb) Mondeo 60EC (hoạt chất Chlorpyrifos ethyl) cho lúa đến ChE não cá lóc sống ruộng 89 4.3.4 Khả tái kích hoạt hoạt tính ChE cá lóc đồng ruộng 93 4.3.4.1 Khả tái kích hoạt hoạt tính ChE cá lóc 2PAM phun Mondeo 60EC (hoạt chất Chlorpyrifos ethyl) ruộng lúa 93 4.3.4.2 Khả tái kích hoạt hoạt tính ChE cá lóc 2PAM pha lỗng phun hỗn hợp thuốc Bascide 50EC (hoạt chất Fenobucarb) Mondeo 60EC (hoạt chất Chlorpyrifos ethyl) 95 4.3.5 Đánh giá tổng hợp ảnh hƣởng Fenobucarb Chlorpyrifos ethyl lên cá lóc 97 4.3.6 Đề xuất khả áp dụng đo ChE để cảnh báo nhiễm bẩn thuốc BVTV 98 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 102 5.1 Kết luận 102 5.2 Đề xuất 103 x 10% Hỗn hợp Đối chứng 10% Chlorpyrifos ethyl Đối chứng 10% Fenobucarb Đối chứng * Trung bình khác biệt có ý nghĩa mức 0,05 5.3 -17.1* 5.2 7.0 7.0 7.0 0.8 0.0 0.8 Phụ lục 15: Kết xử lý thống kê Khả tái k ch hoạt ChE sau xử lý b ng 2PAM hỗn hợp hai hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb điều kiện phòng th nghiệm Kiểm định Paired Samples Test Thời gian phơi nhiễm (giờ) Trung bình SE t df Sig (2-tailed) 1% hỗn hợp 12 24 36 48 60 72 96 0,60 -0,37 0,12 0,05 -0,38 -0,63 -0,60 -0,70 0,03 0,33 0,31 0,27 0,40 0,52 0,58 0,44 0,44 0,33 1,84 -1,18 0,43 0,13 -0,73 -1,09 -1,36 -1,61 0,10 5 5 5 5 0,13 0,29 0,69 0,90 0,50 0,33 0,23 0,17 0,92 2% hỗn hợp 12 24 36 48 60 72 96 0,55 -0,40 0,40 0,37 -1,27 -0,58 0,58 -0,52 0,32 0,23 0,51 0,29 0,07 0,26 0,27 0,68 0,21 0,28 2,36 -0,78 1,38 5,50 -4,91 -2,18 0,86 -2,47 1,12 5 5 5 5 0,07 0,47 0,23 0,00 0,06 0,08 0,43 0,06 0,31 5% hỗn hợp 12 24 36 0,60 -0,55 -0,37 -1,67 -1,33 0,40 0,27 0,14 0,41 0,43 1,52 -2,05 -2,56 -4,07 -3,13 5 5 0,19 0,10 0,05 0,01 0,03 160 48 60 72 96 10% hỗn hợp 12 24 36 48 60 72 96 -0,87 0,27 -0,25 -0,30 0,40 0,29 0,24 0,29 -2,15 0,93 -1,04 -1,03 5 5 0,08 0,40 0,35 0,35 0,28 -0,40 -0,85 -1,77 -2,72 -1,13 -0,93 -0,97 -0,27 0,44 0,28 0,23 0,22 0,09 0,17 0,30 0,73 0,26 0,64 -1,44 -3,66 -7,97 -31,14 -6,57 -3,13 -1,32 -1,04 5 5 5 5 0,55 0,21 0,01 0,00 0,00 0,00 0,03 0,24 0,35 161 PHỤ LỤC NỘI DUNG 162 Phụ lục 16: Yếu tố môi trƣờng th nghiệm xác định ảnh hƣởng phun Fenobucarb lên hoạt t nh ChE cá lóc (Channa striata) ruộng lúa Ngày sau Số lần Trung Độ lệch Sai số Giá trị Giá trị phun thuốc lặp lại bình chuẩn chuẩn cao thấp o Nhiệt độ ( C) 9 28,8 1,8 27,5 30,2 9 26,5 0,0 26,4 26,5 9 26,1 0,2 26,0 26,3 9 28,8 0,1 28,7 28,9 9 26,0 0,4 25,7 26,3 14 9 26,1 0,2 26,0 26,3 Trung bình 54 54 27,1 1,4 26,7 27,5 DO (mg/L) 9 2,4 0,7 1,8 3,0 9 1,7 0,5 1,3 2,0 9 1,5 0,4 1,3 1,8 9 2,4 0,2 2,2 2,6 9 1,6 0,1 1,5 1,7 14 9 1,5 0,2 1,4 1,7 Trung bình 54 54 1,9 0,6 1,7 2,0 pH 9 6,6 0,1 6,5 6,7 9 6,7 0,1 6,6 6,7 9 6,8 0,1 6,7 6,8 9 6,8 0,1 6,8 6,8 9 6,6 0,1 6,6 6,7 14 9 6,8 0,1 6,7 6,8 Trung bình 54 54 6,7 0,1 6,7 6,7 Phụ lục 17: Yếu tố môi trƣờng thí nghiệm xác định ảnh hƣởng phun Chlorpyrifos Ethyl lên hoạt tính ChE cá lóc (Channa striata) ruộng lúa Ngày sau Số lần Trung Độ lệch Sai số Giá trị Giá trị phun thuốc lặp lại bình chuẩn chuẩn cao thấp Nhiệt độ (oC) 29,3 0,7 0,2 28,3 30,1 27,2 0,2 0,1 27,0 27,5 26,8 0,3 0,1 26,5 27,2 26,9 0,2 0,1 26,7 27,1 27,3 0,5 0,2 26,9 28,0 163 14 Trung bình 54 27,0 27,4 0,4 1,0 0,1 0,1 26,4 26,4 27,7 30,1 DO (mg/L) 14 Trung bình 9 9 9 54 1,9 1,3 1,1 1,9 1,1 1,1 1,4 0,7 0,6 0,4 0,4 0,2 0,2 0,6 0,2 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 1,0 0,8 0,8 1,4 0,8 0,8 0,8 2,9 2,3 1,7 2,4 1,4 1,6 2,9 9 9 9 54 6,7 6,7 6,7 6,8 6,6 6,8 6,7 0,1 0,1 0,1 0,0 0,1 0,1 0,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 6,6 6,5 6,6 6,8 6,4 6,7 6,4 6,8 6,8 6,8 6,9 6,7 6,8 6,9 pH 14 Trung bình Phụ lục 18: Yếu tố mơi trƣờng thí nghiệm xác định ảnh hƣởng phun kết hợp Chlorpyrifos Ethyl Fenobucarb lên hoạt tính ChE cá lóc (Channa striata) ruộng lúa Ngày sau phun thuốc Nhiệt độ (oC) 14 21 Trung bình DO (mg/L) Số lần lặp lại Trung bình Độ lệch chuẩn Sai số chuẩn Giá trị cao Giá trị thấp 9 9 9 63 28,3 27,1 27,9 27,9 27,7 27,2 28,3 27,8 0,1 0,3 0,6 0,4 0,3 0,1 0,4 0,6 0,0 0,1 0,2 0,1 0,1 0,0 0,1 0,1 28,1 26,8 27,1 27,4 27,3 27,2 28,1 26,8 28,4 27,4 28,4 28,2 28,1 27,3 28,8 28,8 9 1,9 0,8 0,8 0,4 0,1 0,2 0,1 0,0 0,1 1,5 0,7 0,6 2,3 0,9 0,9 164 14 21 Trung bình 9 9 63 0,7 0,8 0,8 0,6 0,9 0,0 0,0 0,1 0,1 0,4 0,0 0,0 0,0 0,0 0,1 0,7 0,8 0,7 0,5 0,5 0,7 0,9 0,9 0,7 2,3 9 9 9 63 6,6 6,5 6,5 6,6 6,6 6,6 6,7 6,6 0,1 0,1 0,2 0,0 0,1 0,1 0,0 0,1 0,0 0,0 0,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 6,5 6,3 6,3 6,6 6,4 6,4 6,6 6,3 6,7 6,6 6,7 6,6 6,7 6,7 6,7 6,7 pH 14 21 Trung bình Phụ lục 19: Kết xử lý thống kê tỷ lệ ức chế ChE cá lóc phun hoạt chất Fenobucarb cho lúa đến ChE Bảng phân t ch phƣơng sai (Anova) ChE Tổng bình phƣơng 9.223,04 7.699,47 16.922,51 Nguồn biến động Giữa nhóm Trong nhóm Tổng Độ tự 101 107 Trung bình bình phƣơng 1.844,61 76,99 F tính 23,96 Sig 0,00 Kiểm định Duncana,b Ngày sau phun N Phân nhóm tỷ lệ ức chế (%) -1,8 18 18 0,0 14 18 1,2 18 1,8 18 18 Sig 13,0 24,2 0,28 165 1 Phụ lục 20: Kết xử lý thống kê tỷ lệ ức chế ChE cá lóc phun hoạt chất Chlorpyrifos ethyl cho lúa đến ChE Bảng phân t ch phƣơng sai (Anova) Nguồn biến động ChE Giữa nhóm Trong nhóm Tổng Tổng bình phƣơng 117.137,7 36.252,9 153.390,7 Độ tự 101 107 Trung bình bình phƣơng 23.427,5 302,1 F tính 77,5 Sig 0,000 Kiểm định Duncana,b Ngày sau phun N -9,1 Phân nhóm tỷ lệ ức chế (%) 18 14 18 18 18 18 73,0 18 79,1 22,4 35,4 51,0 Sig 1,0 1,0 1,0 1,0 0,3 Phụ lục 21: Kết xử lý thống kê tỷ lệ ức chế ChE cá lóc phun kết hợp hoạt chất Fenobucarb Chlorpyrifos ethyl cho lúa Bảng phân t ch phƣơng sai (Anova) ChE Nguồn biến động Giữa nhóm Trong nhóm Tổng Tổng bình phƣơng 131.326 41.615 172.940 Độ tự 118 125 Trung bình bình phƣơng 21.887,6 283,1 F tính 77,3 Sig 0,000 Kiểm định Duncana,b Ngày sau phun N 18 -0,5 166 Phân nhóm tỷ lệ ức chế (%) 21 18 25,8 14 18 18 73,4 18 82,5 18 85,7 18 86,2 49,7 Sig 1,0 1,0 1,0 82,5 0,1 0,5 Phụ lục 22: Kết xử lý thống kê tỷ lệ ức chế ChE cá lóc trƣớc sau áp dụng tỷ lệ tái k ch hoạt với 2PAM th nghiệm xác định ảnh hƣởng phun Chlorpyrifos ethyl cho lúa đến ChE Bảng phân t ch phƣơng sai (Anova) Trung Tổng Mẫu phân Độ tự bình Nguồn biến động bình F tính Sig tích bình phƣơng phƣơng Giữa nhóm 1115,9 223,2 77,5 0,00 ChE Trong nhóm 345,4 101 2,9 Tổng 1461,2 107 Giữa nhóm 222,9 44,6 14,5 0,00 ChETrong nhóm 368,3 101 3,1 2PAM Tổng 591,3 107 Kiểm định Duncana,b Mẫu phân tích ChE Ngày sau phun thuốc Phân nhóm tỷ lệ ức chế (%) N 18 2,0 18 2,6 18 18 14 18 18 Sig ChE – 2PAM 4,8 6,3 7,6 10,6 0,3 18 5,4 18 5,9 167 1 1 14 18 6,2 18 7,8 18 7,8 18 9,4 Sig 0,2 0,9 Phụ lục 23: Kết xử lý thống kê tỷ lệ ức chế ChE cá lóc trƣớc sau áp dụng tỷ lệ tái k ch hoạt với 2PAM th nghiệm xác định ảnh hƣởng phun Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb cho lúa đến ChE Bảng phân t ch phƣơng sai (Anova) Trung Tổng Mẫu phân Độ tự bình Nguồn biến động bình F tính Sig tích bình phƣơng phƣơng Giữa nhóm 699,6 116,6 56,4 0,00 ChE Trong nhóm 279,2 118 2,1 Tổng 978,8 125 Giữa nhóm 274,0 45,7 15,7 0,00 ChETrong nhóm 393,7 118 2,9 2PAM Tổng 667,6 125 Giữa nhóm 944,0 157,3 61,3 0,00 ChE - Pha Trong nhóm 346,6 118 2,6 loãng Tổng 1290,6 125 Kiểm định Duncana,b Mẫu phân tích ChE Ngày sau phun thuốc Phân nhóm tỷ lệ ức chế (%) N 18 1,2 18 1,2 18 1,5 18 2,3 14 18 21 18 18 Sig 4,3 6,4 9,8 0,1 168 1 ChE – 2PAM 18 4,4 18 5,9 18 6,0 14 18 6,3 21 18 6,7 18 18 8,0 10,5 Sig ChE – Pha loãng 0,3 18 1,2 18 1,5 1,5 18 1,7 1,7 18 14 18 21 18 18 Sig 1 2,6 4,7 8,2 9,8 0,4 169 0,1 1 MỘT SỐ HÌNH ẢNH NGHIÊN CỨU Hình 1: Phỏng vấn điều tra thuốc BVTV Hình 2: Phun thuốc trừ sâu, rầy khu vực điều tra, vấn 170 Hình 3: Một số loại thuốc BVTV đƣợc sử dụng vùng vấn 171 Hình 4: Cá đƣợc dƣỡng bể composite 600L trƣớc bố trí thí nghiệm Hình 5: Chuẩn bị bể thí nghiệm bố trí 172 Hình 6: Hệ thống bể thí nghiệm nghiên cứu mơi trƣờng nƣớc máy Hình 7: Bố trí thí nghiệm đồng ruộng 173 Hình 8: Q trình mỗ não cá Hình 9: Quá trình chuẩn bị phân tích mẫu đo ChE não cá lóc 174 ...TÓM TẮT Luận án ? ?Ảnh hƣởng sử dụng kết hợp thuốc bảo vệ thực vật hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến hoạt tính enzyme Cholinesterase cá lóc (Channa striata)? ?? đƣợc thực điều kiện... đó, luận án ? ?Ảnh hƣởng sử dụng kết hợp thuốc bảo vệ thực vật hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến hoạt tính enzyme Cholinesterase cá lóc (Channa striata)? ?? đƣợc thực 1.2 Mục tiêu nghiên... thuốc bảo vệ thực vật hoạt chất Chlorpyrifos ethyl Fenobucarb đến hoạt tính enzyme cholinesterase cá lóc (Channa striata)? ?? riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chƣa đƣợc công bố luận văn