Comparative Digestive Physiology BÀI 1 THỰC NGHIỆM VỀ PROTEIN I CÁC PHẢN ỨNG MÀU 1 Phản ứng biure Trong mt kiềm, các chất chứa từ hai liên kết peptide trở lên sẽ tạo phức chất màu tím hồng với Cu++ (m[.]
BÀI 1: THỰC NGHIỆM VỀ PROTEIN I CÁC PHẢN ỨNG MÀU Phản ứng biure a Nguyên lý: Trong mt kiềm, chất chứa từ hai liên kết peptide trở lên tạo phức chất màu tím hồng với Cu++ (muối đồng) Cơ chế phản ứng: Protein tạo phức chất màu tím với đồng mt kiềm b Ứng dụng ◼ ◼ Phát protein Định lượng protein: Dự vào cường độ màu tím So màu: màu đậm, nhiều protein c Cách làm + ố 1: cho khoảng 0,1g ure Đun lửa đèn cồn đến ure nóng chảy; để nguội biure + ố 2: ml lòng trắng trứng + ố 3: ml dung dịch gelatin 1% + ố 4: khoảng ml sữa tươI Thêm vào ống ml NaOH 10%, 1-2 giọt CuSO4 1% Lắc đều, quan sát, so sánh giải thớch kết Phản ứng xantoprotein a Nguyên lý: Các protein có chứa aa mạch vòng như: Phe, Tyr, Trp, vv… td HNO3 đặc, bị nitơ húa thành màu vàng,nếu gặp môi trường kiềm mạnh thỡ dẫn xuất tạo thành muối có màu da cam Cơ chế phản ứng: b Tiến hành Lấy ống nghiệm - ống 1: cho1 ml dd lũng trắng trứng - ống 2: cho khoảng ml sữa tươi - ống 3: cho ml dd gelatin 1% Cho tiếp vào ống ml HNO3 đặc , đun đèn cồn, đến xuất màu vàng Sau để nguội, cho từ từ giọt NaOH 20% (khoảng 1-2 ml) xuất màu vàng da cam Nhận xét giải thích kết c Ứng dụng - Phát protein vật phẩm - Kiểm tra chất lượng protein II CÁC PHẢN ỨNG SA LẮNG PROTEIN Trong dd, protein trạng thái keo bền, nhờ yếu tố: - Sức đẩy tĩnh điện - Lớp vỏ thủy hóa Khi yếu tố đi, protein sa lắng c ứng dụng Kết tủa cách protein khơng bị biến tính Dùng phương pháp để chiết suất protein hoạt tính Sa lắng cồn a Nguyên lý - Protein bị kết tủa vẩn dung môi h/cơ : cồn, aceton, eter, Do protein bị lớp vỏ thủy hóa - Tủa dễ có thêm NaCl - Kết tủa cồn kết tủa thuận nghịch tiến hành nhiệt độ thấp (00 đến – 150C) tủa tách khỏi cồn cách nhanh chóng b Tiến hành - ống : cho ml cồn 96o - ống 2: cho ml cồn 96o, thêm 1-2 giọt NaCl bão hòa Cho vào ống ml dd lòng trắng trứng - ống 3: 1ml cồn 96o, 1ml dd gelatin 1% Nhận xét gi/thích kết c ứng dụng - Dùng cồn sát trùng - Dùng để tách chiết enzyme Sa lắng nhiệt độ cao a Nguyên lý - Protein bị đun nóng bị xáo trộn mặt cấu truc phân tử, lớp vỏ thủy hóa nên tính hịa tan bị đơng vón Hiện tượng xảy mạnh điểm đẳng điện - Nếu biến tính xảy pH khác (trong môi trường kiềm mạnh, acid mạnh), protein trạng thái tích điện nên khơng bị đơng vón mà dạng dung dịch b Tiến hành Lấy ống, cho vào ống ml dd lịng trắng trứng + ống 1: đun sơi, theo dõi kết tủa + ống 2: thêm giọt a acid 1% để tạo điểm đẳng điện, đun sôi + ống 3: thêm 0,5 ml a acid 10%, đun sôi + ống 4: thêm 0,5 ml NaOH 10%, đun sôi + ống 5: thêm 0,5 ml a.acid 10%, 3-4 giọt NaCl bão hịa, đun sơi Nhận xét giải thích kết c ứng dụng - Dùng nhiệt độ để hấp, sấy tiệt trùng…các dụng cụ Bài 2: THỰC NGHIỆM VỀ ENZYME Thủy phân tinh bột amylase a Nguyên lý Tinh bột polysaccharide,gồm nhiều đơn vị glucose nối với lk - 1,4 glycoside vµ -1,6 glycoside TB khơng có nhóm aldehyde tự , nên khơng cho phản ứng tromer dương tính Nước bọt có amylase, maltase thủy phân TB cho đường đơn glucose cho phản ứng tromer dương tính ... Phát protein vật phẩm - Kiểm tra chất lượng protein II CÁC PHẢN ỨNG SA LẮNG PROTEIN Trong dd, protein trạng thái keo bền, nhờ yếu tố: - Sức đẩy tĩnh điện - Lớp vỏ thủy hóa Khi yếu tố đi, protein. .. (muối đồng) Cơ chế phản ứng: Protein tạo phức chất màu tím với đồng mt kiềm b Ứng dụng ◼ ◼ Phát protein Định lượng protein: Dự vào cường độ màu tím So màu: màu đậm, nhiều protein c Cách làm + ố 1:... lắng Làm điện tích protein cách : + Đưa pH dd protein pH đẳng điện (pHi), đú đa số protein dạng lưỡng cực, khơng mang điện tích + Thêm NaCl, (NH4)2SO4…: ion trung hịa điện tích protein Làm lớp thủy