TRANSFORMATION AND ASSESSMENT OF Melia azedarach L. LINES CARRYING GA20-OXIDASE GENE PROMOTING BY GmPrP2 PROMOTER TNU Journal of Science and Technology 227(14) 113 120 TRANSFORMATION AND ASSESSMENT OF Melia azedarach L LINES CARRYING GA20 OXIDASE GENE PROMOTING BY Gm[.]
TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 TRANSFORMATION AND ASSESSMENT OF Melia azedarach L LINES CARRYING GA20-OXIDASE GENE PROMOTING BY GmPrP2 PROMOTER Ong Xuan Phong1,3, Ly Khanh Linh2, La Viet Hong3, Do Tien Phat2, Pham Bich Ngoc2* 1Graduate 2Institute University of Sciences and Technology - VAST of Biotechnology – VAST, 3Hanoi Pedagogical University ARTICLE INFO ABSTRACT Received: 11/8/2022 Melia azedarach L is a forest tree with many uses, in Vietnam it is grown quite popularly In this study, GA20 encoding for the enzyme GA20-oxidase which plays an important role in GA biosynthesis in plant cells was transferred to the plant by vector GmPrP2:GA20ox The results of checking the presence of the GA20ox gene by PCR showed that there were 15 lines carrying the gene Transgene-carrying sinus lines were evaluated for expression at the molecular level by RT-PCR and also showed that the GA20ox gene was active Assessing the growth of transgenic lines after weeks of age, lines T16, T20 and T22 had an increase in height and number of nodes by 150 - 200% compared to the control Anatomy of the 8th stem showed that the density of xylem fibers and the number of cells on the xylem fibers of the transgenic lines were higher than that of the control lines, and the cell wall thickness of the lines were similar These results demonstrate the role of the GmPrP2 promoter with the GA20ox gene on growth and biomass improvement in woody plants Revised: 14/9/2022 Published: 15/9/2022 KEYWORDS Assessment Melia azedarach L GA20 oxidase Promoter Transgenic BIẾN NẠP VÀ ĐÁNH GIÁ CÁC DÒNG XOAN TA (Melia azedarach L.) MANG GEN GA20-OXIDASE ĐƯỢC ĐIỀU KHIỂN BỞI PROMOTER GmPrP2 Ong Xuân Phong1,3, Lý Khánh Linh2, La Việt Hồng3, Đỗ Tiến Phát2, Phạm Bích Ngọc2* 1Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 3Trường Đại học Sư phạm Hà Nợi 2Viện THƠNG TIN BÀI BÁO Ngày nhận bài: 11/8/2022 Ngày hoàn thiện: 14/9/2022 Ngày đăng: 15/9/2022 TỪ KHÓA Đánh giá Chuyển gen GA20 oxidase Promoter Xoan ta TÓM TẮT Cây xoan ta lâm nghiệp có nhiều cơng dụng, Việt Nam xoan trồng phổ biến Trong nghiên cứu cấu trúc mang gen GA20ox mã hoá cho enzyme GA20-oxidase đóng vai trị quan trọng q trình sinh tổng hợp GA tế bào thực vật chuyển vào xoan ta vector GmPrP2:GA20ox Kết kiểm tra có mặt gen GA20ox kỹ thuật PCR có 15 dịng mang gen Các dịng xoan mang gen chuyển đánh giá mức độ biểu cấp độ phân tử kỹ thuật RT-PCR cho kết gen GA20ox hoạt động Đánh giá sinh trưởng dòng mang gen chuyển sau tuần tuổi dịng T16, T20 T22 có chiều cao số đốt tăng 150 - 200% so với đối chứng Giải phẫu đốt thân thứ cho thấy mật độ sợi xylem số tế bào sợi xylem dòng mang gen chuyển cao dòng đối chứng, độ dày thành tế bào dòng tương tự Những kết bước đầu chứng minh vai trò promoter GmPrP2 với gen GA20ox trình tăng trưởng cải thiện sinh khối thân gỗ DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.6356 * Corresponding author Email: pbngoc77@gmail.com http://jst.tnu.edu.vn 113 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 Giới thiệu Cây xoan ta (Melia azedarach L.) thuộc họ Xoan (Meliaceae), thuộc nhóm gỗ nhỡ, đơi gỗ lớn, có chiều cao 15 - 20m, phân bố nước Đơng Á [1] Cây xoan ta lồi có nhiều tác dụng làm thuốc trừ sâu sinh học, phân bón lấy gỗ [2], [3],… Ở Việt Nam, xoan loài địa trồng rộng khắp từ Bắc đến Nam, lồi có sức chống chịu tốt, thích hợp sinh trưởng, phát triển nhiều địa hình khác mang lại giá trị kinh tế Hiện nay, số kết nghiên cứu tạo giống lâm nghiệp sinh trưởng nhanh kỹ thuật chuyển gen để tăng khả sinh tổng hợp chất điều tiết sinh trưởng gibberellin acid (GA) thu số kết khả quan [4], [5] GA hợp chất dạng diterpenes tham gia vào trình sinh trưởng phát triển tác động đến trình phân chia tế bào như: nảy mầm, hoa, kéo dài thân Gen mã hóa cho enzyme tham gia sinh tổng hợp GA nội sinh có nhiều dạng khác nhau, enzyme GA20-oxidase mã hóa GA20 tham gia q trình sinh tổng hợp GA tế bào thực vật Các nhà khoa học nghiên cứu cơng bố số cơng trình chuyển gen mã hóa cho GA20-oxidase thu kết chứng minh cho vai trò tăng chiều cao thân tăng sinh khối Arabidopsis [6], dương chuyển gen GA20ox điều khiển promoter 35S, gỗ phát triển đặc biệt thể khối lượng khô thân tăng gấp bốn lần so với đối chứng [7] Trong đó, biểu mức gen mã hóa enzyme Gibberellin 2oxidase (GA2ox) lại dẫn đến kiểu hình lùn, quan sinh dưỡng nhỏ Arabidopsis Jatropha [8] Việc tìm kiếm gen mã hóa liên quan đến đường sinh tổng hợp GA promoter điều khiển phù hợp điều kiện cần thiết Trong nghiên cứu này, promoter GmPrP2 đặc hiệu rễ thiết kế để điều khiển hoạt động gen GA20, cấu trúc chuyển vào xoan ta nhằm tạo dịng chuyển gen có phát triển gỗ tốt, phát triển cân đối Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu nghiên cứu Hạt giống xoan ta dùng để làm vật liệu chuyển gen, gen GA20ox, Vector biểu gen pBI121, chủng E coli DH5α, chủng Agrobacterium tumefaciens Cv58 dùng chuyển gen Các hóa chất liên quan tới thí nghiệm Phịng Cơng nghệ Tế bào Thực vật, Viện Công nghệ sinh học cung cấp 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế vector Trong nghiên cứu này, thiết kế cấu trúc vector GmPrP2:GA20ox dựa vector pBI121 Promoter GmPrP2 cấu trúc phân lập từ đậu tương (Hình 1) Từ vector ban đầu pBI121/GmPrP2:GUS:NOS, gen GUS thay gen GA20ox Hình Sơ đồ cassette biểu GmPrP2:GA20ox 2.2.2 Phương pháp chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Cấu trúc mang gen GA20ox thiết kế chuyển vào mô xoan ta thông qua Agrobacterium theo phương pháp Bùi Văn Thắng [9] Đoạn thân mầm mầm tiền nuôi cấy 24 môi trường MS bổ sung 1,0 mg/l BAP 0,2 mg/l NAA để làm vật liệu chuyển gen Đoạn thân mầm lây nhiễm dung dịch Agrobacterium chuẩn bị 30 phút (lắc nhẹ) Sau đó, mẫu thấm khơ cấy chuyển lên mơi trường đồng ni cấy MS bổ sung 200µM Acetosyringone, 1,0 mg/l BAP 0,1 mg/l NAA, nuôi buồng tối, nhiệt độ http://jst.tnu.edu.vn 114 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 28ºC 48 Đồng thời tiến hành cấy 50 mẫu đối chứng không lây nhiễm vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens môi trường đồng nuôi cấy Sau 48 đồng nuôi cấy, mẫu xoan rửa qua nước cất vô trùng lần, sau chuyển sang rửa nước cất vơ trùng có bổ sung Cefotaxime 500 mg/l 10 phút Đặt mẫu lên giấy thấm vô trùng, thấm khô cấy chuyển sang mơi trường tái sinh có bổ sung kháng sinh chọn lọc 2.2.3 Kiểm tra có mặt gen chuyển phương pháp PCR Các dòng xoan ta sau khoảng tuần sinh trưởng nhà lưới, sử dụng phương pháp PCR kiểm tra có mặt gen chuyển với cặp mồi đặc hiệu GA20ox-F (5’-CCCGGGATGGCCGT AAGTTTCGTAACAA-3’) GA20ox-R (5’-GAGCTCTCACAGATCCTCTTCTGAGATGA3’) theo chu trình nhiệt 94oC/4 phút; 30 chu kỳ [94oC/40 giây; 56oC/40 giây; 72oC/1 phút] 72oC/7 phút; giữ 4oC để bảo quản Sử dụng gel agarose 0,8% để điện di kiểm tra sản phẩm phản ứng PCR Nhuộm dung dịch ethidium bromine, sau quan sát đèn UV 2.2.4 Phân tích biểu gen chuyển mức phiên mã kỹ thuật RT-PCR RNA tổng số tách từ rễ dòng xoan ta chuyển gen dùng để tổng hợp cDNA thực phản ứng RT-PCR với cặp mồi đặc hiệu GA20ox-Frt (5’-GGCGATACTTTCATGGC TCT-3’), GA20ox-Rrt (5’-GAGCTCTCACAGATCCTCTTCT-3’), GADPH-F (5’-GGCTGTG GGAAAGGTCTTGCC-3’) GADPH-R (5’-CTAGCTTCCTTCGCCAGCCTC-3’) 2.2.5 Đánh giá sinh trưởng xoan chuyển gen Cây xoan ta chuyển gen trồng nhà lưới, theo dõi đo tiêu sinh trưởng chiều cao (cm), đếm số đốt/cây sau tuần 2.2.6 Phân tích giải phẫu Đốt thân thứ xoan tháng tuổi dùng để giải phẫu phân tích Lát cắt ngang thân nhuộm với 0,05% toluidine blue O (trên) 2% phloroglucinol/HCl (dưới) độ phóng đại 10x (a), ngang tương đương với 5000 µm độ phóng đại 100x (b), ngang tương đương với 500 µm 2.2.7 Phân tích xử lý số liệu Sử dụng chương trình Excel 2016 để tính giá trị trung bình, độ lệch chuẩn (σ) cho liệu định lượng Dùng phương pháp giới hạn sai khác nhỏ LSD0,05 đánh giá sai khác giá trị trung bình [10] Các tiêu chiều cao cây, số đốt, độ dày thành tế bào, số lượng tế bào sợi xylem, độ rộng vùng xylem phân tích thống kê nghiên cứu Kết bàn luận 3.1 Tạo dòng xoan ta chuyển gen Trong nghiên cứu này, cấu trúc mang gen chuyển GA20ox điều khiển promoter GmPrP2 đưa vào mẫu mô xoan ta thông qua vi khuẩn A.tumefaciens Các giai đoạn q trình chuyển gen thể tóm lược Hình Từ 750 mẫu ban đầu, sau đồng ni cấy với vi khuẩn A.tumefaciens mang vector đích, có 331 mẫu cảm ứng tái sinh (tương ứng 44,1%), thu 213 chồi tái sinh nuôi cấy mơi trường chọn lọc, 35 dịng sống sót sinh trưởng mơi trường chọn lọc, tỷ lệ tạo dịng mang gen GA20ox 4,67%, hiệu suất cụ thể lơ thí nghiệm thể chi tiết Bảng Hiệu suất chuyển gen thấp so với công bố trước tác giả xoan ta [9], khác biệt cấu trúc casstte chuyển gen http://jst.tnu.edu.vn 115 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 Cấu trúc chuyển Lơ thí nghiệm Số mẫu Đối GmPrP2:: chứng GA20ox Hình Hình ảnh giai đoạn trình tạo dòng xoan mang gen chuyển GA20ox (a) Vật liệu để chuyển gen; (b) Đồng nuôi cấy thân mầm với vi khuẩn A tumefaciens, (c) Tái sinh chồi; (d), (e) Chọn lọc chồi; (f) Cây xoan ta mang gen chuyển sinh trưởng môi trường tự nhiên Bảng Thống kê kết tỉ lệ tạo dòng xoan mang gen chuyển GA20ox Số mẫu cảm ứng tạo chồi Tổng số 1* 2* Tổng số 250 250 250 750 50 50 100 Chọn lọc chồi Số lượng Số chồi tách Số chồi sống sót rễ 97 118 116 331 39 43 82 58 72 83 213 26 32 58 11 15 35 32 33 Chú thích: 1* 2* chồi ni cấy môi trường chọn lọc không chứa kháng sinh GA20ox nghiên cứu biểu xoan ta điều khiển promoter 35S, cho thấy dòng chuyển gen sinh trưởng mạnh mẽ so với dịng xoan ta khơng chuyển gen [4] Sự biểu StGA20ox1 khoai tây điều khiển promoter 35S promoter đặc hiệu STLS1 cho thấy mức độ biểu mRNA cao so với dòng đối chứng, thể sinh trưởng kéo dài đặc trưng giống xử lý GA ngoại sinh [11] Ở đậu Hà Lan, GA chứng minh di chuyển từ rễ đến thân từ thân trở lại rễ [12] Do đó, biểu đặc hiệu GA20ox đặc hiệu rễ xoan ta dự đoán tạo dòng xoan ta sinh trưởng, phát triển tốt 3.2 Kiểm tra có mặt gen chuyển GA20ox PCR kỹ thuật sử dụng phổ biến sàng lọc chuyển gen có tính xác cao, đơn giản rút ngắn thời gian [13] DNA tổng số thu từ xoan ta trồng nhà lưới dùng làm khuôn phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu Kết phản ứng PCR, mẫu xuất băng DNA có kích thước ~1,2 kp mang gen chuyển Sau tiến hành phản ứng PCR với dòng xoan ta, kết điện di kiểm tra sản phẩm thể Hình http://jst.tnu.edu.vn 116 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 Hình Hình ảnh điện di kiểm tra dòng xoan ta gel agarose 0,8% (w/v) T16, 20, 22: dòng xoan ta chuyển cấu trúc GmPrP2::GA20ox; (B): (+), (-) Đối chứng dương và đối chứng âm; (M) Thang DNA chuẩn Kết sàng lọc phân tích phân tử cho thấy 35 dịng xoan ta có 15 dịng mang gen chuyển GA20ox Các dòng xoan ta sử dụng cho nghiên cứu 3.3 Đánh giá biểu hiện gen chuyển mức mRNA Rễ 03 số 15 dòng xoan ta mang cấu trúc GmPrP2:GA20ox dùng để kiểm tra biểu mức phiên mã nhằm đánh giá bước đầu hoạt động gen chuyển dòng chuyển gen Kết phản ứng RT-PCR rễ thể Hình Hình Hình ảnh điện di sản phẩm RT-PCR gen chuyển GA20ox dòng xoan ta GmPrP2:GA20ox (M) Thang DNA chuẩn kb Gen GA20ox có kích thước ~1,2 kp, vùng mã hóa có kích thước khoảng 0,3 kb, kết thí nghiệm kiểm tra mức độ hoạt động cấu trúc mang gen chuyển thể hình cho thấy, dịng xoan ta T16, T20, T22 cho hình ảnh với băng điện di có kích thước dự đốn Kết chứng minh cấu trúc mang gen chuyển GA20ox điều khiển promoter GmPrP2 sau đưa vào hoạt động biểu sản phẩm 3.4 Đánh giá khả sinh trưởng dòng xoan ta mang gen GA20ox Tác dụng sinh lý gibberellin tác động lớn tới sinh trưởng theo chiều dài thân, kéo dài lóng Gibberellin tác động mạnh theo chiều dọc lên pha giãn tế bào, chúng tơi đánh giá q trình sinh trưởng chiều cao số đốt dòng xoan ta mang gen GA20ox Dòng xoan ta chuyển gen trồng nhà lưới với điều kiện chăm sóc chế độ dinh dưỡng phù hợp Sau tuần, tiến hành đo chiều cao dịng chuyển gen Kết thí nghiệm thể Hình Hình Biểu đồ chiều cao ảnh đại diện dòng chuyển gen (Ghi chú: Giá trị thể giá trị trung bình lần nhắc lại Kí tự a, b, c cột số liệu thể sai khác mức ý nghĩa α=0,05) http://jst.tnu.edu.vn 117 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 Kết thể biểu đồ cho thấy, dịng chuyển gen có phát triển chiều cao tốt so với đối chứng Dịng T16 có chiều cao đạt gấp đơi (33,3 cm) so với dòng WT (16,2 cm), dòng chuyển gen có chiều cao thấp dịng cịn lại T22 (23,55 cm) dạt 1,5 lần so với đối chứng Số đốt đếm thời điểm tuần cho kết dịng chuyển gen có số đốt lớn dòng đối chứng Kết theo dõi thể biểu đồ Hình Hình Biểu đồ số đốt (Ghi chú: Kí tự a, b, c cột số liệu thể sai khác mức ý nghĩa α=0,05) Dòng T16 có số đốt trung bình 17, gấp gần lần số đốt dịng đối chứng (trung bình 9,3), cịn dịng T20 T22 có số đốt trung bình 13,67 13 gấp 1,5 với đối chứng Qua kết quan sát số liệu chiều cao số đốt cho thấy việc sử dụng promoter GmPrP2 mang gen GA20ox để chuyển vào xoan ta giúp cho phát triển cân đối không gặp tượng biểu mức GA20ox sử dụng promoter 35S nghiên cứu trước [6] 3.5 Đánh giá khả phát triển xylem dòng xoan ta mang gen GA20ox Theo Park cộng (2015), biểu gen mã hóa GA20ox promoter 35S dương thúc đẩy hình thành gỗ (xylem) kéo dài tế bào thực vật [7] Nghiên cứu đánh giá phát triển xylem dòng xoan ta mang gen mã hóa GA20ox promoter GmPrP2 đặc hiệu rễ cách giải phẫu đốt thân tuần tuổi Kết thí nghiệm thể Hình Hình Lát cắt ngang đốt thân thứ 8: a), ngang tương đương với 5000 µm và đợ phóng đại 100x (b), scale bar tương đương với 500 µm http://jst.tnu.edu.vn 118 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 Kết thống kê độ rộng vùng xylem, số lượng tế bào sợi xylem độ dày thành tế bào nghiên cứu phù hợp với công bố trước biểu gen mã hóa GA20ox dương điều khiển promoter 35S [7] Kết GA sinh tổng hợp xylem mở rộng, tiền chất tổng hợp GA phloem, sau vận chuyển đến xylem để thúc đẩy hình thành gỗ [14] Hình Biểu đồ thể đợ rợng vùng xylem, số lượng tế bào một sợi xylem và độ dày thành tế bào đốt thân thứ (Kí tự a, b, c cột số liệu thể sai khác mức ý nghĩa α=0,05) Kết thí nghiệm thể biểu đồ Hình cho thấy độ rộng vùng xylem mang gen chuyển rộng đối chứng Độ rộng vùng xylem cao quan sát thấy dòng T22, sau dịng T20 T16 Kết tương đồng với nghiên cứu trước sản phẩm GA20ox tác động đến biệt hóa thứ cấp xylem làm cho mang gen chuyển có vùng xylem lớn [15] Đối với tiêu số lượng tế bào sợi xylem cho kết tương tự cao dòng T22, sau dịng T20 T16, tất dịng thí nghiệm cho kết cao so với đối chứng WT Nhìn vào mức độ thể sai khác ta thấy có khác biệt rõ rệt dòng chuyển gen với dòng đối chứng Các dịng chuyển gen có chiều cao phát triển tốt độ rộng vùng xylem số lượng tế bào sợi xylem thấp (cụ thể thứ tự chiều cao T16, T20, T22 thứ tự độ rộng vùng xylem số lượng tế bào sợi xylem T22, T20, T16) Về tiêu độ dày thành tế bào khơng có khác biệt nhiều dòng xoan ta chuyển gen dòng đối chứng, khác biệt dịng khơng có ý nghĩa mặt thống kê Từ kết thí nghiệm thấy rằng, dịng mang gen chuyển có hệ sợi xylem phát triển dòng đối chứng mật độ số lượng tế bào sợi đảm bảo phát triển độ dày thành tế bào tương đương dòng đối chứng Kết luận Cấu trúc GmPrP2::GA20ox chuyển vào đoạn thân xoan ta tuần tuổi thơng qua vi khuẩn A tumefacien Tỷ lệ tạo dịng chuyển gen trung bình đạt 4,67% Bằng phân tích PCR với cặp mồi đặc hiệu, có 15 dịng chuyển gen số 35 dịng mơi trường chọn lọc mang cấu trúc chứa gen chuyển GmPrP2::GA20ox Gen chuyển điều khiển promoter GmPrP2 chứng minh hoạt động thơng qua phân tích RT-PCR Các dịng xoan mang gen chuyển mang trồng nhà lưới đánh giá sinh trưởng Sau tuần theo dõi, kết cho http://jst.tnu.edu.vn 119 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(14): 113 - 120 thấy tất dịng mang gen chuyển có chiều cao tốt so với đối chứng Đặc biệt, dịng T16 có chiều cao gấp đôi đối chứng; số đốt thân tương ứng với kết chiều cao Giải phẫu đốt thân thứ sau tuần tuổi để đánh giá phát triển hệ sợi xylem tế bào thu dịng mang gen chuyển có số mật độ xylem tế bào số lượng tế bào sợi xylem cao hẳn so với dịng đối chứng, độ dày thành tế bào dịng thí nghiệm đối chứng nhau, từ kết luận dòng mang gen chuyển sinh trưởng phát triển tốt so với dòng đối chứng TÀI LIỆU THAM KHẢO/ REFERENCES [1] T Pennington, Flora Neotropica Vol28: Meliaceae, ed: The New York Botanical Garden Press, 1981 [2] M C Carpinella, L M Giorda, C G Ferrayoli, and S M Palacios, "Antifungal effects of different organic extracts from Melia azedarach L on phytopathogenic fungi and their isolated active components," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol 51, pp 2506-2511, 2003 [3] G Schmidt, A A Ahmed, and M Breuer, "Effect of Melia azedarach extract on larval development and reproduction parameters of Spodoptera littoralis (Boisd.) and Agrotis ipsilon (Hufn.)(lep noctuidae)," Anzeiger für Schädlingskunde, Pflanzenschutz, Umweltschutz, vol 70, pp 4-12, 1997 [4] X D Do, V T Bui, V G Ho, V S Le, and H H Chu, "Transformation of gibberellin 20-oxidase encoded gene to paradise tree (Melia azedarach L.) via Agrobacterium tumefaciens," Vietnam Journal of Biotechnology, vol 9, no 2, pp 217-222, 2011 [5] L K Ly, T P Bui, P T Do, A V T Le, P Van Nguyen, and N B Pham, "Demonstration of improved plant growth and biomass production by At1g73160 promoter-controlled root-preferential expression of the AtGA20ox gene," Research Square, 2020, doi: https://doi.org/10.21203/rs.3.rs19585/v42020 [6] S Huang, A S Raman, J E Ream, H Fujiwara, R E Cerny, and S M Brown, "Overexpression of 20-oxidase confers a gibberellin-overproduction phenotype in Arabidopsis," Plant physiology, vol 118, pp 773-781, 1998 [7] E.-J Park, H.-T Kim, Y.-I Choi, C Lee, V P Nguyen, and H.-W Jeon, "Overexpression of gibberellin 20-oxidase1 from Pinus densiflora results in enhanced wood formation with gelatinous fiber development in a transgenic hybrid poplar," Tree Physiology, vol 35, pp 1264-1277, 2015 [8] Y.-X Hu, Y.-B Tao, and Z.-F Xu, "Overexpression of Jatropha Gibberellin 2-oxidase (JcGA2ox6) Induces Dwarfism and Smaller Leaves, Flowers and Fruits in Arabidopsis and Jatropha," Frontiers in Plant Science, vol 8, pp.1-12, 2017 [9] V T Bui, X D Do, V S Le, and H H Chu, "The high frequency of transformation procedure for expression of gus gene in chinaberry tree (Melia azedarach L.) using Agrobacterium," Journal of Biology, vol 35, pp 227-233, 2013 [10] V M Nguyen, V H La, and X P Ong, Methods in plant physiology Hanoi: Hanoi National University Publishing House, 2013 [11] E Carrera, J Bou, J L García-Martínez, and S Prat, "Changes in GA 20-oxidase gene expression strongly affect stem length, tuber induction and tuber yield of potato plants," The Plant Journal, vol 22, pp 247-256, 2000 [12] J Binenbaum, R Weinstain, and E Shani, "Gibberellin Localization and Transport in Plants," Trends in Plant Science, vol 23, pp 410-421, 2018 [13] T B Le, V C Phan, V H Nong, N H Truong, and Q H Le, Application of molecular techniques in the study of biological resources in Vietnam Ha Noi: Science and Technology Publishing House, 2003 [14] M Israelsson, B Sundberg, and T Moritz, "Tissue-specific localization of gibberellins and expression of gibberellin-biosynthetic and signaling genes in wood-forming tissues in aspen," Plant J, vol 44, pp 494-504, Nov 2005 [15] H W Jeon, J S Cho, E J Park, K H Han, Y I Choi, and J H Ko, "Developing xylem-preferential expression of PdGA20ox1, a gibberellin 20-oxidase from Pinus densiflora, improves woody biomass production in a hybrid poplar," Plant Biotechnol J, vol 14, pp 1161-70, Apr 2016 http://jst.tnu.edu.vn 120 Email: jst@tnu.edu.vn ... X D Do, V S Le, and H H Chu, "The high frequency of transformation procedure for expression of gus gene in chinaberry tree (Melia azedarach L.) using Agrobacterium," Journal of Biology, vol 35,... Bui, V G Ho, V S Le, and H H Chu, "Transformation of gibberellin 20-oxidase encoded gene to paradise tree (Melia azedarach L.) via Agrobacterium tumefaciens," Vietnam Journal of Biotechnology, vol... Le, P Van Nguyen, and N B Pham, "Demonstration of improved plant growth and biomass production by At1g73160 promoter- controlled root-preferential expression of the AtGA20ox gene, " Research Square,