(Đề tài NCKH) NGHIÊN cứu HOẠT TÍNH KHÁNG OXY hóa của THÂN cây tứ THƯ HỒNG, TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH , họ NHO (VITACEAE)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA THÂN CÂY TỨ THƯ HỒNG, TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH., HỌ NHO (VITACEAE) MÃ SỐ: T2014-48TĐ SKC004783 Tp Hồ Chí Minh, 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC & THỰC PHẨM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KH&CN CẤP TRƯỜNG TRỌNG ĐIỂM NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA THÂN CÂY TỨ THƯ HỒNG, TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH., HỌ NHO (VITACEAE) Mã số: T2014-48TĐ Chủ nhiệm đề tài: ThS Phan Thị Anh Đào Thành viên đề tài: TS Võ Thị Ngà TP HCM, 11, 2014 DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THAM GIA ĐỀ TÀI ST T Họ tên Phan Thị Anh Đào Võ Thị Ngà ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN Error! Bookmark not defined LỜI CAM ĐOAN Error! Bookmark not defined MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ix DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU ix DANH M ỤC CÁC SƠ ĐỒ x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GỐC TỰ DO VÀ CHẤT KHÁNG OXY HÓA 1.1.1 Khái niệm gốc tự 1.1.2 Các nguồn phát sinh gốc tự thể 1.1.3 Vai trò gốc tự thể 1.1.4 Khái niệm chất kháng oxy hóa 13 1.1.5 Phân loại 13 1.1.6 Các phương pháp xác định hoạt tính kháng oxy hóa 19 1.2 TÌM HIỂU VỀ CÁC CÂY THUỐC SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA Error! Bookmark not defined 1.3 TÌM HIỂU VỀ CÂY THUỐC TETRASTIGMA ERUBESCENS PLANCH .23 1.3.1 Mô tả thực vật phân bố sinh thái Tetrastigma erubescens Planch .23 1.3.2 Nghiên cứu dược học T.erubescen 24 1.3.3 Nghiên cứu thành phần hóa học chi Tetrastigma 25 1.4 TÌM HIỂU VỀ CÂY THUỐC NAUCLEA ORIENTALIS (L.)Error! Bookmark not defined 1.4.1 Mô tả thực vật phân bố sinh thái Nauclea orientalis (L.) Error! Bookmark not defined 1.4.2 Nghiên cứu dược học N orientalis .Error! Bookmark not defined 1.4.3 Nghiên cứu thành phần hóa học N orientalisError! Bookmark not defined 1.4.4 Nghiên cứu thành phần hóa học chi NaucleaError! defined iv Bookmark not 1.5 ĐỊNH HƯỚNG NGHIÊN CỨU 30 1.5.1 Những vấn đề tồn 30 1.5.2 Định hướng nghiên cứu 30 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 32 2.1 ĐIỀU CHẾ CÁC MẪU CAO SÀNG LỌC Error! Bookmark not defined 2.1.1 Hóa chất thiết bị Error! Bookmark not defined 2.1.2 Nguyên liệu Error! Bookmark not defined 2.1.3 Xác định độ ẩm nguyên liệu Error! Bookmark not defined 2.1.4 Điều chế mẫu cao methanol Error! Bookmark not defined 2.2 TRÍCH LY VÀ PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT TINH KHIẾT 32 2.2.1 Hóa chất 32 2.2.2 Thiết bị 32 2.2.3 Trích ly phân lập hợp chất từ thân T.erubescens 33 2.2.4 Trích ly phân lập hợp chất từ thân N.orientalis 34 2.3 ĐỊNH LƯỢNG THÀNH PHẦN HÓA HỌC Error! Bookmark not defined 2.3.1 Nguyên tắc Error! Bookmark not defined 2.3.2 Hóa chất thiết bị Error! Bookmark not defined 2.3.3 Chuẩn bị mẫu Error! Bookmark not defined 2.3.4 Qui trình xác định Error! Bookmark not defined 2.3.5 Dựng đường chuẩn Error! Bookmark not defined 2.3.6 Xử lý kết Error! Bookmark not defined 2.3.7 Nơi thực nghiệm Error! Bookmark not defined 2.4 THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA 34 2.4.1 Khảo sát hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 34 2.3.2 Khảo sát hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 36 2.4.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính bảo vệ gan chuột nhắt bị suy giảm hệ miễn dịch cyclophosphamide (mơ hình in vivo) Error! Bookmark not defined CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓAError! Bookmark not defined 3.1.1 Điều chế mẫu cao MeOH Error! Bookmark not defined v 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính ức chế gốc tự DPPHError! Bookmark not defined 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipidError! Bookmark not defined 3.1.3 Bàn luận kết nghiên cứu sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa Error! Bookmark not defined 3.2 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA THÂN CÂY T.ERUBESCENS VÀ THÂN CÂY N.ORIENTALIS 39 3.2.1 Kết thử hoạt tính mẫu cao T erubescensError! Bookmark not defined 3.2.2 Kết thử hoạt tính mẫu cao N orientalisError! Bookmark not defined 3.3 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY T ERUBESCENS 40 3.3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất polyphenol đơn vòngError! Bookmark not defined 3.3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất stilbene 40 3.3.3 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất flavonoid 47 3.3.4 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất benzopyranoidError! Bookmark not defined 3.3.5 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm lignanError! Bookmark not defined 3.3.6 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm steroidError! Bookmark not defined 3.3.7 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm norisoprenoidError! Bookmark not defined 3.4 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY NUCLEA ORIENTALIS (L.) Error! Bookmark not defined 3.4.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất polyphenol đơn vòngError! Bookmark not defined 3.4.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất benzopyranoidError! defined vi Bookmark not 3.4.3 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất triterpenoidError! Bookmark not defined 3.4.4 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất monoterpenoidError! Bookmark not defined 3.4.5 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất flavonoidError! Bookmark not defined 3.4.6 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất lignan Error! Bookmark not defined 3.5 ĐỊNH LƯỢNG THÀNH PHẦN HÓA HỌC Error! Bookmark not defined 3.6 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA 66 3.6.1 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 66 3.6.2 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 69 3.6.3 Kết nghiên cứu in vivo- mơ hình gây suy giảm miễn dịch chuột nhắt cyclophosphamide Error! Bookmark not defined CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT A : Acetone AO (AH) : Antioxidant (chất kháng oxy hóa) Asc : Ascorbic acid (vitamin C) BHA : Butylated hydroxyanisole br : Broad (rộng) BTH : Butylated hydroxytoluene CHCl3 : Chloroform CPA : Cyclophosphamide CTPT : Công thức phân tử d : Doublet (mũi đôi) DEPT : Distortionless enhancement by polarization transfer DMSO : Dimethyl sulfoxide DNA : Acid deoxyribonucleic DPPH : 2,2-diphenylpicrylhydrazyl E : Ethyl acetate EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid ET : Electron transfer methods GSH : Glutathione H : n-hexan HAT : Hydrogen atom transfer methods HMBC : Heteronuclear multiple bond correlation HR-EIS-MS : High resolution electron spray ionization mass spectroscopy HSQC : Heteronuclear single quantum coherence IC50 : Nồng độ mẫu mà ức chế 50 % gốc tự J : Hằng số ghép M : Methanol m : Multiplet (mũi đa) MDA : Malonyldialdehyde NADPH : Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NMR : Nuclear magnetic resonance (cộng hưởng từ hạt nhân) viii NOS : Nitrogen oxygen species NP : Nomal phase (pha thường) PBS : Phosphate buffered saline PG : Propyl gallate Pr : Protein quin : quintet (mũi năm) RNS : Reactive nitrogen species ROS : Reactive oxygen species RP : Reversed phase (pha đảo) s : Singlet (mũi đơn) SEM : Standard error of the mean (sai số chuẩn giá trị trung bình) SKC : Sắc ký cột TBA : Acid thiobarbituric TBHQ : tert-Butylhydroquinone TCA : Trichloroacetic acid TLC : Thin layer chromatography (sắc ký mỏng) Trolox : Acid 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic UV : Ultraviolet (tử ngoại) W : Water (nước) XO : Xanthine oxydase YHCT : Y học cổ truyền ix Phụ lục 8d Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-17 Phụ lục 8e Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-17 HỢP CHÁT DR-18 (acetone-d6) Phụ lục 9a Phổ 1H-NMR hợp chất DR-18 Phụ lục 9b Phổ 13 C-NMR hợp chất DR-18 Phụ lục 9c Phổ COSY-NMR hợp chất DR-18 Phụ lục 9d Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-18 Phụ lục 9e Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-18 HỢP CHẤT DR-19 (aceton-d6) Phụ lục 10a Phổ 1H-NMR hợp chất DR-19 Phụ lục 10b Phổ 13 C-NMR hợp chất DR-19 Phụ lục 11c Phổ COSY-NMR hợp chất DR-19 Phụ lục 10d Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-19 Phụ lục 10d Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-19 HỢP CHẤT DR-20 (CD3OD) Phụ lục 11a Phổ H-NMR phổ giãn rộng hợp chất DR-20 Phụ lục 11b Phổ 13 C phổ DEPT-NMR hợp chất DR-20 Phụ lục 11c Phổ COSY-NMR hợp chất DR-20 Phụ lục 11d Phổ COSY-NMR giãn rộng hợp chất DR-20 Phụ lục 11e Phổ HSQC-NMR hợp chất DR-20 Phụ lục 11f Phổ HMBC-NMR hợp chất DR-20 [M+Na] + Phụ lục 11g Phổ HR-ESI-MS hợp chất DR-20 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ QUÁ TRÌNH PEROXIDE HĨA LIPID Phụ lục 12 Kết xác định hoạt tính ức chế peroxide hóa lipid tế bào (thử nghiệm MDA) 10 hợp chất Các ký hiệu mẫu thử thay đổi tương ứng: 10 DR-10, 11 DR-12, 12 DR-11, 17 DR-17, 18 DR-18, 19 DR-19, 20 DR-20 CƠNG TRÌNH KHOA HỌC Phan Thị Anh Đào, Nguyễn Trung Nhân, Trần Lê Quan, Nguyễn Thị Thanh Mai (2014), Antioxidant Constituents from the Stem of Tetrastigma erusbescense Planch (Vitaceae), Natural product sciences, 20(1), 22-18 ... cứu hoạt tính kháng oxy hóa thực lồi (T thomsonianum) nghiên cứu thành phần hóa học tiến hành loài Cây T Erubescens (Tứ thư hồng) loài chưa nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng oxy hóa. .. định hướng hoạt tính kháng oxy hóa - Cây T Erubescens lồi chưa nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng oxy hóa Do vậy, ngồi mục tiêu tìm kiếm hoạt chất kháng oxy hóa mạnh, chúng tơi cịn... gốc tự ung th? ?, tim mạch, viêm gan, tiểu đường, huyết áp…Tuy nhiên, nay, chưa có nghiên cứu qui mơ hệ thống thuốc Việt Nam có hoạt tính kháng oxy hóa Từ kết sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa 90 thuốc