(Đề tài NCKH) nghiên cứu họat tính kháng oxy hóa của thân cây gáo vàng, nauclea orientalis (i ) l (rubiaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA THÂN CÂY GÁO VÀNG, NAUCLEA ORIENTALIS (L.) L (RUBIACEAE) MÃ SỐ: T2015-66TĐ SKC004795 Tp Hồ Chí Minh, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC & THỰC PHẨM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KH&CN CẤP TRƯỜNG TRỌNG ĐIỂM NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA THÂN CÂY GÁO VÀNG, NAUCLEA ORIENTALIS (L.) L (RUBIACEAE) Mã số: T2015-66TĐ Chủ nhiệm đề tài: TS Phan Thị Anh Đào Thành viên đề tài: TS Võ Thị Ngà TP HCM, 2015 DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THAM GIA ĐỀ TÀI ST T Họ tên Phan Thị Anh Đào Võ Thị Ngà ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ vi DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GỐC TỰ DO VÀ CHẤT KHÁNG OXY HÓA……………………………………4 1.1.1 Khái niệm gốc tự 1.1.2 Các nguồn phát sinh gốc tự thể 1.1.3 Vai trò gốc tự thể 1.1.4 Khái niệm chất kháng oxy hóa 12 1.1.5 Phân loại 12 1.1.6 Các phương pháp xác định hoạt tính kháng oxy hóa 16 1.2 TÌM HIỂU VỀ CÂY THUỐC NAUCLEA ORIENTALIS (L.), L ………………………………………………………………………………20 1.2.1 Mô tả thực vật phân bố sinh thái Nauclea orientalis (L.) L 20 1.2.2 Nghiên cứu dược học N orientalis 21 1.2.3 Nghiên cứu thành phần hóa học N orientalis 22 1.2.4 Nghiên cứu thành phần hóa học chi Nauclea 25 1.3 ĐỊNH HƯỚNG NGHIÊN CỨU………………………………………………….30 1.3.1 Những vấn đề tồn 30 1.3.2 Định hướng nghiên cứu 31 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 32 2.1 TRÍCH LY VÀ PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT TINH KHIẾT………………… 32 2.1.1 Hóa chất 32 2.1.2 Thiết bị 32 2.1.3 Trích ly phân lập hợp chất từ thân N.orientalis 33 2.2 THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA 35 2.2.1 Thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 35 2.2.2 Khảo sát hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 37 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 iv 3.1 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA THÂN CÂY NUCLEA ORIENTALIS (L.) L 39 3.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA THÂN CÂY NUCLEA ORIENTALIS (L.) L 40 3.2.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất benzopyranoid 40 3.2.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất monoterpenoid 47 3.3 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA…………… ………………… 59 3.3.1 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 59 3.3.2 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 60 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 CƠNG TRÌNH KHOA HỌC PHỤ LUC THUYẾT MINH ĐỀ TÀI v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Một số chất kháng oxy hóa tổng hợp 13 Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo acid L-ascorbic acid dehydro ascorbic 15 Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo vitamin E 15 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo β-carotene 15 [84] Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo taurine hypotaurine 16 Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo acid α-lipoic 16 Hình 1.7 Phản ứng trung hịa gốc DPPH 18 Hình 1.8 Phản ứng tạo phức malonyldialdehyde acid thiobarbituric 19 Hình 1.9 Ảnh minh họa cây, hoa N orientalis 21 Hình 1.10 Cấu trúc số hợp chất alkaloid phân lập từ N orientalis 24 Hình 1.11 Cấu trúc số hợp chất steroid chất béo phân lập từ N orientalis 24 Hình 1.12 Cấu trúc số hợp chất terpenoid phân lập từ N orientalis 25 Hình 1.13 Cấu trúc số hợp chất phenol phân lập từ N orientalis 25 Hình 1.14 Cấu trúc số hợp chất alkaloid phân lập từ chi Nauclea 28 Hình 1.15 Cấu trúc số hợp chất steroid, terpenoid phân lập từ chi Nauclea 29 Hình 1.16 Cấu trúc số hợp chất polyphenol phân lập từ chi Nauclea 29 Hình 3.1 Tương quan HMBC (mũi tên) hợp chất GV-8 41 Hình 3.2 Tương quan HMBC (mũi tên) hợp chất GV-9 42 Hình 3.3 Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-10 44 Hình 3.4 Tương quan HMBC (mũi tên) hợp chất GV-12 47 Hình 3.5 Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-17 48 Hình 3.6 Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-18 50 Hình 3.7 Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-19 52 Hình 3.8 Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-20 54 Hình 3.9a Cấu trúc tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) phần aglycone hợp chất GV-21 57 Hình 3.9b Cấu trúc tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) phần đường hợp chất GV-21 58 Hình 3.9c Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-21 58 Hình 3.38c Tương quan HMBC (mũi tên) COSY (kẻ đậm) hợp chất GV-21 58 Hình 3.9d Tương quan NOESY (mũi tên) hợp chất GV-21 59 Hình 4.1 Cấu trúc 10 hợp chất phân lập từ thân N orientalis 62 vi DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Các dạng hoạt động nitroge…………………………………………….4 Bảng 1.2 Các dạng hoạt động oxygen Bảng 1.3 Các hợp chất phân lập từ N orientalis 23 Bảng 1.4 Các hợp chất phân lập từ chi Nauclea 25 Bảng 2.1 Khối lượng thu suất loại cao từ thân N.orientalis 33 Bảng 2.2 Kết sắc ký cột cao ethyl acetate thân N orientalis 35 Bảng 3.1 Kết thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH cao phân đoạn từ thân N orientalis 39 Bảng 3.2 Kết thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH phân đoạn từ cao ethyl acetate thân N orientalis 39 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất GV-8 so sánh với umbelliferone 41 Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR hợp chất GV-9 so sánh với skimmin 43 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR hợp chất GV-10 so sánh với adicardin 45 Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR hợp chất GV-11 so sánh với esculetin 46 Bảng 3.7 Số liệu phổ NMR hợp chất GV-12 so sánh với scopoletin 47 Bảng 3.8 Số liệu phổ NMR hợp chất GV-17 so sánh với loganetin 49 Bảng 3.9 Số liệu phổ hợp chất GV-18 so sánh với loganin 50 Bảng 3.10 Số liệu phổ hợp chất GV-19 so sánh với sweroside 52 Bảng 3.11 Số liệu phổ hợp chất GV-20 so sánh với grandifloroside 54 Bảng 3.12 Số liệu phổ hợp chất GV-21 57 Bảng 3.13 Hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 10 hợp chất phân lập thân N orientalis 59 Bảng 3.14 Hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid hai hoạt chất lựa chọn .60 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Các phận thể bệnh lý liên quan tới gốc tự Sơ đồ 1.2 Phân loại chất kháng oxy hóa tự nhiên 13 Sơ đồ 2.1 Sơ đồ điều chế loại cao từ thân N.orientalis 34 Sơ đồ 2.2 Quy trình thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 36 Sơ đồ 2.3 Quy trình khảo sát hoạt tính ức chế q trình peroxide hóa lipid 38 vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AO (AH) : Antioxidant (chất kháng oxy hóa) Asc : Ascorbic acid (vitamin C) BHA : Butylated hydroxyanisole br : Broad (rộng) BHT : Butylated hydroxytoluene CHCl3 : Chloroform CTPT : Công thức phân tử d : Doublet (mũi đôi) DEPT : Distortionless enhancement by polarization transfer DMSO : Dimethyl sulfoxide DNA : Acid deoxyribonucleic DPPH : 2,2-diphenylpicrylhydrazyl EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid ET : Electron transfer methods GSH : Glutathione HAT : Hydrogen atom transfer methods HMBC : Heteronuclear multiple bond correlation HR-ESI-MS : High resolution electro spray ionization mass spectroscopy HSQC : Heteronuclear single quantum coherence IC50 : Nồng độ mẫu mà ức chế 50 % gốc tự J : Hằng số ghép m : Multiplet (mũi đa) MDA : Malonyldialdehyde NADPH : Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NMR : Nuclear magnetic resonance (cộng hưởng từ hạt nhân) NOS : Nitrogen oxygen species NP : Nomal phase (pha thường) PBS : Phosphate buffered saline PG : Propyl gallate Pr : Protein PTLC : Preparative thin layer chromatography (sắc ký mỏng điều chế) quin : quintet (mũi năm) viii RNS : Reactive nitrogen species ROS : Reactive oxygen species s : Singlet (mũi đơn) SEM : Standard error of the mean (sai số chuẩn giá trị trung bình) SKC : Sắc ký cột TBA : Acid thiobarbituric TBHQ : tert-Butylhydroquinone TCA : Acid Trichloroacetic TLC : Thin layer chromatography (sắc ký mỏng) Trolox : Acid 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic UV : Ultraviolet (tử ngoại) XO : Xanthine oxidase YHCT : Y học cổ truyền ix Phụ lục 7c Phổ COSY-NMR hợp chất GV-18 Phụ lục 7d Phổ HSQC-NMR hợp chất GV-18 Phụ lục 7e Phổ HMBC-NMR hợp chất GV-18 HỢP CHẤT GV-19 (CD3OD) HOH2C HO HO Phụ lục 8a Phổ H-NMR phổ giãn rộng hợp chất GV-19 Phụ lục 8b Phổ 13 C-NMR DEPT-NMR hợp chất GV-19 Phụ lục 8c Phổ COSY-NMR hợp chất GV-19 HOH2C HO HO OH Phụ lục 8d Phổ HSQC-NMR hợp chất GV-19 Phụ lục 8e Phổ HMBC-NMR hợp chất GV-19 HỢP CHẤT GV-20 (CD3OD) 11 COOH HOH2C 3'' HO HO OH Phụ lục 9a Phổ H-NMR phổ giãn rộng hợp chất GV-20 Phụ lục 9b Phổ 13 C-NMR DEPT-NMR hợp chất GV-20 Phụ lục 9c Phổ HMBC-NMR hợp chất GV-20 Phụ lục 9d Phổ HSQC-NMR hợp chất GV-20 Phụ lục 9e Phổ HMBC-NMR hợp chất GV-20 HỢP CHẤT GV-21 (CD3OD) HOH2C HO Phụ lục 10a Phổ H-NMR phổ giãn rộng hợp chất GV-21 Phụ lục 10b Phổ 13 C-NMR DEPT-NMR hợp chất GV-21 Phụ lục 10c Phổ COSY-NMR hợp chất GV-21 Phụ lục 10d Phổ HSQC-NMR hợp chất GV-21 Phụ lục 10e Phổ HMBC-NMR hợp chất GV-21 Phụ lục 10f Phổ HMBC-NMR giãn rộng hợp chất GV-21 Phụ lục 10g Phổ NOESY-NMR hợp chất GV-21 Phụ lục 10h Phổ NOESY-NMR giãn rộng hợp chất GV-21 [M+ + Phụ lục 10i Ph HR-ESI-MS c hợp chất GV-2 ... hoạt tính kháng oxy hóa Nauclea orientalis (L. )L (Rubiaceae) Việt nam  Đề tài công bố 10 hợp chất l? ??n cô l? ??p từ thân chi Nauclea Kết nghiên cứu: Từ thân Nauclea orientalis (L. )L (Gáo vàng), phân... HIỂU VỀ CÂY THUỐC NAUCLEA ORIENTALIS (L .), L 1.2.1 Mô tả thực vật phân bố sinh thái Nauclea orientalis (L .) L a) Mô tả thực vật [25-27] Cây thuốc Nauclea orientalis (L .) L. , thuộc họ Cà phê (Rubiaceae). .. (phản ứng 1.18-1.2 0) LH + HO• L? ?? + O2LOO• LOO• + LHLOOH L? ?? + L? ?? + LOO• L? ? ?L- L LOO• + LOOH + LOOH + LOOHLO• Q trình peroxide hóa xúc tiến oxygen đơn bội, hypochlorite, có mặt ion kim loại chuyển tiếp