Xác định điều kiện thu nhận sinh khối Bacillus subtilis để tạo chế phẩm Synbiotic-Plus

Bài viết Xác định điều kiện thu nhận sinh khối Bacillus subtilis để tạo chế phẩm Synbiotic-Plus được nghiên cứu nhằm đánh giá ảnh hưởng của các yếu tố môi trường đến sự sinh trưởng, phát triển của chủng và xác định một số tính chất của chủng từ đó làm tiền đề cho lên men tạo chế phẩm Synbiotic-Plus

Nghiên cứu khoa học công nghệ Xác định điều kiện thu nhận sinh khối Bacillus subtilis để tạo chế phẩm Synbiotic-Plus Nguyễn Hà Trung, Nghiêm Ngọc Hoa, Nguyễn Lâm Anh*, Lê Huy Hồng, Phạm Kiên Cường Viện Cơng nghệ mới, Viện Khoa học Công nghệ quân * Email: nguyenlamanh1235@gmail.com Nhận bài: 29/8/2022; Hoàn thiện: 08/11/2022; Chấp nhận đăng: 28/11/2022; Xuất bản: 20/12/2022 DOI: https://doi.org/10.54939/1859-1043.j.mst.FEE.2022.253-259 TÓM TẮT Synbiotic th ph bảo ệ h đ t o thành b i h i thành ph n h nh hất (pr bioti ) n i inh (probioti ) Synbioti ó h i hu n ân hệ i inh ật đ ờng ruột Ở Việt N i hu n B i u ubti i đ ng đ dụng rộng rãi ản ph probioti b i hình thành bào tử ủ húng Bào tử ó thể nảy inh tr ng điều iện ỵ h đ ờng ruột ì trì đ qu n thể i hu n ó i ruột Mụ đ h ủ nghiên u nhằ đánh giá ảnh h ng ủ yếu tố ôi tr ờng đến inh tr ng phát triển ủ hủng định ột ố t nh hất ủ hủng từ tiền đề ho ên n t o hế ph Synbioti -Plus Kết định đ điều iện nuôi hủng i inh B i u ubti i : ôi tr ờng th h h p ho inh tr ng phát triển ủ hủng B ubti i DSM pH nhiệt độ 37 °C tố độ ắ 200 rp u ngày nuôi Hiệu uất hình thành bào tử 85 57% Chủng B ubti i thể t nh hất ủ hủng probioti nh ó inh nzyme ngo i bào ( u y prot ) háng hu n (đối ới E o i S on ) Từ khoá: Bacillus subtilis; Synbiotic; Probiotic; Prebiotic MỞ ĐẦU Synbiotic thực phẩm bảo vệ sức khỏe, chúng tạo thành hai thành phần ch t prebiotic men vi sinh probiotic Synbiotic c chức n ng lợi khuẩn, cân b ng hệ vi sinh vật đường ruột Trên thị trường sản phẩm bổ sung chủ yếu dạng lợi khuẩn probiotic Do đ , cần tích hợp ch t prebiotic men vi sinh probiotic để nâng cao hiệu sử dụng sản phẩm phù hợp với nhu cầu người tiêu dùng Ở Việt Nam, vi khuẩn Bacillus subtilis sử dụng rộng rãi sản phẩm probiotics Vi khuẩn B subtilis c quan quản lí thực phẩm thuốc Hoa Kỳ (FDA) ếp vào nhóm an tồn GRAS (Generally Regarded As Safe) Bacillus subtilis quan tâm khả n ng hình thành bào tử chúng Bào tử nảy mầm sinh trưởng điều kiện kỵ khí đường ruột, trì quần thể vi khuẩn c lợi ruột Chính vậy, cơng nghệ sản u t probiotic dạng bào tử hình thành nhiều công ty dược phẩm lớn áp dụng thành công Sanofi-Aventis, Pháp Probiotic sản u t dạng bào tử bền vững dải pH rộng, từ môi trường a it dày tới môi trường kiềm nhẹ ruột [5] Probiotic dạng bào tử Bacillus subtilis em probiotic hệ c ưu điểm vượt trội h n probiotic sử dụng tế bào sống phổ biến Mục đích nghiên cứu nh m đánh giá ảnh hưởng yếu tố môi trường đến sinh trưởng, phát triển chủng ác định số tính ch t chủng như: hoạt tính kháng khuẩn, khả n ng sinh enzyme ngoại bào, khả n ng hình thành bào tử, từ đ làm tiền đề cho lên men tạo chế phẩm Synbiotic-Plus VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu Chủng vi khuẩn Bacillus subtilis cung c p Viện Vi sinh vật Cơng nghệ sinh học, Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 12 - 2022 253 Hóa học – Sinh học – Môi trường nuôi môi trường dịch thể, c nồng độ ≥ 1010 cfu/ml, đạt yêu cầu sản u t chế phẩm vi sinh 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên u ảnh h ng ủ ột ố yếu tố ôi tr ờng đến inh tr ng ủ hủng probiotic Bacillus subtilis 2.2.1.1 Ảnh h ng ủ ôi tr ờng nuôi ên inh tr ng phát triển ủ hủng B ubti is Chủng vi khuẩn lựa chọn nuôi loại môi trường khác LB, DSM, NB, PCB Đây môi trường không chọn lọc giàu dinh dưỡng thường sử dụng nghiên cứu vi khuẩn Thành phần loại mơi trường thể bảng Bảng Thành ph n ôi tr ờng nuôi Thành phần LB DSM NB PCB Pepton (g) 10 10 Cao n m men g 2,5 Cao thịt Dextrose NaCl (g) 10 KCl (g) MgSO4.7H2O (g) 0,25 Ca(NO₃ )₂ 1M (ml) FeSO4 10mM (ml) 0,1 MnCl2 1M (ml) H2O (ml) 1000 1000 1000 1000 Các môi trường điều chỉnh pH 7; khử trùng 121°C, 20 phút Chủng B subtilis nuôi 37 °C 24 giờ, tỷ lệ giống 5% v/v , 200 rpm Sau thời gian nuôi c y, vi khuẩn ác định mật độ bẳng phư ng pháp đo quang bước s ng 600 nm 2.2.1.2 Ảnh h ng ủ tỷ ệ giống ên inh tr ng phát triển ủ hủng B ubti i Chủng hoạt h a b ng cách l y khuẩn lạc đĩa LB nuôi lỏng môi trường LB 37 ⁰ C, 200 rpm, qua đêm Sau đ , chủng c y theo tỷ lệ 1%, 2%, 3%, 4%, 5% v/v vào môi trường nuôi c y DSM nuôi 37 ⁰ C, 200 rpm Mật độ vi khuẩn theo tỷ lệ nuôi c y ác định b ng phư ng pháp đo quang bước s ng 600 nm 2.2.1.3 Ảnh h ng ủ nhiệt độ ên inh tr ng phát triển ủ hủng B ubti i Chủng hoạt h a b ng cách l y khuẩn lạc đĩa LB nuôi lỏng môi trường LB 37 ⁰ C, 200 rpm, qua đêm Bổ sung 5% giống vào môi trường nuôi c y DSM nuôi lắc 200 rpm dải nhiệt độ sau: 25, 30, 37, 40, 45 °C Mật độ vi khuẩn nuôi nhiệt độ khác ác định b ng phư ng pháp đo quang bước s ng 600 nm 2.2.1.4 Ảnh h ng ủ pH ên inh tr ng phát triển ủ B ubti i Chủng hoạt h a b ng cách l y khuẩn lạc đĩa LB nuôi lỏng môi trường LB 37 ⁰ C, 200 rpm, qua đêm Bổ sung 5% giống vào môi trường nuôi c y DSM điều chỉnh sẵn pH 5, 6, 7, 8, nuôi lắc 200 rpm, 37 °C Mật độ vi khuẩn nuôi pH khác ác định b ng phư ng pháp đo quang bước s ng 600 nm 2.2.1.5 Ảnh h ng ủ thời gi n nuôi ên inh tr ng phát triển ủ B ubti i Chủng hoạt h a b ng cách l y khuẩn lạc đĩa LB nuôi lỏng môi trường LB 37 ⁰ C, 200 rpm, qua đêm Bổ sung 5% giống vào môi trường nuôi c y DSM, pH 200 rpm, 37 °C Sau bốn thu dịch nuôi c y để ác định mật độ tế bào qua giá trị OD 600 nm 2.2.2 Lên n thu nhận inh hối hủng B ubti i quy ô t/ ẻ Từ điều kiện thích hợp trên, tiến hành nuôi c y dịch vi khuẩn B subtilis hệ thống 254 N H Trung, …, P K Cường, “Xác định điều kiện thu nhận … chế phẩm Synbiotic-Plus.” Nghiên cứu khoa học công nghệ lên men lít/mẻ Các thơng số c q trình lên men kiểm soát tốc độ khu y 200 vịng/phút, tốc độ sục khí lít/phút, pH, nhiệt độ ni c y, tỷ lệ giống, thích hợp từ nghiên cứu phía Sau ngày lên men tiến hành ly tâm tốc độ 8000 vòng/phút, 10 phút, nhiệt độ thường, thu sinh khối vi khuẩn B subtilis 2.2.3 Ph ng pháp định ho t t nh háng hu n Thực theo phư ng pháp mô tả Huynh 2016 c điều chỉnh sau [6]: Vi khuẩn gây bệnh nuôi môi trường LB, 37 °C 24 Vi khuẩn B subtilis hoạt h a môi trường LB ủ 37 °C 24 Tiến hành c y 50 μL huyền phù vi khuẩn gây bệnh lên đĩa thạch dùng que c y trải Sau đ , đục lỗ b m 10 μL dịch vi khuẩn B subtilis vào đĩa thạch trải vi khuẩn gây bệnh, đem ủ 37 °C 24 2.2.4 Ph ng pháp định inh nzy ngo i bào Thử nghiệm khả n ng sinh số loại enzyme như: protease, amylase, xenlullase C y Bacillus subtilis đĩa chứa mơi trường LB có ch t cảm ứng thích hợp Ủ 37°C 48 Đọc kết b ng thuốc thử Lugol (amylase), thuốc thử Congored 1% (cellulase), (NH₄ )₂ SO₄ bão hòa (protease) [8] 2.2.5 Xá định hình thành bào tử ủ hủng B i u ubti i Chủng Bacillus subtilis nuôi lỏng môi trường DSM 37 °C Sau ngày nuôi c y, dịch nuôi vi khuẩn lý nhiệt 80 °C, 10 phút; sau đ c y gạt môi trường LB đặc 37 °C Sau 24 h, đếm số lượng bào tử hình thành Dịch nuôi c y không lý nhiệt thực tư ng tự nh m ác định hiệu su t sinh bào tử chủng vi khuẩn 2.2.6 Ph ng pháp định ật độ i hu n Sinh khối pha loãng với nước c t khử trùng thành dãy nồng độ thập phân 10 -1, 10-2, -3 10 ,… Ở nồng độ 10-5, 10-6 trải 10 - 20 µL dịch lên đĩa thạch DSM, ủ 37 °C, qua đêm Đếm số khuẩn lạc đĩa c số lượng khuẩn lạc từ 30 - 300 L y giá trị trung bình đĩa c nồng độ pha loãng Số lượng tế bào ml g mẫu tính theo công thức [3] N = A x 1/K x 1/V Trong đ : N - Số lượng tế bào VSV ml 1g mẫu; A - Số khuẩn lạc trung bình nồng độ pha lỗng; K - Độ pha loãng mẫu; V - Lượng mẫu c y, ml 2.3 Thiết bị Tủ m nuôi c y vi khuẩn Memmert, máy lắc ổn nhiệt Thermolyme Mỹ, máy quang phổ Dynamica Thụy Sĩ, tủ c y vô trùng Laminar Pháp, tủ s y Memmert, nồi khử trùng Autoclave, máy ly tâm lạnh 1,5/2 ml Sigma, KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến sinh trưởng phát triển chủng B subtilis 3.1.1 Ảnh h ng ủ ôi tr ờng nuôi ên inh tr ng phát triển ủ hủng B ubti i Kết ảnh hưởng môi trường nuôi c y lên sinh trưởng chủng B subtilis sau 24 h thể bảng 2: Bảng Ảnh h ng ủ ôi tr ờng nuôi Môi trường LB DSM NB PCB OD 600nm 1,262 ± 0,05 1,257 ± 0,05 0,897 ± 0,05 0,873 ± 0,05 Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 12 - 2022 255 Hóa học – Sinh học – Môi trường Kết thể bảng cho th y, LB DSM cho phát triển B subtilis cao nh t Kết phù hợp với nhiều nghiên cứu tác giả trước đ Tuy nhiên, với mục tiêu thu bào tử vi khuẩn để sử dụng làm nguyên liệu tạo chế phẩm, lựa chọn môi trường DSM cho nuôi c y vi khuẩn B subtilis nghiên cứu 3.1.2 Ảnh h ng ủ tỷ ệ giống ên inh tr ng phát triển ủ hủng B ubti i Kết ảnh hưởng tỷ lệ giống lên sinh trưởng phát triển chủng B subtilis thể hình 1: Hình Ảnh h ng ủ tỷ ệ giống ên phát triển ủ B Subtilis Hình cho th y phát triển vi khuẩn tỷ lệ thuận với phần tr m giống ban đầu cho vào môi trường nuôi c y Tỷ lệ tiếp giống 5% cho mật độ tế bào chủng B subtilis cao nh t, tỷ lệ tiếp giống 1% cho mật độ tế bào th p nh t Ở tỷ lệ tiếp giống 2%, 3%, 4% không cho sai khác nhiều mật độ vi khuẩn Ở tỷ lệ tiếp giống, vi khuẩn phát triển nhanh theo pha log từ h đến 48 h đạt cực đại 50 h nuôi c y sau ngày nuôi c y Tiếp đ pha cân b ng, số vi khuẩn sinh tư ng đư ng với số vi khuẩn chết Sau 96 h nuôi c y, mật độ vi khuẩn giảm nhanh lúc ch t dinh dưỡng môi trường cạn kiệt, vi khuẩn sinh sản phẩm trao đổi ch t ảnh hưởng đến phát triển n Do đ , lựa chọn 5% giống tỷ lệ tiếp giống bổ sung vào môi trường nuôi c y cho thí nghiệm 3.1.3 Ảnh h ng ủ nhiệt độ ên inh tr ng phát triển ủ hủng B subtilis Hình Ảnh h 256 ng ủ nhiệt độ đến inh tr ng ủ B subtilis N H Trung, …, P K Cường, “Xác định điều kiện thu nhận … chế phẩm Synbiotic-Plus.” Nghiên cứu khoa học công nghệ Mật độ tế bào chủng B subtilis đạt giá trị cao nh t 37 °C, cao h n lần 2,7 lần so với mật độ tế bào 40 °C 45 °C (hình Chủng B subtilis sinh trưởng tốt khoảng nhiệt độ từ 35 - 40 °C phù hợp với thân nhiệt đa số vật nuôi lợi chọn làm chế phẩm probiotic 3.1.4 Ảnh h ng ủ pH ên inh tr ng phát triển ủ B ubti i Hình Ảnh h ng ủ pH đến inh tr ng ủ B ubti i Chủng B subtilis sinh trưởng tốt giá trị pH trung tính tới kiềm nhẹ tốt nh t pH (hình Kết phù hợp với khoảng giá trị pH thích hợp cho sinh trưởng chủng B subtilis nghiên cứu trước như: chủng B subtilis Natto thích hợp sinh trưởng pH 7,5 [1], chủng B subtilis SK09 thích hợp với pH 6,72 [4] 3.1.5 Ảnh h ng ủ thời gi n nuôi ên inh tr ng phát triển ủ B ubti i 2.5 1.5 0.5 0h 4h 6h 8h 24h 26h 32h 48h 50h 52h 56h 72h 74h 76h 80h 96h 100h104h Hình Ảnh h ng ủ thời gi n nuôi ên inh tr ng ủ B ubti i Biểu đồ hình thể đường cong sinh trưởng chủng Bacillus subtilis Chủng phát triển mạnh sau bốn nuôi c y, đạt cực đại sau 50 h nuôi c y ngày Khoảng thời gian từ 50 h đến 96 h nuôi c y, tốc độ sinh trưởng chủng đạt cân b ng sau 96 h nuôi, vi khuẩn tiến vào pha suy vong Lúc này, ch t dinh dưỡng môi trường cạn kiệt, vi khuẩn sinh ch t độc từ trình trao đổi ch t, tốc độ phát triển giảm hẳn 3.2 Lên men thu nhận sinh khối chủng B Subtilis quy mơ lít/mẻ Chủng Bacillus subtilis ni lỏng môi trường DSM 37 °C Sau ngày nuôi c y, dịch nuôi vi khuẩn lý nhiệt 80 °C, 10 phút; sau đ c y gạt môi trường DSM đặc 37 °C Sau 24 h, đếm số lượng bào tử hình thành Dịch nuôi c y không lý nhiệt thực tư ng tự nh m ác định hiệu su t sinh bào tử chủng vi khuẩn Kết ác định khả n ng sinh bào tử vi khuẩn thể bảng Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 12 - 2022 257 Hóa học – Sinh học – Môi trường Bảng Khả inh bào tử ủ hủng B ubti is Mẫu CFU/mL Hiệu su t hình thành bào tử % Khơng lý nhiệt 6,1 x 108 85,57 Xử lý nhiệt nhiệt 5,22 x 108 Bảng cho th y chủng Bacillus subtilis c khả n ng hình thành bào tử mơi trường sinh bào tử DSM với hiệu su t 85,57% 3.3 Xác định hoạt tính kháng khuẩn Hiệu sản phẩm probiotic đưa vào đường tiêu h a giúp gia t ng chuyển h a thức n, t ng khả n ng miễn dịch, ngồi cịn c tác dụng ức chế phát triển vi khuẩn gây bệnh, giúp cân b ng hệ vi sinh đường ruột, hạn chế bệnh đường tiêu h a Chủng vi khuẩn B subtilis khảo sát khả n ng đối kháng với vi khuẩn gây bệnh E coli, Salmonella sp b ng phư ng pháp đối kháng trực tiếp Kết hoạt tính kháng khuẩn chủng B subtilis trình bày hình ) Ho t t nh háng E o i (b) Ho t t nh háng Salmonella Hình Ho t t nh háng hu n ủ hủng B i u ubti i Kết hình cho th y B subtilis có khả n ng kháng khuẩn hai chủng vi khuẩn gây bệnh E coli Salmonella Tuy nhiên, chủng thể khả n ng kháng E coli tốt h n so với kháng Salmonella Kết khảo sát tính kháng khuẩn Jianhua (2009) cho th y, B subtilis LFB112 có khả n ng đối kháng đồng thời với nhóm vi khuẩn Gram dư ng Gram âm (E.coli, Salmonella spp., Staphylococcus spp Streptoccus spp) [7] 3.4 Xác định khả sinh enzyme ngoại bào B subtilis Các enzyme ngoại bào đ ng vai trò quan trọng việc hỗ trợ tiêu h a thức n, giúp thức n dễ h p thu Do đ , khả n ng sinh enzyme ngoại bào tiêu chí quan trọng chọn lọc chủng vi khuẩn làm probiotic a) b) c) Hình Khả inh nzy ngo i bào ủ B ubti i : ) Ho t t nh y ; b) Ho t t nh u ; ) Ho t t nh prot Kết từ hình cho th y, chủng B subtilis c khả n ng sinh amylase, protease celullase Theo nghiên cứu Ngô Tự Thành Bùi Thị Việt Hà 2009 236 chủng Bacillus phân lập từ mẫu đ t nước thải, c chủng T20 M27 thể đầy đủ hoạt tính phân hủy amylase, gelatine ch t béo sữa, chủng lại thể tính n ng phân hủy protein tinh bột [2] 258 N H Trung, …, P K Cường, “Xác định điều kiện thu nhận … chế phẩm Synbiotic-Plus.” Nghiên cứu khoa học công nghệ KẾT LUẬN - Đã ác định điều kiện nuôi c y chủng vi sinh Bacillus subtilis: mơi trường thích hợp cho sinh trưởng, phát triển chủng B subtilis DSM, pH 7, nhiệt độ 37 °C, tốc độ lắc 200 rpm sau ngày nuôi c y Hiệu su t hình thành bào tử 85,57% Các điều kiện nuôi c y sử dụng cho lên men thu sinh khối vi khuẩn, tạo chế phẩm - Chủng B subtilis thể tính ch t chủng probiotic c khả n ng sinh enzyme ngoại bào cellulase, amylase, protease , khả n ng kháng khuẩn E coli, Salmonella) Lời cảm ơn: Nhó tá giả ả n tài tr “Nghiên u t o hế ph Synbioti -P u ( h hống o y hó động ật th nghiệ ” ề inh ph ủ đề tài ấp Viện Công nghệ ới nă 2021 hất n i inh onoid) đánh giá ho t t nh TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đoàn Thị Ngọc Thanh, Phạm Nguyễn Kim Lài, Phạm Thị Thúy Ngoan “Đặ t nh Probioti t n huyết hối ủ hủng i hu n B i u ubti i N tto” Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Th 56 : 104 – 110, (2020) [2] Ngô Tự Thành, Bùi Thị Việt Hà, Vũ Minh Đức, Chu V n Mẫn “Nghiên u ho t t nh nzy ngo i bào ủ ột ố hủng B i u ới phân ập ng dụng húng ý n thải” Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 25: 101 – 106, (2009) [3] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm V n Ty “Một ố ph ng pháp nghiên u i inh ật” NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội, 27-35, (1989) [4] G Sreekumar1, Soundarajan Krishnan “Enhanced biomass production study on probiotic Bacillus subtilis SK09 by medium optimization using response surface methodology” African Journal of Biotechnology (45): 8078-8084, (2010) [5] Hoa T T., Duc, L H., Isticato R., Baccigalupi L., Ricca E., Van P H and Cutting S M “The fate and dissemination of Bacillus subtilis spores in a murine model”, Appl Environ Microbiol 67: 38193823, (2001) [6] Huynh, T H N and Nguyen, T H “Examining Some Probiotics Activities of Bacillus subtilis natto”, International Journal of Modern Engineering Research (5): 33 –37, (2016) [7] Jianhua Xie, Rijun Zhang, Changjiang Shang and Yaoqi Guo, “Isolation and characterization of a bacteriocin produced by an isolated Bacillus subtilis LFB112 that exhibits antimicrobial activity against domestic animal pathogens” African Journal of Biotechnology (20): 5611-5619, (2009) [8] Shimizu M “Purification and characterization of phytase from Bacillus subtilis(natto) N-77” Biosci Biotechnol Biochem 56 (8): 1266-1269, (1992) ABSTRACT Determining the conditions for obtaining Bacillus subtilis biomass to create Synbiotic-Plus Synbiotics are food supplements that protect the health, they are made up of two main ingredients, fiber (prebiotic) and probiotics (probiotic) Synbiotics have the function of beneficial bacteria, balancing the microbiome in the gut In Vietnam, Bacillus subtilis is widely used in probiotic production Bacillus subtilis is of interest because of its sporeforming ability Spores can germinate and grow under anaerobic conditions in the intestinal tract, thus maintaining a population of beneficial bacteria in the gut The purpose of this study is to evaluate the influence of medium factors on the growth and development of the strain and determine some properties of the strain, thereby making a premise for fermentation to produce Synbiotic-Plus The results determined the conditions for culturing Bacillus subtilis strains: the optimal media for the growth and development of B subtilis strain was DSM, pH 7, 37 °C, speed 200 rpm, days of incubation Spore formation efficiency was 85,57% The strain B subtilis exhibits the properties of the probiotic strain such as the ability to produce extracellular enzymes (cellulase, amylase, protease), antibacterial ability (E coli, Salmonella) Keywords: Bacillus subtilis; Synbiotic; Probiotic; Prebiotic Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 12 - 2022 259 ... Cường, ? ?Xác định điều kiện thu nhận … chế phẩm Synbiotic-Plus. ” Nghiên cứu khoa học công nghệ KẾT LUẬN - Đã ác định điều kiện nuôi c y chủng vi sinh Bacillus subtilis: mơi trường thích hợp cho sinh. .. inh tr ng phát triển ủ hủng B subtilis Hình Ảnh h 256 ng ủ nhiệt độ đến inh tr ng ủ B subtilis N H Trung, …, P K Cường, ? ?Xác định điều kiện thu nhận … chế phẩm Synbiotic-Plus. ” Nghiên cứu khoa... hành ni c y dịch vi khuẩn B subtilis hệ thống 254 N H Trung, …, P K Cường, ? ?Xác định điều kiện thu nhận … chế phẩm Synbiotic-Plus. ” Nghiên cứu khoa học cơng nghệ lên men lít/mẻ Các thơng số c