Đang tải... (xem toàn văn)
Microsoft Word 14 11 22 Luận án Chùa dù Hương docx BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU HOÀNG THỊ DIỆU HƯƠNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY CHÙA DÙ (Elsholt[.]
tai lieu, luan van1 of 98 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU HOÀNG THỊ DIỆU HƯƠNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY CHÙA DÙ (Elsholtzia penduliflora W W Smith) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, 2022 document, khoa luan1 of 98 tai lieu, luan van2 of 98 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU HOÀNG THỊ DIỆU HƯƠNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY CHÙA DÙ (Elsholtzia penduliflora W W Smith) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: Dược liệu - Dược học cổ truyền MÃ SỐ: 9720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đỗ Thị Hà TS Lê Thị Kim Vân HÀ NỘI, 2022 document, khoa luan2 of 98 tai lieu, luan van3 of 98 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án cơng trình nghiên cứu khoa học riêng hướng dẫn PGS TS Đỗ Thị Hà TS Lê Thị Kim Vân Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận án NCS Hoàng Thị Diệu Hương document, khoa luan3 of 98 tai lieu, luan van4 of 98 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận án này, nhận nhiều giúp đỡ quý báu Thầy Cô giáo, nhà khoa học bạn bè, đồng nghiệp gia đình Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đỗ Thị Hà TS Lê Thị Kim Vân, người Thầy tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ hỗ trợ tơi q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TSKH Nguyễn Minh Khởi - Viện trưởng Viện Dược liệu động viên tinh thần tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn đồng nghiệp Khoa Hóa Phân tích Tiêu chuẩn, Khoa Hóa Thực vật, Khoa Tài nguyên Dược liệu Khoa Phòng Viện Dược liệu nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện cộng tác giúp tơi hồn thành cơng trình Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên, giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình nghiên cứu, học tập hồn thành luận án Một lần nữa, tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu đó! NCS Hồng Thị Diệu Hương document, khoa luan4 of 98 tai lieu, luan van5 of 98 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI Elsholtzia Willd 1.1.1 Vị trí phân loại .3 1.1.2 Đặc điểm thực vật, phân bố sinh thái 1.1.3 Thành phần hóa học .5 1.1.3.1 Tinh dầu 1.1.3.2 Flavonoid .6 1.1.3.3 Terpenoid 16 1.1.3.4 Steroid 18 1.1.3.5 Coumarin .18 1.1.3.6 Một số hợp chất khác 19 1.1.4 Tác dụng sinh học 21 1.1.4.1 Tác dụng chống viêm, giảm đau 21 1.1.4.2 Tác dụng chống ung thư 21 1.1.4.3 Tác dụng chống oxy hóa .22 1.1.4.4 Tác dụng kháng khuẩn 23 1.1.4.5 Tác dụng kháng virus 24 1.1.4.6 Tác dụng bảo vệ tim mạch 25 1.1.4.7 Tác dụng điều trị bệnh Alzheimer 26 1.1.4.8 Một số tác dụng khác 27 1.1.5 Độc tính 28 1.1.6 Công dụng y học cổ truyền 28 1.1.6.1 Công dụng y học cổ truyền giới .28 1.1.6.2 Công dụng y học cổ truyền Việt Nam 29 1.2 TỔNG QUAN VỀ LOÀI CHÙA DÙ (Elsholtzia penduliflora W W Smith) 30 1.2.1 Đặc điểm thực vật, sinh thái phân bố Chùa dù 30 document, khoa luan5 of 98 tai lieu, luan van6 of 98 1.2.2 Thành phần hóa học Chùa dù 31 1.2.2.1 Tinh dầu 31 1.2.2.2 Flavonoid .32 1.2.2.3 Acid phenolic hợp chất phenolic khác .32 1.2.2.4 Triterpenoid phytosterol 33 1.2.3 Tác dụng sinh học Chùa dù 34 1.2.4 Công dụng Chùa dù y học cổ truyền 34 1.3 TỔNG QUAN VỀ VIÊM VÀ UNG THƯ 35 1.3.1 Viêm .35 1.3.1.1 Khái niệm viêm .35 1.3.1.2 Nguyên nhân gây viêm 35 1.3.1.3 Phân loại viêm .36 1.3.1.4 Các chất trung gian hóa học gây viêm 36 1.3.2 Ung thư 37 1.3.2.1 Khái niệm ung thư 37 1.3.2.2 Phân loại ung thư 38 1.3.2.3 Các yếu tố nguy gây ung thư 38 1.3.3 Vai trò viêm ung thư 39 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 41 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu .41 2.1.2 Thuốc thử, hóa chất, dung môi 42 2.1.3 Dụng cụ, máy móc thiết bị nghiên cứu 44 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .45 2.2.1 Về hoá học 45 2.2.2 Về tác dụng sinh học 45 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học .45 2.3.1.1 Phương pháp xác định hàm lượng thành phần tinh dầu 45 2.3.1.2 Phương pháp định tính nhóm chất 48 2.3.1.3 Phương pháp chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 48 document, khoa luan6 of 98 tai lieu, luan van7 of 98 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý 49 2.3.2.1 Phương pháp đánh giá tác dụng gây độc tế bào số dòng tế bào ung thư in vitro 49 2.3.2.2 Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống viêm in vitro 51 2.3.3 Xử lý số liệu 54 2.4 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 54 2.4.1 Địa điểm nghiên cứu thành phần hóa học 54 2.4.2 Địa điểm nghiên cứu tác dụng dược lý 54 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 55 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 55 3.1.1 Kết xác định hàm lượng thành phần tinh dầu 55 3.1.2 Kết định tính nhóm hợp chất hữu 58 3.1.3 Chiết xuất phân lập hợp chất 59 3.1.3.1 Chiết xuất 59 3.1.3.2 Phân lập hợp chất 60 3.1.4 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 66 3.1.4.1 Hợp chất EP1 66 3.1.4.2 Hợp chất EP2 68 3.1.4.3 Hợp chất EP3 (chất mới) 70 3.1.4.4 Hợp chất EP4 (chất mới) .73 3.1.4.5 Hợp chất EP5 (chất mới) .76 3.1.4.6 Hợp chất EP6 (chất mới) 79 3.1.4.7 Hợp chất EP7 (chất mới) 82 3.1.4.8 Hợp chất EP8 (chất mới) .85 3.1.4.9 Hợp chất EP9 87 3.1.4.10 Hợp chất EP10 89 3.1.4.11 Hợp chất EP11 91 3.1.4.12 Hợp chất EP12 (chất mới) 93 3.1.4.13 Hợp chất EP13 96 3.1.4.14 Hợp chất EP14 98 3.1.4.15 Hợp chất EP15 99 3.1.4.16 Hợp chất EP16 101 document, khoa luan7 of 98 tai lieu, luan van8 of 98 3.1.4.17 Hợp chất EP17 103 3.1.4.18 Hợp chất EP18 104 3.1.4.19 Hợp chất EP19 104 3.1.4.20 Hợp chất EP20 105 3.1.4.21 Hợp chất EP21 106 3.1.4.22 Hợp chất EP22 108 3.1.4.23 Hợp chất EP23 109 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG SINH HỌC .111 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng chống viêm in vitro cao chiết hợp chất tinh khiết phân lập .111 3.2.1.1 Ảnh hưởng cao chiết hợp chất tinh khiết đến khả sống sót tế bào RAW 264.7 .111 3.2.1.2 Kết đánh giá mức độ ức chế sản sinh PGE2 cao chiết hợp chất tinh khiết 113 3.2.1.3 Ảnh hưởng cao chiết hợp chất tinh khiết tiềm lên mức độ biểu mARN COX-2 115 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư in vitro cao chiết hợp chất tinh khiết 116 3.2.2.1 Kết đánh giá tác dụng gây độc tế bào dòng tế bào ung thư A549 MCF-7 cao chiết hợp chất tinh khiết 116 3.2.2.2 Kết đánh giá tác dụng gây độc tế bào dòng tế bào ung thư A549, MCF-7, HepG2, K562 cao chiết hợp chất tiềm theo nồng độ 119 CHƯƠNG BÀN LUẬN 121 4.1 VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC .121 4.2 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 135 4.3 VỀ ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI .145 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 147 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC document, khoa luan8 of 98 tai lieu, luan van9 of 98 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Phần viết tắt H-NMR 13 C-NMR Tiếng Anh Tiếng Việt Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy proton Carbon-13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ carbon 13 Resonance Spectroscopy A549 ABTS Tế bào ung thư phổi người 2,2′-Azino-bis(3ethylbenzothiazolin-6-sulfonic acid) Ac Acetyl AChE Acetylcholinesterase ADN Deoxyribonucleic acid AGS Acid deoxyribonucleic Tế bào ung thư biểu mô dày người Api Apinofuranosyl 10 Ara Arabinopyranosyl 11 ATCC American Type Culture Collection 12 CC50 Half-maximal cytotoxic Nồng độ gây độc tối đa 50% concentration 13 CD3OD Methanol 14 CDCl3 Chloroform 15 COSY 16 COX Cyclooxygenase 17 DCM Dichloromethane 18 DEPT Distortionless Enhancement by H–1H Correlation Spectroscopy Polarization Transfer document, khoa luan9 of 98 Phổ COSY tai lieu, luan van10 of 98 19 DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium 20 DMSO Dimethyl sulfoxid 21 DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl 22 EC50 Half maximal effective Nồng độ có hiệu tối đa concentration 50% Enzyme-linked immunosorbent Miễn dịch hấp thụ liên kết với assay enzym Electrospray Ionisation - Mass Phổ khối ion hóa phun mù Spectrometry điện tử 23 24 ELISA ESI-MS 25 EtOAc Ethyl acetate 26 EtOH Ethanol 27 FBS Fetal bovine serum 28 Fuc Fucopyranosyl 29 Gal Galactopyranosyl 30 GC-MS Gas Chromatography Mass Huyết thai bị Sắc ký khí khối phổ Spectrometry 31 Glc Glucopyranosyl 32 GlcA Glucuronic acid 33 HCV Hepatitis C Virus 34 HepG2 35 HIV Virus viêm gan C Tế bào ung thư gan người Human Immunodeficiency Virus Virus gây suy giảm miễn dịch người 36 37 38 HMBC HR-ESI-MS HSQC document, khoa luan10 of 98 Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương quan dị hạt nhân đa Correlation liên kết High-resolution electrospray Phổ khối phân giải cao ion ionisation mass spectrometry hóa phun mù điện tử Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác dị hạt nhân Coherence lượng tử đơn tai lieu, luan van281 of 98 Phụ lục 2.20.1 Phổ 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) hợp chất EP20 Phụ lục 2.20.2 Phổ 13C-NMR (150 MHz, CDCl3) hợp chất EP20 c document, khoa luan281 of 98 tai lieu, luan van282 of 98 Phụ lục 2.20.3 Phổ ESI-MS hợp chất EP20 Inten.(x10,000,000) 269.20 1.0 0.9 0.8 616.35 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 389.25 430.30 0.2 0.1 0.0 100 600.40 843.35 318.50 200 300 400 500 600 ci document, khoa luan282 of 98 700 800 900 m/z tai lieu, luan van283 of 98 PHỤ LỤC 2.21 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT EP21 Cấu trúc hóa học hợp chất EP21 Công thức phân tử: C16H24O7 Khối lượng phân tử: 328,15 Phụ lục 2.21.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất EP21 Phụ lục 2.21.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất EP21 Phụ lục 2.21.3 Phổ ESI-MS hợp chất EP21 cii document, khoa luan283 of 98 tai lieu, luan van284 of 98 Phụ lục 2.21.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất EP21 Phụ lục 2.21.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất EP21 ciii document, khoa luan284 of 98 tai lieu, luan van285 of 98 Phụ lục 2.21.3 Phổ ESI-MS hợp chất EP21 Inten.(x1,000,000) 327.20 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 373.25 1.0 255.35 0.5 387.30 283.40 339.30 0.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 civ document, khoa luan285 of 98 375.0 400.0 425.0 450.0 475.0 m/z tai lieu, luan van286 of 98 PHỤ LỤC 2.22 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT EP22 Cấu trúc hóa học hợp chất EP22 Công thức phân tử: C16H24O7 Khối lượng phân tử: 328,15 Phụ lục 2.22.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất EP22 Phụ lục 2.22.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất EP22 Phụ lục 2.22.3 Phổ ESI-MS hợp chất EP22 cv document, khoa luan286 of 98 tai lieu, luan van287 of 98 Phụ lục 2.22.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất EP22 Phụ lục 2.22.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất EP22 cvi document, khoa luan287 of 98 tai lieu, luan van288 of 98 Phụ lục 2.22.3 Phổ ESI-MS hợp chất EP22 Inten.(x1,000,000) 3.0 2.5 327.20 2.0 1.5 1.0 373.20 283.40 0.5 387.25 255.35 0.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 311.30 275.0 300.0 cvii document, khoa luan288 of 98 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 475.0 m/z tai lieu, luan van289 of 98 PHỤ LỤC 2.23 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT EP23 Cấu trúc hóa học hợp chất EP23 Công thức phân tử: C26H32O14 Khối lượng phân tử: 568,18 Phụ lục 2.23.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 Phụ lục 2.23.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 Phụ lục 2.23.3 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 Phụ lục 2.23.4 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 Phụ lục 2.23.5 Phổ ESI-MS hợp chất EP23 cviii document, khoa luan289 of 98 tai lieu, luan van290 of 98 Phụ lục 2.23.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 Phụ lục 2.23.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 cix document, khoa luan290 of 98 tai lieu, luan van291 of 98 Phụ lục 2.23.3 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 Phụ lục 2.23.4 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất EP23 cx document, khoa luan291 of 98 tai lieu, luan van292 of 98 Phụ lục 2.23.5 Phổ ESI-MS hợp chất EP23 Inten.(x1,000,000) 591.30 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 607.25 872.50 1.0 345.30 0.0 100 200 300 708.35 400 500 600 cxi document, khoa luan292 of 98 700 800 900 m/z tai lieu, luan van293 of 98 PHỤ LỤC III: SẮC KÝ ĐỒ GC-MS CỦA CÁC MẪU TINH DẦU CHÙA DÙ PHỤ LỤC 3.1 SẮC KÝ ĐỒ GC-MS CỦA TINH DẦU CHÙA DÙ CD-1 cxii document, khoa luan293 of 98 tai lieu, luan van294 of 98 PHỤ LỤC 3.2 SẮC KÝ ĐỒ GC-MS CỦA TINH DẦU CHÙA DÙ CD-2 cxiii document, khoa luan294 of 98 tai lieu, luan van295 of 98 PHỤ LỤC 3.3 SẮC KÝ ĐỒ GC-MS CỦA TINH DẦU CHÙA DÙ CD-3 cxiv document, khoa luan295 of 98 ... này, đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Chùa dù (Elsholtzia penduliflora W W Smith)” thực với mục tiêu: Nghiên cứu thành phần hoá học: Xác định hàm lượng thành phần tinh... sâu thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi Để góp phần giải thích, chứng minh tác dụng dược liệu Chùa dù dựa khoa học, cung cấp sở liệu hóa học dược lý làm khoa học cho việc khai thác, sử dụng. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU HOÀNG THỊ DIỆU HƯƠNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY CHÙA DÙ (Elsholtzia penduliflora W W Smith) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC