Hcmute nghiên cứu hoạt tính kháng oxy hóa của thân cây tứ thư hồng, tetrastigma erubescens planch , họ nho (vitaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA THÂN CÂY TỨ THƯ HỒNG, TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH., HỌ NHO (VITACEAE) S K C 0 9 MÃ SỐ: T2014-48TĐ S KC 0 Tp Hồ Chí Minh, 2014 Luan van TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC & THỰC PHẨM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KH&CN CẤP TRƯỜNG TRỌNG ĐIỂM NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA THÂN CÂY TỨ THƯ HỒNG, TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH., HỌ NHO (VITACEAE) Mã số: T2014-48TĐ Chủ nhiệm đề tài: ThS Phan Thị Anh Đào Thành viên đề tài: TS Võ Thị Ngà TP HCM, 11, 2014 Luan van DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THAM GIA ĐỀ TÀI ST T Đơn vị công tác lĩnh vực chuyên môn Họ tên Nội dung nghiên cứu giao Phan Thị Anh Đào Bộ mơn CN Hóa học- Khoa CN Hóa học& Thực phẩm, ĐH Sư phạm Kỹ thuật TP HCM Chủ trì Võ Thị Ngà Bộ mơn Hóa Phân Tich, Khoa Hóa, Tham gia ĐH Khoa học Tự Nhiên TP HCM ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH Tên đơn vị Nội dung phối hợp Họ tên nước nghiên cứu người đại diện đơn vị Phịng thí nghiệm Hóa Dược– ĐH Khoa học Tự nhiên Tp HCM Thử hoạt tính kháng oxy Nguyễn Xn Hải Phịng phân tích trung tâm-– ĐH Khoa học Tự nhiên Tp HCM hóa Phân tích phổ nghiệm iii Luan van Nguyễn Huỳnh Hoa MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN Error! Bookmark not defined LỜI CAM ĐOAN Error! Bookmark not defined MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ix DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU ix DANH M ỤC CÁC SƠ ĐỒ x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GỐC TỰ DO VÀ CHẤT KHÁNG OXY HÓA 1.1.1 Khái niệm gốc tự 1.1.2 Các nguồn phát sinh gốc tự thể 1.1.3 Vai trò gốc tự thể 1.1.4 Khái niệm chất kháng oxy hóa 13 1.1.5 Phân loại 13 1.1.6 Các phương pháp xác định hoạt tính kháng oxy hóa 19 1.2 TÌM HIỂU VỀ CÁC CÂY THUỐC SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA Error! Bookmark not defined 1.3 TÌM HIỂU VỀ CÂY THUỐC TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH 23 1.3.1 Mô tả thực vật phân bố sinh thái Tetrastigma erubescens Planch 23 1.3.2 Nghiên cứu dược học T.erubescen 24 1.3.3 Nghiên cứu thành phần hóa học chi Tetrastigma 25 1.4 TÌM HIỂU VỀ CÂY THUỐC NAUCLEA ORIENTALIS (L.)Error! Bookmark not defined 1.4.1 Mô tả thực vật phân bố sinh thái Nauclea orientalis (L.) Error! Bookmark not defined 1.4.2 Nghiên cứu dược học N orientalis Error! Bookmark not defined 1.4.3 Nghiên cứu thành phần hóa học N orientalisError! Bookmark not defined 1.4.4 Nghiên cứu thành phần hóa học chi NaucleaError! defined iv Luan van Bookmark not 1.5 ĐỊNH HƯỚNG NGHIÊN CỨU 30 1.5.1 Những vấn đề tồn 30 1.5.2 Định hướng nghiên cứu 30 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 32 2.1 ĐIỀU CHẾ CÁC MẪU CAO SÀNG LỌC Error! Bookmark not defined 2.1.1 Hóa chất thiết bị Error! Bookmark not defined 2.1.2 Nguyên liệu Error! Bookmark not defined 2.1.3 Xác định độ ẩm nguyên liệu Error! Bookmark not defined 2.1.4 Điều chế mẫu cao methanol Error! Bookmark not defined 2.2 TRÍCH LY VÀ PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT TINH KHIẾT 32 2.2.1 Hóa chất 32 2.2.2 Thiết bị 32 2.2.3 Trích ly phân lập hợp chất từ thân T.erubescens 33 2.2.4 Trích ly phân lập hợp chất từ thân N.orientalis 34 2.3 ĐỊNH LƯỢNG THÀNH PHẦN HÓA HỌC Error! Bookmark not defined 2.3.1 Nguyên tắc Error! Bookmark not defined 2.3.2 Hóa chất thiết bị Error! Bookmark not defined 2.3.3 Chuẩn bị mẫu Error! Bookmark not defined 2.3.4 Qui trình xác định Error! Bookmark not defined 2.3.5 Dựng đường chuẩn Error! Bookmark not defined 2.3.6 Xử lý kết Error! Bookmark not defined 2.3.7 Nơi thực nghiệm Error! Bookmark not defined 2.4 THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA 34 2.4.1 Khảo sát hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 34 2.3.2 Khảo sát hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 36 2.4.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính bảo vệ gan chuột nhắt bị suy giảm hệ miễn dịch cyclophosphamide (mô hình in vivo) Error! Bookmark not defined CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨAError! Bookmark not defined 3.1.1 Điều chế mẫu cao MeOH Error! Bookmark not defined v Luan van 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính ức chế gốc tự DPPHError! Bookmark not defined 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipidError! Bookmark not defined 3.1.3 Bàn luận kết nghiên cứu sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa Error! Bookmark not defined 3.2 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA THÂN CÂY T.ERUBESCENS VÀ THÂN CÂY N.ORIENTALIS 39 3.2.1 Kết thử hoạt tính mẫu cao T erubescensError! Bookmark not defined 3.2.2 Kết thử hoạt tính mẫu cao N orientalisError! Bookmark not defined 3.3 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY T ERUBESCENS 40 3.3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất polyphenol đơn vịngError! Bookmark not defined 3.3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất stilbene 40 3.3.3 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất flavonoid 47 3.3.4 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất benzopyranoidError! Bookmark not defined 3.3.5 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm lignanError! Bookmark not defined 3.3.6 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm steroidError! Bookmark not defined 3.3.7 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm norisoprenoidError! Bookmark not defined 3.4 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY NUCLEA ORIENTALIS (L.) Error! Bookmark not defined 3.4.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất polyphenol đơn vòngError! Bookmark not defined 3.4.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất benzopyranoidError! Bookmark not defined vi Luan van 3.4.3 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất triterpenoidError! Bookmark not defined 3.4.4 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất monoterpenoidError! Bookmark not defined 3.4.5 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất flavonoidError! Bookmark not defined 3.4.6 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất lignan Error! Bookmark not defined 3.5 ĐỊNH LƯỢNG THÀNH PHẦN HÓA HỌC Error! Bookmark not defined 3.6 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA 66 3.6.1 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 66 3.6.2 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 69 3.6.3 Kết nghiên cứu in vivo- mơ hình gây suy giảm miễn dịch chuột nhắt cyclophosphamide Error! Bookmark not defined CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 vii Luan van DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT A : Acetone AO (AH) : Antioxidant (chất kháng oxy hóa) Asc : Ascorbic acid (vitamin C) BHA : Butylated hydroxyanisole br : Broad (rộng) BTH : Butylated hydroxytoluene CHCl3 : Chloroform CPA : Cyclophosphamide CTPT : Công thức phân tử d : Doublet (mũi đôi) DEPT : Distortionless enhancement by polarization transfer DMSO : Dimethyl sulfoxide DNA : Acid deoxyribonucleic DPPH : 2,2-diphenylpicrylhydrazyl E : Ethyl acetate EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid ET : Electron transfer methods GSH : Glutathione H : n-hexan HAT : Hydrogen atom transfer methods HMBC : Heteronuclear multiple bond correlation HR-EIS-MS : High resolution electron spray ionization mass spectroscopy HSQC : Heteronuclear single quantum coherence IC50 : Nồng độ mẫu mà ức chế 50 % gốc tự J : Hằng số ghép M : Methanol m : Multiplet (mũi đa) MDA : Malonyldialdehyde NADPH : Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NMR : Nuclear magnetic resonance (cộng hưởng từ hạt nhân) viii Luan van NOS : Nitrogen oxygen species NP : Nomal phase (pha thường) PBS : Phosphate buffered saline PG : Propyl gallate Pr : Protein quin : quintet (mũi năm) RNS : Reactive nitrogen species ROS : Reactive oxygen species RP : Reversed phase (pha đảo) s : Singlet (mũi đơn) SEM : Standard error of the mean (sai số chuẩn giá trị trung bình) SKC : Sắc ký cột TBA : Acid thiobarbituric TBHQ : tert-Butylhydroquinone TCA : Trichloroacetic acid TLC : Thin layer chromatography (sắc ký mỏng) Trolox : Acid 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic UV : Ultraviolet (tử ngoại) W : Water (nước) XO : Xanthine oxydase YHCT : Y học cổ truyền ix Luan van DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU x Luan van Phụ lục 8d Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-17 Phụ lục 8e Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-17 Luan van HỢP CHÁT DR-18 (acetone-d6) Phụ lục 9a Phổ 1H-NMR hợp chất DR-18 Phụ lục 9b Phổ 13C-NMR hợp chất DR-18 Luan van Phụ lục 9c Phổ COSY-NMR hợp chất DR-18 Phụ lục 9d Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-18 Luan van Phụ lục 9e Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-18 HỢP CHẤT DR-19 (aceton-d 6) Phụ lục 10a Phổ 1H-NMR hợp chất DR-19 Luan van Phụ lục 10b Phổ 13C-NMR hợp chất DR-19 Luan van Phụ lục 11c Phổ COSY-NMR hợp chất DR-19 Phụ lục 10d Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-19 Luan van Phụ lục 10d Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-19 HỢP CHẤT DR-20 (CD3OD) Phụ lục 11a Phổ 1H-NMR phổ giãn rộng hợp chất DR-20 Luan van Phụ lục 11b Phổ 13C phổ DEPT-NMR hợp chất DR-20 Luan van Phụ lục 11c Phổ COSY-NMR hợp chất DR-20 Phụ lục 11d Phổ COSY-NMR giãn rộng hợp chất DR-20 Luan van Phụ lục 11e Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-20 Luan van Phụ lục 11f Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-20 Luan van [M+Na]+ Phụ lục 11g Phổ HR-ESI-MS hợp chất DR-20 Luan van KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ Q TRÌNH PEROXIDE HÓA LIPID Phụ lục 12 Kết xác định hoạt tính ức chế peroxide hóa lipid tế bào (thử nghiệm MDA) 10 hợp chất Các ký hiệu mẫu thử thay đổi tương ứng: 10 DR-10, 11  DR-12, 12 DR-11, 17 DR17, 18 DR-18, 19  DR-19, 20 DR-20 Luan van CƠNG TRÌNH KHOA HỌC Phan Thị Anh Đào, Nguyễn Trung Nhân, Trần Lê Quan, Nguyễn Thị Thanh Mai (2014), Antioxidant Constituents from the Stem of Tetrastigma erusbescense Planch (Vitaceae), Natural product sciences, 20(1), 22-18 Luan van Luan van ... 1,3 3 3,2 ± 1,9 1 4,9 ± 0,9 9 4,6 ± 0,7 6 8,1 ± 0,5 2 7,5 ± 1,3 9 8,2 ± 0,8 9 0,0 ± 0,6 5 7,0 ± 0,4 39 Luan van 0,5 µg/ml * * 3 7,3 ± 1,7 IC50 (µg/µl) 4,4 1,8 0,8 DR-F Cao phân đoạn DR-A DR-B 9 9,5 ± 0,9 ... cứu hoạt tính kháng oxy hóa thực loài (T thomsonianum) nghiên cứu thành phần hóa học tiến hành lồi Cây T Erubescens (Tứ thư hồng) loài chưa nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng oxy hóa. .. định hướng hoạt tính kháng oxy hóa - Cây T Erubescens lồi chưa nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng oxy hóa Do vậy, ngồi mục tiêu tìm kiếm hoạt chất kháng oxy hóa mạnh, chúng tơi cịn