Nghiên cứu sàng lọc và thu nhận aptamer đặc hiệu kháng sinh neomycin

LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan kết luận văn em thực hướng dẫn PGS.TS Lê Quang Huan, TS Lã Thị Huyền Các số liệu kết quà luận văn chưa cơng bố cơng trình khác Ký tên Đoàn Thị Mai Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội LỜI CẢM ON Trong trình làm thực tập sinh phịng Cơng nghệ Té hào Động vật _ Viện Công nghệ Sinh học _ Viện Hàn lãm Khoa học Công nghệ Việt Nam em giao đề tài: "Nghiên cứu sàng lọc thu nhận aptamer dặc hiệu kháng sinh neomycin ” Lời em xin giá lời cám ơn sâu sac tới PGS.TS Lê Quang Huấn, TS Lã Thị Huyền tạo điều kiện, nhiệt tình giúp đỡ em giúp em tiếp xúc, thêm hiếu biết hồn thành cơng việc thời gian qua Em xin cám ơn Ths Lê Thị Hạnh, Ths Lê Thị Minh Phúc, Ths Đặng Thị Minh Lụa hướng dẫn, chi báo tận tình, theo sát tạo điều kiện tốt cho em snot trình em học tập nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cán phịng Cơng nghệ Te bào Động vật nhiệt tình chi háo em giúp em hồn thành tot công việc giao Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Cuối em xin gửi lời cảm tới gia đình bạn bè động viên giúp em hồn thành tot cơng việc Hà Nội, ngày 19 tháng năm 20 ì MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CÁM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỪ VIẾT TẦT vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC BÁNG Error! Bookmark not defined MỞ ĐÀU CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN VÈ TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan kháng sinh Neomycin 1.1.1 Giới thiệu kháng sinh Neomycin 1.1.2 Kháng sinh chặn nụôi V A., .6 1.1.3 Dư lượng kháng sinh mẫu thực phàm 1.1.4 Các thông tin hàm lượng kháng sinh an toàn thực phẩm 1.1.5 Các phương pháp xác định dư lượng kháng sinh 10 1.2 Thư viện Viện Đại học Mớ Hà Nội Tổng quan aptamer .12 1.2.1 Giới thiệu ve aptamer 12 1.2.2 Phương pháp SELEX (Systematic Evolution of ligands by Exponential enrichment) sàng lọc aptamer 14 1.2.3 Tình hình nghiên cừu aptamer nước 15 CHƯƠNG 2: VẶT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúu 19 2.1 Vật liệu 19 2.1.1 Sinh phẩm 19 iii 2.1.2 Hóa chất: 19 2.1.3 Thiết bị máy móc 19 2.1.4 Môi trường dung dịch nuôi cấy .19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp PCR 20 2.2.2 Phương pháp SELEX sàng lọc aptamer 23 2.2.3 Phương pháp tinh sản phẩm PCR 27 2.2.4 Phương pháp điện di gel agarose 27 2.2.5 Phán ứng gan gen vào vector tách dòng .28 2.2.6 Phương pháp biến nạp plasmid vào tế bào E coli DH5a 30 2.2.7 Phương pháp tách DNA từ vi khuân E coli chủng DH5a 31 2.2.8 Phương pháp ELISA 2.2.9 Phương pháp giải trình tự nucleic acid tự động 35 Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUÁ THựC NGHIỆM 36 3.1 Kết sàng lọc aptamer liên kết kháng sinh Neomycin 36 3.1.1 Ket tạo thư viện .36 3.1.2 Kết sàng lọc aptamer liên kết với kháng sinh Neomycin 37 3.2 Kết tách dòng aptamer liên kết với kháng sinh Neomycin 43 3.2.1 Nhân trình tự aptamer ssDNA liên kết kháng sinh Neomycin 43 3.2.2 Phán ứng gắn sàn phẩm PCR vào vector tách dòng 44 3.2.3 Kết biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào vi khuan E coli 45 3.2.4 Kết quà tách plasmid từ vi khuẩn ecoli .47 iv 3.3 Kết quà xác định khả liên kết kháng sinh Neomycin aptamer 48 3.4 Xác định trình tự aptamer đặc hiệu kháng sinh Neomycin 51 KẾT LUẬN 53 KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHAO 55 Thư viện Viện Đại học Mớ Hà Nội V DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ATTP An toàn thực phẩm Bb Cặp base BSA Bovine Serum Albumin DMSO Dimethyl sulphat DNA Axit deoxyribonucleic DNase Enzym DNase EDTA Axit ethyenediaminetetraacetic E coli IPTG Vi khuân Escherichia coll Thi Isopropyl P-D-1 -thiogalactopyranosidc Kb Kilo base KN-KT Kháng nguyên- kháng thê LB Môi trường luria Berlani MPBS Milk Phosphate buffer saline PCR Phàn ứng chuỗi trùng hợp RT-PCR Phàn ứng chuỗi trùng hợp thời gian thực RNase Enzym RNase RNA Axit ribonucleic ssDNA DNA sợi đơn vi dsDNA DNA sợi đôi SDS Natri dodeyl sulphat TAE Tris acetate EDTA Taq polymerase Enzym polymerase chịu nhiệt TMB Tetramethylbenzidine TPBS Tween Phosphate buffer saline x-gal - Bromo - Clorua - indodyl -0 - D galactoside Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Sơ đồ chế tác động cùa kháng sinh Neomycin Hình 1.2: cấu trúc aptamer liên kết với kháng sinh Neomycin 12 Hình 1.3: Các ứng dụng cùa nucleic acid aptamer 13 Hình 1.4: Quy trình sàng lọc SELEX 14 Hình 2.1: Ba giai đoạn chu kì phàn ứng PCR 21 Hình 2.2: Sàn phẩm phàn ứng PCR tăng theo cấp số nhân 22 Hình 2.3: Sơ đồ cấu tạo cùa vector tách dòng pCR2.1 _TOPO 29 Hình 3.1: Kết phán ứng PCR làm giàu thư viện 36 Hình 3.2: Quá trình cắt dsDNA sử dụng enzym À exonuclease 37 Hình 3.3: Kết quà PCR với khn ssDNA sau vịng sàng lọc I với cặp mồi ApF2/ApR2-Ph „ „1 Till! viện Viên Đạihọc Mở Hà Nội Hình 3.4: Kêt PCR sau vòng III vòng IV 39 41 Hình 3.5: Kết q PCR sau vịng VI 41 Hình 3.6: Kết PCR vòng VII 42 Hình 3.7: Quy trình tách dịng aptamer ssDNA liên kết đặc hiệu kháng sinh Neomycin 43 Hình 3.8: Kết PCR sau vòng loại trừ 44 Hình 3.9: Kết biến nạp vector tái tổ hợp vào vikhuẩn E coli chúng DH5a 45 Hình 3.10: Kết quà PCR từ khuẩn lạc 47 Hình 3.11: Kết tách plasmid từ vi khuẩn E coli 47 Hình 3.12: Hình nồng độ cùa ssDNA tiến hành PCR với mồi ApFi/ApRi-Biotin hóa 49 Hình 3.13: Kết ELISA aptamer ssDNA với kháng sinh Neomycin 50 Hình 3.14: Biểu đồ khả gắn kết aptamer đặc hiệu Neomycin 50 vĩiĩ Hình 3.15: Ket xác định trình tự nucleotide dịng chứa aptamer số có gắn kết với Neomycine 51 Hình 3.16: cấu trúc khơng gian cúa aptamer (dịng số 6) có khả gắn kết với Neomycin 52 Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội ix DANH MỤC CÁC BẢNG Băng 1.1: Dư lưọng tối đa kháng sinh neomycin thực phẩm Bảng 2.1: Thành phan phán ứng PCR làm giàu thư viện 23 Bàng 2.2: Chu kỳ nhiệt cùa phàn ứng PCR làm giàu thư viện 23 Bâng 2.3: Thành phần cúa phản ứng tạo sợi đơn DNA 24 Bàng 2.4: Thành phần cúa phàn ứng gắn gen vào vector tách dòng 29 Bàng 3.1: Nồng độ ssDNA sau vòng sàng lọc 38 Băng 3.2: Tóm tắt điều kiện nghiêm ngặt tăng dan cho mồi vòngsàng lọc 40 Báng 3.3: Thành phan phíin ứng gan gcn vào vector tách dịng PCR 2.1 44 Bâng 3.4: Các thành phần cũa phàn ứng PCR từ khuẩn lạc 46 Bâng 3.5: Chu kỳ nhiệt phán ứng PCR từ khuấn lạc 46 Thư viện Viện Đại học Mớ Hà Nội Bảng 3.6: Nồng độ ssDNA tiến hẩnh PCR với mồi ApF2 -Biotin/ApR2 48 X 3.2 Kết tách dịng aptamer liên kết vói kháng sinh neomycin Đe tìm phân tử aptamer có khã liên kết tốt với Neomycin hỗn hợp aptamer ssDNA vừa thu trên, cần tiến hành tách dòng chọn dòng aptamer liên kết đặc hiệu với kháng sinh Neomycin Hình 3.7: Quy trình tách dịng aptamer ssDNA liên kết đặc hiệu kháng sinh Neomycin 3.2.1 Nhân bán trĩnh tự aptamer ssDNA liên kết kháng sinh Neomycin Dịch sàng lọc sau vòng loại trừ đưa vào quy trình tách dịng xác định trình tự Đầu tiên, cần tiến hành PCR để tăng số bàn cùa aptamer ssDNA gắn đặc hiệu với kháng sinh Neomycin Cách tiến hành sau: Lay 5pl dịch qua cột vịng sàng lọc đe làm khn cho phàn ứng PCR Cách tiến hành trước 43 sàn phẩm PCR 100 bp Hình 3.8: Kết quã PCR sau vòng loại trừ Đường chạy M: Thang DNA 100 bp; Đường chạy 1-2: Sán phẩm cùa phàn ứng PCR Sàn phấm PCR băng'rõ hét có kích thước 100 bp Sàn phầm dược sứ dụng đế tách dịng giải trình tự 3.2.2 Phản úng gan sán phẩm PCR vào vector tách dòng Sán phẩm PCR gắn vào vector tách dòng PCR 2.1 - TOPO với thành phần phàn ứng bàng 3.3 Bảng 3.3: Thành phần phản ứng gắn gen vào vector tách dịng PCR 2.1 Thành phần The tích (pl) Vector pCR2.1 - TOPO Đệm Sán phầm PCR Tống thề tích 44 Phán ứng thực 22°c Sau săn phẩm sê biến nạp vào tế bào khà biến ĐH5a bang phương pháp sốc nhiệt, sau thời gian ni hoạt hóa, dịch vi khuẩn cay trái mơi trường có kháng sinh kanamycin, X- gal, IPTG đế chọn dòng tái tồ hợp mang sán phẩm PCR 3.2.3 Ket biến nạp vector tái tố hợp vào tế bào vi khuẩn E coìi Kết biến nạp thể hình 3.9: Trên đĩa biến nạp xuất khuẩn lạc xanh, trắng xen kẽ nhau, khuẩn lạc trắng khuấn lạc có mang sàn phẩm PCR Hình 3.9: Kết biến nạp vector tái tố họp vào vi khuẩn E coli chủng DHSa Những tế bào mang vector tái tồ hợp mọc dược môi trường kháng sinh Tuy nhiên có khn lạc trang mọc khơng chứa đoạn gen ta quan tâm Vì vậy, ta tiến hành PCR trực tiếp từ khuấn lạc mọc riêng rẽ sử dụng cặp mồi ApFi/ApRj để chọn dòng tế bào mang plasmid tái tổ hợp 45 Bảng 3.4: Các thành phần phản ứng PCR từ khuấn lạc Thê tích (pl) Thành phần Nồng độ PCRMM 2X 6,25 Mồi xuôi 10 pmol/p 0,5 Mồi ngược 10 pmol/pl 0,5 DNA khuôn (TV gốc ) 10-100 ng/pl 0,25 h20 Tông thê tích 13 Bảng 3.5: Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR từ khuấn lạc Nhiệt độ ìir^iện VB1E ại l' 4ởĩĩà ? Ịội72 00 °C Thời phút 45 giây 45 giây 45 giây gian 25 chu kỳ Kết quà điện di kiểm tra dòng khuấn lạc sau: 46 phút 00 M Sàn phẩm PCR Sàn phấm PCR Hình 3.10: Kết PCR tù' khuẩn lạc Đường chạy M: Thang DNA 100 bp; Đường chạy 1-6: Sàn phẩm PCR với cặp mồi ApF2/ApR2 3.2.4 Ket tách DNA plasmid từ vi khuẩn E coli Sau kiểm tra sơ PCR từ khuấn lạc, dòng khuấn lạc chọn nuôi môi trường LB đế nhân lên với số lượng lớn tiến hành tách chiết .X .X Thư vicn Viên Đai hoc Mơ Tia NpL plasmid đê kiêm tra dong vector mang gen trước giải trình tự Quy trình tách chiết trình bày mục 2.2.8 Tiến hành điện di kiềm tra 3/6 plasmid tách từ dòng khuấn lạc thể hình 3.11 Hình 3.11: Kết tách plasmid từ vi khuẩn E coli Đường chạy 1-3: Sán phấm tách plasmid 47 Từ kết điện di cho thấy sản phẩm plasmid tái tố hợp khuấn lạc riêng biệt tương đối sạch, không bị lẫn RNA, dòng plasmid tái tổ hợp đú tiêu chuẩn đê làm mẫu giái trình tự Tuy nhiên, dòng plasmid thu được, đề chọn dòng chứa aptamer có khả gan kết với neomycin tốt nhất, tiến hành xác định khâ liên kết dòng aptamer thu với kháng sinh Neomycin thông qua phàn ứng ELISA 3.3 Kết qua xác định kha liên kết kháng sinh neomycin aptamer Sau tách riêng rẽ dòng aptamer, tiến hành PCR dòng aptamer sừ dụng cặp mồi ApFj_ Biontin/ApRi Nồng độ ssDNA sau PCR trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6: Nồng độ ssDNA tiến hành PCR với mồi ApF2_Biotin/ApR2 ssDNA Nồng độ (ng/ pl) Apamer 318.60 Thư viẹàP^Ỳệh^ại h ỌC Mơ Hà Nội13 Aptamer 310.85 Aptamer 333,81 Aptamer 313,73 Aptamer 418,60 48 Hình 3.12: Hình thể nồng độ ssDNA tiến hành PCR vói mồi ApF2_Biotin/ApR2 Mồi ApR2 giảm 100 lần để tạo ssDNA có 5’- Biotin bổ sung kháng cộng hợp Streptavidin _ Peroxidase tạo thành phức hệ Thu’ vĩện Viện Đại học Mớ Ha Nội Nồng độ ssDNA khác nên ta tiến hành pha loãng aptamer nong độ 274,13 ng/pl để aptamer có nồng độ phục vụ cho giai đoạn sau Các aptamer gắn với kháng sinh Neomycin _ BSA Và sử dụng phức kháng sinh Neomycin _ aptamer để chọn dịng aptamer có khã liên kết đặc hiệu với kháng sinh Neomycin qua phàn ứng ELISA trực tiếp Kết quà kiểm tra ELISA thề hình 3.13 3.14 49 PBS Hình 3.13: Kết quà ELISA aptamer ssDNA vói kháng sinh Neomycin Giếng 16: Hình ánh ELISA cùa kháng sinh Neomycin với aptamer I - Thư VIện.Vien ĐạiI npc Mo' HaNộ>1 Neomycin với aptamer 6; Giêng 7: PBS Tiến hành đo mẫu máy đo huỳnh quang bước sóng OD = 630nm OD = 450nm Hiệu OD450.6.10 thề hình 3.14: OD Hình 3.14: Biểu đồ thể khả gấn kết aptamer đặc hiệu Neomycin 50 Cột 1-6: Khả liên kết cùa Neomycin với aptamer - Neomycin với aptamer 6; Cột 7: PBS (đối chứng) Qua hình ta thấy aptamer dòng số liên kết với kháng sinh Neomycin mạnh Như vậy, chọn dịng aptamer có lực cao với kháng sinh đích 3.4 Xác định trình tự aptamer đặc hiệu kháng sinh neomycin Theo kết ELISA lựa chọn dịng số chứa aptamer có khả gắn kết với Neomycine cao để xác định trình tự nucleotide kết xác định trình tự nucleotide cùa dịng số trình bày hình 3.15 trình tự nucleotide cụ thề là: 5'-TCCGTCACACCTGCTCTCATAAGAGAGTCTGAGT- AGGATGAGACTAGACAAGGTCCCAGGGGGAAGCTTTGGTGTTGGCTCCC GTAT-3' Selected none ãôo6_Mi3F_:C F.> D .QHVAN'XC-04 TONCKET DE TAI-KC04 TONCKET-:C'.5 5.t_BASE_15J6íl5_N»o«_M13F_M 1M 1120 1130 1140 1150 1160 1170 1130 TTAT c CGT CA CA CCTGCT CT CA TAA GA GAGT CTGA GTA GGATGAGA CTAGA CAAGGT cc CA GGGGGAA G c Selected rcre •0 1160 1170 1180 1190 1200 1210 i: GOA TOAGA CTAOA CAAGGT cc CA GGGGOAA G CTT TOGTGTTGG CT cc CGTATAT c COT CA CA CCTG CT c " 14831.1608 1335 Hình 3.15: Kết xác định trình tự nucleotide dịng chứa aptamer số có khả gắn kết vói Neomycin Kết q phân lích cấu trúc khơng gian aptamer (dịng số 6) có khả gan kết với Neomycine bang phần mem Mfold (http://mfold.rna.albany.edu/7qs mfold/DNA-FoIding-Form) trình bày hình 3.16 • Structure AG = -5.08 kcal/mol (TnermợỢvnarriĩc Details) Different file formats PostScript Pdf, png Jpg Ct file Vienna RNAML RnaViz Ct Mac Ct RNAdraw XRNA ss 51 Hình 3.16: cấu trúc khơng gian aptamer (dịng số 6) có khả gắn kết với Neomycin Như phần nguyên liệu phương pháp trình bày thư viện mà chúng tơi sứ dụng có cấu trúc chung 5'- ATC CGT CAC ACC TGC TCT CAT ATG -N40AAG CTT TGG TGT TGG CTT CCơỲẰ^r nghĩá labao'jjAu vùng biến đối 40 vị trí vùng định (vùng để bẳt cặp primer trình sàng lọc nhân bàn PCR) Vậy sàng lọc lại nhận dược aptamer có vùng biến đồi chi gồm 52 nucleotide Đế giải thích vấn đề cho rang nguyên nhân trình tống hợp thư viện gốc sỗ có trình tự dài ngan khác hình thành, hay nói cách khác thư viện có chứa các trình tự mà vùng biến đối khơng phái 40 vị trí mà có the nhiều Đề làm rõ vấn đề can có nhúng nghiên cứu đánh giá biến thiên chiều dài cùa aptamer sau tồng hợp đánh giá chất lượng tinh sợi DNA sau tông hợp 52 KÉT LUẬN J Đã xây dựng quy trình sàng lọc aptamer đặc hiệu kháng sinh Neomycine theo quy trình SELEX với phân từ đích sừ dụng trình sàng lọc Neomycine ^Đã sàng lọc aptamer có khả gắn kết với Neomycine có kích thước 52 bp khơng kề vùng định có khà gắn kết với Neomycine dánh giá bang ELISA, cấu trúc không gian aptamer dược xác dinh phan mem Mfold Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội 53 KIẾN NGHỊ Nghiên cứu sử dụng aptamer có gắn kết với Neomycine sàng lọc để tạo KIT xác định nhanh Neomycine sữa loại thực phâm khác Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt PGS.TS Cao Văn Thu (2015), giáo trình Kháng Sinh Hà PGS.TS Mai Phirong Mai Giáo trình Dược lý học Hà Nội: NXB Y Học Tài liệu tiếng Anh Baugh, c, D Grate, C.Wilson (2000), “2.8 angstrom crystal structure of the malachite green Aptamer", J Mol Biol 301 : 117 _128 Bolger M, Coker R D DiNovi M, Gaylor D, Gelderblom w, OIsenM Speijers G J A, Fumonisins (2001) “ WHO / 1PCS safety evaluation of certain mycotoxin in food" WHO Food Additives Series 47 pp.557 - 680 Cheli F Pinotti L Campagnoli A, Fusi E Rebucci R Baldi A (2008), “Mycotoxin analysis, mycotoxin-producing fungi assays and mycotoxin toxicity bioassays in food mycotoxin monitoring and surveillance” Italian Journal of Food Seienee.20.4.14h’c Mỡ H;l Nội David JH & Szostak JW (2002), Isolation of high _ affinity GTP aptamer from partially sructured RNA libraries”, Proc Nalt Acad Sci USA 99 11616- 11621 Dieckmann T E Fujikawa, X Xhao, J Szostak J Feigon (1995), “ Structural Investigations of RNA and DNA aptamer in Solution”, Journal of Cellular Biochemistry : 56-56 Ellington AD & Szostak JW (1992), “ Selection In vitro of single_strand DNA molecules that fold into specific ligand _ binding structures”, Nature,355, 850-852 Grate D., & Wilson c (1999), “ Laser - mediated, site - specific inactivation of RNA trancripts” Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 96 11 (May 25), pp.6131 - 6136, 0027 - 8424 55 10 Kim M Um H J, Bang s, Lee s H, Oh s J Han J H„ Kim Y H (2009), “Arsenic removal from vietnamxsese groundwater using the arsenic _ binding DNA aptamer”, Environmental Science & Technology, 43,24, (Dec 15), pp.9335-9340, 0013 - 936X 11 Kyung - Mi Song, Seonghwan Lee and Changill Ban (2012), “ Aptamer and their biological applications” Sensors (Basel) 2012;12(l):612 - 631 12 Liu M, T Kagahara, H.Abe, Y.Ito (2009), “Direct In Vitro Selection of Hemin - Binding DNA Aptamer with Peroxidase Activity”, Bullentin of the Chemical Society of Japan 82 : 99 -104 13 Ng, EWM, DT Shima p., Calias, ET Cunningham, DR Guyer, AP Adamis (2006), “Pegaptanib, a targeted anti - VEGF Aptamer for ocular vascular disease” Nature Reviews Drug Discovery (2): 123 -132 14 Stead s L., Ashwin H Johnston B., Dallas A.; Kazakov s A., Tarbin J.A., Keely B J (2010), “An RNA - Aptamer - based assay for the detection and Tw V1?n Viện Đại Hoc MỜ Ha Nọĩ '' analysis of malachite green and leucomalatite green residues in fish tissue” Analytical Chemistry, 82, 7, (Apr 1), pp.2652 - 2660, 1520 -6882; 0003- 2700 15 Tuerk c & Gold L (1990), “ Systematic evolution of lignads by exponential enrichment: RNA lignads to bacteriophage T4 DNA polymerase”, Science, 249, 505-510 16 Xu J p„ Fang Y„ Mei J Jia L„ Qin A J Tang B.Z.(2010), “Label-free fluorescence detection of mercury (II) and glutathione based on Hg2+ - DNA complexes stimulating aggregation - induced emission of a tetraphenylethene derivative” The Analyst, 135,11 (Nov),pp.3002 -3007, 1364 -5528 0003 - 2654 17 F Pastor M M Soldevilla, H Villanueva et al “CD28 aptamers as powerful immune response modulators.” Molecular Therapy—Nucleic Acids, vol 2, article e98, 2013 View at Publisher • View at Google Scholar • View at Scopus 56 18 Y Wan, Y Kim, N Li et al., “Surface-immobilized aptamers for cancer cell isolation and microscopic cytology,” Cancer Research, vol 70, no 22, pp 9371-9380, 2010 View at Publisher • View at Google Scholar • View at Scopus 19 L H Lauridsen and R N Veedu, “Nucleic acid aptamers against biotoxins: a new paradigm toward the treatment and diagnostic approach,” Nucleic Acid Therapeutics, vol 22, no 6, pp 371-379 2012 View at Publisher • View at Google Scholar • View at Scopus 20 J G Bruno and J L Kiel “Use of magnetic beads in selection and detection of biotoxin aptamers by electrochemiluminescence and enzymatic methods,” BioTechniques, vol 32, no 1, pp 178-183, 2002 View at Google Scholar • View at Scopus 21 s Jeong, H K Lee, and M Y Kim, “Use of RNA aptamers for the modulation of cancer cell signaling,” Methods in Molecular Biology, vol 542, pp 363-377, 2009 View at Publisher • View at Google Scholar • View at Scopus Thư viện Vien Đại học Mớ Hà Nội 22 N Li, H H Nguyen, M' Byroin and A D Ellington, “Inhibition of cell proliferation by an anti-EGFR aptamer,” PLoS ONE, vol 6, no 6, Article ID e20299, 2011 View at Publisher • View at Google Scholar • View at Scopus 57 ... tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu sàng lọc thu nhận aptamer đặc hiệu kháng sinh Neomycin? ?? Mục tiêu cúa đề tài: J Xây dựng phương pháp sàng lọc aptamer có khả liên kết với kháng sinh neomycin. .. viện aptamer J Tách dòng chọn lọc dược từ tới aptamer có khâ liên kết đặc hiệu với kháng sinh neomycin Nội dung nghiên cứu; _ Thữ viẹn Viện Đại học Mớ Hà Nội Sàng lọc aptamer đặc hiệu với kháng. .. lọc aptamer liên kết đặc hiệu với kháng sinh neomycin theo phương pháp SELEX Quá trình sàng lọc gồm vòng sàng lọc với kháng sinh đích vịng sàng lọc loai trừ Cứ sau vòng sàng lọc dịch giải hấp sứ