Nhân giống lan dendrobium bằng phương pháp gieo hạt in vitro

Luận văn Nhân giống lan Dendrobium phương pháp gieo hạt in-vitro LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp – 2005 Mở đầu PHẦN I: GIỚI THIỆU Trong năm gần với sách mở rộng đầu tư mặt Nhà nước, đời sống vật chất tinh thần người dân ngày cải thiện nâng cao Song song với nhu cầu vật chất nhu cầu tinh thần đặc biệt thiếu Từ lâu người thích trồng hoa, cảnh vừa để trang trí cho đẹp, vừa để giải trí tinh thần Mỗi người thích trồng loài hoa khác nhau, việc lựa chọn loài hoa thường tuỳ thuộc vào điều kiện khí hậu vùng đó, vẻ đẹp hoa, hoa trồng chăm sóc hay không Hoa lan nhiều người ưa thích, lẽ hoa lan có cấu trúc kiêu kì phức tạp, phận môi có nét chạm trổ tinh vi, lại phù hợp với điều kiện khí hậu Việt Nam, dễ chăm sóc người chọn loại hoa lan thích tuỳ theo túi tiền mà thoả mãn thú vui tao nhã Phong lan nước ta phong phú đa dạng, có nhiều giống khác như: Cattleya, Phalaenopsis, Oncidium, Mokara, Vanda, Dendrobium… chúng cho hoa đẹp mang nhiều màu sắc khác Nó dùng để trang trí, trưng bày, làm đẹp, dùng buổi lễ… hay người ta bán hoa cắt cành-kinh doanh Trong số có lẽ Dendrobium giống đặc sắc từ màu sắc, dạng hoa giống loài Mặc khác, Dendrobium dễ trồng, siêng hoa lâu tàn Do ưa chuộng trồng phổ biến nước ta nhằm phục vụ cho nhu cầu sống Các nhà trồng lan không ngừng tìm kiếm giống lan để thõa mãn hiếu kì đem bán Có hai cách để có giống lan Một là, sưu tập giống lan hoang dại rừng đem hóa, tạo điều kiện nhân tạo giống tự nhiên để lan hóa Phương pháp gặp nhiều rủi ro điều kiện môi trường không thuận lợi cho lan phát triển Hai là, tạo giống lan lai mới, lan lai mang đặc tính tốt vựơt trội bố mẹ, thỏa mãn nhu cầu người thưởng thức lan Tuy nhiên hai lan lai với đạt kết tạo trái cần phải kết hợp với phương pháp gieo hạt ống nghiệm để hạt lan nẩy mầm dễ dàng Có kiểm tra kết việc lai hai lan Xuất phát từ nhu cầu thực tiễn, phạm vi đề tài tiến hành nghiên cứu: Nhân giống lan Dendrobium phương pháp gieo hạt in-vitro SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU I Giới thiệu họ lan: 1.1 Đặc điểm chung: Các họ lan đánh giá loài hoa cao cấp vương quốc thảo mộc, bao gồm 25.000 ngàn loài khác nhau, với loài khám phá mô tả theo năm Do chúng phân bố vùng rộng lớn, trải dài từ đường xích đạo Bắc cực, từ đồng vùng núi băng tuyết, loài lan khác biệt nhau: Lan đất (phát triển mọc đất kháng nước); thực vật biểu sinh thực vật phụ sinh (phát triển phía mặt đất sống bám loại thảo mộc khác, thu hút chất dinh dưỡng nước từ môi trường xung quanh); thực vật phát triển mặt đá mặt đất (phát triển bề mặt môi trường cấy trồng) Những nhà sáng lập ngành Lan học đáng kể triết gia người Hy Lạp Theophrastus (372-287 trước Công nguyên) sau nhà thực vật học người Thụy Điển Linnaeus (1707-1778) Chính Theophrastus người sử dụng từ Hy Lạp “Orchis” để nhóm Lan [4] 1.2 Đặc điểm hình thái: 1.2.1 Cơ quan dinh dưỡng: Giả hành (thân giả): xuất loài lan đa thân Giả hành phận cần thiết cho sinh trưởng phát triển lan Giả hành thân lại chứa diệp lục, phận dự trữ nhiều chất dinh dưỡng cần thiết cho phát triển giả hành Giả hành quan dự trữ nước[11] Thân: Thân vẩy giả có nhiều hình dáng khác tùy theo giống lan Trên thân có đốt, đốt mọc nhánh lá bao Thân quan dự trữ nước chất dinh dưỡng, mầm hoa mầm mọc từ phần gốc phận thân rễ[12] Chỉ có loài đơn thân số loài giống Dendrobium Epidendrum vừa có giả hành, vừa có thân Các loài lan có thân thường quan dự trữ nước chất dinh dưỡng[11] Lá: quan dinh dưỡng hoa lan, xưởng chế tạo chất dinh dưỡng quang hợp Phiến thường có hình lưỡi kiếm dài, số lượng hình dạng khác tùy chủng loại lan khác [12] Lá mọc đối xứng qua gân hay không, sát gốc hay xếp cách có bẹ úp lên nhau, chia đốt đặn, có thoái hóa thành vẩy hay phình lên, mọng nước, hình dạng khác [11] Căn hành (thân-rễ): gặp lan đa thân Căn hành nơi cấu tạo quan dinh dưỡng mới, hành có nhiều mắt sống, chết SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoaù luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu hưu niên Mắt nơi hình thành mang nhiều rễ để nuôi sống lan [11] Rễ: lan đa thân, rễ thường hình thành từ hành loài đơn thân rễ mọc thẳng từ thân thường xen kẽ với Rễ không loài lan phụ sinh có trục bao quanh mô không chặt, giống bọt biển bao quanh gọi mạc Mạc hấp thụ nước không khí, tích trữ nước mưa sương đọng [11] 1.2.2 Cơ quan sinh sản: Hoa: tập hợp thành cụm hoa chùm hay Hoa lưỡng tính, đối xứng hai bên Bao hoa dạng cánh, rời nhau, xếp thành vòng: mảnh vòng (đài hoa) mảnh vòng (cánh hoa) bé mảnh thứ vòng Mảnh có hình dạng màu sắc khác hẳn, gọi cánh môi [13] Quả: khô, mở thành 3-6 mảnh Hạt nhỏ nhiều, thường nội nhũ Do nhẹ nên hạt dễ phát tán nhờ gió nhiều loài, có lông hút nước dùng để bắn hạt Phôi hạt phát triển yếu, không phân hóa thành quan Hạt muốn nẩy mầm cần có nấm cộng sinh [13] 1.3 Đặc điểm phân loại Orchidaceae họ lớn thuộc lớp Đơn tử diệp, phân bố khắp nơi giới [16] Ở vùng ôn đới, ta gặp nhiều loài sống đất địa lan; số loài hoại sinh không diệp lục sống nhờ vào chất mục nát đất; có loài Úc Châu sống ngầm đất nấm vùng nhiệt đới, ta gặp nhiều loài phụ sinh sống khác Cattleya, Oncidium, Laelia tập trung nhiều vùng Trung Mỹ; Đông Nam Á đặc sắc Dendrobium có Cypripedium, Phalaenopsis, Cymbidium có nguồn gốc Indonesia Một số loài lan sống đá thạch lan Cây lan chia làm hai nhóm [11]: Nhóm đơn thân: nhóm tăng trưởng chiều cao làm dài Nhóm đơn thân chia làm hai nhóm phụ: - Nhóm phụ mọc đối (Sarcanthinae): nhóm xếp thành hàng mọc đối nhau, hàng xen kẻ với hàng Gồm giống như: Vanda, Aerides, Phalaenopsis… - Nhóm phụ dẹp thẳng hay tròn (Campylocentrinae): Papilionanthe, Luisia… Nhóm đa thân: nhóm gồm tăng trưởng liên tục Căn vào cách hoa nhóm chia thành nhóm phụ: SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu - Nhóm hoa phía như: Cymbidium, Dendrobium, Oncidium… - Nhóm hoa đỉnh: Cattleya, Laelia, Epidendrum… Ngoài có số giống mang tính chất trung gian như: Centropetatum, Phachyphllum, Dichaea… Hình 2.1: Cấu tạo quan sinh sản a Cấu tạo hoa chi tiết b Quả lan chín Hình 2.2: Một số giống hoa đẹp họ Orchidaceae SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyeân Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 II Tổng quan tài liệu Giới thiệu Dendrobium 2.1 Nguồn gốc phân bố: Giống lan đặt tên vào năm 1799 Chữ Dendrobium có nguồn gốc chữ Hy Lạp Dendro có nghóa gỗ, lớn; bio sống, tất loài Dendrobium phụ sinh sống bám gỗ [16] Dendrobium phong phú chủng loại, lớn thứ nhì họ Lan với khoảng 1.600 loài phân bố vùng thuộc châu Á nhiệt đới, tập trung nhiều Đông Nam Á Úc châu [16] Điều kiện sinh thái Dendrobium đa dạng có nhiều loài mọc hoa vùng lạnh, có loài vùng nóng, có loài trung gian, có loài thích nghi với điều kiện khí hậu [11] 2.2 Vị trí phân loại: Lan Dendrobium thuộc: - Ngành : Angiospermatophyta - Lớp : Liliopsida (Monocotyledones) - Lớp phụ : Liliidae - Bộ : Orchidales - Họ : Orchidaceae - Giống : Dendrobium sp Hình 2.3: Tổng quan lan Dendrobium SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu 2.3 Đặc điểm hình thái Dendrobium loài đa thân với nhiều giả hành, giả hành thường mang thân với nhiều mọc xen kẽ, thân có nhiều mắt ngủ Căn hành với khoảng cách mắt ngắn Cattleya Hoa mọc từ thân thành chùm hay hoa cô độc [11] Hoa có màu trắng, vàng đến tím Thường đài sau nằm mình, đài bên dài dính lại với mép dính vào đáy trụ tạo thành phần chân trụ phía gọi cằm Môi gắn vào cằm, kéo dài phía sau tạo thành cựa, móc hay túi Môi nguyên hay có thùy, gai, sọc có lông hay không cánh hoa bên giống đài Trụ thấp Phần đực đỉnh trụ có nắp đậy, nắp gắn vào trụ nhờ ngắn phái sau khối phấn nhỏ dính lại với cặp, không vó, không gót Dendrobium chia làm nhóm theo dạng thân chúng: - Dạng thòng hay Nobile dạng thân mềm thường vùng lạnh Đà Lạt - Dạng đứng hay Phalaenopsis dạng thân cứng thường sống vùng có khí hậu nóng Cả Dendrobium nobile Dendrobium phalaenopsis có chung đặc điểm việc tạo lập giả hành biệt hóa chồi sơ khởi nách dọc theo giả hành; chúng lại khác biệt việc việc tạo lập chồi hoa - Dendrobium nobile hoa từ chồi sơ khởi giả hành trưởng thành Như Long tu, Giả hạc chúng hoa với giả hành rụng hết - Dendrobium phalaenopsis hoa mọc giả hành cũ lẫn giả hành giả hành mới, chồi non gần chồi phát triển thành vòi hoa Hình dạng Dendrobium biến thiên: - Nhóm có giả hành dài mang dọc theo chiều dài giả hành ấy, thường rụng hết hoa Long tu (Dendrobium primulinum), Ý thảo (Dendrobium gratio sissimum)… - Nhóm giả hành to ngắn , tận thường có 2-3 dai, bền, không rụng Phát hoa tập trung phần tạo thành chùm đứng hay thòng như: Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri), Thủy tiên vàng (Dendrobium thyrisflorum), Vảy cá (Dendrobium lindleyi)… - Nhóm cá giả hành mảnh mai, dài hay ngắn, có dọc theo chiều dài chúng, dai bền không rụng Hoa thường cô độc nách Hương duyên (Dendrobium revolutum)… Ngoài có số loài Dendrobium khác thường trồng: - Kim điệp (Dendrobium chysotosum var delacuorii): Hoa vàng tươi, môi vàng trung tâm đậm SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu - Nhất điểm hồng (Dendrobium dracoins): Hoa trắng bóng sáp với môi sọc đỏ đáy - Thạch hộc (Dendrobium crumenatum): Hoa trắng, môi có bớt vàng, thơm mau tàn, hoa nở rộ lúc - Giả hạc (Dendrobium anosmum, Dendrobium superbum): Hoa màu hường, có hai bớt đậm màu trắng hay tuyền Rất thơm [16] 2.4 Các điều kiện để nuôi trồng lan Dendrobium sp.: 2.4.1 Nhiệt độ Nhiệt độ tác động lan qua đường quang tổng hợp, cường độ quang hợp gia tăng theo nhiệt độ, thường nhiệt độ tăng 10% tốc độ quang hợp tăng lên gấp đôi Nhiệt độ ảnh hưởng đến hoa số loài lan lan Bạch câu Dendrobium crumenatum đòi hỏi giảm nhiệt độ khoảng 5-60C vài giây ngày sau chúng nở hoa đồng loạt 18,50 Dendrobium nobile tăng trưởng mà không hoa chúng hoa nhiệt độ hạ xuống 130C hay thấp [16] Căn vào nhu cầu nhiệt độ, tạm chia Dendrobium thành hai nhóm chính: - Nhóm ưa lạnh sinh trưởng phát triển tốt nhiệt độ lý tưởng 150C, gồm giống lấy từ vùng cao nguyên độ cao 1.000m loài trồng nhiệt độ cao 250C, sống, sống hoa - Nhóm ưa nóng, nhiệt độ thích hợp cho loài nhóm 250C, gồm đa số giống Dendrobium vùng nhiệt đới, loài giống Dendrobium lai trồng thành phố Hồ Chí Minh tỉnh phía Nam… - Ngoài ra, có nhóm Dendrobium trung gian sống vùng lạnh vùng nóng, vùng lạnh sinh trưởng hoa nhiều Dendrobium primulinum, Dendrobium farmeri nhiệt độ lý tưởng loài 200C [11] 2.4.2 m độ Các lan, phong lan, sống bám cao, chúng lấy nước từ trận mưa, từ nước không khí Chính ẩm độ định diện loài phong lan [16] Thông thường ẩm độ tương đối tối thiểu 70% thích hợp cho tăng trưởng nhiều loài Tuy nhiên ẩm độ lý tưởng ẩm độ vùng xứ mà loài lan tìm thấy Dendrobium đa số giống lan khác phát triển tốt không khí ẩm thoáng m độ tương đối cần thiết 40-70% Cấu tạo giá thể ẩm úng rễ bị thối biểu keiki mọc từ phần thân [11] SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyeân Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu 2.4.3 nh sáng nh sáng điều kiện cần thiết cho sinh trưởng phát triển lan thông qua trình quang hợp Đây yếu tố định trổ hoa lan [16] Dendrobium giống ưa sáng, trồng điều kiện ánh sáng trực tiếp hay khuếch tán nh sáng hữu hiệu cho giống Dendrobium 70% Nếu thừa ánh sáng, bị vàng lá, giả hành bị teo lại, xấu thích nghi dần, hoa nhiều đẹp Nếu thiếu ánh sáng, bị thoái hóa rõ rệt, èo uột số lượng hoa [11] 2.4.4 Nhu cầu phân bón Dendrobium thân đứng đòi hỏi dinh dưỡng cao, chúng cần nhiều phân bón dùng nhiều dạng phân bón khác Còn loại Dendrobium thân thòng hấp thu phân chậm nên phải dùng nồng độ thật loãng Các loại phân hữu như: phân heo, bánh dầu khô, phân tôm cá, phân trâu bò khô… dùng tốt cách pha loãng với nước tưới, vò chặt viên đặt bề mặt giá thể, rễ lan hấp thụ dưỡng chất phóng thích qua trình tưới nước Các loại phân vô dùng thường có công thức 30-10-10 dùng lần/tuần với nồng độ muỗng cà phê/4lít Trong suốt mùa tăng trưởng, ta bón phân 10-2030 làm lần/tuần để tạo sức chịu đựng cho trước bước vào mùa nghỉ Trong mùa tăng trưởng có nụ hoa, ta thay phân 30-10-10 phân 10-2020 với chu kỳ bón hoa tàn Trong mùa nghỉ hoàn toàn không bón phân cho Dendrobium, hay giảm không bón phân cho Dendrobium hoàn tất thời kì tăng trưởng năm Không nên dùng loại phân riêng rẽ, thường phân bón dùng dạng hỗn hợp bổ sung thêm chất phụ gia sinh tố nguyên tố vi lượng 2.4.5 Sâu bệnh vấn đề khác Vì lan Dendrobium cần bón nhiều loại phân hữu khác môi trường sơ dừa mục nát sau thời gian ngắn trồng Đây nguyên nhân gây nhiều sâu bệnh hại Một loại rệp dính màu vàng, kích thước bé thường xuất bề mặt Loại gây tác hại qua việc hút nhựa Đối với loài côn trùng cắn phá Dendrobium loại trừ chúng tương đối dễ dàng Serpa, Bassa, nồng độ 1/500 Mặc dù Dendrobium kháng bệnh mạnh, nhiên bị nấm virus công điều kiện vệ sinh Nguy hiểm bệnh khô thân gần gốc giả hành loài virus thâm nhập làm cho giả hành bị khô chết Có thể ngừa bệnh cách nửa tháng xịt Topsil, Zineb, Benomyl với nồng độ 1/400 [11] SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp - 2005 Tổng quan tài liệu Hình 2.4: Một số dạng hoa đẹp giống Dendrobium SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 II Kết – Thảo luận Download» http://Agriviet.Com Thí nghiệm 2: Các lan sau khử trùng gieo vào loại môi trường khác nhau, theo dõi sau tuần nuôi cấy: Môi trường MS KC Ký hiệu Nồng độ BA (ppm) Số mẫu hóa nâu (1 tuần) % Số mẫu nảy mầm (2 tuần) % Số mẫu hóa xanh (4 tuần) % M0 100 83,33 93,33 M1 100 90 100 K0 100 50 63,33 K1 100 43,33 80 Baûng 3: Sự nảy mầm hạt lan môi trường Knudson’C MS bổ sung ppm BA - Một tuần sau gieo vào môi trường, tất mẫu hạt lan hóa nâu vàng - Sau tuần, mẫu bắt đầu có tượng nẩy mầm có khác biệt rõ rệt loại môi trường khác - Sau tuần, hạt có màu vàng, dần chuyển sang xanh có tiếp xúc với ánh sáng, tạo diệp lục tố Dựa vào bảng kết quả, nhận thấy: - Hạt gieo môi trường MS có tỷ lệ nẩy mầm cao (8090%), tất mẫu hạt có tượng phình lên chuyển sang vàng Trong đó, mẫu hạt gieo môi trường Knudson’C, tỷ lệ nẩy mầm thấp (40-50%) Trong thời điểm khác biệt loại môi trường có kích thích tố Có thể thời điểm này, kích thích tố ảnh hưởng khả nẩy mầm hạt - Sau tuần, hạt lan hóa xanh Trong môi trường MS có bổ sung BA 1ppm, tất mẫu hạt hóa xanh kích thích tố tỷ lệ 93,33% Trong môi trường KC, tỷ lệ mẫu hóa xanh thấp hơn, có khác biệt rõ rệt môi trường có kích thích tố Môi trường KC có BA tỷ lệ nẩy mầm cao (80%) so với BA (63,33%) Trong giai đoạn này, vai trò kích thích tố có biểu rõ rệt Các mẫu hạt SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 33 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Download» http://Agriviet.Com Kết – Thảo luận gieo môi trường có kích thích tố, có màu xanh đậm hơn, hạt phình to ™ Từ kết ghi nhận cho thấy, nồng độ kích thích tố, môi trường MS có nồng độ khoáng cao hơn, hạt lan nẩy mầm nhanh so với môi trường Knudson’C Vậy, môi trường MS có ppm BA cho nẩy mầm hạt lan Dendrobium tốt so với môi trường Knudson’C SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 34 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết – Thảo luận Download» http://Agriviet.Com Thí nghiệm 3: III Các mẫu hạt lan sau hóa xanh, cấy chuyền qua môi trường khác để tạo protocorm, theo dõi sau tuần nuôi cấy: Môi trường Ký hiệu MS KC Nồng độ BA (ppm) Tình trạng tạo protocorm Sau tuần Sau tuaàn M0 0 + M2 + + K0 + ++ K2 ++ +++ Baûng 4: Kết tạo protocorm môi trường Knudson’C MS bổ sung ppm BA Với : tạo protocorm + : tạo thành protocorm ++ : tạo thành protocorm nhiều +++ : tạo thành protocorm nhiều - Tuần môi trường không tạo protocorm - Sau tuần, hạt gieo bắt đầu biến đổi tạo thành đám tế bào có màu xanh - Số lượng protocorm ngày tăng nhanh sau 3-4 tuần, phình to lên, có mầm Dựa vào bảng kết nhận thấy: - Hai tuần sau cấy, môi trường MS, hạt lan biến đổi rõ rệt, tạo thành protocorm Sau bốn tuần, số lượng protocorm tạo thành nhiều, đường kính nhỏ, màu xanh trắng, mầm dài khoảng 3-4 mm - Trong môi trường Knudson’C, sau hai tuần tất hạt lan biến đổi rõ rệt, đường kính protocorm khoảng 2mm, protocorm có lông hút Sau tuần, số lượng protocorm môi trường Knudson’C phát triển nhanh, màu xanh, mầm dài khoảng 5-7 mm SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 35 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 - Download» http://Agriviet.Com Kết – Thảo luận Trong môi trường Knudson’C có chứa BA, sốù lượng protocorm tạo tương đương với môi trường không chứa BA Nhưng protocorm phát triển tương đối nhanh hơn, tăng trưởng protocorm đồng với nhau, có nhiều mầm khỏe, màu xanh tươi Trong môi trường có chứa kích thích tố BA, cytokinin có khả kích thích điều chỉnh phân bào, tăng chuyển hóa chất dinh dưỡng [10] ™ Tóm lại: - Từ kết ghi nhận thời gian số lượng protocorm tạo thành ta kết luận rằng: tạo protocorm môi trường Knudson’C có bổ sung kích thích tố BA tốt - Do tạo thành protocorm môi trường Knudson’C tốt hơn, nên tất thí nghiệm sau, thực môi trường Knudson’C SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 36 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Download» http://Agriviet.Com Kết – Thảo luận Trang 37 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoùa luận tốt nghiệp – 2005 IV Kết – Thảo luận Download» http://Agriviet.Com Thí nghiệm 4: Các protocorm tạo thành từ hạt có chất lượng đưa vào thí nghiệm nhân protocorm, sau tuần theo dõi kết ghi nhận sau: Kích thích tố Nồng độ (ppm) Ký hiệu Số lượng chồi Chiều cao chồi (cm) Chiều dài (cm) Ghi 0 K0 0 Protocorm nhỏ, K1 1-2 1,5-2 0,5-0,7 Protocorm xanh, K2 4-6 1,5-2,5 0,5-0,7 Protocorm nhiều, to, xanh, có lông hút K3 1-2 1,3-1,5 0,5-0,7 Protocorm nhiều nhỏ 0,1 K4 4-6 2-3,5 1,5-2 Protocorm xanh, to, có lông hút, 0,5 K5 5-7 3-4 2-3 Protocorm xanh, K6 4-5 2-3 1,5-2,5 Protocorm nhỏ, vàng, BA 2ppm BA + IBA Bảng 5: Kết nhân protocorm môi trường Knudson’C với kích thích tố khác - Sau tuần, bắt đầu xuất protocorm mới, có lông hút Số lượng kích thước thay đổi tuỳ theo môi trường - Sau tuần, có số protocorm bật chồi - Sau tuần chồi phát triển mạnh, tuỳ theo môi trường mà số lượng chiều cao chồi khác Dựa vào bảng kết nhận thấy: - Sau tuần, môi trường K1, không thấy xuất protocorm Sang đến tuần thứ 3, xuất protocorm Số lượng protocorm tạo thành ít, có màu xanh Một số protocorm bật chồi vào tuần thứ 4, số lượng ít, khoảng 1-2 chồi - môi trường K2, nhân protocorm diễn nhanh mạnh Sau tuần, xuất nhiều protocorm Sau tuần, số lượng protocorm tạo thành nhiều, protocorm xanh mướt, to, xung quanh có nhiều lông tơ trắng mịn Vào SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 38 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết – Thảo luận tuần thứ 3, có số protocorm bật chồi, số lượng chồi nhiều, chiều cao chồi thấp - Số lượng protocorm tạo thành nhiều môi trường K3, sau tuần, xuất protocorm Sang đến tuần 4, số lượng protocorm nhiều, nhiên protocorm nhỏ, có số protocorm có màu trắng Hầu hết protocorm không bật chồi ¾ Trong môi trường K1, K2, K3, tác dụng kích thích tố BA, mẫu cấy tạo thành protocorm Các protocorm tạo thành nhiều nồng độ kích thích tố tăng lên, chất lượng protocorm ngược lại (protocorm nhỏ trắng) Như vậy, với nồng độ kích thích tố thích hợp tác động tốt đến phân chia tế bào, nồng độ cao, gây độc - Sau tuần, môi trường K4, K5, K6, thấy xuất protocorm Tuy nhiên, sau tuần, số lượng protocorm không đổi Trong môi trường K5 K6, protocorm có màu xanh mướt, to, có lông hút Số lượng protocorm môi trường K6, hơn, protocorm có màu xanh vàng, nhỏ - Sang đến tuần thứ 3, protocorm bật chồi, sang đến tuần thứ protocorm phát triển mạnh, giai đoạn hầu hết mẫu hạn chế tạo protocorm mà chủ yếu tạo chồi So sánh cacù môi trường, môi trường K5 tạo thêm nhiều chồi hơn, chồi có màu xanh mướt, bật chồi chồi xanh tốt đồng loạt hai môi trường lại, có số chồi có rễ nhỏ, màu trắng, dài từ 0,1-0,3 cm ¾ Có khác biệt rõ rệt số lượng chồi mới, chiều cao chồi chiều dài môi trường có kích thích tố BA, môi trường có BA IAA môi trường có BA, sang đến tuần thứ 4, protocorm bật chồi, số lượng ít, chồi phát triển chậm, thấp Các môi trường chủ yếu tạo thêm protocorm mới, tạo chồi Trong đó, môi trường có BA IAA, mẫu cấy chủ yếu tạo chồi, hạn chế việc tạo thành protocorm Như vậy, nhận thấy, kết hợp BA IAA có lợi cho viêc tạo chồi mới, phát triển để sử dụng cho thí nghiệm sau ™ Tóm lại: - Đối với thí nghiệm nhân protocorm, sử dụng môi trường K2 K5 tốt, sử dụng môi trường K5, tạo thành nhiều chồi hơn, có chiều cao, thích hợp cho thí nghiệm rễ sau - Nếu sử dụng môi trường K5 cho trình nhân giống hệ số nhân là: SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 39 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết – Thảo luận Cụm chồi ban đầu tách làm 3, cấy chuyền sang môi trường K5 Sau tuần, từ cụm chồi, thu chồi cao 3-4 cm Như mặt lý thuyết, ta tính hệ số nhân chồi 3x412 chồi/năm Sau tuần, có chiều cao 3-4 cm có 2-3 tách để đưa vào thí nghiệm tạo rễ Các chồi thấp tách ra, tiếp tục đưa vào môi trường K5, để phát triển chiều cao Các protocorm lại đựơc tách đưa vào môi trường K2 SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 40 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Kết – Thảo luận Trang 41 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 V Kết – Thảo luận Thí nghiệm 5: Những thí nghiệm có chiều cao từ 3-4 cm, có từ 2-3 cấy vào môi trường rễ, sau tuần theo dõi kết ghi nhận sau: Kích thích tố Nồng độ (ppm) Ký hiệu Số lượng rễ Chiều dài rễ (cm) Tỷ lệ rễ(%) K0 1-3 0,3-0,7 63,9 Phát triển chiều cao 0,1 KN1 2-4 0,7-2 83,33 Cây thấp, phát triển không 0,5 KN2 4-6 2-4 94,44 Lá dài, xanh, phát triển tốt đồng KN3 3-4 1-5 90,22 Thân ốm, rễ dài 0,1 KI1 1-3 0,5-1,2 62,5 Ít rễ, ngắn 0,5 KI2 2-3 1-4,5 69,44 Phát triển tốt, không đều, thân thấp, rễ dài KI3 1-3 1,5-3,5 66,67 Cây thấp, rễ ít, dài 0,1 KB1 2-4 2-3 77,78 Ít lá, phát triển không 0,5 KB2 1-3 1-2,5 91,67 Lá màu xanh phát triển tốt, đồng KB3 1-3 1-5 72,22 Nhiều lá, thân ngắn, rễ dài NAA IAA IBA Ghi Bảng 6: Kết thí nghiệm tạo rễ môi trường Knudson’C, bổ sung NAA, IAA, IBA với nồng độ khác (sau tuần) - Hai tuần sau cấy vào môi trường rễ, bắt đầu tăng chiều cao rễ xuất - Sau tuần, rễ phát triển mạnh, tùy theo loại môi trường mà rễ, phát triển khác SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 42 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết – Thảo luận Dựa vào bảng kết nhận thấy: - Trong môi trường đối chứng K0 , sau tuần, chồi rễ chậm, có 1-3 rễ chiều dài từ 0,3-0,7 cm Trong môi trường có bổ sung kích thích tố, kích thước rễ có biến đổi rõ rệt tùy theo tùy loại kích thích tố nồng độ - Trong môi trường bổ sung kích thích tố IAA, chênh lệch tỷ lệ rễ, tỷ lệ thấp 60% Số lượng rễ khoảng 1-3, mập dài Cây thấp, số lượng ít, 2-3 lá, có màu xanh đậm - Các môi trường KB1, KB2, KB3, tỷ lệ rễ cao, có chênh lệch rõ ràng Môi trường KB2 có tỷ lệ rễ cao hơn, rễ ngắn có so với môi trường KB3 - Trong môitrường KN1, KN2, KN3, có tỷ lệ rễ cao Các có nhiều lá, dài, có màu xanh mướt Cây cao, khoẻ có nhiều rễ, dài Trong môi trường KN2, tỷ lệ rễ cao (94,44%), rễ dài, mập, có màu xanh Cây có nhiều lá, khoẻ mạnh phát triển tốt chuyển sang giai đoạn chuyển tiếp trước vườn ươm ¾ Nhìn chung, tác dụng kích thích tố NAA, IAA, IBA auxin, gây giảm độ pH thành tế bào nên hoạt hoá enzym phân huỷ polysaccharide pectinmetylesteraza liên kết sợi cellulose làm chúng lỏng lẻo Vách tế bào mềm ra, trở nên lỏng lẻo làm tế bào kéo dài Do với hàm lượng auxin tăng dần số lượng chiều dài rễ tăng theo Trong auxin NAA, IBA sử dụng nhiều môi trường nuôi cấy mô IAA sử dụng bền hấp khử trùng môi trường [10] ™ Tóm lại môi trường tốt cho tạo rễ lan Dendrobium môi trường Knudson’C bổ sung 0,5ppm NAA Trong môi trường gia tăng chiều cao, số lượng rễ cứng cáp sau tạo rễ cứng cáp, khoẻ mạnh đưa vào giai đoạn chuyển tiếp trước đem trồng vườn SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyeân Trang 43 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khóa luận tốt nghiệp – 2005 Kết – Thảo luận Hình 4.5: Cây rễ môi trường Knudson’C với nồng độ kích tố khác nhau, sau tuần SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoaù luận tốt nghiệp – 2005 I Kết luận Kết luận – Đề nghị PHẦN V: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ Từ kết đạt được, đưa số kết luận sau: ¾ Mẫu khử trùng lan Dendrobium xanh Vì mẫu hạt gieo nằm bên trong, nên tiến hành rửa mẫu kỹ đốt cồn lần loại bỏ hoàn toàn tác nhân gây nhiễm Hạt không bị ảnh hưởng gieo vào môi trường phục hồi nhanh ¾ Môi trường MS có ppm BA cho nẩy mầm hạt lan Dendrobium tốt so với môi trường Knudson’C ¾ Sự tạo protocorm môi trường Knudson’C có bổ sung kích thích tố BA tốt ¾ Đối với thí nghiệm nhân protocorm sử dụng môi trường Knudson’C bổ sung 2ppm BA 0,5 ppm IAA, tạo thành nhiều chồi hơn, có chiều cao, thích hợp cho thí nghiệm rễ sau Với hệ số nhân chồi 3x412 chồi/năm ¾ Môi trường tốt cho tạo rễ lan Dendrobium môi trường Knudson’C bổ sung 0,5ppm NAA Từ kết nghiên cứu đưa quy trình nhân giống lan Dendrobium phương pháp gieo hạt in-vitro sau: SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 36 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp – 2005 Kết luận – Đề nghị Hình 5.1: Quy trình nhân giống lan Dendrobium phương pháp gieo hạt in-vitro SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 37 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Khoá luận tốt nghiệp – 2005 II Kết luận – Đề nghị Đề nghị: Do thời gian thực đề tài có hạn nên hoàn thành giai đoạn gieo hạt nhân giống in-vitro Trong thời gian tới, có điều kiện tiến hành giai đoạn đưa vườn ươm tiếp tục nghiên cứu thí nghiệm khác như: - Khảo sát ảnh hưởng độ chín đến nảy mầm hạt - So sánh khả nhân chồi so với phương pháp nhân giống lan Dendrobium khác - Kết hợp với kỹ thuật lai giống hữu tính nhằm đưa giống lan SVTH: Nguyễn Vũ thị Hoàng Uyên Trang 38 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... Tổng quan tài liệu Các phương pháp nhân giống 3.1 Nhân giống thiên nhiên 3.1.1 Nhân giống vô tính a Tách bụi: phương pháp nghệ nhân sử dụng giống lan đa thân Cattleya, Dendrobium, Cymbidium,... http://Agriviet.Com Vật liệu – Phương pháp Hướng đề tài Đối với đề tài, hướng mục đích nhân giống lan Dendrobium lai phương pháp gieo hạt in- vitro nhằm: - Cung cấp giống lan cho phòng nuôi cấy mô... Rhizoctonia lanugiosa giúp cho hột nẩy mầm Oncidium, Odontoglossum Miltonoa [16] 3.2 Nhân giống phòng thí nghiệm Trong phòng thí nghiệm lan Dendrobium nhân giống phương pháp gieo hạt in- vitro Trong