Đánh giá tính an toàn và tác dụng trên các thông số lipid máu của cao chiết từ lá chè vằng (jasminum subtriplinerve blume oleaceae) trên thực nghiệm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC - - NÔNG THỊ TUYÊN ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ TÁC DỤNG TRÊN CÁC THƠNG SỐ LIPID MÁU CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC  - Người thực hiện: NƠNG THỊ TUN ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ TÁC DỤNG TRÊN CÁC THÔNG SỐ LIPID MÁU CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (DƯỢC HỌC) Khóa : QH.2017.Y Người hướng dẫn : ThS BSNT Phan Hồng Minh TS Mai Phương Thanh Hà Nội – 2022 LỜI CẢM ƠN Đề tài “đánh giá tính an tồn tác dụng thông số lipid máu cao chiết từ chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) thực nghiệm” nội dung em chọn đề tài nghiên cứu làm khóa luận tốt nghiệp sau năm học tập rèn luyện ngành Dược học trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Để hoàn thành đề tài bên cạnh nỗ lực thân từ kiến thức học em nhận quan tâm, giúp đỡ tận tình thầy cơ, bạn bè gia đình Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy cô công tác trường Đại học Y dược thuộc Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện cung cấp cho em kiến thức quan trọng để em có tảng nghiên cứu, hồn thành khóa luận hành trang cần thiết cho nghiệp em tương lai Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS BSNT Phan Hồng Minh TS Mai Phương Thanh, giảng viên trực tiếp hướng dẫn bảo em tận tình kiến thức, kĩ năng, kinh nghiệm thái độ làm việc để em hồn thành đề tài cách tốt Em xin cảm ơn gia đình bạn bè bên cạnh động viên, ủng hộ em vật chất tinh thần trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trong q trình thực khóa luận, em cố gắng hoàn thiện đề tài qua việc tham khảo tài liệu, trao đổi, tiếp thu ý kiến góp ý khơng tránh khỏi có thiếu sót Em mong nhận ý kiến, đóng góp quý thầy để khóa luận em hồn thiện Em xin trân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 01 tháng 06 năm 2022 Sinh viên DANH MỤC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Kí hiệu Diễn giải P-407 Poloxamer 407 RLLPM Rối loạn lipid máu VLDL Lipoprotein tỉ trọng thấp IDL-C Lipoprotein tỉ trọng trung bình LDL-C Lipoprotein tỉ trọng thấp HDL-C Lipoprotein tỉ trọng cao TC Cholesterol toàn phần TG Triglyceride CETP Cholesteryl-estertransfer-protein 10 LCAT Lecithin-cholesterol-acyltransferase 11 HL Hepatic lipase 12 XVĐM Xơ vữa động mạch 13 GOT Glutamat Oxaloacetat Transaminase 14 GPT Glutamat pyruvat transaminase DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Chuyển hóa lipid thể Hình 1.4: Điều trị RLLPM thuốc 12 Hình 3.1: Ảnh hưởng cao chiết đến thể trọng chuột cống trắng 20 Hình 3.2: Ảnh hưởng cao chiết đến nồng độ creatinin máu chuột cống trắng 24 Hình 3.3: Nhuộm HE cho mơ gan với độ phóng đại 400x 25 Hình 3.4: Nhuộm HE cho mơ thận với độ phóng đại 400x 25 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Phân loại đặc điểm lipoprotein huyết tương Bảng 1.6: Cây chè vằng tự nhiên sản phẩm cao chiết 13 Bảng 3.1: Ảnh hưởng cao chiết đến chức tạo máu chuột cống trắng 21 Bảng 3.2: Ảnh hưởng cao chiết đến độ hủy hoại tế bào gan chuột cống trắng 22 Bảng 3.3: Ảnh hưởng cao chiết đến chức gan chuột cống trắng 23 Bảng 3.4: Ảnh hưởng lơ mơ hình P-407 lên chuột nhắt trắng (mmol/L) 26 Bảng 3.5: Tác dụng cao chiết chè vằng lên số lipid máu chuột nhắt trắng sau 24h tiêm P-407 (mmol/L) 26 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương - TỔNG QUAN 1.1 SINH LÝ HỌC LIPID MÁU 1.1.1 Lipid, cấu tạo lipid 1.1.2 Thành phần lipoprotein 1.1.3 Phân loại lipoprotein 1.1.4 Chuyển hóa lipoprotein 1.2 SINH LÝ BỆNH RỐI LOẠN LIPID MÁU 1.3 CHẨN ĐOÁN RỐI LOẠN LIPID MÁU 1.4 ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU 10 1.4.1 Không dùng thuốc 10 1.4.2 Dùng thuốc 11 1.5 CÁC MƠ HÌNH GÂY TĂNG LIPID MÁU TRÊN THỰC NGHIỆM 12 1.6 GIỚI THIỆU VỀ CAO CHIẾT LÁ CÂY CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) 13 Chương - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 15 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Đánh giá độc tính bán trường diễn 17 2.2.2 Đánh giá tác dụng hạ lipid máu dựa mơ hình gây tăng cholesterol máu nội sinh 18 2.2.3 Xử lý số liệu 19 Chương - KẾT QUẢ 20 3.1 ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 20 3.1.1 Tình trạng chung 20 3.1.2 Sự thay đổi trọng lượng chuột cống trắng 20 3.1.3 Đánh giá chức tạo máu 21 3.1.4 Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan 22 3.1.5 Đánh giá chức gan 23 3.1.7 Thay đổi mô bệnh học sau 90 ngày uống thuốc 24 3.2 TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) TRÊN MƠ HÌNH RLLPM THEO CƠ CHẾ NỘI SINH 26 Chương - BÀN LUẬN 28 4.1 ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 28 4.2 HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA CAO CHIẾT LÁ CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) TRÊN CÁC THÀNH PHẦN LIPID MÁU 31 4.2.1 Đánh giá mơ hình tăng lipid máu nội sinh P-407 31 4.2.2 Đánh giá mơ hình thuốc đối chứng Atorvastatin 10 mg 32 4.2.3 Đánh giá tác dụng cao chiết chè vằng số lipid máu 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO MỞ ĐẦU Rối loạn lipid máu yếu tố quan trọng cho việc hình thành phát triển bệnh xơ vữa động mạch, bệnh động mạch vành, động mạch não Xơ vữa động mạch gây nhiều biến chứng nghiêm trọng, đe dọa tính mạng như: tăng huyết áp, nhồi máu tim, tai biến mạch máu não [13, 18, 19] Rối loạn lipid máu chiếm tỷ lệ cao bệnh nhân cao tuổi tăng huyết áp, đặc biệt bệnh nhân có yếu tố nguy tim mạch khác kèm thừa cân, béo phì, uống nhiều rượu vận động thể lực, theo tạp chí Y học Việt Nam (2022) tỷ lệ rối loạn lipid máu bệnh nhân cao tuổi tăng huyết áp 88,0% [27] Y học đại áp dụng nhiều biện pháp để điều trị RLLPM: chế độ ăn uống, sinh hoạt điều độ, rèn luyện thể lực dùng thuốc Có nhiều nhóm thuốc có tác dụng điều chỉnh RLLPM dẫn xuất statin, nhóm fibrat, acid nicotinic, chất gắn acid mật Các thuốc đạt hiệu điều trị tốt có nhiều tác dụng khơng mong muốn gây rối loạn tiêu hóa, đau đầu, chóng mặt, ngủ, suy giảm nhận thức, phản ứng da…, đặc biệt gây tăng enzym gan, viêm cơ, tiêu vân có tỷ lệ gây đột biến ảnh hưởng đến trình phát triển thai nhi [4, 29, 34] Bên cạnh đó, chi phí điều trị thuốc cao, bệnh thường phải điều trị dài ngày Vì thế, xu hướng hướng thuốc có nguồn gốc tự nhiên, vừa mang lại hiệu điều trị, vừa hạn chế tác dụng không mong muốn giảm chi phí điều trị cho người bệnh [22] Việt Nam nước có nguồn gốc dược liệu tự nhiên vô phong phú với 5000 loài thực vật nấm, 408 loài động vật, 75 loại khống vật dùng làm thuốc 200 lồi có tiềm khai thác phát triển để trồng Nhiều loài xếp vào loại quý giới như: Sâm Ngọc Linh, thông đỏ, bách hợp… Chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) từ lâu ông cha ta dùng chữa viêm lt ngồi da, thơng kinh, hoạt huyệt, chữa viêm tuyến sữa, trị thiếu máu, bổ gan, thải độc, ổn định huyết áp, kích thích tiêu hoá, ngủ ngon giấc, chống oxi hoá Tuy nhiên chưa có nhiều nghiên cứu chè vằng để khai thác hết hiệu điều trị từ cao chiết Để có sở khoa học giúp khai thác hết tiềm chè vằng lấy làm cho việc sử dụng thuốc lâm sàng, tiến hành nghiên cứu đề tài “đánh giá tính an tồn tác dụng thơng số lipid máu cao chiết từ chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) thực nghiệm” với hai mục tiêu sau: Đánh giá độc tính bán trường diễn cao chiết chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng thông số lipid máu cao chiết chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) chuột nhắt trắng Số liệu từ bảng 3.5 thể nồng độ số lipid máu chuột nhắt trắng lơ mơ hình lơ dùng thuốc thời điểm 24 sau tiêm màng bụng dung dịch P-407 gây RLLPM nội sinh - Cao chiết chè vằng liều 36 mg/kg 108 mg/ngày lơ chứng dương (atorvastatin) làm giảm có ý nghĩa thống kê số TG (p 0,05) 27 Chương - BÀN LUẬN 4.1 ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN Nghiên cứu độc tính bán trường diễn thực cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày liên tục khoảng thời gian định Trong nghiên cứu, khoảng thời gian chọn cho thử nghiệm 90 ngày Chúng tiến hành đánh giá độc tính bán trường diễn chuột cống trắng với mức liều: liều 18 mg/kg/ngày liều có tác dụng tương đương người (tính theo hệ số 6) liều cao gấp lần liều tương đương người (54 mg/kg/ngày), uống liên tục 90 ngày Độc tính mức độ mà chất gây hại cho người động vật Nó tác động lên cấu trúc thể , chẳng hạn tế bào (độc tế bào), quan (ví dụ: độc tính thận gan), tồn sinh vật Vậy để đánh giá tính an tồn cao chiết chè vằng, tiến hành đánh giá số tiêu sau: ▪ Ảnh hưởng cao chiết tình trạng chung, thể trọng chuột quan tạo máu: Theo hướng dẫn WHO, tình trạng chung, trọng lượng thể số huyết học xét nghiệm bắt buộc đánh giá độc tính thuốc Máu tổ chức quan trọng máu liên quan mật thiết với phận, quan thể [51] Về mặt bệnh lý, máu chịu ảnh hưởng tất tổ chức đồng thời bị ảnh hưởng phản ánh tình trạng riêng quan tạo máu Nếu thuốc có ảnh hưởng đến quan tạo máu trước hết thành phần máu bị thay đổi, đặc biệt thường làm giảm số lượng bạch cầu Vì vậy, xét nghiệm số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, số lượng tiểu cầu chuột cống cần xác định Định lượng huyết sắc tố cho biết rõ chức hồng cầu Thể tích trung bình hồng cầu phản ánh đặc điểm tình trạng thiếu máu Hematocrit tỷ lệ % khối hồng cầu máu toàn phần [17] Nếu thuốc làm thay đổi số lượng hồng cầu làm nước hay ứ nước tế bào máu số thay đổi Kết nghiên cứu cho thấy sau 30, 60 90 ngày nghiên cứu, trọng lượng chuột lô dùng cao chiết tăng so với trước uống dịch chiết, nhiên khơng có khác biệt lô chứng sinh học lô dùng cao chiết Tất số huyết học lô chứng sinh học lô trị giới hạn bình thường, thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê so với trước dùng cao 28 chiết so với lô chứng sinh học thời điểm sau 30, 60 90 ngày uống cao chiết liên tục Như vậy, với mức liều cao chiết 54 mg/kg/ngày 108 mg/kg/ngày không làm ảnh hưởng tới phát triển thể trạng, cân nặng độc tính quan tạo máu chuột cống trắng ▪ Ảnh hưởng cao chiết đến chức gan, thận: Trong thể, gan có nhiều chức quan trọng Việc đưa thuốc vào thể gây độc với gan, làm ảnh hưởng đến chức quan Vì vậy, đánh giá độc tính thuốc nghiên cứu ảnh hưởng thuốc chức gan cần thiết [17] Để đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan, nồng độ enzym có nguồn gốc gan (AST, ALT) huyết thường định lượng ALT enzym có nhiều gan, khu trú bào tương tế bào nhu mô gan Khi tổn thương hủy hoại tế bào gan, chí cần thay đổi tính thấm màng tế bào gan, hoạt độ ALT máu tăng cao Khác với ALT, 2/3 AST khu trú ty thể (mitochondria) 1/3 lượng AST khu trú bào tương tế bào Khi tổn thương tế bào gan mức độ tế bào, AST ty thể giải phóng Vì vậy, viêm gan nói chung, hoạt độ ALT ln tăng cao AST Ngồi ra, người ta đánh giá chức gan qua số nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần albumin máu Kết cho thấy sau 30, 60 90 ngày uống cao chiết, số hoạt độ AST, ALT, nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol tồn phần albumin máu khơng thay đổi có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống liều cao chiết Thận quan tiết thể, nhu mô thận dễ tổn thương chất nội sinh ngoại sinh mơ có nhiều máu qua Vì vậy, đưa thuốc vào thể thuốc gây tổn thương thận, từ ảnh hưởng đến chức thận [51] Creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phục thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin máu tăng sớm ure Do vậy, creatinin máu tiêu tin cậy quan trọng ure máu, nên dùng để đánh giá theo dõi chức thận [17] Kết nghiên cứu cho cao chiết chè vằng liều dùng đường uống chuột cống liên tục 90 ngày không làm thay đổi nồng độ creatinin so với lô chứng sinh học 29 ▪ Ảnh hưởng cao chiết lên cấu trúc đại thể vi thể: Theo hướng dẫn WHO, giải phẫu đại thể vi thể gan thận số bắt buộc đánh giá độc tính bán trường diễn Ngồi ra, xét nghiệm vi thể tiêu chuẩn vàng để đánh giá tổn thương quan chịu trách nhiệm chuyển hóa thải trừ thuốc gan thận [51] Trên tất chuột nghiên cứu, không quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan Kết giải phẫu bệnh cho thấy cao chiết chè vằng liều dùng đường uống chuột cống liên tục 90 ngày khơng làm thay đổi hình ảnh mơ bệnh học thận so với lơ chứng sinh học Hình ảnh vi thể gan khơng có khác biệt lơ chứng lô uống cao chiết chè vằng Quan sát ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan 30% số chuột kết cho thấy mẫu bệnh phẩm gan có hình ảnh thối hóa nhẹ (lơ trị 1) đến thối hóa vừa (lơ trị 2) tế bào gan Tại gan, nguyên nhân gây tổn thương công, tế bào gan bị ảnh hưởng nặng nhẹ tùy thuộc vào loại nguyên nhân thời gian tiếp xúc với nguyên nhân tổn thương Sự tổn thương tế bào nói chung tế bào gan nói riêng chia làm mức độ khác tổn thương có khả hồi phục (thối hóa), tổn thương có nguy gây chết tế bào tổn thương khơng có khả hồi phục (hoại tử) [15] Trong tổn thương tế bào nói trên, tổn thương thối hóa tổn thương ban đầu nhẹ tế bào, tế bào tự phục hồi lại tổn thương để trở tình trạng bình thường Sự thối hóa tế bào thối hóa hạt, thối hóa nước thối hóa mỡ Kết hợp với kết xét nghiệm đánh giá tổn thương tế bào gan, hoạt độ ALT AST lô uống cao chiết chè vằng mức bình thường, khơng khác biệt so với lơ chứng, nên theo nhóm nghiên cứu, chưa có sở cao chiết chè vằng gây tổn thương gan chuột thông qua xét nghiệm vi thể gan chuột nghiên cứu độc tính bán trường diễn Từ kết luận cao chiết chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) có tính an tồn 30 4.2 HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA CAO CHIẾT LÁ CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) TRÊN CÁC THÀNH PHẦN LIPID MÁU 4.2.1 Đánh giá mơ hình tăng lipid máu nội sinh P-407 Trong nghiên cứu này, chọn P-407 liều 200 mg/kg tiêm màng bụng để gây RLLPM nội sinh chuột nhắt trắng, atorvastatin liều 100 mg/kg sử dụng làm thuốc đối chứng Atorvastatin cao chiết uống kéo dài ngày trước gây mơ hình Poloxamer 407 chất hoạt động bề mặt khơng ion hóa có khả gây RLLPM thông qua số chế liên quan đến enzym tham gia vào trình chuyển hóa lipid [37] Mơ hình nội sinh thực cách dùng chất hoạt động bề mặt không ion hoá Tween 80, Triton WR-1339 Poloxamer 407 (P-407) đường tồn thân mà khơng cần dùng tới nguồn lipid ngoại sinh bổ sung đường ăn uống Các chất chứng minh chế làm tăng tổng hợp cholesterol gan [23, 41] Trước đây, nhóm nghiên cứu sử dụng Tween 80 để gây rối loạn lipid máu kết thu không ổn định, không làm rối loạn rõ rệt nồng độ lipid máu động vật thí nghiệm Ở nghiên cứu này, chúng tơi chọn P- 407 có khả gây tăng lipid máu cao an toàn so với Triton WR-1339 [31, 41] Tham khảo liều dùng P-407 chuột nhắt trắng từ nghiên cứu trước [24, 25, 41] nghiên cứu liều P- 407 dùng 200 mg/kg chuột Sau tiêm màng bụng chuột, nồng độ lipid máu bắt đầu tăng đạt cực đại sau 24 giờ, sau giảm dần bình thường [24, 38], chúng tơi chọn thời điểm 24 sau tiêm P- 407 để định lượng nồng độ lipid máu chuột thí nghiệm Kết nghiên cứu bảng 3.4 cho thấy, lô tiêm màng bụng P407, tất thông số lipid máu tăng lên rõ rệt so với lơ chứng sinh học, tăng cao nồng độ TG (gấp khoảng lần so với nhóm chứng), nồng độ TC nồng độ non-HDL-C tăng hơn, gấp khoảng lần so với nhóm chứng sinh học Tất chuột lô sau tiêm P-407 khơng có dấu hiệu bất thường tình trạng chung như: chuột hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lông mượt, phân khô, chuột chết Điều cho thấy P-407 chất có hiệu an tồn việc gây mơ 31 hình rối loạn lipid máu nội sinh động vật thí nghiệm Kết tương đối phù hợp với nghiên cứu trước tiến hành chuột nhắt trắng [24, 31, 41], mức tăng số TG thấp so với mơ hình tác giả Phạm Thanh Tùng, Đỗ Quốc Hương Tạ Thu Thủy thể mức tăng đáng kể số lipid máu, mức tăng có ý nghĩa thống kê (p < 0,001 với TC, TG non-HDL-C) [16, 26, 28] Vì vậy, mơ hình tăng lipid máu P-407 nghiên cứu thành cơng 4.2.2 Đánh giá mơ hình thuốc đối chứng Atorvastatin 10 mg Trên mơ hình nghiên cứu thực nghiệm, thuốc đối chứng lựa chọn viên nén atorvastatin 10 mg Đây loại thuốc thường nhà nghiên cứu giới sử dụng làm thuốc đối chứng Atorvastatin thuốc thuộc nhóm statin, nhóm hiệu điều trị rối loạn lipid máu với chế ức chế enzym HMG-CoA reductase, làm giảm tổng hợp cholesterol làm tăng hoạt động LDL receptor gan Về tác dụng thuốc nhóm statin mức độ điều chỉnh RLLPM giảm dần theo thứ tự: Rosuvastatin, atorvastatin, simvastatin, lovastatin,…[53] Do sử dụng rosuvastatin làm thuốc chứng dương có kết tốt nhất, nhiên giá thành rosuvastatin đắt, mà atorvastatin có tác dụng tốt, nên chúng tơi chọn atorvastatin làm thuốc đối chứng để so sánh Trong nghiên cứu chọn mức liều cao 100 mg/kg lâm sàng thuốc điều trị RLLPM thường bắt đầu có tác dụng sau 10 – 15 ngày tối đa sau tháng Trong thời gian thực mơ hình nội sinh ngày nên phải chọn liều cao đánh giá tác dụng điều chỉnh RLLPM P-407 chất hoạt động bề mặt (chất hoạt động bề mặt) dựa polyether, cung cấp phương tiện gây tăng lipid máu khởi phát nhanh dường khơng có độc tính q mức so với Triton WR-1339 [40] Poloxamer 407 có biết gây tăng cholesterol máu phụ thuộc vào liều đáng kể tăng triglycerid máu chuột cống chuột nhắt theo số chế (ức chế lipoprotein lipase, kích thích gián tiếp HMG-CoA (3-hydroxy-3methylglutaryl Co-A) reductase, thúc đẩy nồng độ cholesterol gan) Dựa chế P-407 mảnh chứng hiệu quả, statin chọn làm 32 chất chuẩn tham chiếu cho thuốc Nó ức chế HMG-CoA reductase, chống lại tác dụng P-407, làm giảm TC huyết Ngồi ra, làm giảm mức LDL cách hạ thấp mức độ tiền chất (VLDL IDL), giúp tăng cường tác dụng hạ lipid Hiện nay, có bảy loại statin khác nói chung, atorvastatin rosuvastatin sử dụng liệu pháp cường độ cao Atorvastatin có mức độ điều chỉnh rối loạn lipid máu vừa phải, thuốc có giá thành phù hợp sẵn có thị trường thời điểm nghiên cứu nên thường chọn làm thuốc đối chứng dương cho đánh giá tác dụng hạ lipid máu mơ hình thực nghiệm lâm sàng [35] Kết bảng 3.5 cho thấy atorvastatin có hiệu giảm đáng kể tình trạng tăng lipid máu thực nghiệm số TC, TG, non-HDL-C So sánh với mội số kết nghiên cứu chúng tơi nhận thấy có kết tương đồng với nghiên cứu tác giả Phạm Thanh Tùng, Tạ Thu Thủy Đỗ Quốc Hương [16, 26, 28] 4.2.3 Đánh giá tác dụng cao chiết chè vằng số lipid máu Như biết, hầu hết phòng xét nghiệm, số lipid máu thường định lượng bao gồm TG, TC HDL- C Chỉ số LDL-C tính theo cơng thức Friedewald: LDL- C (mmol/L) = TC- HDL- C - TG/ 2,2 Đây công thức tương đối tin cậy Chương trình giáo dục quốc gia cholesterol Mỹ (National cholesterol Education Program - NCEP) khuyến cáo phương pháp thông thường để tính LDL- C [42] Tuy nhiên cơng thức Friedewald có hạn chế định, gây sai số tính tốn dựa định lượng thông số lipid khác Hơn nữa, nồng độ TG > 2,26 mmol/L cơng thức khơng đáng tin cậy phải nhịn đói trước xét nghiệm để loại trừ tồn chylomicron máu [30] Vì vậy, NCEP đưa số non- HDL-C, tính tốn theo cơng thức: non HDL-C = TC - (HDL-C) nồng độ TG > 2,26 mmol/L [42] Non - HDL- C chủ yếu bao gồm LDL VLDL Nồng độ non - HDL- C định lượng trường hợp khơng nhịn đói [48] Kết nghiên cứu bảng 3.5 cho thấy cao chiết chè vằng có tác dụng điều chỉnh RLLPM, hiệu lên số lipid máu có khác 33 nhau: Cả hai mức liều 36 mg/kg liều 108 mg/kg làm giảm có ý nghĩa thống kê số TG, TC, non-HDL-C (7,9%, 15,6% 16,9%) (9,3%, 16,8% 18,3%) so với lơ mơ hình Có thể thấy cao chiết liều cao thể tác dụng điều chỉnh số lipid tốt Tuy nhiên mức giảm số lại thấp so với thuốc đối chứng atorvastatin 100 mg/kg (TG: ↓14,3%; TC: ↓27,2%; non-HDL-C: ↓18,9%) Giải thích cho tác dụng hạ lipid máu cao chiết từ chè vằng: nghiên cứu từ năm 1984 cho thấy chè vằng có terpenoid, glycosid đắng, flavonoid, syringin Nhiều hợp chất có dược tính tốt biết công nhận betulin, axit betulinic, 3β-acetyl-oleanoic, lupeol, β-sitosterol, rutin, astragalin, isoquercetrin, nicotiflorin, verbascosid, isoverbascosid, isooleoverbascosid, apiosylverbascosid, 6'-O-menthiafoloylverbascosid, Daucosterol, Dotriacontanol [7, 43] Trong số thành phần chứng minh có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu kể đến là: Betulin: Các protein liên kết yếu tố điều hòa sterol (SREBPs) yếu tố phiên mã kích hoạt biểu gen liên quan đến sinh tổng hợp cholesterol, axit béo chất béo trung tính Nghiên cứu Jing-Jie Tang (2011) ức chế SREBP betulin làm giảm sinh tổng hợp cholesterol axit béo giảm thúc đẩy suy thối HMG-CoA reductase Vì betulin coi hợp chất hàng đầu để phát triển loại thuốc điều trị chứng tăng lipid máu [47] Lupeol: Điều trị lupeol liều 50 mg/kg/ngày mơ hình chuột cống ăn cholesterol ngoại sinh 15 ngày giảm đáng kể mức lipid với mức giảm TC TG 26,7% 28,7% so với lô mô hình Nhóm điều trị lupeol cho thấy tiết cholesterol phân axit mật mức cholesterol trở lại bình thường [46] Rutin: Một nghiên cứu “tác dụng rutin mô hình chuột tăng cholesterol máu” (2009) Ziaee cộng cho thấy chế độ ăn giàu cholesterol kết hợp với 10 mg/kg rutin làm giảm 21,1% TC 48,8% LDLC [54] 34 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận: Cao chiết chè vằng mức liều 18 mg/kg/ngày 54 mg/kg/ngày chuột cống trắng 90 ngày cho kết an toàn Cao chiết chè vằng mức liều 36 mg/kg/ngày 108 mg/kg/ngày chuột nhắt trắng gây mơ hình RLLPM nội sinh P-407 ngày cho kết giảm đáng kể số lipid có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) máu TC, TG, non-HDL-C Có thể tiến hành nghiên cứu lâm sàng Đề xuất: Cần thêm nghiên cứu in vitro để đánh giá tác dụng hạ lipid máu thành phần rutin, lupeol betulin có cao chiết chè vằng 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Đơng Thị Hồi An (2005), Lipid, apoprotein, lipoprotein huyết tương, Hóa sinh lâm sàng, Nhà xuất Y học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh Bộ mơn hố sinh Trường Đại học Y Hà Nơi (2001), Chuyển hố lipid, Hoá sinh, Nhà xuất Y học Bộ Y tế (1996), Quy chế đánh giá tính an tồn hiệu lực thuốc cổ truyền Bộ Y tế (2004), Danh mục thuốc quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y tế (2014), Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh nội tiết-chuyển hóa Bộ Y Tế (2015), Quyết định 141/QĐ-K2ĐT 2015 Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc từ Đông Y, thuốc từ dược liệu PGS.TS Ngô Kim Chi (2017), "Nghiên cứu hiệu chiết thử nghiệm hoạt tính sinh học chè vằng La Văng Cam Lộ Quảng Trị", Viện Hàn Lâm Khoa Học Và Công Nghệ Việt Nam TS Tạ Mạnh Cường (2010), Rối loạn lipid máu (tăng lipid máu) Đại học Y Hà Nội (2007), Sinh lý bệnh miễn dịch, Nhà xuất Y học, Hà Nội 10 Nguyễn Thị Hà (2007), Lipid máu rối loạn chuyển hóa lipid, Chun đề Sau đại học, Bộ mơn hóa sinh - trường Đại học Y Hà Nội 11 Nguyễn Thị Ninh Hải (1986), GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume - Oleaceae), Luận án Tiến sĩ Dược học 12 Hội Tim mạch học quốc gia Việt Nam (1998), Khuyến cáo số 06 - Xử trí rối loạn lipid máu 13 Hội Tim mạch học quốc gia Việt Nam (2008), "Khuyến cáo 2008 hội Tim mạch học Việt Nam chẩn đoán điều trị rối loạn lipid máu", Khuyến cáo 2008 bệnh lý tim mạch chuyển hóa, Nhà xuất Y học, Hà Nội, pp 94-99 14 Hội Tim mạch học quốc gia Việt Nam (2008), Xử trí rối loạn lipid máu, Khuyến cáo chẩn đốn điều trị rối loạn chuyển hóa lipid máu 15 Nguyễn Văn Hưng (2018), Giải phẫu bệnh học, Nhà xuất Y học, Hà Nội 16 Đỗ Quốc Hương (2016), Nghiên cứu độc tính hiệu viên nang Lipidan điều trị hội chứng rối loạn lipid máu, Luận án Tiến sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội 17 Nguyễn Thế Khánh Phạm Tử Dương (2001), Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội 18 Phạm Khuê (2000), Vữa xơ động mạch, Bệnh học tuổi già, Nhà xuất Y học, Hà Nội 19 Phạm Khuê, Phạm Gia Khải Nguyễn Lân Việt (2004), Xơ vữa động mạch, ed khoa, Bài giảng bệnh học nội, Nhà xuất Y học, Hà Nội 20 Đỗ Tất Lợi (2001), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội 21 PGS.TS Nguyễn Nghiêm Luật (2012), Hóa sinh, Sách đào tạo bác sĩ đa khoa, Nhà xuất Y học, Hà Nội 22 Phí Thị Ngọc (2001), Nghiên cứu tác dụng thuốc HHKV lên số số lipid máu thỏ chuột, Luận văn thạc sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 23 Đoàn Thị Nhu (2006), "Phương pháp nghiên cứu dược lý thuốc chống tăng lipid máu thuốc tác dụng vữa xơ động mạch", Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội, pp 131-138 24 Nguyễn Phương Thanh (2011), Nghiên cứu độc tính tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu Monacholes thực nghiệm, Luận văn Bác sĩ nội trú, Trường Đại học Y Hà Nội 25 Phương Thanh Mai (2013), Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu thuốc Chỉ thực đạo trệ hoàn thực nghiệm, Luận văn thạc sỹ y hoc Hà Nội ed Nội, Trường Đại học Y Hà, Hà Nội 26 Tạ Thu Thủy (2016), Đánh giá tác dụng điều trị hội chứng rối loạn liid máu cao lỏng đại an, Luận án Tiến sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội 27 Nguyễn Văn Tuấn Hoàng Thị Cúc (2022), "Nghiên cứu rối loạn lipid máu người cao tuổi tăng huyết áp", Tạp chí y học Việt Nam 508(1) 28 Phạm Thanh Tùng (2019), Nghiên cứu tính an toàn tác dụng viên nang cứng Vinatan điều trị hội chứng rối loạn lipid máu thực nghiệm lâm sàng, Luận án Tiến sĩ Y học, Học viện Y dược học Cổ truyền Việt Nam 29 Nguyễn Lân Việt (2008), Cập nhật vai trò Statin việc ngăn ngừa tiến triển xơ vữa động mạch, Tài liệu hội thảo khoa học, Viện tim mạch học Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG ANH 30 Bairaktari Eleni T, Seferiadis Konstantin I, and Elisaf Moses S (2005), "Evaluation of methods for the measurement of low-density lipoprotein cholesterol", Journal of cardiovascular pharmacology and therapeutics 10(1), pp 45-54 31 Dumortier G., et al (2006), "A review of poloxamer 407 pharmaceutical and pharmacological characteristics", Pharm Res 23(12), pp 2709-28 32 Expert Pannel on Detection Evaluation, and Treament of High Blood cholesterol in Adults (2001), "Executive Summary of The Third Report of The National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, And Treatment of High Blood Cholesterol In Adults (Adult Treatment Panel III)", Jama 285(19), pp 2486-97 33 Feingold K R (2000), "Introduction to Lipids and Lipoproteins", in Feingold, K R., et al., Editors, Endotext, MDText.com, Inc.Copyright 2000-2022, MDText.com, Inc., South Dartmouth (MA) 34 Garg A and Simha V (2007), "Update on dyslipidemia", J Clin Endocrinol Metab 92(5), pp 1581-9 35 Golomb B A and Evans M A (2008), "Statin adverse effects : a review of the literature and evidence for a mitochondrial mechanism", Am J Cardiovasc Drugs 8(6), pp 373-418 36 Johnston T P (2004), "The P-407-induced murine model of dosecontrolled hyperlipidemia and atherosclerosis: a review of findings to date", J Cardiovasc Pharmacol 43(4), pp 595-606 37 Johnston T P., Korolenko T A., and Sahebkar A (2017), "P-407induced Mouse Model of Dose-controlled Hyperlipidemia and Atherosclerosis: 25 Years Later", J Cardiovasc Pharmacol 70(5), pp 339-352 38 Johnston Thomas P and Palmer Warren K (1993), "Mechanism of poloxamer 407-induced hypertriglyceridemia in the rat", Biochemical pharmacology 46(6), pp 1037-1042 39 Leon C., et al (2006), "Acute P-407 administration to mice causes hypercholesterolemia by inducing cholesterolgenesis and downregulating low-density lipoprotein receptor expression", Pharm Res 23(7), pp 1597-607 40 Loginova V M., et al (2013), "Comparative characteristics of lipemia models induced by injections of Triton WR-1339 and poloxamer 407 in mice", Bull Exp Biol Med 155(2), pp 284-7 41 Millar J S., et al (2005), "Determining hepatic triglyceride production in mice: comparison of poloxamer 407 with Triton WR-1339", J Lipid Res 46(9), pp 2023-8 42 Detection National Cholesterol Education Program Expert Panel on and Adults Treatment of High Blood Cholesterol in (2002), Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on detection, evaluation, and treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel III), The Program 43 Huong N T., et al (2008), "A new phenylpropanoid glycoside from Jasminum subtriplinerve Blume", J Asian Nat Prod Res 10(11-12), pp 1035-1038 44 OECD (2001), Test Guideline for the Testing of Chemicals, Acute Oral Toxicity – Up and Down procedure 45 OECD (2018), Test no 408: repeated dose 90-day oral toxicity study in rodents, OECD Publishing 46 Sudhahar V., Ashokkumar S., and Varalakshmi P (2006), "Effect of lupeol and lupeol linoleate on lipemic hepatocellular aberrations in rats fed a high cholesterol diet", Mol Nutr Food Res 50(12), pp 1212-9 47 Tang J J., et al (2011), "Inhibition of SREBP by a small molecule, betulin, improves hyperlipidemia and insulin resistance and reduces atherosclerotic plaques", Cell Metab 13(1), pp 44-56 48 Virani Salim S (2011), "Non-HDL cholesterol as a metric of good quality of care: opportunities and challenges", Texas Heart Institute Journal 38(2), p 160 49 Wasan K M., et al (2003), "Poloxamer 407-mediated alterations in the activities of enzymes regulating lipid metabolism in rats", J Pharm Pharm Sci 6(2), pp 189-97 50 WHO (2000), General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine, World Health Organization, Geneva 51 WHO (2000), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine,, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 52 Wout Z G., et al (1992), "Poloxamer 407-mediated changes in plasma cholesterol and triglycerides following intraperitoneal injection to rats", J Parenter Sci Technol 46(6), pp 192-200 53 Zhang X., et al (2020), "Comparative Lipid-Lowering/Increasing Efficacy of Statins in Patients with Dyslipidemia, Cardiovascular Diseases, or Diabetes Mellitus: Systematic Review and Network MetaAnalyses of 50 Randomized Controlled Trials", Cardiovasc Ther 2020, p 3987065 54 Ziaee A., et al (2009), "Effects of rutin on lipid profile in hypercholesterolaemic rats", Basic Clin Pharmacol Toxicol 104(3), pp 253-8 ...  - Người thực hiện: NÔNG THỊ TUN ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ TÁC DỤNG TRÊN CÁC THÔNG SỐ LIPID MÁU CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) TRÊN THỰC NGHIỆM KHĨA... Oleaceae) thực nghiệm? ?? với hai mục tiêu sau: Đánh giá độc tính bán trường diễn cao chiết chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng thông số lipid máu cao. .. BSNT Phan Hồng Minh TS Mai Phương Thanh Hà Nội – 2022 LỜI CẢM ƠN Đề tài ? ?đánh giá tính an tồn tác dụng thông số lipid máu cao chiết từ chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae) thực nghiệm? ??