Báo cáo tối ưu hóa quá trình thu nhận flavonoid từ củ cải trắng (raphanus sativus l ) với sự hỗ trợ của vi sóng

LỜI MỞ ĐẦU Flavonoid nhóm thuộc nhóm hợp chất polyphenol, biết đến nhóm hợp chất tự nhiên có nhiều tác dụng tốt cho sức khỏe người, bật chức chống oxi hóa, kháng khuẩn, chống viêm nhiễm ung thư… Trong tự nhiên, hợp chất flavonoid tồn phổ biến, tìm thấy tất loài thực vật Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu flavonoid từ loài thực vật khác nhau, tập trung vào khảo sát thành phần hóa học, hoạt tính sinh học hợp chất đơn lẻ dịch chiết, phương pháp cải thiện hiệu suất thu nhận (sử dụng phương pháp trích ly đại có giải pháp hỗ trợ: enzyme, vi sóng, sóng siêu âm, áp suất cao ), ứng dụng hợp chất thu nhận vào việc tạo sản phẩm thương mại Các phương pháp trích ly đại cho hiệu thu nhận cao hơn, rút ngắn thời gian trích ly, bảo tồn hoạt tính dịch chiết thu Tuy nhiên, điều kiện trích ly tối ưu cho phương pháp đối tượng cụ thể không giống Củ cải trắng tên khoa học Raphanus sativus L., thuộc họ cải Brassicaceae, trồng hàng năm, dùng loại rau ăn củ Việt Nam nhiều nước giới Theo tài liệu y học ghi nhận, củ cải trắng có vị cay, không độc, Những nghiên cứu khoa học công bố gần từ số nước giới cho thấy củ cải trắng có thành phần hóa học phong phú, có chứa hợp chất phenolic flavonoid Ở nước ta, củ cải trắng loại rau phổ biến, rẻ tiền, trồng sử dụng nhiều, nghiên cứu thành phần, hoạt tính ứng dụng loại củ cịn hạn chế Với mục đích thu nhận dịch chiết giàu flavonoid từ củ cải trắng, thực nghiên cứu: “Tối ưu hóa q trình thu nhận flavonoid từ củ cải trắng Raphanus sativus L với hỗ trợ vi sóng” Trong q trình thực nghiên cứu này, cố gắng, song khơng thể tránh cịn nhiều hạn chế, thiếu sót Rất mong nhận góp ý Hội đồng để đề tài hoàn thiện ❖ Mục đích nghiên cứu: Xác định điều kiện tối ưu cho q trình xử lý vi sóng để thu nhận hợp chất giàu hoạt tính chống oxi hóa từ củ cải trắng Raphanus sativus L ❖ Nội dung chính: Tối ưu trình thu nhận flavonoid từ củ cải trắng điều kiện không xử lý xử lý vi sóng Xác định điều kiện xử lý vi sóng để phá vỡ tế bào giúp thu nhận flavonoid tốt Khảo sát hoạt tính chống oxi hóa flavonoid thu ❖ Phương pháp nghiên cứu: Các phương pháp phân tích thơng thường dùng để xác định thành phần hóa học nguyên liệu củ cải trắng Đánh giá hiệu q trình trích ly qua hàm lượng flavonoid thu nhận Hàm lượng flavonoid tổng xác định phương pháp tạo màu với muối nhơm clorua Hoạt tính chống oxi hóa đánh giá qua khả khử gốc tự ABTS* Quá trình tối ưu thực theo mơ hình Box – Wilson dạng CCC phần mềm Mode 5.0 Quan sát thay đổi cấu trúc bề mặt nguyên liệu điều kiện không xử lý xử lý vi sóng phương pháp chụp SEM CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan củ cải trắng 1.1.1 Thực vật học cải củ Củ cải trắng (white radish) củ cải củ, có tên khoa học Raphanus sativus L thuộc giới thực vật, ngành Magnoliophyta, lớp Magnoliopsida, Brassicales, họ Brassicaceae, chi Raphanus, loài sativus [1] Củ cải trắng cịn có tên gọi khác white radish (Anh), Daikon (Nhật), Hua piahs (Thái Lan), Lai fu (Trung Quốc), Lobak beurem (Indonesia), Mu (Hàn Quốc), Muli (Ấn Độ) [1], [2] Nhiều tài liệu cho cải củ hoang dại có nguồn gốc từ khu vực Biển Đen Địa Trung Hải, dùng loại thực phẩm từ thời Ai Cập cổ đại, sau trồng châu Âu vào kỉ 16-17 châu Mỹ vào kỉ 20 Ở khu vực Đông Á, nhiều loại củ cải khác phát trồng Trung Quốc khoảng 2450 năm trước Nhật Bản 1300 năm trước [3] Chi Raphanus chia thành phân chi: Raphanis DC Hesperidopsis Boiss Phân chi Raphanis DC có lồi khác gồm Raphanus sativus, Raphanus raphanistrum, Raphanus microcarpus, Raphanus rostras Raphanus landra Phân chi Hesperidopsis Boiss có lồi Raphanus maritimus [3] Loài Raphanus sativus lại chia thành thứ khác nhau, gồm: thứ radicular DC (thứ sativus Saz củ cải Hatsuka, củ cải tròn nhỏ miền Bắc Trung Quốc), thứ niger (Mill.) Pers (thứ majorA.Voss, củ cải đen, củ cải nhỏ nước phương tây), thứ raphanistroides Makino (thứ hortensis Backer, củ cải miền bắc Trung Quốc, củ cải miền nam Trung Quốc, củ cải Nhật Bản), thứ mougri Helm (thứ caudatus (L.) Hooker et Anderson, củ cải có đi), thứ olerfer Netz (thứ oleiformis Pers., củ cải lấy dầu) [3] Trong thứ lại chia thành nhiều giống khác nguồn gốc, lai hóa, điều kiện đất đai, khí hậu, mùa vụ gieo trồng Nhìn chung, gia đình họ cải củ có đa dạng kích thước, hình dáng màu sắc Dựa vào yếu tố màu sắc, người ta thường chia củ cải thành nhóm lớn: củ cải trắng (white radish), củ cải đỏ (red radish) củ cải đen (black radish) Dựa vào yếu tố hình dáng, chia củ cải thành nhóm lớn: cải tròn củ cải dài Trong củ cải tròn, nhiều màu sắc khác phổ biến nước phương Tây, củ cải dài màu trắng phổ biến nước châu Á Nhật Bản, Hàn Quốc, Trung Quốc, Việt Nam Cải củ hàng năm, thân củ, trồng chủ yếu để lấy củ Củ dùng ăn sống, nấu chín ngâm muối Ở số quốc gia, thân sử dụng loại rau Cây cải củ (mầm củ cải), sử dụng loại rau Cải củ có rễ cọc phình to thành củ chứa nhiều dinh dưỡng, hình dáng, màu sắc, kích thước phụ thuộc vào giống Rễ củ phận dùng thực phẩm mà ta quen gọi củ, củ có hình dạng khác phụ thuộc vào giống, chế độ dinh dưỡng, đất đai điều kiện ngoại cảnh Củ hình thành giai đoạn - thật tuỳ giống Củ cải trắng Việt Nam thường thon dài 15 - 30 cm, đường kính - cm, màu trắng, vị cay nồng, cấu trúc giịn [1], [4] Hình 1.1 Một số loại củ cải Lá: có màu xanh xanh vàng tùy giống Lá mọc phần đầu củ gồm phiến cọng Cọng dài hay ngắn, nhỏ hay to, khơng lơng hay có lơng tùy giống Phiến ngun hay xẻ thùy, rìa ngun hay cưa tùy giống Hoa có dạng chùm mọc thành cụm đỉnh có màu trắng hay phớt tím, hoa có cánh hoa Quả dài hình trụ thắt lại đoạn, mỏ dài, có màu xanh, chín vỏ chuyển sang màu vàng, số hạt tuỳ theo giống, thông thường có từ 3-5 hạt Hạt hình trịn thn dài, hạt có màu xanh, chín hồn tồn hạt chuyển sang màu nâu [4], [5] Hình 1.2 Hoa, cải củ Cải củ trồng quanh năm Thời gian trồng tốt mùa xuân đầu mùa thu Thời gian sinh trưởng khác từ 50 đến 90 ngày tùy giống sản phẩm mong muốn, thường 50 - 60 ngày vào mùa hè 70 - 80 ngày vào mùa đông Nhiệt độ lý tưởng cho sinh trưởng 20 - 250C pH đất trồng tối ưu 6,0 – 6,5 Loại trồng khơng chịu điều kiện ngập nước [4,5] Hình 1.3 Cây củ cải trắng 1.1.2 Thành phần hóa học củ cải trắng 1.2.2.1 Thành phần hóa học Các thành phần hóa học 100 g củ cải trắng nêu bảng 1.1 Trong củ cải trắng, protein chiếm khoảng 1,5% khối lượng củ với nhiều acid amin không thay glycine, alanine, serine, proline, valine, threonine, trans-4 hydroxy – L – proline, leucine, isoleucine, methione, phenylalanine, arginine, acid aspartic, acid glutamic, tryptophan, cystein, lysine, histidine, tyrosine cystine [6], [7] Bảng 1.1 Thành phần hóa học 100 g củ cải trắng Việt Nam STT Thành phần Hàm lượng STT Thành phần Hàm lượng Nước 92 g Sắt 1,1 mg Protein 1,5 g Phospho 41 mg Glucid 3,7 g 10 Vitamin PP 0,5 mg Lipid 0,1 g 11 Vitamin B1 0,1 mg Chất xơ 1,5 g 12 Vitamin B2 0,1 mg Tro 1,2 g 13 Vitamin C 30 mg Canxi 40 mg 14 Β-caroten 15 mcg (nguồn: Viện dinh dưỡng quốc gia Việt Nam) Glucid củ cải trắng bao gồm đường, tinh bột, pectin xơ Đường củ cải trắng chủ yếu glucose, lượng nhỏ fructose, sucrose pentosan Tinh bột thay đổi tùy theo giống, chiếm từ 0,2 – 0,5% Xơ chiếm lượng khoảng 1,5% gồm chủ yếu cellulose hemicellulose có phần vỏ, mơ nâng đỡ thành tế bào củ cải trắng, đóng vai trị tạo cấu trúc, chống lại va chạm học Pectin chiếm khoảng 0,3%, chủ yếu tham gia vào cấu tạo thành tế bào, tồn chủ yếu dạng calcium pectate [8], [9] Ngoài ra, củ cải trắng bật với hàm lượng lipid thấp, hàm lượng vitamin khoáng cao Một số khoáng vi lượng tìm thấy củ cải trắng nhôm, bari, liti, mangan, silic, titan, flour iod với hàm lượng tổng lên đến 18 µg/100g [8] 1.2.2.2 Các hợp chất thứ cấp củ cải trắng Các nghiên cứu công bố cho thấy củ cải trắng có chứa nhiều hợp chất thứ cấp có lợi cho sức khỏe người Enzyme: củ cải trắng tìm thấy diện enzyme invertase, cellulase, ß-galactosidase, protease, peroxidase, catalase, sucrase, amylase, alcohol dehydrogenase, pyruvic carboxylase [8], [10], [11], glutathione reductase [12] raphanin [13] Trong số này, catalase glutathione reductase enzyme có tác dụng chất chống oxi hóa bậc 2, góp phần ngăn chặn tạo thành gốc tự [14] Ngoài ra, raphanin, protease trung tính có khả kháng khuẩn kháng nấm mạnh tìm thấy củ cải trắng Acid hữu cơ: chủ yếu gồm acid oxalic, acid malic, acid malonic, acid erythorbic, acid erucic, acid gentisic, acid hydrocinnamic, acid salicylic acid vanillic [15], [16] Các hợp chất phenolic: flavonoid tìm thấy củ cải trắng gồm quercetin, kaempferol, myricetin, apigenin, luteolin, catechin rutin [17], [18] Các acid phenolic có mặt củ cải trắng gồm caffeic, p-coumaric, ferulic, hydroxycinnamic, p-hydroxybenzoic, vanillic, salicylic, acid gentisic [16], acid syringic phenyl pyruvic [19] Anthocyanidin tìm thấy củ cải trắng với hàm lượng nhỏ, ngoại trừ pelargonidine, delphinidin cyanidine, chất tạo màu cho củ cải đỏ, hồng tía [16] Các hợp chất isothiocyanate: gồm 4-methylthio-3-butenyl isothiocyanate (raphasatin), 4-(methylthio) butyl isothiocyanate (erucin) [20], allyl isothiocyanate benzyl isothiocyanate phenethyl isothiocyanate [12] ghi nhận có mặt thành phần củ cải trắng Ngoài thành phần trên, củ cải trắng cịn có hợp chất tannin, alkaloid, coumarin, gibberellin hợp chất có chứa lưu huỳnh 1.2 Hợp chất flavonoid 1.2.1 Khái niệm Flavonoid hợp chất màu phenol thực vật, tạo màu cho nhiều loại rau, hoa Flavonoid có cấu trúc 1,3-diphenylpropan, nghĩa gồm vòng benzen (vòng A B) nối với qua dây carbon (vịng pyron - vịng C) Hình 1.4 Khung sườn flavonoid [21] 1.2.2 Phân loại Flavonoid chia thành ba phân nhóm chính: euflavonoid (2phenylbenzopyrans), isoflavonoid (3-benzopyrans) neoflavonoid (4- benzopyrans) Trong nhóm flavonoid lại chia thành nhóm phụ khác dựa vào khác biệt cấu tạo vòng C [22], [23] Hình 1.5 Các phân nhóm flavonoid (A: euflavonoid, B: iso-flavonoid, C: neo-flavonoid) • Phân nhóm euflavonoid gồm nhóm phụ: flavan, flavan 3-ol (catechin), flavan 4-ol, flavan 3,4-diol, anthocyanidin, flavanone, flavone, flavonol, 3-hydroxy flavanon, chalcon, dihidrochalcon, aurone • Phân nhóm isoflavonoid gồm nhóm phụ: iso flavan, iso flavan-4-ol, isoflavon, isoflavanon, rotenoid…Thường gặp isoflavon họ đậu • Neoflavon giới hạn số gồm nhóm phụ 4-aryl-chroman, 4-aryl-coumarin, dalbergion Ngồi người ta cịn phân loại flavonoid thành flavonoid, biflavonoid, triflavonoid flavonlignan [22] 1.2.3 Tính chất lý hóa Trong thực vật, flavonoid tồn dạng: dạng tự (gọi aglycon) dạng liên kết với đường (glycoside) Các glycoside bị thủy phân acid enzyme giải phóng đường aglycon Các đường thường gặp D-glucose, Dgalactose, L-rhamnose, L-arabinose, D-xylose, D-apiose [22] Tính tan: aglycon tan dung môi phân cực (hexan, benzen, ether dầu hỏa), tan dung môi phân cực vừa mạnh (ethyl acetate, dimethyl ether, methanol, ethanol), tan kiềm loãng, tan dung dịch acid Glycoside: tan ethanol, methanol Các glycoside có nhiều nhóm đường mạch đường dài tan tốt nước nóng Các flavonoid glycoside có nhóm -OH vị trí C7 cịn tan dung dịch NaOH, Na2CO3, NaHCO3 có tính acid Các flavonoid dạng aglycon thường dễ kết tinh, glycoside thường khó kết tinh [22] Các flavonoid thường có màu Flavon có màu vàng nhạt màu cam; flavonol có màu vàng đến vàng nhạt; chalcon có màu vàng đến cam đỏ Các isoflavon, flavanon, flavanonol, leucoanthocyanidin, catechin kết tinh không màu Anthocyanidin thường diện dạng glycosid: pelargonidin, cyanidin, delphinidin…tạo màu xanh dương, đỏ, tím cho hoa trái [21], [22] Các flavonoid dễ tạo muối tan nước với hydroxyd kiềm, nhạy cảm với pH, nhiệt độ ánh sáng Có khả tạo phức với ion kim loại cho sản phẩm có màu đặc trưng Hệ thống nối đơi liên hợp tạo vòng benzen vòng pyron làm cho flavonoid có khả hấp thụ tia tử ngoại Thường thu dải hấp thu cực đại, dải có λmax = 320 - 380 nm, dải có λmax = 240 - 280 nm [22] 1.2.4 Giá trị sinh học flavonoid 1.2.4.1 Hoạt tính chống oxi hóa Gần đây, hợp chất flavonoid coi chất chống oxi hóa mạnh mẽ ống nghiệm chứng minh chất chống oxi hóa mạnh vitamin C, vitamin E carotenoids [24] Chất chống oxi hóa hợp chất trì hỗn, ức chế ngăn chặn q trình oxi hóa gây gốc tự giảm bớt tình trạng stress oxi hóa [25], [26] Stress oxi hóa trạng thái cân số lượng gốc tự sản sinh nhiều vượt qua khả chống oxi hóa nội sinh, dẫn đến trình oxi hóa loại đại phân tử sinh học, enzym protein DNA lipid [24], [26] Stress oxihóa nguyên nhân quan trọng phát triển bệnh thối hóa mãn tính bao gồm bệnh mạch vành tim, ung thư lão hóa [24], [25] Khả chống oxi hóa flavonoid giải thích dựa vào đặc điểm cấu trúc phân tử chúng: • Trong phân tử flavonoid có chứa nhóm hydroxyl liên kết trực tiếp với vịng thơm có khả nhường hydro giúp chúng tham gia vào phản ứng oxi hóa khử, bắt giữ gốc tự do; • Chứa vịng thơm liên kết bội (liên kết C=C, C=O) tạo nên hệ liên hợp giúp chúng bắt giữ, làm bền hóa phần tử oxi hoạt động gốc tự • Chứa nhóm tạo phức chuyển tiếp với ion kim loại catechol…giúp làm giảm trình sản sinh phần tử oxi hoạt động [24], [25] Q trìnhchống oxi hóa flavonoid chủ yếu theo chế sau: • Khử vô hoạt gốc tự donhờ oxi hóa khử thấp: hợp chất flavonoid nhờ oxi hóa khử thấp nên khử gốc tự cách nhường ngyên tử hidro electron cho gốc tự [26] Hình 1.6 Cơ chế ức chế catechol với gốc tự peroxyl [25] • Ức chế hình thành gốc tự cách liên kết với ion kim loại vi lượng tham gia vào trình sản xuất gốc tự [26] 10 đáng kể Sự thay đổi cấu trúc bề mặt mẫu bã trích ly có vi sóng rõ nét, thể nguyên liệu bị phá vỡ phần, sợi khít Điều cho thấy vi sóng có tác dụng hỗ trợ cho việc xử lý mẫu nên tăng hiệu trích ly Các kết góp phần rõ nét vào việc minh chứng trích ly có vi sóng hàm lượng hợp chất trích y thực tế cao đáng kể hợp lý theo quy luật khoa học chứng minh 40 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau q trình khảo sát sử dụng vi sóng hỗ trợ q trình trích ly thu nhận dịch chiết giàu flavonoid từ bột củ cải trắng (Raphanus sativus L.), chúng thu kết sau: ➢ Điều kiện thích hợp cho q trình trích ly khơng có vi sóng là: • Dung mơi ethanol 70o • Tỷ lệ mẫu/dung môi: 1/30 g/ml • Nhiệt độ: 50oC • Thời gian: ➢ Điều kiện tối ưu cho q trình trích ly có vi sóng là: • Dung môi ethanol 70o • Tỷ lệ mẫu/dung môi: 1/21 g/ml • Cơng suất vi sóng: 300 W • Thời gian xử lý vi sóng: 5,2 phút ➢ Phương trình hồi quy thu được: Y = 13,0404 + 0,4504X1 + 0,3757X2 – 1,2376X12– 1,2024X22 – 0,8401X32 ➢ TFC thu khơng có vi sóng 10,218 mg/g, điều kiện tối ưu có vi sóng 13,0115 mg/g, tăng 28,41% 4.2 Kiến nghị Nghiên cứu sử dụng thêm các phương pháp trích ly khác như: sử dụng loại enzyme dùng sóng siêu âm, kết hợp để q trình trích ly thu nhận dịch chiết đạt hiệu cao Khảo sát hoạt tính sinh học dịch chiết thu Ngoài ra, định danh số hợp chất khác củ cải trắng để đánh giá khả dược liệu dịch chiết 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Morgan W and D Midmore, Daikon in Australia Rural industries research and development corporation Publication No 03/091 Project No UCQ -10a, 2003 Lim T.K., Edible medicinal and non-medicinal plant Vol 9: Modified stems roots bulbs 2015: Springer Kole C., Genome mapping and molecular breeding in plants Vol 5: Vegetable 2007 New york: Springer Berlin Heidelberg Cúc T.T.T., Giáo trình trồng rau 2007: Nhà xuất Nông nghiệp Sở Nông nghiệp & triển Nơng thơn Lâm Đồng,Quy trình kỹ thuật trồng cải củ Ban hành kèm theo định số 1251/QĐ-SNN ngày 13/12/2012 Sở Nông nghiệp PTNT Lâm Đồng V/v Ban hành tạm thời quy trình canh tác số trồng địa bàn tỉnh Lâm Đồng Katsuzaki H et al., Chemistry and antioxidative activity of hot water extract of Japanese radish (daikon).Biofactor 2004 21: p 211-214 Nhu P.H.Q., Minh N.P and Dao D.T.A., Hydrolyzation of Raphanus sativus L White hot radish starch to receive active elements and nutritional components Internationa Journal of Engineering Research & Technology 2014 3(1): p 2041-2049 Singh P and J singh, Medicinal and therapeutic utilities of Raphanus sativus Internationa Journal of plant animal and environmental sciences 2013 3(2): p 103-105 Jahan M.G.S et al., Correlation between â-amylase activity and starch content in different cultivars of radish (Raphanus sativus L.) Biotechnology 2014 9(7): p 298-302 10 Jahan M.G.S et al., Screening of some enzyme and nutrients in radish (Raphanus sativus L.) root Philiip J Anim Sci 2011 37: p 89-100 42 11 Hồng T.T cộng sự, Nghiên cứu phương pháp sử dụng enzyme peroxidase tách chiết từ củ cải trắng để xác định hàm lượng thủy ngân nước ô nhiễm Tạp chí Khoa học ĐH Quốc gia Hà Nội Khoa học Tự nhiên & Công nghệ 2008 24: p 23-27 12 Shin T et al., Biological activity of various radish species Orient Pharm Exp Med 2015 15: p 105-111 13 El-sayed S.T., Purification and characterization of Raphanin a neutral protease from raphanus sativus leaves Pakistan journal of Biological sciences 2001 4(5): p 564-568 14 Hà L.T.N Thư.V.T., Stress oxi hóa chất chống oxi hóa tự nhiên Tạp chí Khoa học Phát triển 2003.7(5): p 667 - 677 15 Strack D et al., Tissue distribution of phenylpropanoid metabolism in cotyledons of Raphanus sativus L Planta 1985 164(507-511) 16 Gutierrez R.M.P and R.L Perez, Raphanus sativus (Radish): their chemistry and biology The Scientific Word journal 2004 4: p 811-837 17 Ghasemzadeh A et al., Flavonoid compounds and their antioxidant activity in extract of some tropical plants Journal of Medicinal Plants Research 2012 6(13): p 2639-2643 18 Lugasi A and J Hovari, Flavonoid aglycons in foods of plant origin I Vegetables Acta Aliment 2000 29: p 345-352 19 Beevia S.S., Mangamooria N.P and GowdaB.B., Polyphenolics profile and antioxidant properties of Raphanus sativus L Natural product Res 2012 26(6): p 557-563 20 Consolacion Y Ragasaet al., Isothiocyanates sterol and triglycerides from Raphanus sativus Der Pharmacia Lettre 2015 17(2): p 293-296 21.Phụng N.K.P., Phương pháp cô lập hợp chất hữu 2007: NXB ĐH quốc gia Tp.HCM 22 Thu N.V.và Hùng.T., Dược liệu học 2011 Nhà xuất Y học Bộ Y tế 43 23 Grotewold E., The Science of Flavonoids 2006 New York: Springer Science Business Media Inc 24 Dai J and R.J Mumper, Plant Phenolics: Extraction Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties Molecules 2010.15: p 7313-7352 25 Gulcin, Antioxidant activity of food constituents: an overview Arch Toxicol 2012 86: p 345–391 26 Hà L.T.N.và Thư.V.T., Stress oxi hóa chất chống oxi hóa tự nhiên tạp chí Khoa học Phát triển 2013 2009 7(5): p 667-677 27 J.B.Harborne and C.A.Williams, Review: Advances in flavonoid research since 1992 Phytochemistry 2000 55: p 481 -504 28 Trung B.H.vàMai N.T.T., Nghiên cứu mối quan hệ hoạt tính ức chế gốc tự NO với cấu trúc hoạt chất cô lập từ hoa cúc trắng Tạp chí khoa học cơng nghệ 2009 12(10): p 48-56 29 Viên Đ.T.H., Nghiên cứu khảo sát hoạt chất flavonoid mơ Prunus armeniaca (họ Rosaceae) Tạp chí Khoa học công nghệ 2007 45(2): p 4953 30 K Agarwal, R Varma (2014), Radical scavenging ability and biochemical screening of a common Asian vegetable- Raphanus sativus L., Int J Pharm Sci Res., vol 27, no 1, pp 127-137 31 Trần Thị Hồng, Trần Hoàng Thanh, Nguyễn Thị Hà Giang (2008), Nghiên cứu phương pháp sử dụng enzyme peroxidase tách chiết từ củ cải trắng để xác định hàm lượng thủy ngân nước nhiễm, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, vol Khoa học Tự nhiên Công nghệ 24, pp 23-27 32 Nguyễn Anh Thủy, Dương Anh Tuấn, Vũ Nguyên Thành (2011), Tinh chế peroxide từ củ cải trắng Raphanus sativus Var hortensis ứng dụng xét nghiệm ethanol, Tạp chí cơng nghệ sinh học, 113-118 44 33 Tuấn H.V., Nghiên cứu tách chiết xác định số hoạt tính sinh học dịch chiết flavonoid từ diếp cá (Hoyttuynia cordata Thunberg) thu hái Hà Nội Tạp chí Sinh học 2013 35(3S): p 183-187 34 ệzỗelik B et al., Antimicrobial Activity of Flavonoids against ExtendedSpectrum β-Lactamase (ESβL)-Producing Klebsiella pneumonia Tropical Journal of Pharmaceutical Research 2008 7(4): p 1151-1157 35 Segovia R.G et al., Effect of the flavonoid quercetin on inflammation and lipid peroxidation induced by Helicobacter pylori in gastric mucosa of guinea pig J Gastroenterol 2008 43: p 441-447 36 Nishioka T et al., Baicalein - an α-glucosidase inhibitor from Scutellaria baicalemis II Journal of Natural Products 1998 61: p 1413-1415 37 Angst E et al., The flavonoid quercetin inhibits pancreatic cancer growth in vitro and in vivo Pancreas 2013 42(2): p 223-229 38 Susanti D et al., Antioxidant and cytotoxic flavonoids from the flowers of Melastoma malabathricum L Food Chemistry 2007 103: p 710-716 39 Chang C.c et al., Estimation of Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods Journal of Food and Drug Analysis 2002 10(3): p 178-182 40 Re R et al., Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay Free radical biology and medicine 1999 26: p.1231 1237 41 Gabrielsson J et al., Multivariate methods in pharmaceutical applications Journal of chemometrics 2002 16(3): p.141 – 160 45 PHỤ LỤC Phụ lục 1: kết thí nghiệm 1.1 Khảo sát loại dung môi 1.1.1 Xác định TFC NT Ehyl acetate Metanol Ethanol 90 Ethanol 90 + 1% HCl Chloroform Kl mẫu (g) 1 1 1 1 Ẩm (%) 8.644 8.644 8.644 8.644 8.644 8.644 8.644 8.644 8.644 CK (g) 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 V (ml) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 HSPL 10 10 10 10 250 250 250 250 250 OD 0.069 0.032 0.043 0.154 0.007 0.006 0.005 0.005 0.004 1 1 8.644 8.644 8.644 8.644 8.644 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 0.9136 20 20 20 20 20 250 250 250 10 10 0.008 0.009 0.008 0.012 0.005 46 8.644 10.997 10.997 10.997 8.644 8.644 8.644 0.9136 1.7890 1.8691 1.7890 0.9136 0.9136 0.9136 Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.9972 10.9972 10.9972 CK (g) 1.8602 1.7890 1.8602 1.8424 1.8602 1.8424 1.8068 1.7890 1.8335 1.7890 1.8691 1.7890 1.8869 1.7801 1.8335 1.8869 1.7801 1.8335 0.9256 0.9256 0.8989 V (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 HSPL 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 304 304 304 V (ml) 100 100 100 100 HSPL 40 40 40 40 OD 2.01 2.1 2.01 Ethanol 70 1 Nước 20 100 100 100 20 20 20 10 20 20 20 10 10 10 0.004 0.039 0.047 0.044 0.047 0.054 0.039 1.1.2 Xác định ABTS NT Kl mẫu (g) 2.09 2.01 Ehyl acetate 2.09 2.07 2.09 Metanol 2.07 2.03 2.01 Ethanol 90 2.06 2.01 2.1 Ethanol 90 + 1% HCl 2.01 2.12 Chloroform 2.06 2.12 Ethanol 70 2.06 1.04 1.04 1.01 Nước 1.2 Khảo sát tỉ lệ rắn: lỏng 1.2.1 Xác định TFC NT 1.10 1.10 1.10 1.20 Kl mẫu (g) 1.03 1.11 1.04 1.12 Ẩm (%) 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 CK (g) 0.9167 0.9879 0.9256 0.9968 47 0.008 0.008 0.007 0.012 OD Ac 0.154 0.153 0.156 0.147 0.149 0.142 0.147 0.123 0.126 0.134 0.140 0.122 0.134 0.140 0.122 0.120 0.120 0.124 0.176 0.175 0.174 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 1.20 1.04 1.20 1.02 1.30 1.09 1.30 1.02 1.30 1.01 1.40 1.00 1.40 1.08 1.40 1.04 1.1.3 Xác định ABTS NT Kl mẫu (g) 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 0.9256 0.9078 0.9701 0.9078 0.8989 0.8900 0.9612 0.9256 Ẩm (%) CK (g) 10.9972 0.9167 10.9972 0.9879 10.9972 0.9256 10.9972 0.9968 10.9972 0.9256 10.9972 0.9078 10.9972 0.9701 10.9972 0.9078 10.9972 0.8989 10.9972 0.8900 10.9972 0.9612 10.9972 0.9256 1.10 1.03 1.10 1.11 1.10 1.04 1.20 1.12 1.20 1.04 1.20 1.02 1.30 1.09 1.30 1.02 1.30 1.01 1.40 1.00 1.40 1.08 1.40 1.04 1.3 Khảo sát nhiệt độ trích ly 100 100 100 100 100 100 100 100 V (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 40 40 40 40 40 40 40 40 HSPL 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 0.011 0.012 0.011 0.012 0.012 0.012 0.011 0.011 OD Ac 0.178 0.173 0.177 0.174 0.170 0.177 0.176 0.175 0.176 0.175 0.175 0.177 1.3.1 Xác định TFC NT 40 40 40 45 45 45 50 50 50 55 55 55 Kl mẫu (g) 1.03 1.05 1.05 1.01 1 1 1 Ẩm (%) 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 CK (g) 0.9167 0.9345 0.9345 0.8900 0.8989 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 V (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 48 HSPL 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 OD 0.011 0.012 0.010 0.012 0.012 0.011 0.012 0.011 0.012 0.013 0.012 0.009 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 60 10.9972 60 10.9972 60 10.9972 1.3.2 Xác định ABTS NT Kl mẫu (g) Ẩm (%) 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 10.9972 0.8900 0.8900 0.8900 100 100 100 40 40 40 CK (g) 0.8989 0.8989 0.8900 0.9167 0.8900 0.8989 0.9078 0.8900 0.9078 0.8989 0.8989 0.9523 1.0057 1.0591 0.9345 V (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 HSPL 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 CK (g) 0.9078 0.8989 0.9078 0.9701 0.9078 0.8989 0.8989 0.9167 0.8989 0.9167 0.8900 0.8989 0.9345 0.9256 V (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 HSPL 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 1.01 40 1.01 40 45 1.03 45 45 1.01 50 1.02 50 50 1.02 55 1.01 55 1.01 55 1.07 60 1.13 60 1.19 60 1.05 1.4 Khảo sát thời gian trích ly 0.012 0.010 0.011 OD 0.185 0.171 0.184 0.177 0.177 0.179 0.173 0.172 0.175 0.177 0.176 0.178 0.172 0.174 0.171 1.4.1 Xác định TFC NT 2 2.5 2.5 2.5 3 3.5 3.5 3.5 4 Kl mẫu (g) 1.02 1.01 1.02 1.09 1.02 1.01 1.01 1.03 1.01 1.03 1.01 1.05 1.04 Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 49 OD 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 Ac 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 1.07 10.997 1.4.2 Xác định ABTS Kl mẫu (g) 1.02 0.9523 100 40 0.009 Ẩm (%) 10.997 CK (g) 0.9078 V (ml) 100 HSPL 1004 OD 0.203 Ac 0.216 10.997 0.8989 100 1004 0.2 0.216 1.02 10.997 0.9078 2.5 1.09 10.997 0.9701 2.5 1.02 10.997 0.9078 2.5 1.01 10.997 0.8989 1.01 10.997 0.8989 1.01 10.997 0.8989 1.01 10.997 0.8989 3.5 1.03 10.997 0.9167 3.5 10.997 0.8900 3.5 1.01 10.997 0.8989 1.05 10.997 0.9345 1.04 10.997 0.9256 1.07 10.997 0.9523 Phụ lục 2: kết thí nghiệm 2.1 Khảo sát tỉ lệ rắn: lỏng 2.1.1 Xác định TFC 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 0.202 0.207 0.208 0.204 0.205 0.198 0.199 0.209 0.221 0.203 0.21 0.19 0.208 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 0.216 NT 1.01 Kl mẫu (g) 1.10 1.10 1.10 1.20 1.20 1.20 1.30 1.30 1.30 1.40 1.40 1.40 2.1.2 Xác định ABTS NT NT Kl mẫu (g) Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 Ẩm (%) CK (g) V (ml) 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 CK (g) 50 V (ml) HSPL HSPL 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 OD 0.016 0.017 0.013 0.019 0.018 0.019 0.019 0.018 0.018 0.017 0.018 0.019 OD Ac 1.10 10.997 1.10 10.997 1.10 10.997 1.20 10.997 1.20 10.997 1.20 10.997 1.30 10.997 1.30 10.997 1.30 10.997 1.40 10.997 1.40 10.997 1.40 10.997 2.2 Khảo sát công suất vi sóng 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 0.8900 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 1004 0.186 0.175 0.179 0.183 0.173 0.183 0.177 0.178 0.183 0.174 0.176 0.178 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 0.223 2.2.1 Xác định TFC Kl mẫu (g) NT 80 80 80 150 150 150 300 300 300 450 450 450 700 700 700 2.2.2 Xác định ABTS NT 80 80 80 150 150 4 4 4 4 4 4 4 Kl mẫu (g) 4 4 Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 CK (g) 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 CK (g) 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 3.5601 51 V (ml) 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 V (ml) 250 250 250 250 250 HSPL 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 HSPL 2510 2510 2510 2510 2510 OD 0.179 0.181 0.181 0.182 0.179 OD 0.013 0.012 0.01 0.014 0.011 0.013 0.015 0.013 0.014 0.014 0.014 0.013 0.013 0.013 0.012 Ac 0.202 0.202 0.204 0.209 0.202 150 10.997 3.5601 300 10.997 3.5601 300 10.997 3.5601 300 10.997 3.5601 450 10.997 3.5601 450 10.997 3.5601 450 10.997 3.5601 700 10.997 3.5601 700 10.997 3.5601 700 10.997 3.5601 2.3 Khảo sát thời gian sử dụng vi sóng 2.3.1 Xác định TFC Kl mẫu (g) 3 5 7 9 2.3.2 Xác định ABTS NT NT 3 5 7 9 Kl mẫu (g) 1 1 1 1 1 Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 Ẩm (%) 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 10.997 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 CK (g) V (ml) 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 CK (g) V (ml) 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 0.8900 100 52 2510 2510 2510 2510 2510 2510 2510 2510 2510 2510 HSPL 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 HSPL 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 304 0.173 0.176 0.174 0.178 0.169 0.179 0.178 0.177 0.172 0.176 OD 0.018 0.017 0.017 0.019 0.02 0.023 0.02 0.021 0.022 0.023 0.025 0.023 OD 0.584 0.542 0.565 0.558 0.563 0.561 0.559 0.565 0.556 0.553 0.558 Ac 0.714 0.714 0.714 0.714 0.714 0.714 0.714 0.714 0.714 0.716 0.716 0.202 0.202 0.204 0.204 0.204 0.202 0.202 0.202 0.202 0.202 10.997 0.8900 100 304 0.562 0.716 Phụ lục 3: kết thí nghiệm tối ưu NT 10 11 12 13 14 15 16 17 Kl mẫu (g) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20.02 20 20.1 Ẩm (%) 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 95.4 CK (g) 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9200 0.9209 0.9200 0.9246 V (ml) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 53 OD 0.545 0.564 0.559 0.542 0.547 0.539 0.538 0.514 0.559 0.524 0.555 0.526 0.524 0.519 0.499 0.498 0.471 Ac 0.700 0.700 0.700 0.700 0.702 0.702 0.702 0.702 0.712 0.712 0.712 0.706 0.706 0.706 0.718 0.718 0.718 TFC 9.687 8.974 8.984 10.436 9.140 9.972 9.611 10.829 8.619 10.618 8.813 10.623 10.733 10.753 12.616 12.973 13.505 54 ... kiện tối ưu cho q trình xử l? ? vi sóng để thu nhận hợp chất giàu hoạt tính chống oxi hóa từ củ cải trắng Raphanus sativus L ❖ Nội dung chính: Tối ưu q trình thu nhận flavonoid từ củ cải trắng. .. tính Từ đó, tơi thấy thời gian xử l? ? vi sóng phút phù hợp cho q trình trích ly flavonoid củ cải trắng 3.4 Kết TN 3: Tối ưu trình trích ly flavonoid từ củ cải trắng phương pháp trích ly có hỗ trợ. .. vi sóng hỗ trợ q trình trích ly thu nhận dịch chiết giàu flavonoid từ bột củ cải trắng (Raphanus sativus L. ), chúng thu kết sau: ➢ Điều kiện thích hợp cho q trình trích ly khơng có vi sóng l? ?: