LUẬN văn THẠC sĩ HAY đánh giá đa dạng di truyền và nhân giống trà hoa vàng tam đảo (camellia tamdaoensis ninh et hakoda) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro​

TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ====== NGUYỄN THỊ HƯỜNG ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ NHÂN GIỐNG TRÀ HOA VÀNG TAM ĐẢO (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ====== NGUYỄN THỊ HƯỜNG ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ NHÂN GIỐNG TRÀ HOA VÀNG TAM ĐẢO (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã ngành: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn: TS Nguyễn Văn Việt Hà Nội - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu hướng dẫn khoa học TS Nguyễn Văn Việt Các nội dung nghiên cứu, kết nghiên cứu đề tài trung thực chưa công bố hình thức Luận văn sử dụng thơng tin, số liệu từ báo nguồn tài liệu tác giả khác có trích dẫn thích nguồn gốc đầy đủ Nếu có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Học viên Nguyễn Thị Hường LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ii LỜI CÁM ƠN Tôi xin gửi lời cám ơn chân thành tới Phòng Đào tạo, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàm lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam trang bị kiến thức cho xuất q trình học tập Đặc biệt tơi xin gửi lời cám ơn chân thành tới TS Nguyễn Văn Việt, Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp Việt Nam tận tình bảo hướng dẫn tơi xuất q trình nghiên cứu đề tài hoàn chỉnh Luận văn Thạc sỹ Tôi xin cám ơn cán Bộ môn Công nghệ tế bào tồn thể cán Viện Cơng nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt đề tài nghiên cứu Xin cám ơn Ban quản lý Vườn quốc gia Tam Đảo cho phép thu thập mẫu vật làm nguồn vật liệu cho đề tài Cuối cùng, tơi xin chân thành cám ơn gia đình, bạn bè đông nghiệp sát cánh hỗ trợ động viên vật chất tinh thần xuất trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cám ơn ! Hà nội, ngày tháng năm Học viên Nguyễn Thị Hường LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC HÌNH .v DANH MỤC CÁC BẢNG vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1.Giới thiệu Trà hoa vàng Tam Đảo 1.1.1.Hệ thống phân loại phân bố 1.1.2.Đặc điểm sinh học Trà hoa vàng Tam Đảo .3 1.1.3.Giá trị sử dụng trà hoa vàng 1.2.Phân tích di truyền kỹ thật RAPD–PCR .6 1.2.1.Kỹ thuật thị phân tử cải tiến di truyền Camellia .6 1.2.2.Kỹ thật RAPD 1.2.3.Vị trí tầm quan trọng đa dạng di truyền .10 1.3.Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật .11 1.3.1.Khái niệm nuôi cấy in vitro 11 1.3.2.Cơ sở lý luận phương pháp nuôi cấy mô tế bào 12 1.3.3.Ý nghĩa nhân giống in vitro 12 1.3.4.Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy .14 1.4.Các cơng trình nghiên cứu chi Camellia 20 1.4.1.Các cơng trình nghiên cứu chi Camellia giới 20 1.4.2.Các cơng trình nghiên cứu chi Camellia Việt Nam .22 CHƯƠNG 2: MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1.Mục tiêu nghiên cứu 26 2.2.Đối tượng nghiên cứu 26 2.3.Địa điểm thời gian nghiên cứu 27 2.4.Nội dung nghiên cứu 27 2.4.1.Phân tích đa hình ADN lồi Trà hoa vàng Tam Đảo kỹ thuật RAPD 27 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com iv 2.4.2.Xây dựng quy trình nhân giống trà hoa vàng kỹ thuật nuôi cấy in vitro 27 2.5.Phương pháp nghiên cứu 28 2.5.1.Phân tích đa hình ADN lồi Trà hoa vàng Tam Đảo 28 2.5.2.Xây dựng quy trình nhân giống Trà hoa vàng Tam Đảo 31 2.6.Phương pháp đánh giá kết xử lý số liệu 33 2.6.1.Chỉ tiêu theo dõi 33 2.6.2.Phương pháp xử lý số liệu 34 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1.Kết phân tích đa hình ADN lồi Trà hoa vàng Tam đảo 35 3.1.1.Tách chiết ADN tổng số 35 3.1.2.Khuếch đại PCR với 15 mồi RAPD 36 3.1.3.Tương quan di truyền 10 hệ gen nghiên cứu 37 3.2.Kết nhân giống in vitro Trà hoa vàng 40 3.2.1.Kết khử trùng tạo mẫu tái sinhh chồi 40 3.2.2.Kết tạo cụm chồi nhân nhanh chồi .44 3.2.3.Nghiên cứu rễ tạo hoàn chỉnh 53 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 4.1 Kết luận .56 4.1.1 Kết phân tích đa hình ADN kỹ thuật RAPD 56 4.1.2 Kết nhân giống Trà hoa vàng Tam Đảo kỹ thuật nuôi cấy in vitro 56 4.2 Kiến nghị .57 TÀI LIỆU THAM KHẢO LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Trà hoa vàng Tam Đảo Hình 3.1 Kết điện di ADN tổng số gel agarose 1% .35 Hình 3.2 Điện di đồ sản phẩm khuyếch đại từ mồi CP1 mồi CP9 gel agarose 1,2% .37 Hình 3.3 Biểu đồ mô tả quan hệ di truyền 10 mẫu trà hoa vàng 39 Hình 3.4 Biểu đồ ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ tạo mẫu tái sinh chồi 41 Hình 3.5 Một số hình ảnh tái sinh trà hoa vàng từ phôi hạt 42 Hình 3.6 Hạt chè nảy mầm môi trường WPM 43 Hình 3.7 Chồi Trà hoa vàng Tam Đảo tái sinh mơi trường WPM 46 Hình 3.8 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro 48 Hình 3.9 Ảnh hưởng loại hàm lượng đường đến nuôi cấy in vitro Trà hoa vàng 50 Hình 3.10 Cụm chồi trà hoa vàng phát triển môi trường MT7 52 Hình 3.11 Biểu đồ ảnh hưởng tổ hợp nồng độ IBA NAA đến khả rễ in vitro 54 Hình 3.12 Ảnh hưởng nồng độ IBA NAA đến khả rễ in vitro 55 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi sử dụng 26 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng dùng cho phản ứng RAPD - PCR 29 Bảng 2.3 Chương trình chạy phản ứng PCR 30 Bảng 3.1 Nồng độ độ tinh mẫu ADN tổng số (pha loãng 10 lần) .36 Bảng 3.2 Phân đoạn RAPD đa hình thu từ 15 mồi RAPD 36 Bảng 3.3 Hệ số tương đồng di truyền Jaccard 38 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ tạo mẫu tái sinh chồi .40 Bảng 3.5 Ảnh hưởng điều kiện khử trùng tới khả nảy mầm 43 Bảng 3.6 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả nhân nhanh chồi 44 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi .47 Bảng 3.8 Ảnh hưởng loại hàm lượng đường đến khả nhân nhanh chồi 49 Bảng 3.9 Ảnh hưởng nồng độ BAP kinetin đến khả nhân nhanh chồi 51 Bảng 3.10 Ảnh hưởng tổ hợp nồng độ IBA NAA đến khả rễ in vitro .53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên đầy đủ Dịch nghĩa AFLP Amplified fragment length polymorphism CTAB Hexadecyltrimethylammonium bromide DNA Deoxyribonucleic acid EBA Extraction Bufer A Đệm chiết A EBB Extraction Bufer B Đệm chiết B EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid EST Expressed Sequence Tag PCR Polymerase Chain Reaction BAP 6- Benzylaminopurin IBA Indol- 3- acetic acid RAPD Random amplification polymorphism DNA RFLP Retriction fragment length polymorphism α- NAA WPM MS VQG ADN α- Naphthyacetic acid Woody Plant Medium- Lloyd G, Mc CownB, 1980 Murashige Skoog, 1962 Vườn quốc gia LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ĐẶT VẤN ĐỀ Trà hoa vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) loài thực vật hạt kín thuộc họ Chè (Theaceae) phát cơng bố vào năm 2007, lồi trà đặc hữu Vườn Quốc gia Tam Đảo, Vĩnh Phúc 30 loài trà hoa vàng phát công bố giới Theo thống kê nay, có khoảng 28 lồi tìm thấy Trung Quốc 24 lồi trà hoa vàng tìm thấy Việt Nam 45 Trà hoa vàng biết đến loại dược liệu có giá trị cao Thành phần chất trà hoa vàng có tác dụng phịng chống ung thư, củng cố tính đàn hồi thành mạch điều hịa huyết áp Ngồi ra, lồi trà hoa vàng nói riêng chi Camellia nói chung có hoa to, màu sắc rực rỡ lạ mắt, thường hoa vào dịp Tết Nguyên đán nên thu hút quan tâm nhà chơi cảnh Với giá trị lớn mặt khoa học kinh tế, việc đánh giá, bảo tồn quản lý nguồn gen công tác nghiên cứu đa dạng di truyền lồi trà hoa vàng trở nên vơ quan trọng Ngày nay, bên cạnh phương pháp truyền thống sử dụng thị hình thái, thị phân tử ADN đánh giá phương pháp hữu hiệu việc nghiên cứu, xác định mối quan hệ di truyền cá thể loài loài, sở cho việc phân loại loài, phát loài mối quan hệ tiến hóa lồi [31] Trong số thị phân tử đánh giá đa dạng di truyền, kỹ thuật RAPD (Randomly amplified polymorphic DNA) sử dụng rộng rãi kỹ thuật đơn giản, có độ tin cậy xác cao thường sử dụng nghiên cứu sâu mức độ phân tử tất đối tượng thực vật Ứng dụng kỹ thuật RAPD công tác nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể loài Trà hoa vàng Tam Đảo để chọn cá thể có tính đa hình ADN cao phục vụ số cơng tác nghiên cứu khác Những năm gần đây, khai thác không hợp lý nên trữ lượng loài trà hoa vàng Vườn quốc gia Tam Đảo suy giảm nghiêm trọng, đặc biệt loài Trà hoa vàng Tam Đảo Nhằm bảo vệ, lưu trữ phát triển nguồn gen lồi trà hoa vàng phục vụ cho cơng tác nghiên cứu, khai thác sử dụng bền vững tương lai, việc lựa chọn phương pháp nhân giống tối ưu loài trà hoa vàng trở nên vô LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 60 22 Nguyễn Văn Việt, Phan Đặng Hoàng, Trần Việt Hà (2016) “Ứng dụng phương pháp giâm hom nhân giống trà hoa vàng (Camellia chrysantha (Hu) Tuyama)”,Tạp chí Nơng nghiệp PTNT, 12/2016, tr 224- 230 23 Nguyễn Văn Việt, Nguyễn Anh Quân (2017) “Nghiên cứu khả nhân giống trà hoa vàng (Camellia flava Pit. Sealy) phương pháp giâm hom”,Tạp chí Nơng Nghiệp phát triển nơng thôn,138- 143 24 Nguyễn Thị Thu Phương (2011) “Nghiên cứu số biện pháp giâm hon Trà hoa vàng Tam Đảo - Vĩnh Phúc (C tamdaoensis) Trà hoa vàng ba – Hà Nội (C.tonkinensis)” Khóa luận tốt nghiệp Đại học Lâm nghiệp 25 Nguyễn Thị Hải Yến, Trần Thị Thu Hương (2014) “Nghiên cứu khả tái sinh in vitro chè”,Tạp chí Khoa Học  Cơng Nghệ, 123(09):23- 29 26 Hoàng Thị Thu Yến, Nguyễn Văn Tuấn, Hoàng Thị Ngà (2012) “Nghiên cứu đa dạng di truyền genome số dòng chè (Camellia sinensis) trồng xã Tân Cương- thành phố Thái Nguyên kỹ thuật RAPD”,Tạp chí Khoa Học  Cơng Nghệ, 96(08): 139- 143 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 27 Bandyopadhyay T (2011) “Molecular marker technology in genetic improvement of Tea” International Journal of Plant breeding and Genetics P1-11 28 Barua B.K (1963) “Classification of the Tea plant” Two bud, 10:3-11 29 Barua D.N (2008) “Science and Practice in Tea Culture Tea Reseach Accosication”, Kolkata, p 164-231 30 Brow, B., George M., and Wilson A.C (1979) “Rapid evolution of animal mitochondrial DNA”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 76 (4), pp 1967-1971 31 Boonerjee S, M Nurul Islam, M.I.Hoque, R H Sarker (2013) “Genetic diversity analysis of eighteen Tea (Camllia sinensis L.) clones of banglandesh through RAPD”, Plant tissue cult Biotech 23(2): 189-199 32 Doyle, J (1991) “DNA protocols for plants-CTAB total DNA isolation”.Molecular techniques in taxonomy pp 283-293 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 61 33 Duran, Chris, et al (2009) "Molecular genetic markers: discovery, applications, data storage and visualisation." Current Bioinformatics 4.1: 16-27 34 Dh’sninski, J, White T, and Van Dung T.N.L (2013) “Camellia dilinhensis: A New yellow species from Viet Nam”, Journal of Botany, 69,pp 348-355 35 Food and Agriculture Organization (1996), The state of the world's plant genetic resources for food and agriculture, FAO, Rome 36 Gonbad, Reze Azadi (2012) “Micropropagation of tea (Camellia sinensis (L) kuntze) using temporart immersion system” PhD thesis, Universiti Putra Malaysia 37 Hakoda n., Kirino Sh., Ninh T (2007) “New species of genus Camellia in Viet Nam” International Camellia Jural, 39: 54-57 38 Khan W M Khan T A., Ahad H., Ali H., Ghafoor S., Afzal M., Khan F A., Shah.M and Afridi S G (2010) “Esfimation of genetic diversity in Walnut”, Pak J Bot., 42 (3), pp 1791-1796 39 KATO, Michiyo (1986) "Micropropagation through Cotyledon Culture in Camellia japonica L and C sinensis L.", Japanese Journal of Breeding 36.1: 31-38 40 Katoh Y., M Katoh, Y Takeda and M Omori (2003) “Genetic diversity within cultivated teas based on nucleotide sequence comparison of ribosomal RNA maturase in chloroplast DNA”, Euphitica, 134: 287-295 41 Loao Mei- lan, WANG Hua- xin, DU Ling (2013) “Effect of Three Rooting Reagents on the Rooting of Camellia nitidissima”, Guangxi Forestry Science, 2013-02 42 Murashige T and Skoog F., (1962) “A revised medium for rapid growth and bioassays ưith tobaco tissue cultures”,Physiol plant, 15: 473-497 43 Ninh, T and Hakoda N (1998), “Camellia petelotii: a new species of yellow Camellia from Viet Nam”, International Camellia Journal, (30), pp 81-83 44 Ninh, T and Hakoda N (1998), “Three new species of the genus Camellia from Viet Nam”, International Camellia Journal, (30),pp.76-79 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 62 45 Ninh T., (2007) “Diversity of wild Camellia species of Tam Dao Nationnal Park Journal of Science”, Natural Science and Technology, 23:152-154 46 Ninh, T, N.L.N.H (2013).“The yellow Camellia of the Tam đao National Park”, International Camellia Journal, 1, pp 122-128 47 Orel, G and Curry A S (2013), “Preliminary morphological assessment of six new, yellow flowering Camellia (Theaceae) species from Viet Nam”, International Camellia Journal,pp 83-86 48 Rana V., Thakur K., Sood R., Sharma.T.K (2012), “Genetic diversity analysis of Tinospara cordifolis germplasm collected from northwesten Himalayan region of India”, J.Genet, 91, 99-103 49 Rohlf, F.J., 2002 NTSYS pc: Numerical taxonomy system http://www.exetersoftware.com/cat/ntsyspc/ntsyspc.html 50 Sealy J, R., (1958) “A Revision of the Genus Camellia Roy Hort Soc., London 51 Tang, Shaoqing, et al "Genetic diversity and population structure of yellow camellia (Camellia nitidissima) in China as revealed by RAPD and AFLP markers." Biochemical genetics 44.9-10 (2006): 444 52 Tankslay, SD and S.R McCouch (1997) Seed bank molecular maps: Unlocking genetic potential from the wild Sci., 277: 1063-1066 53 Visser T (1976) Tea In: Evolation of Crop Plant Longman, England 54 Yang, J-B., Yang S.-X., LiH.-T., and LiD.-Z (2013), “Comparative chloroplast genomes of Camellia species”, PLoS One, (8), pp.e73053 55 Ye Chuang- xing (1993) “Annotation of phylogeny in the family Theaceae III A review of Camellia Sect Chrysantha Chang and evolution of genus Camellia” Guihaia, 13(4): 306-310 56 Ye Chuang- xing (1993) “Annotation of phylogeny in th family Theaceae IV Notes from the type of Camellia petelotii (Merr) Sealy” Guihaia, 15(1): 3-5 57 Ye Chuang- xing, Xu Zhao-ran (1992) “A taxonomy of Camellia Sect Chrysantha Chang Acta Sci Nat Univ” Sunyatseni, 31(4): 68-77 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 63 58 Ye Chuang- xing, Chang Hong-ta and Xu Zhao-ran (1993) “A systematic study on Camellia Sect Chrysantha Chang, a group of rate limestone phlants” Guihaia, additamentum 4: 115-149 59 WANG Jie-ling (2011) “Research on clone cutting seedling of Camellia oleifera” Horticulture  Seed, 2011-4 60 Williams, J.G.K., A.R Kubelik, K.J Livak, J.A Rafalski and S.V Tingey, 1990 DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers Nucl Acids Res., 18: 6531-6535 PMID: 1979162 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC 1: CÁC MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG CÁC THÍ NGHIỆM Mơi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Lượng lấy Thành phần 1l dung dịch mẹ Đa lượng (g) NH4NO3 33,0 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 3,40 CaCl2 (pha riêng) 6,60 Vi lượng 50 ml/l (mg) H3BO4 620,000 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H20 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO2.5H2O 2,50 Sắt (g) FeSO4.7H2O 5,56 Na2EDTA 7,46 Vitamin 1l môi trường sử dụng 10ml/l 5ml/l (mg) Glycine 400 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridixine (B6) 100 Thiamine HCl (B1) 20 Inositol 100 5ml/l LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Môi trường Knops STT Tên dung dịch K1 K2 K3 K4 K5 NH4NO3 Hàm lượng (mg/l) 600 PKNO3 1900 MgSO4.7H2O 146,5 KCl 300 CaCl2.2H2O 453 KI 0,75 H3BO4 3,0 MnSO4.4H2O 10,0 ZnSO4.4H20 2,0 MoNa2.2H2O 0,25 CuSO2.5H2O 0,0025 CoCl2.6H2O 0,0025 FeSO4.7H2O 27,8 Na2EDTA 37,3 Glycin 2,0 Thiamine.HCl 0,4 Myo inositol 100 Pyridoxine.HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Thành phần LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Môi trường WPM STT Tên dung dịch WPM I WPM II WPM III WPM IV WPM V NH4NO3 Hàm lượng (mg/l) 400 K2SO4 990 Ca(NO3)2.4H2O 556 MnSO4.4H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 (pha riêng) 96 FeSO4.7H2O 27,84 Na2EDTA 37,24 H3BO4 0,62 MnSO4.4H2O 22,3 ZnSO4.4H20 8,6 MoNa2.2H2O 0,25 CuSO2.5H2O 0,25 Glycin Thiamine.HCl Myo inositol 100 Pyridoxine.HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Thành phần LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC 2: BẢNG KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ tạo mẫu tái sinh chồi Anova: Tỷ lệ mẫu (%) SUMMARY Groups K1 Count Sum 100 Average 33,33 Variance 11,11 K2 220 73,33 33,33 K3 273,33 91,11 3,704 K4 286,67 95,56 3,704 K5 296,67 98,89 3,704 ANOVA Source of Variation SS df MS F Between Groups 8797 2199 197,9 Within Groups 111,1 10 11,11 Total 8908 14 Pvalue 2E-09 F crit 3,478 Anova: Tỷ lệ mẫu tái sinh (%) SUMMARY Groups K1 K2 K3 K4 Count 3 3 Sum 96,667 206,67 256,67 183,33 Average 32,22 68,89 85,56 61,11 Variance 3,704 14,81 3,704 3,704 K5 156,67 52,22 14,81 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS df MS F 4696 81,48 10 1174 8,148 144,1 Total 4778 14 Pvalue 9E-09 F crit 3,478 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.6 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả nhân nhanh chồi Anova: Chiều cao TB/chồi SUMMARY Sum Average Variance 4,4 1,466667 0,0033 4,9 1,633333 0,0033 0,01 5,2 1,733333 0,0133 ANOVA Groups MS 1/2 MS WPM Knop Count 3 3 Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0,4492 0,06 df Total 0,5092 11 MS 0,149722 0,0075 F 19,963 P-value 0,000451586 F crit 4,066181 P-value 0,000171288 F crit 4,066181 Anova: Số chồi TB/mẫu SUMMARY Groups MS Count Sum 7,3 Average 2,433333 Variance 0,0033 1/2 MS 7,9 2,633333 0,0033 WPM 8,5 2,833333 0,0033 Knop 7,6 2,533333 0,0033 ANOVA Source of Variation Between Groups SS 0,2625 df MS 0,0875 Within Groups 0,0267 0,003333 Total 0,2892 11 F 26,25 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Anova: Số chồi TB/mẫu SUMMARY Sum Average 1,333333 1,666667 Groups ĐC MT1 Count 3 Variance 0,003333 0,093333 MT2 MT3 MT4 3 7,4 7,9 6,9 2,466667 2,633333 2,3 0,003333 0,003333 0,07 MT5 6,2 2,066667 0,053333 ANOVA Source of Variation SS df MS F Between Groups Within Groups 3,697778 0,453333 12 0,739556 0,037778 19,57647 Total 4,151111 17 P-value 2,15E05 F crit 3,105875 Anova: Chiều cao TB/chồi Groups ĐC MT1 MT2 MT3 MT4 Count 3 3 MT5 SUMMARY Sum Average 3,3 1,1 4,1 1,366667 4,6 1,533333 5,8 1,933333 4,9 1,633333 4,5 1,5 Variance 0,03 0,003333 0,003333 0,013333 0,013333 ANOVA Source of Variation SS df MS F Between Groups 1,151111 0,230222 21,81053 Within Groups 0,126667 12 0,010556 Total 1,277778 17 P-value 1,22E05 F crit 3,105875 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.8 Kết ảnh hưởng loại đường hàm lượng đường đến khả tái sinh chồi Anova: Số chồi TB/mẫu Groups ĐC ĐT1 ĐT2 ĐT3 ĐT4 ĐT5 Count 3 3 3 SUMMARY Sum Average 5,1 1,7 8,4 2,8 8,7 2,9 9,7 3,233333 10,1 3,366667 9,2 3,066667 Variance 0,07 2,96E-31 0,01 0,003333 0,003333 0,003333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS df MS F 5,364444 0,18 12 1,072889 0,015 71,52593 Total 5,544444 17 Anova: Chiều cao TB/chồi SUMMARY Groups Count Sum ĐC 3,6 ĐT1 ĐT2 4,5 ĐT3 4,9 ĐT4 ĐT5 4,5 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Average 1,2 1,333333 1,5 1,633333 1,5 Variance 0,01 0,003333 0,003333 0,04 SS df MS F 1,142778 0,113333 1,256111 12 17 0,228556 0,009444 24,2 P-value F crit 1,65E08 3,105875 P-value 7,01E06 F crit 3,105875 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.9 Ảnh hưởng tổ hợp nồng độ BAP Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Anova: Số chồi TB/mẫu SUMMARY Count Sum Average Variance Groups MT6 MT7 MT8 MT9 3 3 13 10 4,333333 3,333333 2,666667 0,12 0,063333 0,003333 0,013333 MT10 2,333333 0,013333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 7,066667 0,426667 df 10 Total 7,493333 14 MS 1,766667 0,042667 F 41,40625 P-value 3,42E-06 F crit 3,47805 Anova: Chiều cao TB/chồi SUMMARY Groups MT6 Count Sum 5,2 Average 1,733333 Variance 0,013333 MT7 5,9 1,966667 0,003333 MT8 5,3 1,766667 0,003333 MT9 4,9 1,633333 0,003333 MT10 4,8 1,6 0,01 SS df MS F P-value F crit 0,249333 0,062333 9,35 0,002067 3,47805 0,066667 10 0,006667 0,316 14 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.10 Ảnh hưởng nồng độ IBA NAA đến khả rễ Anova: Tỷ lệ mẫu rễ SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 103,3 34,44444 3,7037 TR1 153,3 51,11111 3,7037 TR2 193,3 64,44444 3,7037 TR3 163,3 54,44444 3,7037 TR4 156,7 52,22222 3,7037 TR5 196,7 65,55556 3,7037 TR6 166,7 55,55556 3,7037 TR7 253,3 84,44444 3,7037 TR8 266,7 88,88889 3,7037 TR9 233,3 77,77778 3,7037 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 7675,6 852,8395 230,267 3,38E-18 2,39281 Within Groups 74,074 20 3,703704 Total 7749,6 29 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Anova: Số rễ TB/mẫu SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 3 TR1 1,33 0,3 TR2 TR3 1,67 0,3 TR4 1,33 0,3 TR5 TR6 2,33 0,3 TR7 10 3,33 0,3 TR8 11 3,67 0,3 TR9 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 23,8667 2,65 13 1,25E-06 2,4 Within Groups 20 0,2 Total 27,8667 29 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Anova: Chiều dài rễ SUMMARY Groups Count Sum Average Variance ĐC 2,5 0,833333 0,083333 TR1 4,7 1,566667 0,003333 TR2 7,5 2,5 0,25 TR3 5,4 1,8 0,03 TR4 5,5 1,833333 0,083333 TR5 2,666667 0,333333 TR6 6,4 2,133333 0,023333 TR7 8,4 2,8 0,03 TR8 9,5 3,166667 0,083333 TR9 8,2 2,733333 0,063333 ANOVA Source of Variation SS df MS F Between Groups 13,363 1,484778 15,09944 Within Groups 1,966667 20 0,098333 Total 15,32967 29 P-value 4,28E07 F crit 2,392814 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ====== NGUYỄN THỊ HƯỜNG ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ NHÂN GIỐNG TRÀ HOA VÀNG TAM ĐẢO (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO... Cây Trà hoa vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) Vườn quốc gia Tam Đảo Vật liệu:  Vật liệu để đánh giá đa dạng di truyền quần thể trà hoa vàng trà hoa vàng lấy từ 10 cá thể VQG Tam. .. Mục tiêu cụ thể: + Đánh giá di truyền quần thể Trà hoa vàng Tam Đảo kỹ thuật RAPD + Xây dựng quy trình nhân giống in vitro Trà hoa vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda) 2.2 Đối tượng