Bài viết Chọn lọc một số chủng vi khuẩn lactic có hoạt tính probiotic ứng dụng trong nuôi cá vàng (Carassius auratus) được thực hiện với mục tiêu phân lập và tuyển chọn các chủng vi khuẩn lactic có tiềm năng ứng dụng làm probiotic trong nuôi cá vàng.
Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 CHỌN LỌC MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN LACTIC CĨ HOẠT TÍNH PROBIOTIC ỨNG DỤNG TRONG NI CÁ VÀNG (Carassius auratus) Đặng ị Nguyễn Xuân Trường1, Hoàng Văn Hồn2, Ngơ ị Ngọc Mai2, anh Tâm2, Vũ Hiền Anh2, Mai anh Tình3, Nguyễn Xn Cảnh2* TĨM TẮT Nghiên cứu thực với mục tiêu phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có tiềm ứng dụng làm probiotic nuôi cá vàng Trên môi trường MRS phân lập 16 chủng vi khuẩn lactic có khả phân giải CaCO3 từ mẫu ruột cá Trong đó, hai chủng vi khuẩn TBII.3 BC3 thể hoạt tính kháng khuẩn với Aeromonas hydrophila Hai chủng vi khuẩn có khả chịu acid, muối mật cao ổn định, có khả bám dính niêm mạc ruột cá vàng Nghiên cứu đặc điểm hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào kết hợp với đặc điểm sinh hoá cho thấy hai chủng TBII.3 BC3 có đặc điểm tương đồng với vi khuẩn Lactobacillus Các kết thu cho thấy, hai chủng TBII.3 BC3 sử dụng cho nghiên cứu Từ khoá: Cá vàng (Carassius auratus), Lactobacillus, Aeromonas hydrophila, probiotic I ĐẶT VẤN ĐỀ Sản xuất kinh doanh cá cảnh ngành kinh tế mũi nhọn đem lại giá trị cao có nhiều triển vọng lĩnh vực thủy sản eo FAO, tổng ngành công nghiệp cá cảnh trị giá khoảng 15 tỷ USD xuất cá cảnh toàn cầu tăng từ 181 triệu USD lên 372 triệu USD từ năm 2000 đến năm 2011 (Ladisa et al., 2017) Cá vàng (Carassius auratus) loài cá quan trọng mặt thương mại, chiếm ưu phổ biến toàn giới màu sắc, kiểu vây hình dạng thể hấp dẫn chúng Hơn nữa, cá vàng thích hợp để sử dụng việc nghiên cứu mối quan hệ nhân đôi gen, áp lực chọn lọc, thay đổi hệ thống phát triển tiến hóa hình thái (Abe and Ota, 2017) Việc ni cá vàng đơn giản địi hỏi phải xử lý, cho ăn trì điều kiện môi trường pH, nhiệt độ chất lượng nước thích hợp Ngành ni trồng thủy sản phát triển mạnh mang lại giá trị cao Tuy nhiên, trình canh tác gặp hạn chế dịch bệnh, ô nhiễm môi trường, thời tiết, gây cản trở phát triển trình sản xuất Nhiễm khuẩn thuỷ sản yếu tố gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sản lượng Để trì ngành ni trồng thủy sản bền vững, vài thập kỷ qua kháng sinh thuốc điều trị thường sử dụng để điều trị phòng ngừa bệnh truyền nhiễm, kèm với nguy xuất loại vi khuẩn gây bệnh kháng thuốc Do đó, phát triển phương pháp tự nhiên thân thiện với môi trường nuôi trồng không kháng sinh chấp nhận rộng rãi ngành nuôi trồng thủy sản toàn giới Probiotic vi sinh vật sống sử dụng với lượng vừa đủ mang lại lợi ích sức khỏe cho vật chủ, vi khuẩn lactic chứng minh có chức probiotics, có lợi với sức khỏe vật chủ bổ sung đủ số lượng đường ruột cách tạo acid lactic, ethanol bacteriocin Trong vài năm gần đây, việc sử dụng chế phẩm sinh học nuôi trồng thủy sản quan tâm nhiều khả kháng bệnh tác dụng thúc đẩy tăng trưởng chúng vật chủ mục tiêu Chế phẩm sinh học coi giải pháp thay tốt cho kháng sinh ngành nuôi trồng thủy sản, bổ sung probiotic giúp phục hồi hệ vi sinh vật cá mà không ảnh hưởng đến cấu trúc đa dạng quần xã vi sinh vật Nghiên cứu nhiều tác giả việc phát triển chế phẩm sinh học nuôi trồng thuỷ sản cho thấy tác dụng thúc đẩy tăng trưởng chúng Tuy nhiên nghiên cứu việc tuyển chọn chủng vi khuẩn probiotic cho cá vàng giúp kiểm sốt nguồn bệnh ni trồng thương mại cịn hạn chế Chính vậy, nghiên cứu thực Viện Sinh học Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Cơng ty cổ phần tập đồn Đức Hạnh Marphavet * Tác giả liên hệ, e-mail: nxcanh@vnua.edu.vn 104 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 với mong muốn phát hiện, xác định chủng vi khuẩn có tiềm ứng dụng làm probiotic nuôi cá vàng II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nghiên cứu sử dụng chủng vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá nước thu thập địa phương khác Chủng vi khuẩn kiểm định Aeromonas hydrophila cung cấp từ sưu tập giống lưu giữ môn Công nghệ Vi sinh, Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phân lập vi khuẩn lactic Một gram mẫu ruột cá nước qua xử lý nghiền mịn, trộn cho vào bình chứa 99 mL dung dịch nước muối sinh lý vơ trùng Dung dịch mẫu pha lỗng từ độ pha loãng 10-2 đến 10-6 Một trăm micro-lit dung dịch mẫu độ pha loãng 10-4, 10-5, 10-6 cấy trải môi trường MRS agar bổ sung 0,5% CaCO3, ủ mẫu 30oC 48 Những dòng vi khuẩn có hình dạng khuẩn lạc trắng đục, khơng màu, bờ láng, lồi, bìa nguyên chia thùy, làm tan CaCO3 (vòng halo) Các dòng vi khuẩn làm môi trường MRS agar đến thu khuẩn lạc đồng 2.2.2 Xác định khả kháng vi sinh vật gây bệnh chủng vi khuẩn phân lập Khả đối kháng với chủng vi sinh vật kiểm định Aeromonas hydrophila sàng lọc phương pháp khuếch tán đĩa thạch Các chủng vi khuẩn lactic nuôi cấy môi trường MRS dịch thể 30oC 48 Sau đó, dịch ni cấy ly tâm để thu phần dịch phía (điều chỉnh pH 6,5 NaOH để loại bỏ tác dụng acid lactic) Một trăm micro-lít dịch sau xử lý nhỏ vào giếng thạch đĩa petri cấy vi khuẩn kiểm định trước (vi khuẩn kiểm định ni môi trường LB dịch thể 30oC 24 giờ) Đĩa thạch sau đặt 4oC chuyển vào tủ nuôi 30oC quan sát kết sau 12 ni cấy Hoạt tính kháng khuẩn chủng phân lập thể qua vòng kháng khuẩn xuất quanh giếng thạch xác định hiệu số đường kính vịng kháng khuẩn đường kính giếng thạch ΔD = D – d (Trong đó: D: đường kính vịng kháng khuẩn (mm), d: đường kính giếng thạch (mm)) 2.2.3 Xác định khả chịu ảnh hưởng acid dày chủng vi khuẩn phân lập Sự thích ứng mơi trường acid dày chủng vi khuẩn xác định phương pháp theo mô tả Ramos cộng tác viên (2013) (đo bước sóng OD620nm) để đánh giá thích ứng mơi trường acid dày chủng vi khuẩn lactic qua lượng tế bào sống sót mơi trường có pH khác Các chủng vi khuẩn lactic sau 24 nuôi cấy 30oC, ly tâm dịch ni cấy 5.000 vịng/phút phút, loại bỏ dịch, thu cặn tế bào, rửa cặn tế bào nước cất đưa vào môi trường MRS dịch thể có dải pH từ 1,0 đến 4,0 (môi trường tương tự pH dày) Sau thời điểm giờ, giờ, đo độ đục môi trường sau thời gian nuôi cấy, so sánh giá trị OD chủng Khả chịu axit xác định dựa vào giá trị ∆OD > (hiệu số giá trị OD đo thời điểm giá trị OD đo thời điểm giờ) nồng độ pH 2.2.4 Xác định khả chịu muối mật chủng vi khuẩn tuyển chọn Mức độ chịu muối mật chủng vi khuẩn tuyển chọn xác định dựa phương pháp Gilliland cộng tác viên (1985) Vi khuẩn nuôi môi trường MRS dịch thể có bổ sung 0,3% muối mật 30oC Dựa vào giá trị OD620nm sau nuôi so với ban đầu tăng lên 0,3 đơn vị chủng có khả chịu muối mật DOD = OD4 – OD0 2.2.5 Xác định khả bám dính chủng vi khuẩn tuyển chọn Chủng vi khuẩn tuyển chọn nuôi môi trường MRS dịch thể 30oC 24 trước thử khả bám dính Mẫu cá vàng sử dụng nghiên cứu khoẻ mạnh, có trọng lượng khoảng 55 g ± g, nuôi tách riêng, cho nhịn ăn ngày Mẫu cá thí nghiệm cho ăn lần ngày vào lúc sáng chiều, sau cho ăn 30 phút bơm trực tiếp 700 µL dịch nuôi lỏng vi khuẩn Ở mẫu đối chứng cho ăn thức ăn mà không bơm thêm dịch nuôi cấy vi khuẩn Sau ngày nuôi thu phần tế bào biểu mô ruột cá vàng, rửa mẫu ruột đệm PBS (pH = 7) để loại bỏ tế bào khơng bám dính Khả bám dính chủng vi khuẩn đánh giá phương pháp cấy trải đếm số lượng vi khuẩn đĩa thạch MRS Sau tái phân lập, chủng so sánh đặc điểm hình thái, tế bào 105 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 đặc điểm sinh học với chủng vi khuẩn tuyển chọn để xác định khả bám dính chúng 2.2.6 Xác định đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn a) Đặc điểm hình thái tế bào Đặc điểm tế bào đặc điểm hình thái tiêu chí quan trọng góp phần việc phân loại, xác định vi sinh vật Các chủng vi khuẩn tuyển chọn nuôi cấy môi trường MRS để quan sát đặc điểm hình thái, màu sắc khuẩn lạc, hình thái tế bào xác định cách nhuộm Gram quan sát kính hiển vi b) Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng Các chủng vi khuẩn lactic nuôi cấy môi trường dịch thể MRS (pH = 6,5) ngưỡng nhiệt độ 30oC, 37oC, 40oC sau 24 nuôi cấy đo OD620nm (Nguyễn Quang Huy Trần uý Hằng, 2012) Xác định nhiệt độ ni cấy thích hợp cho chủng vi khuẩn (chiếm 18,75%) có khả đối kháng với vi khuẩn Aeromonas hydrophila bao gồm chủng TBII.3, BC3, TB6 Trong chủng TBII.3 thể khả đối kháng mạnh với vòng kháng khuẩn 21 mm, chủng BC3 TB6 có khả đối kháng với đường kính vịng kháng khuẩn 20 mm 19 mm (Hình 1) Kết phù hợp với nhiều nghiên cứu tác giả công bố trước Nghiên cứu Nguyễn Văn ành Nguyễn Ngọc Trai (2012) số 45 chủng Lactobacillus spp Phân lập chủng Lb12 có khả sản xuất bacteriocin ức chế Aeromonas hydrophila với đường kính vịng vơ khuẩn 8,3 mm Nghiên cứu Meidong cộng tác viên (2017) vi khuẩn lactic đối kháng Aeromonas hydrophila cho thấy từ 119 chủng phân lập có chủng vi khuẩn phân lập từ gạo lên men xác định Lactobacillus plantarum CR1T5 có khả kháng A Hydrophila mạnh 2.2.7 Xử lý số liệu Số liệu thu thập phân tích phương sai (ANOVA) nhân tố với mức ý nghĩa P < 0,05 sử dụng phần mềm Graphpad Prism version 9.0.2 2.3 ời gian địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu thực phịng thí nghiệm Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam từ 02/2021 đến 02/2022 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập vi khuẩn lactic Tiến hành phân lập chủng vi khuẩn lactic từ mẫu ruột cá thu thập Bình, Hưng Yên, Hà Nội, anh Hố mơi trường MRS bổ sung 0,5% CaCO3, kết thu 16 chủng vi khuẩn lactic có đặc tính trịn, bóng, bìa ngun, catalase âm tính theo mô tả Kandler Weiss (1986) Các chủng vi khuẩn tuyển chọn sử dụng cho nghiên cứu 3.2 Khả đối kháng vi khuẩn gây bệnh chủng vi khuẩn tuyển chọn Các chủng vi khuẩn phân lập kiểm tra khả ức chế sinh trưởng chủng vi khuẩn kiểm định Aeromonas hydrophila phương pháp khuếch tán đĩa thạch Kết cho thấy tổng số 16 chủng vi khuẩn phân lập có 03 chủng 106 Hình Khả đối kháng với Aeromonas hydrophila chủng phân lập 3.3 Khả chịu ảnh hưởng axit dày chủng vi khuẩn phân lập Khả chịu axit dày tiêu chí quan trọng để đánh giá khả sử dụng làm probiotic nuôi trồng thuỷ sản Một số nghiên cứu trước giới hạn pH 2,0 pH 3,0 thời gian thời gian sàng lọc chủng vi sinh vật có tiềm probiotic (Nguyễn ị Diễm Hương Đỗ ị Bích ủy, 2012) Kết khảo sát khả chịu pH thấp 16 chủng vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá dải pH từ 1,0 đến 4,0 cho thấy: có chủng TBII.3, BC3, TB6 có khả chịu pH thấp Điều hợp lý nồng độ pH ruột cá từ - nên chủng vi sinh vật sinh trưởng phát triển ruột cá có khả chịu pH thấp Ở pH = 1,0 2,0 tốc độ sinh trưởng chủng vi khuẩn yếu (∆OD sau tăng 0,1 đơn vị) pH = 3,0 4,0 vi khuẩn tồn sinh trưởng tốt Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 Các kết tương đối phù hợp với kết nghiên cứu Hoàng Quốc Khánh Phạm ị Lan anh (2011) cho thấy tất 15 chủng Lactobacillus sử dụng nghiên cứu có khả chịu pH = 3,0 Ramos cộng tác viên (2013) nghiên cứu khả chịu pH thấp 234 chủng vi khuẩn lactic phân lập từ số thực phẩm lên men truyền thống cho thấy, có 51 chủng có khả sinh trưởng pH = 2,0 sau Nghiên cứu Mishra Prasad (2005) cho thấy chủng Lactobacillus casei có khả chịu pH = 3,0 sau ni cấy, có chủng chịu pH = 2,0 Hình Khả chịu acid chủng TBII.3, BC3 TB6 dải pH từ 1,0 đến 4,0 Trong nghiên cứu chủng vi khuẩn TBII.3, BC3 thể khả chống chịu sinh trưởng mạnh mơi trường pH thấp, chủng TB6 có khả phát triển mơi trường pH thấp Các chủng vi khuẩn có khả sinh sống môi trường pH thấp đáp ứng tiêu chí quan trọng probiotic Do chúng tuyển chọn để thực nghiên cứu 3.4 Khả chịu muối mật chủng vi khuẩn tuyển chọn Các chủng vi khuẩn probiotic phát huy tác dụng đường tiêu hoá động vật chúng chịu muối mật (0,3% muối mật) ruột non (Zhou ctv., 2007) í nghiệm thực nhằm đánh giá khả chịu muối mật chủng vi khuẩn tuyển chọn cách xác định mật độ quang bước sóng 620 nm Kết thí nghiệm cho thấy, ba chủng vi khuẩn TBII.3, BC3 TB6 có khả tồn sinh trưởng môi trường MRS bổ sung 0,3% muối mật Cả chủng TBII.3, TB4,TB6, sau DOD đo bước sóng 620 nm đạt 0,4 (Hình 3) Kết nghiên cứu Mota cộng tác viên (2006) khả kháng muối mật Lb Acidophilus 2M14E bị ức chế mạnh, sau h pha log tăng khoảng 0,2 đơn vị OD 620 nm nồng độ mật bò 0,3%, Lb Acidophilus 2G14E tăng khoảng 0,4 Lb Acidophilus 5C14E bị ức chế trung bình tăng khoảng 0,5 đơn vị Từ kết nghiên cứu công bố kết hợp với kết thí nghiệm cho thấy ba chủng vi khuẩn tuyển chọn có khả chịu muối mật tốt, đáp ứng tiêu quan trọng chủng vi khuẩn probiotic Hình Khả chịu muối mật chủng tuyển chọn sau nuôi cấy Ghi chú: Các chữ khác ứng với giá trị sai khác giá trị trung bình khác có ý nghĩa độ tin cậy P < 0,05 107 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 3.5 Khả bám dính chủng vi khuẩn tuyển chọn Khả bám dính niêm mạc ruột tiêu chí quan trọng để tuyển chọn chủng vi khuẩn có tiềm probiotic Hai chủng vi khuẩn TBII.3 BC3 có khả chịu pH, muối mật đối kháng mạnh với A hydrophila sử dụng để nghiên cứu khả bám dính niêm mạc ruột cá vàng Hai chủng vi khuẩn nuôi lỏng môi trường MRS dịch thể, dịch nuôi cấy rửa để loại bỏ thành phần môi trường tạp chất khác Tế bào vi khuẩn sau bơm trực tiếp vào miệng cá vàng để thử nghiệm khả bám dính Kết phân lập sau ngày thử nghiệm mẫu tái phân lập từ ruột cá vàng xuất chủng vi khuẩn có đặc điểm hình thái, tế bào giống với hai chủng TBII.3 BC3, mẫu đối chứng khơng bổ sung vi sinh vật khơng phát vi khuẩn lactic (Hình 4) Chủng TBII.3 có khả bám dính tốt vào màng niêm mạc đường ruột khó bị rửa trơi so với chủng BC3 Hình Kết phân lập khả bám dính chủng vi khuẩn TBII.3 (A) chủng BC3 (B) 3.6 Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn 3.6.1 Đặc điểm hình thái tế bào Đặc điểm hình thái tế bào tiêu quan trọng cho việc phân loại vi sinh vật Kết quan sát đặc điểm tế bào kính hiển vi quang học có độ phóng đại 100X hai chủng vi khuẩn phương pháp nhuộm Gram cho thấy tế bào hai chủng TBII.3 BC3 Gram dương Trong tế bào chủng TBII.3 trực khuẩn hình que ngắn, chủng BC3 trực khuẩn hình que dài Căn vào đặc điểm hình thái, tế bào, khơng sinh bào tử không sinh catalase chủng vi khuẩn TBII.3 BC3 cho thấy chủng vi khuẩn lactic có đặc điểm tương tự Lactobacillus Qua cho thấy hai chủng TBII.3 BC3 thuộc chi Lactobacillus 108 3.6.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng Nhiệt độ nhân tố ảnh hưởng trực tiếp đến trình sinh trưởng phát triển vi khuẩn lactic qua tốc độ phản ứng sinh học, hóa học tế bào Nhiệt độ nuôi cấy không phù hợp gây ức chế enzyme, làm giảm tốc độ phản ứng trao đổi chất làm ảnh hưởng đến trình phát triển vi khuẩn lactic Hai chủng vi khuẩn Lactobacillus TBII.3 BC3 nuôi cấy môi trường MRS dịch thể nhiệt độ khác Kết nghiên cứu cho thấy hai chủng vi khuẩn TBII.3 BC3 sinh trưởng phát triển tốt 30oC (2,714 1,326), mức nhiệt 37oC (1,206 0,913) 40oC (0,875 0,849) khả sinh trưởng hai chủng vi khuẩn giảm so với mức nhiệt 30oC (Hình 5) Qua cho thấy, mức nhiệt 30oC nhiệt độ thích hợp ổn định cho sinh trưởng, phát triển hai chủng vi khuẩn TBII.3 BC3 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 Hình Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng chủng vi khuẩn TBII.3 BC3 Ghi chú: Các chữ khác ứng với giá trị sai khác giá trị trung bình khác có ý nghĩa độ tin cậy P < 0,05 IV KẾT LUẬN Đã phân lập 16 chủng vi khuẩn lactic từ mẫu ruột cá thu thập từ địa phương khác Các chủng phân lập có đặc điểm hình thái, tế bào đặc điểm sinh hóa giống với đặc điểm chủng vi khuẩn Lactobacillus Trong số 16 chủng vi khuẩn tuyển chọn 02 chủng TBII.3 BC3 có đặc điểm điển hình cho vi khuẩn probiotic bao gồm khả chịu acid, muối mật cao, có khả kháng với vi khuẩn Aeromonas hydrophila gây bệnh đường ruột có tính bám dính tốt với niêm mạc ruột cá vàng Hai chủng vi khuẩn Lactobacillus TBII.3 BC3 có tiềm sử dụng làm probiotic nuôi cá vàng TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn ị Diễm Hương Đỗ ị Bích uỷ, 2012 Xác định khảo sát số tính chất có lợi chủng Lactobacillus fermentum DC1 phân lập từ sản phẩm dưa cải Huế Tạp chí khoa học, Đại học Huế, 71: Nguyễn Quang Huy Trần uý Hằng, 2012 Phân lập chủng Bacillus có hoạt tính tạo màng sinh vật (bio lm) tác dụng kháng khuẩn chúng Tạp chí Sinh học, 34(1): 99-106 Hoàng Quốc Khánh Phạm ị Lan anh, 2011 Phân lập, định danh xác định chủng Lactobacillus có tiềm probiotic từ người Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ, 14(6): 62-76 Nguyễn Văn ành Nguyễn Ngọc Trai, 2012 Phân lập tuyển chọn vi khuẩn Lactobacillus sp Có khả ức chế vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ đốm đỏ cá tra Tạp chí khoa học, Đại học Cần ơ, 23a: 224-234 Abe G and Ota K.G., 2017 Evolutionary developmental transition from median to paired morphology of vertebrate ns: perspectives from twin-tail gold sh Developmental biology, 427(2): 251-257 Gilliland S., Nelson C & Maxwell C., 1985 Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus Applied and Environmental Microbiology, 49 (2): 377-381 Kandler O and Weiss N., (1986) Regular, non-sporing gram-positive rods In H A Sneath, N S Mair, M E Sharpe & J G Holt (Eds.), Bergey’s manual of systematic bacteriology, Williams and Wilkins, Baltimore: 1208-1234 Ladisa C., Bruni M & Lovatelli A., 2017 Overview of ornamental species aquaculture FAO Aquaculture Newsletter, 56: 39 Meidong R., Doolgindachbaporn S., Sakai K & Tongpim S., 2017 Isolation and selection of lactic acid bacteria from indigenous fermented foods for use as probiotics in tilapia sh Oreochromis niloticus Aquaculture, Aquarium, Conservation Legislation, 10 (2): 455-463 Mishra V and Prasad D., 2005 Application of in vitro methods for selection of Lactobacillus casei strains as potential probiotics International Journal of Food Microbiology, 103 (1): 109-115 Mota R.M., Moreira J.L.S., Souza M.R., Fátima Horta M., Teixeira S.M., Neumann E., Nicoli J.R & Nunes Á.C., 2006 Genetic transformation of novel isolates of chicken Lactobacillus bearing probiotic features for expression of heterologous proteins: a tool to develop live oral vaccines BMC Biotechnology, 6(1): 01-11 Ramos C.L., orsen L., Schwan R.F & Jespersen L., 2013 Strain-speci c probiotics properties of Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum and Lactobacillus brevis isolates from Brazilian food products Food Microbiology, 36(1): 22-29 Zhou, X.X., Pan, Y.J., Wang, Y.B., & Li, W.F., 2007 In vitro assessment of gastrointestinal viability of two photosynthetic bacteria, Rhodopseudomonas palustris and Rhodobacter sphaeroides Journal of Zhejiang University Science B, 8(9): 686-692 Selection of some isolated bacterial strains having probiotic activity for gold sh (Carassius auratus) farming Dang i Nguyen Xuan Truong, Duong Van Hoan, Ngo i Ngoc Mai, anh Tam, Vu Hien Anh, Mai anh Tinh, Nguyen Xuan Canh Abstract is study was carried out to isolate and select bacterial strains with the potential for probiotic applications in gold sh farming Sixteen strains of lactic acid bacteria capable of degrading CaCO3 were isolated from sh gut samples on MRS medium In which, two strains of TBII.3 and BC3 showed antibacterial activity against Aeromonas hydrophila 109 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 05(138)/2022 ese two strains of bacteria have high and stable acid and bile salt tolerance and can adhere to the intestinal mucosa of gold sh Studying the characteristics of colony morphology, cell morphology combined with biochemical characteristics, showed that both TBII.3 and BC3 strains have similar characteristics to Lactobacillus bacteria e obtained results show that TBII.3 and BC3 strains can be used for further studies Keywords: Gold sh (Carassius auratus), Lactobacillus, Aeromonas hydrophila, probiotic Ngày nhận bài: 02/5/2022 Ngày phản biện: 20/5/2022 Người phản biện: PGS.TS Phạm Ngày duyệt đăng: 30/6/2022 ị Tuyết Ngân NGHIÊN CỨU SINH SẢN VÀ ƯƠNG GIỐNG CUA ĐỒNG BẰNG CÁC LOẠI THỨC ĂN VÀ GIÁ THỂ KHÁC NHAU Nguyễn ị Trúc Linh1* TÓM TẮT Nghiên cứu sinh sản ương giống cua đồng (Somanniathelphusa germaini) loại thức ăn giá thể khác thực Trường Đại học Trà Vinh với mục tiêu tìm loại thức ăn thích hợp việc ni vỗ, sinh sản ương giống cua đồng, đồng thời xác định giá thể phù hợp ương giống cua Nghiên cứu gồm: (1) nuôi vỗ cua bố mẹ loại thức ăn khác nhau, (2) ương cua đồng loại thức ăn giá thể khác Các loại thức ăn bố trí gồm: thức ăn tơm sú, bột cá, bột đậu nành, ốc bươu vàng Kết thí nghiệm cho thấy thời gian cua đồng thí nghiệm đẻ trứng nghiệm thức thức ăn dao động từ 15 - 24 ngày nuôi vỗ Việc sử dụng thức ăn tơm sú nâng cao sức sinh sản cua đồng Tốc độ tăng trưởng cua cao ương cua giá thể lưới + gạch ống Tuy nhiên, tỷ lệ sống nghiệm thức giá thể bùn lại cao so với giá thể lưới gạch ống với nghiệm thức thức ăn Tốc độ tăng trưởng tỷ lệ sống cua thí nghiệm cao nghiệm thức thức ăn tôm sú thấp nghiệm thức thức ăn bột đậu nành Từ khóa: Cua đồng, thức ăn, giá thể I ĐẶT VẤN ĐỀ Cua đồng (Somanniathelphusa germaini) ăn dân dã quen thuộc người Việt Nam, nhiều người ưa chuộng phẩm chất thịt ngon, hàm lượng dinh dưỡng cao, chứa nhiều dưỡng chất như: đạm, béo, vitamin khoáng chất cần thiết khác Gần đây, số tỉnh đồng sông Cửu Long Đồng áp, Vĩnh Long, Trà Vinh, Ang Giang… xuất nghề nuôi cua đồng ao đất ( anh Dương, 2003) Mơ hình ni cua đồng cịn đem lại lợi nhuận cao mà chi phí đầu tư thấp Nguồn thức ăn cho cua dễ tìm nhẹ cơng chăm sóc, cua bán giá lợi nhuận cao Tuy nhiên, giống cua đồng chủ yếu vớt từ tự nhiên, số lượng ít, kích cỡ khơng đồng đều, không đáp ứng đủ Trường Đại học Trà Vinh * Địa liên hệ, e-mail: truclinh@tvu.edu.vn 110 cho nhu cầu người dân ni cua Song song đó, canh tác nông nghiệp, người dân sử dụng nhiều thuốc bảo vệ thực vật, phân bón hóa học, số chất gây hại cho thủy sinh vật đặc biệt cua đồng, làm cho nguồn lợi cua đồng ngày cạn kiệt Hơn nữa, thị hóa ngày gia tăng làm cho môi trường sống cua ngày bị thu hẹp êm vào đó, người dân khai thác triệt để cua tự nhiên nhiều hình thức dùng thuốc, giăng lưới,… làm cho nguồn lợi cua giảm xuống cấp trầm trọng Với suy giảm đáng kể nguồn lợi cua đồng tự nhiên giá cua đồng ngày tăng cần phải có nghiên cứu sản xuất giống cua đồng nhằm đáp ứng đủ nhu cầu giống cho người nuôi cua Nguyễn Chí Lâm cộng tác viên (2011) xác định chủ động để sản xuất giống cua ... thu 16 chủng vi khuẩn lactic có đặc tính trịn, bóng, bìa ngun, catalase âm tính theo mô tả Kandler Weiss (1986) Các chủng vi khuẩn tuyển chọn sử dụng cho nghiên cứu 3.2 Khả đối kháng vi khuẩn. .. thấy ba chủng vi khuẩn tuyển chọn có khả chịu muối mật tốt, đáp ứng tiêu quan trọng chủng vi khuẩn probiotic Hình Khả chịu muối mật chủng tuyển chọn sau nuôi cấy Ghi chú: Các chữ khác ứng với... cộng tác vi? ?n (2013) (đo bước sóng OD620nm) để đánh giá thích ứng mơi trường acid dày chủng vi khuẩn lactic qua lượng tế bào sống sót mơi trường có pH khác Các chủng vi khuẩn lactic sau 24 nuôi cấy