KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ ENZYME α-AMYLASE và α-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC DÂN GIAN ĐIỀU TRỊ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG

Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 Mai ị Hà, Văn Phạm Đăng Trí Nguyễn Hiếu Trung, 2014 Đánh giá thay đổi hệ thống canh tác sở tài nguyên nước mặt vùng đồng sông Cửu Long: nghiên cứu cụ thể điều kiện huyện Ngã Năm, tỉnh Sóc Trăng Tạp chí Khoa học - Đại học Cần 31: 90–98 Mainuddin, M., C.T Hoanh, K Jirayoot, A.S Halls, M Kirby, G Lacombe, and V Srinetr, 2010 Adaptation Options to Reduce the Vulnerability of Mekong Water Resources, Food Security and the Environment to Impacts of Development and Climate Change CSIRO Water a Heal Ctry Natl Res Flagsh V.P.D Tri and Trung, N.H, 2014 Possible Impacts of Seawater Intrusion and Strategies for Water Management in Coastal Areas in the Vietnamese Mekong Delta in the Context of Climate Changein Coastal Disasters and Climate Change in Vietnam (ND Thao, H Takagi, and M Esteban, Eds.) Elsevier Inc Sunada, K, 2009 Study on Asian River Basin, CREST Asian River Basins: Water Policy Study Team Trung, N.H., V.P.D Tri, and V.T.P Linh, 2012 Agro-ecological zones in the Vietnamese Mekong Delta: e present conditions and changes under threats of climate change e 4th International Conference on Vietnam Studies Vietnam Acad Soc Sci Collab with Natl Univ Hanoi Ha Noi, Vietnam Tendency of agricultural land - use change in fresh watering areas of coastal plain of Mekong delta Truong anh Tan, Tran i Le Hang Nguyen Xuan inh, Tran Van Trien Abstract e study was carried out to analyze the relations between irrigation management (surface water) and trends of land-use in agricultural production areas a ected by the irregular saltwater intrusion and to provide a basis for the planning of local land-use in water resources under gradually changing conditions Local o cer and farmer interviews and descriptive statistics were applied to determine the water management mechanisms for agricultural activities; identify the advantages and disadvantages in the irrigation water management and consider the impact of current water management to land-use orientation of farmers in the future e study results showed that there were a collaboration among many stakeholders in the irrigation water management; in which, cooperatives and farmers had the fundamental role to operate irrigation systems In addition, irrigation water management in place is one of the main factors determining the trends of land-use change in the future e farmers have not had tends of e cient land-use change in water management of the stakeholders However, some of farmers had tends of land-use change from rice to fruit due to increased salinization and degradation of irrigation system quality Key words: Saltwater intrusion, water management, land use change, large rice eld Ngày nhận bài: 15/12/2016 Người phản biện: PGS.TS Phạm Quang Hà Ngày phản biện: 19/12/2016 Ngày duyệt đăng: 23/12/2016 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ ENZYME α-AMYLASE α-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC DÂN GIAN ĐIỀU TRỊ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG Lê Quốc Duy1 TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát khả ức chế enzyme α-amylase α-glucosidase số thuốc dân gian điều trị bệnh đái tháo đường” thực nhằm mục tiêu tuyển chọn dược liệu trị đái tháo đường hiệu có nguồn gốc thiên nhiên Kết phân tích định tính cho thấy, cao ethanol từ mẫu có chứa hợp chất alkaloid, avonoid, tannin saponin Cao ethanol từ mẫu có khả ức chế enzyme α-amylase: Ổi (IC50 = 42,92 µg/ mL); Xoài (IC50 = 66,17 µg/mL), mãng cầu Ta (IC50 = 64,85 µg/mL), mãng cầu Xiêm (IC50 = 76,35 µg/mL) Bình Bát (IC50 = 88,93 µg/mL) Đồng thời, cao ethanol từ mẫu ức chế hoạt tính enzyme α-glucosidase: Bình bát (IC50 = 18,18 µg/mL), Xồi (IC50 = 33,18 µg/mL), mãng cầu Xiêm (IC50 = 45,49 µg/mL), mãng cầu Khoa Nông nghiệp - 76 ủy sản, Trường Đại học Trà Vinh Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 Ta (IC50 = 55,73 µg/mL) Ổi (IC50 = 97,47 µg/mL) Phân tích hiệu khử gốc tự cho thấy, cao ethanol từ mẫu có khả khử gốc tự DPPH: Bình bát (IC50 = 285,11 µg/mL), mãng cầu Ta (IC50 = 267,61 µg/mL), Ổi (IC50 = 244,96 µg/mL), Xồi (IC50 = 241,79 µg/mL) mãng cầu Xiêm (IC50 = 223,12 µg/mL) Từ khóa: α-amylase, α-glucosidase, DPPH, mãng cầu Xiêm, Ổi, Xồi, Bình bát mãng cầu Ta I ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường (ĐTĐ) bệnh rối loạn chuyển hóa carbohydrate hormone insulin tuyến tụy bị thiếu hay giảm tác động thể ĐTĐ biểu lượng glucose máu cao bình thường, kiểm sốt lượng glucose mục tiêu quan trọng để làm giảm nguy biến chứng sức khỏe lâu dài bệnh ĐTĐ Carbohydrate nguồn cung ứng lớn glucose thể Phân tử carbohydrate bị thủy phân thành oligosaccharide enzyme α-amylase (tụy tạng); ruột non, enzyme α-glucosidase thủy phân oligosaccharide thành glucose sau thẩm thấu vào máu Do đó, ức chế enzyme lượng glucose máu giảm, việc điều trị ĐTĐ dễ dàng ĐTĐ trực tiếp hay gián tiếp gây rối loạn suy thận, thiếu máu tim, bệnh thần kinh Hiện nay, ĐTĐ kiểm soát nhiều phương pháp khác sử dụng thuốc trì lượng glucose máu ổn định (Sulfonylurea), chất ức chế tiêu hóa hấp thu tinh bột (Glucobay); thuốc cảm ứng độ nhạy insulin Các thuốc điều trị ĐTĐ thường có giá thành cao nhiều tác dụng phụ béo phì, vàng da, suy đường huyết,… gây nhiều khó khăn q trình điều trị chăm sóc bệnh nhân Xu hướng giới Việt Nam nghiên cứu phát triển thuốc hạ đường huyết, có nguồn gốc thực vật sử dụng phổ biến dân gian, nhằm tìm thuốc hiệu không gây tác dụng phụ so với thuốc hóa dược cần thiết Đồng thời, tận dụng nguyên liệu sẵn có, rẻ tiền, sử dụng tiện lợi để người bệnh thầy thuốc có thêm lựa chọn Nhiều nghiên cứu nhà khoa học dược liệu có khả ức chế enzyme α-amylase α-glucosidase như: Bằng Lăng tím (Miura et al., 2012), Dâu tằm (Habeeb et al., 2012) II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Lá mãng cầu Ta, mãng cầu Xiêm, Bình bát, Ổi Xồi thu tỉnh Trà Vinh 2.2 Phương pháp nghiên cứu Phương pháp trích cao chiết ethanol từ mẫu lá: Các mẫu tươi xanh (thu mẫu non lá), bệnh sau thu từ nhà vườn mang phịng thí nghiệm rửa sạch, lau khô bỏ phần cuống trái Sau đó, mẫu cắt nhỏ thành phần sấy điều kiện nhiệt độ 500C, 72 Các mẫu sau sấy cho vào túi vải, buộc kỷ, thực ngâm dầm với ethanol 90%, tỷ lệ nguyên liệu dung môi 1:10 (w/v) Tiến hành ngâm dầm mẫu bình thủy tinh 10 lít, điều kiện nhiệt độ phòng, để tối thời gian ngâm 72 Sau đó, hỗn hợp lọc qua giấy lọc có đường kính 13 µm, thu dịch lọc bỏ phần bã Dịch lọc cô cạn máy cô quay chân không (370C) để loại bỏ dung môi thu cao ethanol mẫu Cao chiết ethanol mẫu trữ tủ lạnh nhiệt độ -20 0C sử dụng cho thí nghiệm sau 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ cao chiết ethanol từ mẫu đến khả ức chế enzyme α-amylase Phản ứng ức chế thủy phân tinh bột enzyme α-amylase thực theo phương pháp Đái ị Xuân Trang ctv (2012) có điều chỉnh sau: Cao ethanol pha loãng thành mức nồng độ: 20 - 100 (µg/mL) Enzyme α-amylase (from pig pancreas, Sigma) pha dung dịch đệm phosphate pH = nồng độ 0,5 U/ mL Tinh bột (1 mg/mL) 50 μL enzyme α-amylase 0,5 U/mL ủ với 100 μL cao chiết mức nồng độ khác 100 μL dung dịch đệm phosphate pH = 7, ủ nhiệt độ 37oC thời gian 10 phút Tiếp theo, cho vào hỗn hợp phản ứng 250 μL tinh bột (Starch from potato, Sigma) mg/mL (được hồ hóa (600C) nồng độ 1% trước thực phản ứng) ủ nhiệt độ 37oC 10 phút Sau đó, hỗn hợp thêm vào 100 μL HCl 1N để dừng phản ứng 300 μL thuốc thử Iodine 0,1N để nhận biết lượng tinh bột lại dựa phản ứng màu xanh đặc trưng phức hợp tinh bột-iodine Hỗn hợp đo quang phổ bước sóng λ = 660 nm (sử dụng cuvette thể tích 950 μL) để xác định lượng tinh bột lại sau phản ứng Song song, tiến hành đánh giá hiệu ức chế enzyme α-amylase với đối chứng dương Acarbose mức nồng độ tương ứng Phần trăm enzyme α-amylase bị ức chế (%): Dựa vào lượng tinh 77 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 bột ban đầu lượng tinh bột cịn lại sau phản ứng thơng qua giá trị đo độ hấp thu quang phổ Phần trăm enzyme α-amylase bị ức chế (%) = 100 – Hiệu suất phản ứng (%) Hiệu suất phản ứng (%) = (Ao – A1)/ Ao 100 Trong đó: Ao giá trị quang dung dịch đối chứng (lượng tinh bột ban đầu); A1 giá trị quang dung dịch sau phản ứng (lượng tinh bột lại) Tiến hành dựng đường chuẩn biểu diễn mối tương quan % enzyme bị ức chế nồng độ mẫu Dựa vào phương trình đường chuẩn xác định giá trị IC50 * IC50 cách xác định: IC50 giá trị dùng để đánh giá khả ức chế mạnh yếu mẫu khảo sát IC50 định nghĩa nồng độ (mg/mL) mẫu ức chế 50% gốc tự do, tế bào enzyme, mẫu có hoạt tính cao giá trị IC50 thấp Xác định IC50: Tiến hành khảo sát hoạt tính mẫu nhiều nồng độ khác Với mẫu có hoạt tính biến thiên tuyến tính với nồng độ cao chiết vẽ đường thẳng y = ax + b qua tất điểm (với y % ức chế x nồng độ) Với mẫu có hoạt tính khơng biến thiên tuyến tính với nồng độ, cách gần đúng, chọn hai nồng độ ức chế 50% tiến hành vẽ đường thẳng y = ax + b Ta thu phương trình y = ax + b với hệ số a, b biết Từ phương trình y = ax + b biết, thay y = 50% vào phương trình ta thu giá trị x, nồng độ ức chế 50% gốc tự (IC50) 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ cao chiết ethanol từ mẫu đến khả ức chế enzyme α-glucosidase Phản ứng ức chế thủy phân tinh bột enzyme α-glucosidase thực theo phương pháp Đái ị Xuân Trang ctv (2012) có điều chỉnh sau: Cao ethanol từ mẫu pha loãng thành mức nồng độ: 10, 25, 50, 75 100 (µg/mL) Enzyme α-glucosidase pha dung dịch đệm phosphate pH = thành nồng độ 0,2 U/mL 100 μL enzyme α-glucosidase ủ với 50 μL cao chiết mức nồng độ khác nhiệt độ 37oC thời gian 10 phút Tiếp theo, cho vào hỗn hợp phản ứng 50 μL pNPG nồng độ 4mM ủ nhiệt độ 37oC với thời gian 20 phút Sau cùng, phản ứng kết thúc việc bổ sung 1000 μL Na2CO3 0,2M Hoạt động ức chế enzyme α-glucosidase xác định cách đo quang phổ bước sóng 78 λ = 405 nm Song song, tiến hành đánh giá hiệu ức chế enzyme α-glucosidase với đối chứng dương Acarbose mức nồng độ tương ứng Phần trăm enzyme α-glucosidase bị ức chế (%) tính dựa vào lượng p-nitrophenol tạo thành từ pNPG phản ứng thông qua giá trị đo độ hấp thu quang phổ Phần trăm enzyme α-glucosidase bị ức chế (%) = (B – A)/B 100 Trong đó: A giá trị quang mẫu thật; B giá trị quang mẫu đối chứng 2.2.3 Đánh giá khả kháng oxy hóa cao chiết ethanol từ mẫu Phản ứng khử gốc tự cao chiết ethanol từ mẫu phương pháp DPPH thực theo phương pháp Shirwaikar et al (2006) có điều chỉnh sau: Cao chiết mẫu pha DMSO để 50 - 300 µg/mL DPPH pha ethanol để dung dịch gốc có nồng độ 0,2 mg/mL Phản ứng thực với 500 μL cao chiết nồng độ khác cho vào ống nghiệm, sau thêm vào ống nghiệm 500 μL DPPH lắc Các ống nghiệm giữ ổn định tối, nhiệt độ phòng thời gian 30 phút, sau tiến hành đo độ hấp thu quang phổ bước sóng λ = 517 nm Vitamin C thực tương tự cao chiết, với mức nồng độ - 70 (μg/mL) 2.3 Xử lý số liệu Số liệu xử lý phần mềm Excel, thống kê phần mềm Statgraphics Centurion 16.0; kiểm định khác biệt nghiệm thức theo phép thử LSD Duncan III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ cao chiết ethanol từ mẫu đến khả ức chế enzyme α-amylase Trong thể, enzyme α-amylase có vai trị thủy phân liên kết α-1,4-glucoside tinh bột, glycogen polysaccharide khác tạo thành glucose maltose Enzyme α-amylase xúc tác thủy phân tinh bột tạo nhiều glucose, làm tăng lượng glucose máu dẫn đến nguy dễ mắc bệnh ĐTĐ Do đó, ức chế α-amylase xem chế để làm giảm glucose máu hạn chế nguy mắc bệnh ĐTĐ Các chất ức chế (Acarbose, Tannin) có tác động mạnh đến khả hoạt động α-amylase cách kìm hãm theo hướng cạnh tranh hay phi cạnh tranh, kết làm ảnh hưởng đến liên kết trung tâm hoạt động Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 enzyme với chất Vì vậy, Acarbose sử dụng nghiệm thức đối chứng nghiên cứu ức chế α-amylase Khi tăng nồng độ Acarbose từ 20-100 (µg/mL), phần trăm α-amylase bị ức chế tăng tuyến tính với nồng độ Acarbose khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê mức 5% Cụ thể, nồng độ Acarbose 100 µg/mL, khả ức chế α-amylase đạt 53,03%; 39,04% nồng độ Acarbose 80 µg/mL thấp 14,95% nồng độ Acarbose 20 µg/mL (Hình 1) Khả ức chế α-amylase tính dựa vào chênh lệch lượng tinh bột ban đầu lượng tinh bột lại sau phản ứng thủy phân để đánh giá mức độ thủy phân α-amylase Lượng tinh bột lại sau phản ứng nhiều khả ức chế α-amylase mạnh Kết quả, hiệu ức chế α-amylase tăng tuyến tính tăng nồng độ cao chiết có khác biệt mẫu nguyên liệu Cao chiết ethanol từ mẫu cho hiệu ức chế α-amylase cao mức nồng độ 100 µg/ml Cụ thể, hiệu ức chế α-amylase đạt 87,11% (lá Ổi); 78,13% (lá mãng cầu Ta); 67,73% (lá Xoài); 67,07% (lá mãng cầu Xiêm) 56,20% (lá Bình bát) Trong đó, hiệu ức chế α-amylase thấp nồng độ 20 µg/ml: Ổi đạt 34,88%; Xồi đạt 30,52%; Bình bát đạt 22,77%; mãng cầu Xiêm đạt 19,52% mãng cầu Ta đạt 15,49% (Hình 2, 3, 4, 6) Hình Hiệu ức chế enzyme α-amylase Acarbose Hình Hiệu ức chế enzyme α-amylase cao chiết từ mãng cầu Xiêm Hình Hiệu ức chế enzyme α-amylase cao chiết từ mãng cầu Ta Hình Hiệu ức chế enzyme α-amylase cao chiết từ Bình bát Hình Hiệu ức chế enzyme α-amylase cao chiết từ Xồi Hình Hiệu ức chế enzyme α-amylase cao chiết từ Ổi 79 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 Hiệu ức chế α-amylase cao chiết ethanol từ mẫu tốt so với Acarbose, thể qua giá trị IC50 mẫu cao chiết thấp so với Acarbose Cụ thể, hiệu khử α-amylase giảm dần theo thứ tự: Ổi (IC50 = 42,92 µg/mL) > Xồi (IC50 = 66,17 µg/mL) > mãng cầu Ta (IC50 = 78,13 µg/mL) > mãng cầu Xiêm (IC50 = 76,07 µg/mL) > Bình bát (IC50 = 56,20 µg/mL) > Acarbose (IC50 = 98,83 µg/mL) Kết cho thấy, mẫu cao chiết có hoạt tính ức chế α-amylase hiệu so với Acarbose, đặc biệt cao chiết từ Ổi có hiệu gấp 2,3 lần so với đối chứng Mặc dù, cao chiết lẫn nhiều tạp chất, chưa tinh hiệu ức chế cao Acarbose - loại thuốc thương mại tinh Điều cho thấy, tiềm mẫu nguyên liệu điều trị ĐTĐ thơng qua hoạt tính ức chế α-amylase Enzyme α-amylase enzyme thực bước trình thủy phân tinh bột, việc làm ức chế enzyme dẫn tới loạt enzyme biến dưỡng carbohydrate hoạt động sau đình trệ, hạn chế tạo thành glucose sau bữa ăn, giúp người bệnh ĐTĐ ổn định đường huyết 3.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ cao chiết ethanol từ mẫu đến khả ức chế enzyme α-glucosidase Enzyme α-glucosidase ruột non người có vai trị thủy phân liên kết α-1,4 oligosaccharide thành glucose sau hấp thu qua niêm mạc ruột non thẩm thấu vào máu Bên cạnh đó, nồng độ glucose máu cao biểu bệnh ĐTĐ, đó, ức chế α-glucosidase điều khiển lượng đường huyết máu, góp phần điều trị hiệu ĐTĐ Acarbose biết đến chất ức chế α-glucosidase sử dụng phổ biến cho bệnh nhân ĐTĐ type Acarbose sử dụng đối chứng dương nghiên cứu khả ức chế α-glucosidase cao chiết thực vật Hoạt tính ức chế α-glucosidase tăng dần 14,11; 22,03; 28,23; 34,86; 44,58 53,63 (%) khác biệt ý nghĩa thống kê mức 5% mức nồng độ, tương ứng với gia tăng nồng độ Acarbose 40 - 140 (µg/mL) (Hình 7) 80 Khi tăng nồng độ cao chiết ethanol mẫu lá, hiệu ức chế α-glucosidase tăng tuyến tính có khác biệt mẫu nguyên liệu Cao chiết ethanol từ mẫu cho hiệu ức chế α-glucosidase cao mức nồng độ 100 µg/ml Cụ thể, hiệu ức chế enzyme đạt 78,48% (lá Bình bát); 71,41% (lá mãng cầu Ta); 70,45% (lá Xoài); 64,23% (lá mãng cầu Xiêm) 52,72% (lá Ổi) Trong đó, hiệu ức chế α-glucosidase thấp mức nồng độ 20 µg/ml: Bình bát đạt 45,71%; Xồi đạt 44,32%; mãng cầu Xiêm đạt 38,12%; mãng cầu Ta đạt 23,87% Ổi đạt 9,66% (Hình 8, 9, 10, 11 12) Hiệu ức chế α-glucosidase cao chiết ethanol từ mẫu tốt so với Acarbose, thể qua giá trị IC50 mẫu cao chiết thấp so với Acarbose Cụ thể, hiệu ức chế α-glucosidase giảm dần theo thứ tự: Bình bát (IC50 = 18,18 µg/mL) > Xồi (IC50 = 33,18 µg/mL) > mãng cầu Xiêm (IC50 = 45,49 µg/mL) > mãng cầu Ta (IC50 = 55,73 µg/mL) > Ổi (IC50 = 97,47 µg/mL) > Acarbose (IC50 = 134,02 µg/mL) Kết phân tích cho thấy, mẫu cao chiết có hoạt tính ức chế α-glucosidase hiệu so với Acarbose, đặc biệt cao chiết từ Bình bát có hiệu gấp 7,37 lần so với đối chứng Mặc dù, cao chiết ethanol lẫn nhiều tạp chất, chưa tinh hiệu ức chế cao chiết cao Acarbose – loại thuốc thương mại tinh Điều cho thấy rằng, tiềm mẫu nguyên liệu điều trị đái tháo đường thơng qua hoạt tính ức chế α-glucosidase Khả ức chế α-glucosidase Acarbose không mạnh cấu trúc hóa học Acarbose Acarbose có cấu trúc tương tự tetrasaccharide, ức chế α-glucosidase theo kiểu chất kìm hãm cạnh tranh Tuy nhiên, tiểu đơn vị xúc tác α-glucosidase, Acarbose liên kết với tiểu đơn vị xúc tác liên kết yếu với tiểu đơn vị lại Tác dụng ức chế α-glucosidase Acarbose tùy thuộc vào nguồn enzyme, Acarbose ức chế mạnh α-glucosidase ly trích từ ruột non động vật có vú, ức chế thấp α-glucosidase nấm men (Sim et al., 2008) Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 Hình Hiệu ức chế α-glucosidase Acarbose Hình Hiệu ức chế α-glucosidase cao chiết từ mãng cầu Xiêm từ Xồi Hình Hiệu ức chế α-glucosidase cao chiết từ mãng cầu Ta Hình 10 Hiệu ức chế α- glucosidase cao chiết từ Bình bát Hình 11 Hiệu ức chế α-glucosidase cao chiết từ Xồi Hình 12 Hiệu ức chế α-glucosidase cao chiết từ Ổi 3.3 Đánh giá khả kháng oxy hóa cao chiết ethanol từ mẫu Gốc tự ngun tử có electron chưa ghép cặp vỏ có khả tồn độc lập Gốc tự sản xuất trình trao đổi chất bình thường thể, stress sinh lý nguyên nhân gây nhiều bệnh ung thư, bệnh tim mạch, bệnh Alzheimer, Parkinson, xơ vữa động mạch Vitamin C chất có hoạt tính mạnh gốc tự sử dụng làm chất chuẩn nhiều tài liệu tham khảo Hiệu ức chế gốc tự DPPH tăng gia tăng nồng độ vitamin C khác biệt có ý nghĩa mức độ 5% Hiệu khử gốc tự vitamin C đạt cao nồng độ 70 µg/ml, đạt 88,98%; nồng độ 60 µg/ml với hiệu suất 81,05% nồng độ 10 µg/ml, với hiệu suất 6,02% (Hình 13) 81 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 Hình 13 Hiệu khử gốc tự DPPH Vitamin C Hình 14 Hiệu khử gốc tự DPPH cao chiết từ mãng cầu Xiêm Hình 15 Hiệu khử gốc tự DPPH cao chiết xuất từ mãng cầu Ta Hình 16 Hiệu khử gốc tự DPPH cao chiết xuất từ Bình bát Hình 17 Hiệu khử gốc tự DPPH cao chiết xuất từ Xồi Hình 18 Hiệu khử gốc tự DPPH cao chiết xuất từ Ổi Cao chiết từ mẫu nồng độ khác nhau, khả loại bỏ gốc tự DPPH khác Cao chiết có hiệu khử gốc tự DPPH cao nồng độ cao chiết 300 µg/mL: Lá mãng cầu Xiêm (63,24%), Ổi (57,91%), Xồi (57,70%), Bình bát (54,15%) thấp mãng cầu Ta (52,37%) Trong đó, nồng độ cao chiết 50 µg/ mL hiệu gốc tự DPPH đạt thấp nhất: Xoài (15,81%), mãng cầu Xiêm (15,81%), mãng cầu Ta (13,04%), Ổi (11,66%) Bình bát (8,89%) (Hình 14, 15, 16, 17 18) Giá trị IC50 cao chiết ethanol mẫu cao so với đối chứng dương vitamin C giảm dần theo thứ tự Bình bát (IC50 = 285,11 µg/mL) > mãng cầu Ta (IC50 = 267,61 µg/mL)> Ổi (IC50 = 244,96 µg/mL) > Xồi (IC50 = 241,79 µg/mL) > mãng cầu Xiêm (IC50 = 223,12 µg/mL) > Viatmin C (IC50 = 39,63 µg/mL) Giá trị IC50 cao chiết gấp 7,19; 6,75; 6,18; 6,10 5,63 lần so với Vitamin C Điều cho thấy rằng, hiệu khử gốc tự cao chiết ethanol từ mẫu thấp so với vitamin C So với vitamin C chất chống oxy hóa cao sản phẩm thương mại nên có độ tinh cao nên cho hiệu ức chế gốc tự cao cao chiết từ mẫu 82 Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 IV KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu mãng cầu ta, mãng cầu xiêm, bình bát, xồi ổi có hoạt tính ức chế hoạt động enzyme α-amylase, α-glucosidae có khả kháng oxy hóa Tuy nhiên, cần thực nhiều nghiên cứu hoạt tính sinh học loại thử độc tính, thử nghiệm chuột, kiểm tra lâm sàng,… để đưa vào bào chế thuốc ứng dụng thực tiễn LỜI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn Quý thầy, cô, anh, chị, bạn Phịng í nghiệm Sinh Hóa, Bộ mơn Sinh Lý - Sinh Hóa, Khoa Nơng nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần hỗ trợ trang thiết bị kinh nghiệm giúp tác giả hoàn thiện nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Đái ị Xuân Trang, Phạm ị Lan Anh, Trần anh Mến Bùi Tấn Anh, 2012 “Khảo sát khả điều trị bệnh tiểu đường cao chiết ổi (Psidium guajava L.)”. Tạp chí Khoa học, 2012: 22b 163-171 Habeeb, M.N., R.N Prakash and S.M Fahmi, 2012 “Inhibition of α-glucosidase and α-amylase by Morus alba Linn leaf extracts” Journal of Pharmacy Research, 5(1): 285-289 Miura T., S Takagi and T Ishida, 2012 “Management of diabetes and its complications with Banaba (Lagerstroemia speciosa  L.) and corosolic acid” Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2012, Article ID 871495, pages Shirwaikar, A., K Rajendran and I.S Punithaa, 2006 “In vivo antioxidant studies on the benzyl tetra isoquinoline alkaloid berberine” Biol Pharm Bull, 29: 1906-1910 Sim, L., R Quezada-Calvillo, E.E Sterchi, B.L Nichols and D.R Rose, 2008 “Human intestinal maltaseglucoamylase: crystal structure of the N-terminal catalytic subunit and basis of inhibition and substrate speci city” J Mol Biol, 375(3): 782-792 Evaluation of inhibitory ability of herbs on α-amylase and α-glucosidase for diabetes treatment Le Quoc Duy Abstract e project “Evaluation of inhibitory ability of herbs on α-amylase and α-glucosidase for diabetes treatment” was implemented to nd out a naturally medicinal herb for diabetes treatment e qualitative analysis showed that ethanol extracts of leaf contained alkaloids, avonoids, tannins and saponins Ethanol extracts of leaf exhibited α-amylase activity: Psidium guajava leaf (IC50 = 42.94 µg/mL); Mangifera Indica leaf (IC50 = 61.17 µg/mL), Annona squamosa leaf (IC50 = 64.85 µg/mL), Annona muricata leaf (IC50 = 76.25 µg/mL) and Annona reticulata leaf (IC50 = 88.93 µg/mL) Meanwhile, ethanol extracts from leaf also exhibited α-glucosidase activity: Annona reticulata leaf (IC50 = 18.18 µg/mL), Mangifera indica leaf (IC50 = 33.18 µg/mL), Annona muricata leaf (IC50 = 45.49µg/ mL), Annona squamosa leaf (IC50 = 55.73 µg/mL) and Psidium guajava leaf (IC50 = 97.47 µg/mL) e antioxidant activity analysis showed that ethanol extracts from leaf could reduce free radicals DPPH: Annona reticulata leaf (IC50 = 285.11 µg/mL), Annona squamosa leaf (IC50 = 267.61 µg/mL), Psidium guajava leaf (IC50 = 244.96 µg/mL), Mangifera indica leaf (IC50 = 241.79 µg/mL) and Annona muricata leaf (IC50 = 223.12 µg/mL) Key words: α-amylase, α-glucosidase, DPPH, Annona muricata, Annona squamosa, Annona reticulata, Psidium guajava, Mangifera indica Ngày nhận bài: 20/12/2016 Người phản biện: TS Hồ Tuấn Anh Ngày phản biện: 26/12/2017 Ngày duyệt đăng: 24/01/2017 83 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 1(74)/2017 NGHIÊN CỨU TẠO HẠT GIỐNG NHÂN TẠO LAN HẠC VỸ (Dendrobium aphyllum) Nguyễn ị Lài1, Phạm Hương Sơn1 TÓM TẮT Lan Hạc vỹ (Dendrobium aphyllum) loài lan rừng đẹp Việt Nam, có giá trị y học thương mại cao Hiện nay, loài lan đứng trước nguy tuyệt chủng nạn khai thác bừa bãi bn bán trái phép nước ngồi Phương pháp vi nhân giống gặp phải số khó khăn chi phí sản xuất cao, thời gian bảo quản ngắn, chiếm nhiều diện tích dễ tổn thương trình vận chuyển Sản xuất hạt giống nhân tạo coi giải pháp có hiệu việc nhân bảo quản loài lan Trong nghiên cứu, nguyên liệu dùng để tạo hạt nhân tạo protocorm-like body (PLBs) D aphyllum in vitro Kết cho thấy nồng độ 3% sodium alginate tiếp xúc với dung dịch CaCl2.2H2O 100 mM thời gian 30 phút phù hợp nhất, hạt chắc, trịn, có kích thước đồng Nội nhũ nhân tạo làm giàu môi trường MS + 2,0 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA + 20 g/l sucrose + 0,1% AC + 20 mg/l ABA + 3.000 mg/l carbendazim cho tỷ lệ hạt nhân tạo nảy mầm cao đạt cao bảo quản 4°C điều kiện tối Từ khóa: Lan rừng, hạt nhân tạo, carbendazim, bảo quản, nảy mầm I ĐẶT VẤN ĐỀ Lan Hạc vỹ (Dendrobium aphyllum) thuốc quý thuộc họ lan (Orchidaceae), lồi lan rừng Việt Nam có giá trị thẩm mỹ giá trị thương mại cao Lan Hạc vỹ thường phân bố số vùng Lâm Đồng, Khánh Hòa,… eo y học cổ truyền Trung Quốc, lan D aphyllum có tác dụng chữa bệnh như: trị ho, đau họng, bỏng lửa; toàn trị kinh phong trẻ em, ăn uống bị ngộ độc Do nhu cầu sử dụng làm hoa cảnh dược liệu tăng mạnh thời gian gần nên loài D aphyllum bị khai thác kiệt quệ Mặt khác, tỷ lệ nảy mầm từ hạt tự nhiên thấp vùng phân bố D aphyllum bị tàn phá nghiêm trọng nên loài lâm vào tình trạng gần tuyệt chủng đưa vào Sách Đỏ Việt Nam ( phần II- ực vật, 2007) cần phải bảo vệ Do cần có biện pháp kỹ thuật để nhân giống, bảo tồn phát triển lồi lan dược liệu có giá trị Việt Nam Hiện nay, giới Việt Nam, nhân giống lan thường thực kỹ thuật nuôi cấy mô cho hệ số nhân cao, số lượng giống lớn đồng Tuy nhiên, phương pháp vi nhân giống loài lan gặp phải số khó khăn chi phí sản xuất cao, thời gian bảo quản ngắn, chiếm nhiều diện tích dễ tổn thương trình vận chuyển Ngày nay, công nghệ sản xuất hạt giống nhân tạo mở triển vọng công nghệ sinh học thực vật Hạt nhân tạo không nhân nhanh với khối lượng lớn, giúp vận chuyển, bảo quản Viện Ứng dụng Công nghệ, Bộ Khoa học Cơng nghệ 84 dễ dàng mà ngồi hạt nhân tạo sử dụng để bảo tồn nguồn gen quý hiếm, nguồn gen có nguy tuyệt chủng Hiện nay, nghiên cứu tạo hạt giống nhân tạo thực số loài lan: P.amabilis (Dương Tấn Nhựt ctv., 2007), D nobile Lindl (Padmaja et al., 2013), D Shavin White (Bustam et al., 2013)… Nghiên cứu trình bày phương pháp tạo hạt giống nhân tạo loài lan (Dendrobium aphyllum) từ protocorm like bodies (PLBs), nhằm góp phần phục vụ cơng tác sản xuất giống bảo tồn nguồn gen qúy II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Các lan Dendrobium aphyllum thu thập từ Hòn Bà - Khánh Hòa trồng nhà lưới, lấy chồi khử trùng nuôi cấy môi trường Vacin and Went (VW) + 20g/l sucrose + 10% CW + 1,5 mg/l BA + 7,0g/l agar, pH 5,5 Sau tuần nuôi cấy PLB (PLBs) tạo thành, cắt PLB với kích thước 3-4 mm từ cụm PLB để làm nguyên liệu tạo hạt nhân tạo 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu - Địa điểm nghiên cứu: Trung tâm Sinh học ực nghiệm - Viện Ứng dụng Công nghệ - Bộ Khoa học Công nghệ - ời gian nghiên cứu: 6/2015-10/2016 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu Phần nội nhũ nhân tạo làm giàu 20g/l sucrose, 0,1% AC, BA, IBA, carbendazim, ABA,