(Đồ án hcmute) nghiên cứu khả năng kháng oxy hóa và ức chế tyrosinase trên tế bào của nấm linh chi đỏ (ganoderma lucidum)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA VÀ ỨC CHẾ TYROSINASE TRÊN TẾ BÀO CỦA NẤM LINH CHI ĐỎ (GANODERMA LUCIDUM) GVHD: PHAN THỊ ANH ĐÀO SVTH: TRẦN THỊ MINH NGÂN MSSV: 16116054 SVTH: TRƯƠNG THỊ THANH THẢO MSSV: 16116081 SKL 0 Tp Hồ Chí Minh, tháng 09/2020 an TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA ĐÀO TẠO CHẤT LƯỢNG CAO BỘ MƠN CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP MÃ SỐ: 2020 – 16116054 NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA VÀ ỨC CHẾ TYROSINASE TRÊN TẾ BÀO CỦA NẤM LINH CHI ĐỎ (GANODERMA LUCIDUM) GVHD: TS PHAN THỊ ANH ĐÀO SVTH: TRẦN THỊ MINH NGÂN 16116054 TRƯƠNG THỊ THANH THẢO 16116081 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 09/2020 an an LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực khóa luận, chúng tơi xin chân thành cảm ơn q thầy cơ, gia đình bạn bè ln giúp đỡ, hỗ trợ đóng góp ý kiến dẫn nhiệt tình cho chúng tơi Đó niềm vinh hạnh động lực giúp chúng tơi hồn thành tốt đồ án tốt nghiệp Chúng tơi xin cảm ơn quý thầy cô trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Tp Hồ Chí Minh nói chung, quý thầy cô ngành Thực phẩm, Khoa Đào tạo chất lượng cao nói riêng dạy kiến thức q báu giúp chúng tơi có tảng vững vàng tạo điều kiện trang thiết bị, dụng cụ thí nghiệm để chúng tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Chúng xin cảm ơn Ths Hồ Thị Thu Trang, chun viên Phịng Thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ Thực phẩm, Khoa Cơng nghệ Hóa học Thực phẩm – trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện giúp đỡ nhiều thiết bị phục vụ cho trình nghiên cứu; em sinh viên Mỹ Hạnh, Diễm Hương, Tiểu My, Hoàng Ánh, Hồng Nhung, Kim Hân giúp đỡ trình thực khóa luận Chúng tơi xin cảm ơn Ths Hà Thị Huế - giảng viên ngành Kỹ thuật nữ công, Khoa Công nghệ may – thời trang trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Tp Hồ Chí Minh; PGS.TS Nguyễn Văn Hiếu học viên cao học Trần Văn Thuận Phịng Thí nghiệm Sinh học Phân tử Môi trường thuộc trường Đại học Khoa học tự nhiên Tp Hồ Chí Minh; Ths Phan Hữu Tín - Phịng Nấm ăn Dược liệu, Viện Nghiên cứu Công nghệ sinh học Môi trường thuộc trường Đại học Nông lâm, Tp Hồ Chí Minh; Phịng Thí nghiệm Phân tích Trung Tâm trường Đại học Khoa học tự nhiên, Tp Hồ Chí Minh nhà cung cấp thiết bị, hóa chất liên quan hỗ trợ chúng tơi q trình thực khóa luận Đặc biệt, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến TS Phan Thị Anh Đào, giảng viên Bộ môn Công nghệ Hóa học, Khoa Cơng nghệ Hóa học Thực phẩm – trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Tp Hồ Chí Minh Cơ tận tâm hướng dẫn, bảo chúng tơi nhiệt tình suốt q trình làm khóa luận Sau cùng, chúng tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè người luôn động viên, giúp đỡ đồng hành suốt quãng thời gian vừa qua ii an LỜI CAM ĐOAN Chúng xin cam đoan tồn nội dung trình bày khóa luận tốt nghiệp riêng Chúng xin cam đoan nội dung tài liệu tham khảo khóa luận tốt nghiệp trích dẫn đầy đủ xác theo quy định Ngày 04 tháng 09 năm 2020 Ký tên Trần Thị Minh Ngân iii an Trương Thị Thanh Thảo iv an v an vi an vii an viii an Nồng độ Mẫu Linh chi Việt Nam Linh chi Nhật Linh chi Hàn quốc Hồng chi Sừng hươu Control 100 50 25 10 0,465 0,187 0,328 0,413 0,435 0,476 0,185 0,325 0,412 0,437 0,476 0,181 0,323 0,400 0,435 0,454 0,108 0,225 0,313 0,398 0,454 0,199 0,286 0,33 0,418 0,454 0,112 0,225 0,283 0,392 0,504 0,13 0,212 0,333 0,418 0,504 0,131 0,21 0,336 0,42 0,504 0,132 0,211 0,336 0,419 0,39 0,103 0,225 0,324 0,356 0,386 0,098 0,227 0,33 0,359 0,387 0,105 0,221 0,326 0,357 0,533 0,056 0,16 0,353 0,418 0,527 0,054 0,169 0,336 0,42 0,534 0,055 0,164 0,346 0,419 Kết xử lý Anova-one way hoạt tính ức chế gốc tự Nồng độ 10 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu a Duncan N LCVN 7.4035 HC 7.8233 LCNB LCHQ SH 3 12.9967 16.8667 21.2046 Sig .202 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ 25 74 an 1.000 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N LCVN HC LCNB LCHQ SH 3 12.3273 15.7367 29.9233 33.5300 34.8806 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ 50 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N LCVN HC LCNB LCHQ SH Sig 30.8537 42.1300 50.4402 65.0800 69.0714 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ 100 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N LCVN HC LCNB LCHQ SH Sig 60.8217 73.6867 75.7701 80.8833 89.5859 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 PHỤ LỤC Năng lực khử với Fe3+ Giá trị đo quang chất đối chứng dương vitamin C 75 an 1.000 1.000 Nồng độ (mg/L) Lần Lần Lần 0,1 1,085 1,095 1,087 Giá trị đo quang mẫu cao với lần lặp Nồng độ Mẫu 0,1 0,5 0,035 0,246 0,451 0,03 0,249 0,44 0,034 0,244 0,469 0,249 0,428 0,72 0,223 0,44 0,78 0,248 0,48 0,783 0,236 0.501 0,957 0,234 0,5 0,955 0,23 0,5 0,958 0,121 0,428 0,648 0,122 0,415 0,672 0,124 0,447 0,671 0,177 0,671 1,194 0,173 0,675 1,184 0,175 0,673 1,189 Linh chi Việt Nam Linh chi Nhật Linh chi Hàn quốc Hồng chi Sừng hươu Kết xử lý Anova-one way lực khử với Fe3+ Nồng độ 0.1 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu a Duncan N Linh chi Việt Nam 0330 Hong chi Sung huou Linh chi Hàn quốc 2333 Linh chi Nhật 2520 1223 1750 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 76 an 1.000 1.000 130 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ 0.5 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N Linh chi Việt Nam Hong chi 4300 Linh chi Nhật 4493 Linh chi Hàn quốc Sung huou 2463 5003 6730 Sig 1.000 127 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N Linh chi Việt Nam Hong chi Linh chi Nhật Linh chi Hàn quốc Sung huou 3 4533 6637 7610 9567 1.1890 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 PHỤ LỤC Khả ức chế enzyme tyrosinase Giá trị đo quang mẫu đối chứng dương kojic acid với lần lặp Nồng độ (𝝁𝒈/𝒎𝒍) Mẫu Control 100 50 25 10 0,110 0,011 0,044 0,067 0,091 0,098 0,110 0,012 0,043 0,065 0,090 0,097 0,110 0,013 0,042 0,063 0,091 0,098 Kojic acid Giá trị đo quang mẫu với lần lặp 77 an Nồng độ (𝝁𝒈/𝒎𝒍) Mẫu Linh chi Việt Nam Linh chi Nhật Linh chi Hàn quốc Hồng chi Sừng hươu Control 100 50 25 0,126 0,109 0,116 0,119 0,126 0,109 0,115 0,12 0,126 0,109 0,115 0,12 0,102 0,084 0,096 0,099 0,102 0,086 0,096 0,099 0,102 0,085 0,095 0,099 0,160 0,074 0,12 0,146 0,160 0,075 0,121 0,148 0,160 0,078 0,119 0,146 0,124 0,087 0,096 - 0,124 0,085 0,095 - 0,124 0,086 0,095 - 0,131 0,093 0,125 0,128 0,131 0,095 0,125 0,128 0,131 0,094 0,124 0,128 Kết xử lý Anova-one way khả ức chế enzyme tyrosinase Nồng độ 25 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N Sừng hươu 2.2137 Linh chi Nhật 2.8103 Linh chi Việt Nam Linh chi Hàn quốc 3 5.0267 8.3333 Sig .141 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ 50 78 an 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N Sừng hươu Linh chi Nhật Linh chi Việt Nam Hồng chi Linh chi Hàn quốc 3 4.8347 6.2090 8.4657 9.6773 25.0000 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Nồng độ 100 Subset for alpha = 0.05 Tên mẫu Duncana N Linh chi Việt Nam Linh chi Nhật Sừng hươu Hồng chi Linh chi Hàn quốc 3 13.4920 16.6667 28.2443 30.6453 52.7083 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 PHỤ LỤC Phân tích thành phần hóa học Ganoderic acid A Ganoderic acid B 79 an 1.000 1.000 1.000 1.000 Ganoderic acid C1 Ganoderic acid C2 80 an Ganoderic acid D Ganoderic acid H Lucidumol B 81 an Lucidenic acid N 𝜷-D-Glucan Adenosine Lucidimine A 82 an Lucidimine C 4-hydroxybenzoic acid p-coumaric acid 83 an Catechin Myricertin PHỤ LỤC Hệ số tương quan tổng hàm lượng polyphenol với khả ức chế gốc tự do, lực khử với Fe3+ khả ức chế enzyme tyrosinase Kết xử lý Anova-one way hệ số tương quan 84 an Correlations Tên mẫu lượng chế -.617* 660** -.667** 076 014 007 007 788 15 15 15 15 15 -.617* -.790** 977** -.592* 000 000 020 N Pearson Correlation Sig (2-tailed) polyphenol 014 N Tổng hàm lượng Pearson Correlation polyphenol Sig (2-tailed) Năng lực khử IC50-DPPH Sig (2-tailed) Pearson Correlation tyrosinase 15 15 15 15 15 660** -.790** -.825** 791** 007 000 000 000 15 15 15 15 15 ** ** ** -.575* N Năng lực khử Khả ức Tên mẫu Pearson Correlation IC50-DPPH Tổng hàm -.667 Sig (2-tailed) N 977 -.825 007 000 000 025 15 15 15 15 15 * ** * Khả ức chế Pearson Correlation 076 -.592 tyrosinase Sig (2-tailed) 788 020 000 025 15 15 15 15 N 791 -.575 15 * Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed) ** Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed) PHỤ LỤC Thử độc tế bào Kết phần trăm tế bào sống (%) Nồng độ (𝝁𝒈/𝒎𝒍) Mẫu Control 10 20 40 50 60 80 100 120 99,60 100,62 98,15 95,25 70,04 57,90 55,14 46,38 33,75 98,60 99,51 100,62 92,78 70,86 55,82 50,44 48,89 36,13 101,80 99,02 99,46 94,33 75,27 53,78 60,12 50,16 35,93 E-HQ Kết xử lý Anova-one way kết thử độc tế bào % doi chung mau N Subset for alpha = 0.05 Duncana 120 100 80 3 35.2704 48.4787 55.2360 85 an 60 50 40 20 99.4087 10 99.7151 control 100.0000 55.8327 72.0568 95.0826 Sig 1.000 1.000 750 1.000 1.000 765 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 PHỤ LỤC 10 Đánh giá tyrosinase nội bào Kết phần trăm hoạt động tyrosinase (%) Nồng độ (𝝁𝒈/𝒎𝒍) Mẫu Control IBMX Arbutin 10 20 40 45,61 103,06 61,08 88,05 86,90 76,04 63,49 93,94 60,75 94,50 90,37 76,46 46,19 103,00 82,40 77,91 91,66 81,73 E-HQ Kết xử lý Anova-one way kết phần trăm hoạt động tyrosinase nội bào (%) Phần trăm Subset for alpha = 0.05 Nồng độ Duncana N arbutin 68.0760 40 78.0747 10 86.8176 86.8176 20 89.6444 89.6444 IBMX 78.0747 100.0000 Sig .125 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 PHỤ LỤC 11 Đánh giá melanin nội bào Kết hàm lượng melanin (% ) Mẫu Nồng độ (𝝁𝒈/𝒎𝒍) 86 an 094 061 Control IBMX Arbutin 10 20 40 60,98 102,39 55,76 101,09 91,30 76,63 57,07 93,26 53,15 94,89 83,88 63,26 60,33 104,34 54,13 94,56 82,50 72,07 E-HQ Kết xử lý Anova-one way kết thử độc tế bào Phần trăm Subset for alpha = 0.05 Nồng độ Duncana N arbutin 54.3478 40 20 10 96.8478 99.9970 70.6522 85.8949 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 87 an 1.000 1.000 447 S an K L 0 ... polyphenol từ nấm linh chi đỏ có khả ức chế hoạt động enzyme tyrosinase Chúng tập trung nghiên cứu khả kháng oxy hóa, khả gây độc tính tế bào, khả ức chế hoạt động enzyme tyrosinase ức chế hình thành... PHẨM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP MÃ SỐ: 2020 – 16116054 NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA VÀ ỨC CHẾ TYROSINASE TRÊN TẾ BÀO CỦA NẤM LINH CHI ĐỎ (GANODERMA LUCIDUM) GVHD: TS PHAN THỊ ANH ĐÀO SVTH: TRẦN THỊ... tế bào Khả ức chế Tyrosinase nội bào Thử độc tính tế bào Khả ức chế melanin tế bào Hình 1.13 Sơ đồ nghiên cứu 2.2.1 Thuyết minh quy trình Giai đoạn loại nấm linh chi khô (linh chi Việt Nam, linh