KẾT QUẢ PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH SEROTYPE VÀ ĐỘC LỰC CÁC CHỦNG E COLI GÂY TIÊU CHẢY Ở LỢN CON TẠI KHU VỰC THÀNH PHỐ CẨM PHẢ, TỈNH QUẢNG NINH

KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIV SỐ - 2017 KẾT QUẢ PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH SEROTYPE VÀ ĐỘC LỰC CÁC CHỦNG E COLI GÂY TIÊU CHẢY Ở LN CON TẠI KHU VỰC THÀNH PHỐ CẨM PHẢ, TỈNH QUAÛNG NINH Phạm Hà Giang1, Nguyễn Quang Tuyên2, Trần Đức Hạnh2, Lưu Đình Tiến2, Nguyễn Thị Liên3, Nguyễn Mạnh Cường3 TĨM TẮT Điều tra tình hình dịch bệnh phân lập, xác định số đặc tính sinh vật học vi khuẩn E coli gây tiêu chảy lợn tháng tuổi khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh năm 2014-2015 cho thấy: tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết cao, tương ứng 17,37% 10,22% Các chủng E coli phân lập với tỷ lệ trung bình mẫu phân 84,53% phủ tạng 82,22%; thuộc serotype O149, O141, O139, O138, O111 O8, serotype O149 chiếm tỷ lệ cao (28,0%) thấp O8 (8,0%) Độc lực chủng E coli phân lập chuột bạch mạnh, gây chết 100% chuột thí nghiệm vịng 18-48 Từ khóa: lợn con, tiêu chảy, E coli, serotype, độc lực, tỷ lệ nhiễm, TP Cẩm Phả, Quảng Ninh Determination of serotype and virulence of E coli strains caused diarrhea in piglets in Cam Pha city, Quang Ninh province Pham Ha Giang, Nguyen Quang Tuyen, Tran Duc Hanh, Luu Dinh Tien, Nguyen Thi Lien, Nguyen Manh Cuong SUMMARY The result of investigating epidemic situation, isolation and determination of some biological characteristics of E coli bacteria causing diarrhea in the piglets under months old in Cam Pha city, Quang Ninh province from 2014 to 2015 showed that the infection and mortality rate of the piglets was relatively high (17.37% and 10.22%, respectively) The rate of fecal and viscera samples from that the E coli strains were isolated to be 84.53% and 82.22% respectively The isolated E coli strains belonged to serotypes: O149, O141, O139, O138, O111 and O8, of which serotype O149 accounted for the highest rate (28.0%) and serotype O8 shared the lowest rate (8.0%) The virulence of E coli strains was very strong, these bacteria strains killed 100% of the experimental albinic mouse within 18-48 hours Keywords: piglet, diarrhea, E coli, serotype, virulence, infection rate, Cam Pha city, Quang Ninh province I ĐẶT VẤN ĐỀ Chăn nuôi lợn tỉnh Quảng Ninh nói chung khu vực thành phố Cẩm Phả nói riêng năm vừa qua phát triển mạnh, tăng nhanh số lượng cải tiến nhiều chất lượng Theo báo cáo tình hình chăn ni gia súc, gia cầm giai đoạn 2010 - 2014 TP Cẩm Hội Nông dân, tỉnh Quảng Ninh Công ty cổ phần thuốc thú y Marphavet Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Phả, tổng đàn lợn đạt 16.000 (Thống kê, 2014) Bên cạnh chương trình nạc hố đàn lợn, đưa nái ngoại vào chăn nuôi trang trại, đến có nhiều sở chăn ni lợn sinh sản lợn thịt với quy mô lớn Tuy nhiên, tình hình dịch bệnh diễn biến phức tạp, hàng năm làm chết nhiều lợn địa bàn Ngoài số bệnh truyền nhiễm nguy hiểm tiêu chảy bệnh gây thiệt hại lớn kinh 39 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIV SỐ - 2017 tế phổ biến lợn hai tháng tuổi Theo Trịnh Quang Tuyên cs (2004) tiến hành phân lập vi khuẩn E coli từ mẫu phân lợn bị tiêu chảy, xác định tỷ lệ 79,69% mẫu có vi khuẩn E coli Nguyễn Thị Kim Lan (2004) nghiên cứu lợn mắc tiêu chảy, phù đầu tỉnh Bắc Giang Thái Nguyên cho thấy có 100% mẫu phân lợn mắc bệnh phân lập vi khuẩn E coli Để có sở cho việc nghiên cứu xây dựng biện pháp phòng trị tiêu chảy cho lợn có hiệu cao, chúng tơi tiến hành phân lập, xác định serotype và kiểm tra độc lực vi khuẩn E coli gây bệnh khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh II NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung - Điều tra số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn Quảng Ninh - Phân lập, xác định serotype chủng vi khuẩn E coli gây tiêu chảy đàn lợn khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh - Xác định độc lực chủng E coli phân lập làm sở cho việc tuyển chọn chủng phục vụ cho nghiên cứu chế tạo chế phẩm phịng bệnh - Các loại mơi trường dùng cho nuôi cấy, phân lập kiểm tra số đặc tính sinh học vi khuẩn đường ruột - Các kháng huyết O chuẩn (đa giá đơn giá) - Chuột nhắt trắng khỏe mạnh (18-20g/con) - Các loại giấy tẩm kháng sinh hãng Oxoid (Anh) - Hố chất, dụng cụ, máy móc… phịng thí nghiệm nghiên cứu vi sinh vật - Thời điểm tiến hành nghiên cứu từ tháng 6/2014-8/2015 2.3 Phương pháp nghiên cứu - Điều tra số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn theo phương pháp nghiên cứu dich tễ học Nguyễn Như Thanh cs.(2001) - Nuôi cấy, phân lập giám định số đặc điểm sinh vật hóa học, kiểm tra độc lực chủng E coli theo quy trình thường quy Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y - Số liệu xử lý theo phương pháp tốn học thơng dụng III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2.2 Nguyên vật liệu 3.1 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết địa bàn nghiên cứu - Mẫu bệnh phẩm: Phủ tạng gồm máu tim, lách, gan, hạch ruột, chất chứa ruột non, ruột già phân lợn tháng tuổi mắc tiêu chảy chết tiêu chảy Đã điều tra xác định tỷ lệ lợn tháng tuổi mắc chết tiêu chảy xã/phường thuộc địa bàn nghiên cứu Kết trình bày bảng Bảng Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết số xã, phường thuộc TP Cẩm Phả Lợn mắc tiêu chảy Lợn chết tiêu chảy Địa điểm (xã, phường) Số lợn điều tra Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) Dương Huy 237 46 19,40 8,69 Cửa Ông 383 56 14,62 10,71 Quang Hanh 224 37 16,51 13,51 Cộng Hòa 239 49 20,50 10,20 Cẩm Đơng 212 38 17,92 7,89 Tính chung 1.295 225 17,37 23 10,22 Kết bảng cho thấy tỷ lệ đàn lợn nuôi khu vực thành phố Cẩm Phả mắc tiêu chảy 40 trung bình 17,37% tỷ lệ chết 10,22% Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy cao Cộng Hòa KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIV SỐ - 2017 (20,50%); tiếp đến Dương Huy (19,40%) thấp Cửa Ông (14,62%) Tỷ lệ lợn chết cao Quang Hanh (13,51%), tiếp đến Cửa Ông (10,71%) thấp Cẩm Đông (7,89%) Qua điều tra cho thấy nguyên nhân chăn ni lợn cịn quy mơ nhỏ hộ gia đình, điều kiện chăm sóc, ni dưỡng, vệ sinh…cịn hạn chế nên hội chứng tiêu chảy thường xuyên xảy Kết tương đồng với kết số tác Trần Trung Mỹ (2010) cho thấy tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Thái Nguyên 27,81%, tỷ lệ chết tiêu chảy 5,12% ; Nguyễn Chí Dũng (2013) cho biết tiêu chảy lợn xuất phổ biến ba huyện thuộc tỉnh Vĩnh Phúc với tỷ lệ cao (26,76%); tỷ lệ chết 5,03% tổng số lợn điều tra Kết cho thấy, địa phương, điều kiện chăn nuôi, công tác vệ sinh thú y, phòng chống dịch bệnh hạn chế tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy cao 3.2 Kết phân lập vi khuẩn E coli từ phân lợn tiêu chảy Tiến hành phân lập vi khuẩn E coli từ 142 mẫu bệnh phẩm (97 mẫu phân 45 mẫu dịch ruột non ruột già) lấy từ lợn tiêu chảy xã/ phường, kết trình bày bảng Bảng Kết phân lập vi khuẩn E coli lợn tiêu chảy TT Lứa tuổi (ngày) Mẫu phân Mẫu phủ tạng Số mẫu nghiên cứu Số mẫu dương tính Tỷ lệ (%) Số mẫu nghiên cứu Số mẫu dương tính Tỷ lệ (%) Sơ sinh-20 30 29 96,66 15 14 93,33 21-40 35 29 82,85 15 12 80,00 41-60 32 25 78,12 15 11 73,33 Tính chung 97 82 84,53 45 37 82,22 Kết bảng cho thấy 142 mẫu bệnh phẩm thu thập, vi khuẩn E coli xuất mẫu phân, chiếm tỷ lệ trung bình 84,53% mẫu phủ tạng 82,22% Ở lứa tuổi lợn cho thấy giai đoạn từ sơ sinh đến 20 ngày tuổi có tỷ lệ phân lập vi khuẩn E coli cao nhất: từ mẫu phân 96,66% mẫu phủ tạng 93,33%; thấp giai đoạn từ 21 đến 40 ngày tuổi (tương ứng 82,85 80,00%) thấp giai đoạn từ 41 đến 60 ngày tuổi (tương ứng 78,12 73.33%) Kết tương đồng với kết nghiên cứu Trịnh Quang Tuyên (2004) phân lập E coli từ mẫu phân lợn bị tiêu chảy xác định 79,69% mẫu có vi khuẩn E coli Trương Quang (2005) cho thấy 100% mẫu phân lợn bị tiêu chảy phù đầu địa bàn phân lập vi khuẩn E coli 3.3 Kết quả xác định serotype kháng nguyên O của các chủng E.coli phân lập được Lựa chọn từ phường/xã 20 chủng E coli (tổng số 100 chủng) phân lập mang đủ đặc tính sinh học điển hình để xác định serotype kháng nguyên O Kết trình bày bảng Kết bảng cho thấy 100 chủng vi khuẩn E.coli phân lập kiểm tra, có 75 chủng cho kết dương tính với serotype kháng huyết O Trong chủng thuộc serotype O149 chiếm tỷ lệ cao (21,0%); chủng thuộc serotype O141 (17,0%), O139 (13,0%), O138 (10,0%), O111 (8,0%), thấp serotype O8 (6,0%), 25 chủng (25,0%) chưa xác định serotype Kết phù hợp với số kết nghiên cứu trước đây, phần lớn tác giả cho thấy serotype kháng nguyên O149 chiếm tỷ lệ cao serotype chủ yếu gây bệnh cho lợn Theo Fairbrother J.M (1992), serotype O138, O139, O141 O149 thuộc nhóm vi khuẩn ETEC VTEC nhóm thường hay gặp gây tiêu chảy cho lợn Lê Văn Dương (2010) cho thấy 248 chủng E.coli phân lập từ lợn tiêu 41 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIV SỐ - 2017 Bảng Kết quả xác định serotype kháng nguyên O của cácchủng E.coli phân lập được Địa điểm (xã, phường) Số chủng kiểm tra Serotype kháng nguyên O8 O111 O138 O139 O141 O149 Chưa xác định n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) n (+) Tỷ lệ (%) Dương Huy 20 5,0 10,0 10,0 15,0 15,0 20,0 - Cửa Ông 20 5,0 5,0 10,0 15,0 20,0 20,0 - Quang Hanh 20 10,0 5,0 10,0 10,0 15,0 25,0 - Cộng Hòa 20 5,0 10,0 5,0 15,0 20,0 20,0 - Cẩm Đông 20 5,0 10,0 15,0 10,0 15,0 20,0 - Tính chung 100 6,0 8,0 10 10,0 13 13,0 17 17,0 21 21,0 25 25,0 chảy Bắc Giang cho kết dương tính với serotype kháng huyết O, chủng thuộc serotype O149 chiếm tỷ lệ cao (31,45%); thấp chủng thuộc serotype O141 (27,42%) Các serotype O139, O111 O138 có tỷ lệ tương ứng 16,13%; 12,90% 9,68%; serotype O8 chiếm tỷ lệ thấp (8,47%) 3.4 Kết quả kiểm tra độc lực của một số chủng vi khuẩn E.coli phân lập Đã lựa chọn 16 chủng E coli phân lập từ lợn mắc tiêu chảy có đầy đủ đặc tính sinh vật, hóa học điển hình để nghiên cứu Kết trình bày bảng Bảng Kết quả kiểm tra độc lực của một số chủng vi khuẩn E.coli chuột bạch Ký hiệu chủng Số chuột tiêm Liều tiêm (ml) E-qn03 E-qn06 E-qn08 Đường tiêm Số chuột chết Tỷ lệ (%) Thời gian chết (giờ) Phân lập lại VK 0,2 2/2 100 < 18 + 0,2 1/2 50 25 - 30 + 0,2 2/2 100 18 - 24 + E-qn12 0,2 2/2 100 31 - 48 + E-qn15 0,2 2/2 100 18 - 24 + E-qn18 0,2 1/2 50 25 – 30 + E-qn23 0,2 2/2 100 < 18 + E-qn34 0,2 2/2 100 18 - 24 + E-qn39 0,2 1/2 50 25 – 30 + E-qn45 0,2 2/2 100 < 18 + E-qn46 0,2 2/2 100 31 – 48 + E-qn52 0,2 2/2 100 < 18 + E-qn56 0,2 1/2 50 18 - 24 + E-qn66 0,2 2/2 100 25 - 30 + E-qn69 0,2 2/2 100 18 - 24 + E-qn70 0,2 2/2 100 < 18 + Phúc xoang Kết bảng cho thấy 100% chủng E coli phân lập từ lợn tháng tuổi Quảng 42 Ninh có độc lực mạnh Trong 16 chủng E coli tiêm cho chuột bạch có 10 chủng có độc lực cao, KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIV SỐ - 2017 giết chết 100% chuột sau tiêm vòng 1848 giờ, chiếm tỷ lệ 62,5% Đặc biệt có chủng có độc lực mạnh E-qn03, E-qn23, E-qn45, E-qn52 E-qn70 gây chết 100% chuột vịng 18 sau tiêm, có chủng thuộc serotepe O149 chủng thuộc serotepe O141 Có chủng E.coli độc lực yếu gây chết 50% chuột thí nghiệm 18-24 giờ, tỷ lệ 25,0%, có chủng thuộc serotepe O141 chủng thuộc serotepe O139 Chuột bạch sau tiêm canh khuẩn bị ủ rũ, vận động, lông xù, run rẩy chết sau 18-48 Các chuột chết mổ khám có bệnh tích điển bụng chướng to, viêm phổi, gan sưng, tụ huyết, ruột xuất huyết, tim nhão Lấy máu tim cấy thạch máu Mac Conkey phân lập lại vi khuẩn E.coli TÀI LIỆU THAM KHẢO Fairbrother J.M (1992), Enteric colibacillosis diseases of swine IOWA State University Press/AMES, IOWA U.S.A 7th Edition, page.489-496 Nguyễn Chí Dũng (2013), Nghiên cứu vai trò gây bệnh vi khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy lợn nuôi tỉnh Vĩnh Phúc biện pháp phòng trị Luận văn thạc sĩ Thú y, Đại học Thái Nguyên Lê Văn Dương (2010), Phân lập, xác định vai trò gây bệnh Escherichia coli hội chứng tiêu chảy lợn số huyện tỉnh Bắc Giang biện pháp phòng trị Luận văn thạc sĩ Thú y, Đại học Thái Nguyên Kết tương đồng với kết số tác Trương Quang (2005) kiểm tra độc lực 30 chủng E.coli phân lập từ phân lợn từ 1-60 ngày tuổi mắc tiêu chảy Hà Nội cho thấy 90% gây chết 100% chủng (100%) gây chết 50% chuột sau tiêm canh khuẩn từ 24-72 giờ; theo Hồ Soái cs (2005) kiểm tra độc lực chủng E.coli phân lập từ phân lợn bị tiêu chảy Quảng Trị cho thấy chủng gây chết 100% chủng gây chết 50% chuột tiêm Nguyễn Thị Kim Lan (2004), “Thử nghiệm phòng trị bệnh coli dung huyết cho lợn Thái Nguyên Bắc Giang”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XII (3), tr 35- 39 IV KẾT LUẬN Trương Quang (2005), “Kết nghiên cứu vai trò gây bệnh E.coli hội chứng tiêu chảy lợn từ 1-60 ngày tuổi”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XII, (1), tr 27-32 - Lợn hai tháng tuổi nuôi số xã, phường thuộc khu vực thành phố Cẩm Phả, tỉnh Quảng Ninh mắc tiêu chảy chết với tỷ lệ cao, tương ứng 17,37% 10,22% - Vi khuẩn E.coli phân lập hầu hết mẫu bệnh phẩm lợn mắc tiêu chảy, tỷ lệ trung bình mẫu phân 84,53% phủ tạng 82,22% - Các chủng E coli phân lập thuộc serotype O149, O141, O139, O138, O111 O8, serotype O149 chiếm tỷ lệ cao (21,0%) thấp O8 (6,0%) Độc lực chủng vi khuẩn E coli phân lập chuột bạch mạnh, gây chết 100% chuột thí nghiệm vịng 18-48 Trần Trung Mỹ (2010), Phân lập xác định vai trò vi khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy lợn tháng tuổi số huyện tỉnh Thái Nguyên biện pháp phòng trị Luận văn thạc sĩ Thú y, Đại học Thái Ngun Hồ Sối, Đinh Thị Bích Lân (2005), “Xác định nguyên nhân chủ yếu gây tiêu chảy lợn xí nghiệp lợn giống Triệu Hải, Quảng Trị thử nghiệm phác đồ điều trị”, Tạp chí KHKT Thú y, tập XII, (5), tr 26- 34 Trịnh Quang Tuyên (2004), “Phân lập xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E.coli từ lợn bị tiêu chảy nuôi trại lợn Tam Điệp”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y (4), tr 22 - 28 Nhận ngày 15-1-2017 Phản biện ngày 5-3-2017 43