KHẢO sát ẢNH HƯỞNG của VI KHUẨN METHYLOBACTERIUM SP lên sự PHÁT SINH cơ QUAN ở cây lúa (ozyra sativa l) NUÔI cấy IN VITRO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** CHU LÝ HẢI ANH KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA VI KHUẨN METHYLOBACTERIUM SP LÊN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN Ở CÂY LÚA (Ozyra sativa L) NUÔI CẤY IN VITRO Luận văn kỹ sƣ Chuyên Ngành: Công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA VI KHUẨN METHYLOBACTERIUM SP LÊN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN Ở CÂY LÚA (Ozyra sativa L) NUÔI CẤY IN VITRO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành:Công nghệ sinh học Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS TS BÙI VĂN LỆ CHU LÝ HẢI ANH ThS KIỀU PHƢƠNG NAM Khóa: 2002-2006 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY STUDYING EFFECT OF METHYLOBACTERIUM SP ON MORPHOGENESIS OF IN VITRO RICE (Ozyra sativa L) Engineer Thesis Major: Biotechnology Research adviser BÙI VĂN LỆ, PROF, PhD KIỀU PHƢƠNG NAM, MSc Researcher CHU LÝ HẢI ANH Term: 2002 - 2006 HCMC, 09/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Trang CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU …………………………………………………………………… TỔNG QUAN……………………………………………………………… 2.1 Giới thiệu lúa…………………………………………………… 2.1.1 Vị trí phân loại…………………………………………………… 2.1.2 Nguồn gốc phân bố…………………………………………… 2.1.3 Đặc điểm hình thái………………………………………………… 2.1.4 Đặc điểm hạt lúa………………………………………………… 2.2 Ứng dụng phƣơng pháp nuôi cấy mô cải tiến giống lúa……… 2.3 Phƣơng pháp nuôi cấy mô, tế bào in vitro………………………………10 2.3.1 Sự tái sinh mẫu cấy (sự tạo quan)…………………………… 10 2.3.2 Sự tạo mô sẹo từ quan………………………………………….11 2.3.3 Ảnh hƣởng số môi trƣờng điều kiện nuôi cấy nuôi cấy tế bào…………………………………………………………….13 2.3.3.1 Môi trƣờng nuôi cấy………………………………………13 2.3.3.2 Các nhân tố vật lý…………………………………………13 2.3.3.3 Ảnh hƣởng chất điều hòa tăng trƣởng thực vật……14 2.4 Ảnh hƣởng vi sinh vật lên phát triển thực vật………………….14 2.5 Đặc điểm chi Methylobacterium…………………………………… 15 2.5.1 Lịch sử phát phân loại…………………………………….15 2.5.2 Đặc điểm sinh thái………………………………………………….17 2.5.3 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa…………………………… 18 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.5.4 Các ứng dụng vi khuẩn Methylobacterium sp……………… 19 2.5.4.1 Tƣơng tác với thực vật…………………………………… 19 2.5.4.2 Sinh tổng hợp auxin cytokinin………………………….23 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP……………………………………………24 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu……………………………………….24 3.2 Vật liệu nghiên cứu……………………………………………………….24 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu………………………………………………24 3.2.2 Thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu………………………27 3.2.3 Mẫu cấy điều kiện nuôi cấy………………………………… 27 3.3.4 Nhân sinh khối giữ giống vi khuẩn………………………… 27 3.3.5 Môi trƣờng nuôi cấy……………………………………………… 28 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu…………………………………………………28 3.3.1 Tạo vật liệu khởi đầu (mô sẹo)…………………………………… 28 3.3.2 Nhân sinh khối vi khuẩn…………………………………………….30 3.3.3 Nội dung thí nghiệm…………………………………………………30 3.3.3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng nồng độ 2,4-D lên khả nhân sẹo giống lúa VĐ20……………………………………… 30 3.3.3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng nồng độ BAP NAA lên khả tái sinh chồi từ mô sẹo giống lúa VĐ20………………… 31 3.3.3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng nồng độ NAA lên khả tái sinh rễ từ mơ sẹo giống lúa VĐ20……………………………… 31 3.3.3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tạo mơ sẹo giống lúa VĐ20……………………………………………32 3.3.3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả nhân sẹo giống lúa VĐ20……………………………………………… 33 3.3.3.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tái sinh chồi từ mơ sẹo giống lúa VĐ20………………………………33 3.3.3.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tái sinh rễ từ mô sẹo giống lúa VĐ20……………………………… 34 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3.3.8 Thí nghiệm 8: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tăng sinh mô sẹo giống lúa VĐ20…………………………………… 34 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN…………………………………………………36 4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng nồng độ 2,4-D lên khả nhân sẹo giống lúa VĐ20…………………………………………………………………36 4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng nồng độ BAP NAA lên khả tái sinh chồi từ mô sẹo giống lúa VĐ20……………………………………………38 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng nồng độ NAA lên khả tái sinh rễ từ mô sẹo giống lúa VĐ20…………………………………………………….43 4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tạo mô sẹo giống lúa VĐ20………………………………………………………………….45 4.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả nhân sẹo giống lúa VĐ20………………………………………………………………….47 4.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tái sinh chồi từ mô sẹo giống lúa VĐ20…………………………………………………….50 4.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tái sinh rễ từ mô sẹo giống lúa VĐ20…………………………………………………………53 4.8 Thí nghiệm 8: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên khả tăng sinh mô sẹo giống lúa VĐ20…………………………………………………………… 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ…………………………………………………… 58 5.1 Kết luận…………………………………………………………………… 58 5.2 Đề nghị……………………………………………………………………….59 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : Dichlorophenoxy-acetic acid Aux : Auxin BAP : 6-Benzylamino-purin Cs : Cộng Cyt : Cytokinin MS : Murashige-Skoog MMS : Methanol mineral salts NAA : α-naphthalene acetic acid vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1: Ảnh hƣởng nồng độ 2,4-D đến kích thƣớc mô sẹo (cm) sau tuần nuôi cấy……………………………………………………………………… 36 Bảng 4.2: Ảnh hƣởng nồng độ BAP NAA đến tỷ lệ tái sinh chồi từ mô sẹo……………………………………………………………………………….38 Bảng 4.3: Ảnh hƣởng nồng độ BAP NAA đến số chồi hình thành từ mơ sẹo……………………………………………………………………………….40 Bảng 4.4: Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến tỷ lệ tái sinh số rễ hình thành…43 Bảng 4.5: Ảnh hƣởng chủng 1019 đến tỷ lệ tạo sẹo hạt lúa…………….45 Bảng 4.6: Ảnh hƣởng chủng 1019 đến đƣờng kính mô sẹo…………………47 Bảng 4.7: Ảnh hƣởng chủng 1019 đến tỷ lế tái sinh chồi số chồi hình thành từ mô sẹo…………………………………………………………………………50 Bảng 4.8: Ảnh hƣởng chủng 1019 đến tỷ lế tái sinh rễ số rễ mẫu… 53 Bảng 4.9: Ảnh hƣởng chủng 1019 lên tăng sinh mô sẹo sau tuần nuôi cấy……………………………………………………………………………… 55 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1: Vi khuẩn có sắc tố hồng ngoại nhiễm vào môi trƣờng nuôi cây: A: Saintpaulia ionantha; B: Paulonia fortunei; C: Pacciflora sp [8]………………………………….2 Hình 2.1: Oryza sativa L……………………………………………………… Hình 2.2: Cấu trúc hạt lúa……………………………………………………….7 Hình 2.3: Methylobacterium sp rêu (A), hình dạng tế bào vi khuẩn chụp qua kính hiển vi điện tử (B)…………………………………………………….17 Hình 2.4: Methylobacterium sp chủng BJ001 ni cấy môi trƣờng thạch LB (A) vào môi trƣờng dịch thể LB (B) chụp qua kính hiển vi điện tử quét [36] 18 Hình 2.5: Sự tái sinh chồi lồi thuốc chuyển gen ipt mơi trƣờng MS không bổ sung hormone sau tháng nuôi cấy (a): không bổ sung vi khuẩn Methylovorus mays (b): có bổ sung vi khuẩn Methylovorus mays[21]……….20 Hình 3.1: Giống lúa VĐ20: (a) hạt chƣa bóc vỏ trấu, (b) hạt bóc vỏ trấu…… 24 Hình 3.2: Hạt lúa khử trùng mơi trƣờng tạo sẹo……………………….29 Hình 4.1: Mơ sẹo môi trƣờng MS bổ sung 0,5mg/l BAP 1mg/l NAA sau tuần ni cấy (1.1)…………………………………………………………… 37 Hình 4.2: Các mơ sẹo thí nghiệm sau tuần ni cấy…………………….38 Hình 4.3: Mơ sẹo tái sinh chồi môi trƣờng MS bổ sung 2mg/l BAP 1mg/l NAA sau tuần ni cấy………………………………………………………42 Hình 4.4: Các mẫu mơ tái sinh chồi thí nghiệm sau tuần ni cấy………42 Hình 4.5: Mơ sẹo tái sinh rễ môi trƣờng MS bổ sung 1,5mg/l NAA sau tuần ni cấy…………………………………………………………………………44 Hình 4.6: Các mẫu mơ tái sinh rễ thí nghiệm sau tuần ni cấy…………45 Hình 4.7: Sự tạo mô sẹo môi trƣờng MS bổ sung 2mg/l 2,4-D: (a) có bổ sung 1ml dung dịch khuẩn, (b) khơng có bổ sung khuẩn sau tuần ni cấy……….47 Hình 4.8: Sự tăng sinh mơ sẹo môi trƣờng MS bổ sung 1mg/l BAP 0,5mg/l NAA: (a) bổ sung 0,5ml dung dịch vi khuẩn, (b) không bổ sung khuẩn sau tuần nuôi cấy…………………………………………………………………………49 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.9: Sự tăng sinh mô sẹo môi trƣờng MS bổ sung 1mg/l BAP, 0,5mg/l NAA 1,5ml dung dịch vi khuẩn sau tuần ni cấy (5.4)…………………49 Hình 4.10: Sự tái sinh chồi môi trƣờng MS bổ sung 2mg/l BAP, 1mg/l NAA 1,5ml dung dịch vi khuẩn sau tuần ni cấy (6.2)……………………… 52 Hình 4.11: Sự tái sinh chồi môi trƣờng MS bổ sung 2mg/l BAP, 1mg/l NAA 1,5ml dung dịch vi khuẩn sau tuần ni cấy (6.4)……………………… 52 Hình 4.12: Sự tái sinh rễ môi trƣờng MS bổ sung 1,5mg/l NAA 0,5ml dung dịch vi khuẩn sau tuần nuôi cấy (7.2)……………………………………… 54 Hình 4.13: Sự tái sinh rễ mơi trƣờng MS bổ sung 1,5mg/l NAA 1,5ml dung dịch vi khuẩn sau tuần ni cấy (7.4)……………………………………… 55 Hình 4.14: Sự tăng sinh mơ sẹo thí nghiệm mơi trƣờng MS khơng bổ sung hormone: (a) khơng có bổ sung khuẩn, (b) bổ sung 0,5ml dung dịch vi khuẩn, (c) bổ sung 1ml dung dịch vi khuẩn, (d) bổ sung 1,5ml dung dịch vi khuẩn sau tuần nuôi cấy……………………………………………………………………… 57 x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 73 t1 - t6 t2 - t3 t2 - t4 -0.75000 1.21127 -0.16667 1.21127 1.08333 1.21127 denotes a statistically significant difference Multiple range analysis for SCHOI.sochoi by SCHOI.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t2 - t5 0.08333 1.21127 t2 - t6 -0.16667 1.21127 t3 - t4 1.25000 1.21127 * t3 - t5 0.25000 1.21127 t3 - t6 0.00000 1.21127 t4 - t5 -1.00000 1.21127 t4 - t6 -1.25000 1.21127 * t5 - t6 -0.25000 1.21127 -* denotes a statistically significant difference * Số chồi mẫu sau tuần nuôi cấy Analysis of Variance for SCHOI2.sochoi - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:SCHOI2.dot 3.4652778 1.7326389 3.470 0717 B:SCHOI2.nt 7.6944444 1.5388889 3.082 0612 RESIDUAL 4.9930556 10 4993056 -TOTAL (CORRECTED) 16.152778 17 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for SCHOI2.sochoi -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 18 1.8611111 1665509 1.4899136 2.2323086 A:SCHOI2.dot d1 2.4583333 2884746 1.8154005 3.1012662 d2 1.7083333 2884746 1.0654005 2.3512662 d3 1.4166667 2884746 7737338 2.0595995 B:SCHOI2.nt t1 1.3333333 4079647 4240889 2.2425777 t2 2.0833333 4079647 1.1740889 2.9925777 t3 2.4166667 4079647 1.5074223 3.3259111 t4 6666667 4079647 -.2425777 1.5759111 t5 2.1666667 4079647 1.2574223 3.0759111 t6 2.5000000 4079647 1.5907556 3.4092444 -Multiple range analysis for SCHOI2.sochoi by SCHOI2.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t4 6666667 X t1 1.3333333 XX t2 2.0833333 X t5 2.1666667 X t3 2.4166667 X LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 74 t6 2.5000000 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 -0.75000 1.28587 t1 - t3 -1.08333 1.28587 t1 - t4 0.66667 1.28587 t1 - t5 -0.83333 1.28587 t1 - t6 -1.16667 1.28587 t2 - t3 -0.33333 1.28587 t2 - t4 1.41667 1.28587 * * denotes a statistically significant difference Multiple range analysis for SCHOI2.sochoi by SCHOI2.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t2 - t5 -0.08333 1.28587 t2 - t6 -0.41667 1.28587 t3 - t4 1.75000 1.28587 * t3 - t5 0.25000 1.28587 t3 - t6 -0.08333 1.28587 t4 - t5 -1.50000 1.28587 * t4 - t6 -1.83333 1.28587 * t5 - t6 -0.33333 1.28587 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục 4.3: Thí nghiệm * Tỷ lệ tái sinh rễ sau tuần Analysis of Variance for TYLERE.tylere - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:TYLERE.dot 729.1667 364.58333 636 5615 B:TYLERE.nt 1875.0000 625.00000 1.091 4222 RESIDUAL 3437.5000 572.91667 -TOTAL (CORRECTED) 6041.6667 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for TYLERE.tylere -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 79.166667 6.909635 62.254274 96.07906 A:TYLERE.dot d1 87.500000 11.967839 58.206876 116.79312 d2 68.750000 11.967839 39.456876 98.04312 d3 81.250000 11.967839 51.956876 110.54312 B:TYLERE.nt t1 58.333333 13.819270 24.508547 92.15812 t2 91.666667 13.819270 57.841881 125.49145 t3 83.333333 13.819270 49.508547 117.15812 t4 83.333333 13.819270 49.508547 117.15812 -Multiple range analysis for TYLERE.tylere by TYLERE.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 75 t1 58.333333 X t3 83.333333 X t4 83.333333 X t2 91.666667 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 -33.3333 47.8355 t1 - t3 -25.0000 47.8355 t1 - t4 -25.0000 47.8355 t2 - t3 8.33333 47.8355 t2 - t4 8.33333 47.8355 t3 - t4 0.00000 47.8355 -* denotes a statistically significant difference * Số rễ mẫu sau tuần Analysis of Variance for RE.re - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:RE.dot 6.635417 3.3177083 1.532 2900 B:RE.nt 10.604167 3.5347222 1.633 2786 RESIDUAL 12.989583 2.1649306 -TOTAL (CORRECTED) 30.229167 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for RE.re -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 3.2916667 4247480 2.2520306 4.3313027 A:RE.dot d1 3.9375000 7356851 2.1367976 5.7382024 d2 2.2500000 7356851 4492976 4.0507024 d3 3.6875000 7356851 1.8867976 5.4882024 B:RE.nt t1 2.0833333 8494960 0040613 4.1626054 t2 4.1666667 8494960 2.0873946 6.2459387 t3 4.2500000 8494960 2.1707280 6.3292720 t4 2.6666667 8494960 5873946 4.7459387 -Multiple range analysis for RE.re by RE.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t1 2.0833333 X t4 2.6666667 X t2 4.1666667 X t3 4.2500000 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 -2.08333 2.94053 t1 - t3 -2.16667 2.94053 t1 - t4 -0.58333 2.94053 t2 - t3 -0.08333 2.94053 t2 - t4 1.50000 2.94053 t3 - t4 1.58333 2.94053 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 76 Phụ lục 4.4: Thí nghiệm * Tỷ lệ tạo sẹo Analysis of Variance for TLSEO.tyles - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:TLSEO.dot 126.1667 63.08333 4.588 0618 B:TLSEO.nt 1036.2500 345.41667 25.121 0009 RESIDUAL 82.500000 13.750000 -TOTAL (CORRECTED) 1244.9167 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for TLSEO.tyles -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 77.916667 1.0704360 75.296610 80.536723 A:TLSEO.dot d1 82.500000 1.8540496 77.961929 87.038071 d2 75.750000 1.8540496 71.211929 80.288071 d3 75.500000 1.8540496 70.961929 80.038071 B:TLSEO.nt t1 85.333333 2.1408721 80.093220 90.573447 t2 79.333333 2.1408721 74.093220 84.573447 t3 84.666667 2.1408721 79.426553 89.906780 t4 62.333333 2.1408721 57.093220 67.573447 -Multiple range analysis for TLSEO.tyles by TLSEO.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t4 62.333333 X t2 79.333333 X t3 84.666667 X t1 85.333333 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 6.00000 7.41064 t1 - t3 0.66667 7.41064 t1 - t4 23.0000 7.41064 * t2 - t3 -5.33333 7.41064 t2 - t4 17.0000 7.41064 * t3 - t4 22.3333 7.41064 * -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 77 Phụ lục 4.5: Thí nghiệm * Đƣờng kính mơ sẹo sau tuần Analysis of Variance for KTK3.kt3 - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:KTK3.dot 0004948 0002474 393 6912 B:KTK3.nt 1727474 0575825 91.497 0000 RESIDUAL 0037760 6.29340E-004 -TOTAL (CORRECTED) 1770182 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for KTK3.kt3 -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 3260417 0072419 3083160 3437673 A:KTK3.dot d1 3343750 0125433 3036733 3650767 d2 3187500 0125433 2880483 3494517 d3 3250000 0125433 2942983 3557017 B:KTK3.nt t1 5333333 0144838 4978820 5687846 t2 2708333 0144838 2353820 3062846 t3 2500000 0144838 2145487 2854513 t4 2500000 0144838 2145487 2854513 Multiple range analysis for KTK3.kt3 by KTK3.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t3 2500000 X t4 2500000 X t2 2708333 X t1 5333333 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 0.26250 0.05014 * t1 - t3 0.28333 0.05014 * t1 - t4 0.28333 0.05014 * t2 - t3 0.02083 0.05014 t2 - t4 0.02083 0.05014 t3 - t4 0.00000 0.05014 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 78 * Đƣờng kính mơ sẹo sau tuần Analysis of Variance for KTK4.kt4 - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:KTK4.dot 0010156 0005078 1.258 3497 B:KTK4.nt 3444141 1148047 284.419 0000 RESIDUAL 0024219 4.03646E-004 -TOTAL (CORRECTED) 3478516 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for KTK4.kt4 -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 3718750 0057998 3576792 3860708 A:KTK4.dot d1 3750000 0100455 3504122 3995878 d2 3593750 0100455 3347872 3839628 d3 3812500 0100455 3566622 4058378 B:KTK4.nt t1 6625000 0115995 6341084 6908916 t2 3125000 0115995 2841084 3408916 t3 2625000 0115995 2341084 2908916 t4 2500000 0115995 2216084 2783916 -Multiple range analysis for KTK4.kt4 by KTK4.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t4 2500000 X t3 2625000 X t2 3125000 X t1 6625000 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 0.35000 0.04015 * t1 - t3 0.40000 0.04015 * t1 - t4 0.41250 0.04015 * t2 - t3 0.05000 0.04015 * t2 - t4 0.06250 0.04015 * t3 - t4 0.01250 0.04015 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 79 Phụ lục 4.6: Thí nghiệm * Tỷ lệ tái sinh chồi sau tuần Analysis of Variance for TYLECH1.tylechoi2 - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:TYLECH1.dot 416.6667 208.3333 3.000 1250 B:TYLECH1.nt 8958.3333 2986.1111 43.000 0002 RESIDUAL 416.66667 69.444444 -TOTAL (CORRECTED) 9791.6667 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for TYLECH1.tylechoi2 -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 20.833333 2.4056261 14.945194 26.721473 A:TYLECH1.dot d1 25.000000 4.1666667 14.801443 35.198557 d2 12.500000 4.1666667 2.301443 22.698557 d3 25.000000 4.1666667 14.801443 35.198557 B:TYLECH1.nt t1 66.666667 4.8112522 54.890388 78.442946 t2 16.666667 4.8112522 4.890388 28.442946 t3 000000 4.8112522 -11.776279 11.776279 t4 000000 4.8112522 -11.776279 11.776279 -Multiple range analysis for TYLECH1.tylechoi2 by TYLECH1.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t3 000000 X t4 000000 X t2 16.666667 X t1 66.666667 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 50.0000 16.6542 * t1 - t3 66.6667 16.6542 * t1 - t4 66.6667 16.6542 * t2 - t3 16.6667 16.6542 * t2 - t4 16.6667 16.6542 * t3 - t4 0.00000 16.6542 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 80 * Tỷ lệ tái sinh chồi sau tuần Analysis of Variance for TYLECH2.tylechoi3 - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:TYLECH2.dot 729.167 364.5833 2.333 1780 B:TYLECH2.nt 11875.000 3958.3333 25.333 0008 RESIDUAL 937.50000 156.25000 -TOTAL (CORRECTED) 13541.667 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for TYLECH2.tylechoi3 -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 29.166667 3.6084392 20.334457 37.998876 A:TYLECH2.dot d1 31.250000 6.2500000 15.952165 46.547835 d2 18.750000 6.2500000 3.452165 34.047835 d3 37.500000 6.2500000 22.202165 52.797835 B:TYLECH2.nt t1 75.000000 7.2168784 57.335582 92.664418 t2 41.666667 7.2168784 24.002248 59.331085 t3 000000 7.2168784 -17.664418 17.664418 t4 000000 7.2168784 -17.664418 17.664418 -Multiple range analysis for TYLECH2.tylechoi3 by TYLECH2.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t3 000000 X t4 000000 X t2 41.666667 X t1 75.000000 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 33.3333 24.9813 * t1 - t3 75.0000 24.9813 * t1 - t4 75.0000 24.9813 * t2 - t3 41.6667 24.9813 * t2 - t4 41.6667 24.9813 * t3 - t4 0.00000 24.9813 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 81 * Số chồi mẫu sau tuần Analysis of Variance for SCHOI3.sochoi - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:SCHOI3.dot 1666667 0833333 2.000 2160 B:SCHOI3.nt 5.7656250 1.9218750 46.125 0002 RESIDUAL 2500000 0416667 -TOTAL (CORRECTED) 6.1822917 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for SCHOI3.sochoi -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 4791667 0589256 3349373 6233960 A:SCHOI3.dot d1 5625000 1020621 3126874 8123126 d2 3125000 1020621 0626874 5623126 d3 5625000 1020621 3126874 8123126 B:SCHOI3.nt to 1.6666667 1178511 1.3782079 1.9551254 t1 2500000 1178511 -.0384587 5384587 t2 0000000 1178511 -.2884587 2884587 t3 0000000 1178511 -.2884587 2884587 -Multiple range analysis for SCHOI3.sochoi by SCHOI3.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t2 0000000 X t3 0000000 X t1 2500000 X to 1.6666667 X -contrast difference +/- limits to - t1 1.41667 0.40794 * to - t2 1.66667 0.40794 * to - t3 1.66667 0.40794 * t1 - t2 0.25000 0.40794 t1 - t3 0.25000 0.40794 t2 - t3 0.00000 0.40794 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 82 * Số chồi hình thành sau tuần Analysis of Variance for SCHOI4.sochoi - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:SCHOI4.dot 385417 1927083 2.846 1351 B:SCHOI4.nt 12.640625 4.2135417 62.231 0001 RESIDUAL 4062500 0677083 -TOTAL (CORRECTED) 13.432292 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for SCHOI4.sochoi -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 7708333 0751157 5869762 9546904 A:SCHOI4.dot d1 7500000 1301041 4315502 1.0684498 d2 5625000 1301041 2440502 8809498 d3 1.0000000 1301041 6815502 1.3184498 B:SCHOI4.nt to 2.5000000 1502313 2.1322858 2.8677142 t1 5833333 1502313 2156191 9510475 t2 0000000 1502313 -.3677142 3677142 t3 0000000 1502313 -.3677142 3677142 -Multiple range analysis for SCHOI4.sochoi by SCHOI4.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t2 0000000 X t3 0000000 X t1 5833333 X to 2.5000000 X -contrast difference +/- limits to - t1 1.91667 0.52003 * to - t2 2.50000 0.52003 * to - t3 2.50000 0.52003 * t1 - t2 0.58333 0.52003 * t1 - t3 0.58333 0.52003 * t2 - t3 0.00000 0.52003 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 83 Phụ lục 4.7: Thí nghiệm * Tỷ lệ rễ tái sinh rễ Analysis of Variance for TLRK2.tylere2 - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:TLRK2.dot 729.167 364.5833 4.200 0723 B:TLRK2.nt 19322.917 6440.9722 74.200 0000 RESIDUAL 520.83333 86.805556 -TOTAL (CORRECTED) 20572.917 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for TLRK2.tylere2 -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 47.916667 2.6895718 41.333527 54.49981 A:TLRK2.dot d1 50.000000 4.6584750 38.597667 61.40233 d2 37.500000 4.6584750 26.097667 48.90233 d3 56.250000 4.6584750 44.847667 67.65233 B:TLRK2.nt t1 83.333333 5.3791435 70.167053 96.49961 t2 91.666667 5.3791435 78.500387 104.83295 t3 16.666667 5.3791435 3.500387 29.83295 t4 000000 5.3791435 -13.166280 13.16628 -Multiple range analysis for TLRK2.tylere2 by TLRK2.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t4 000000 X t3 16.666667 X t1 83.333333 X t2 91.666667 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 -8.33333 18.6199 t1 - t3 66.6667 18.6199 * t1 - t4 83.3333 18.6199 * t2 - t3 75.0000 18.6199 * t2 - t4 91.6667 18.6199 * t3 - t4 16.6667 18.6199 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 84 * Số rễ mẫu Analysis of Variance for REK2.rek - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:REK2.dot 1.166667 583333 467 6481 B:REK2.nt 75.000000 25.000000 20.000 0016 RESIDUAL 7.5000000 1.2500000 -TOTAL (CORRECTED) 83.666667 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for REK2.rek -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 2.8333333 3227486 2.0433565 3.6233101 A:REK2.dot d1 2.7500000 5590170 1.3817200 4.1182800 d2 3.2500000 5590170 1.8817200 4.6182800 d3 2.5000000 5590170 1.1317200 3.8682800 B:REK2.nt t1 4.0000000 6454972 2.4200464 5.5799536 t2 6.3333333 6454972 4.7533797 7.9132869 t3 1.0000000 6454972 -.5799536 2.5799536 t4 0000000 6454972 -1.5799536 1.5799536 -Multiple range analysis for REK2.rek by REK2.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t4 0000000 X t3 1.0000000 X t1 4.0000000 X t2 6.3333333 X -contrast difference +/- limits t1 - t2 -2.33333 2.23439 * t1 - t3 3.00000 2.23439 * t1 - t4 4.00000 2.23439 * t2 - t3 5.33333 2.23439 * t2 - t4 6.33333 2.23439 * t3 - t4 1.00000 2.23439 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 85 Phụ lục 4.8: Thí nghiệm * Số chồi mẫu Analysis of Variance for CHOIK.sochoi - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:CHOIK.dot 0104167 0052083 429 6699 B:CHOIK.nt 2.8489583 9496528 78.143 0000 RESIDUAL 0729167 0121528 -TOTAL (CORRECTED) 2.9322917 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for CHOIK.sochoi -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 4791667 0318234 4012739 5570594 A:CHOIK.dot d1 4375000 0551198 3025858 5724142 d2 5000000 0551198 3650858 6349142 d3 5000000 0551198 3650858 6349142 B:CHOIK.nt to 1.0833333 0636469 9275478 1.2391189 t1 8333333 0636469 6775478 9891189 t2 0000000 0636469 -.1557855 1557855 t3 0000000 0636469 -.1557855 1557855 -Multiple range analysis for CHOIK.sochoi by CHOIK.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t2 0000000 X t3 0000000 X t1 8333333 X to 1.0833333 X -contrast difference +/- limits to - t1 0.25000 0.22031 * to - t2 1.08333 0.22031 * to - t3 1.08333 0.22031 * t1 - t2 0.83333 0.22031 * t1 - t3 0.83333 0.22031 * t2 - t3 0.00000 0.22031 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 86 * Số rễ mẫu Analysis of Variance for RS1.sore - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:RS1.dot 581667 290833 2.815 1373 B:RS1.nt 66.200625 22.066875 213.550 0000 RESIDUAL 6200000 1033333 -TOTAL (CORRECTED) 67.402292 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for RS1.sore -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 4.3791667 0927961 4.1520340 4.6062993 A:RS1.dot d1 4.1875000 1607275 3.7940947 4.5809053 d2 4.2625000 1607275 3.8690947 4.6559053 d3 4.6875000 1607275 4.2940947 5.0809053 B:RS1.nt t0 5.4166667 1855921 4.9624014 5.8709320 t1 5.5000000 1855921 5.0457347 5.9542653 t2 6.2500000 1855921 5.7957347 6.7042653 t3 3500000 1855921 -.1042653 8042653 -Multiple range analysis for RS1.sore by RS1.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t3 3500000 X t0 5.4166667 X t1 5.5000000 X t2 6.2500000 X -contrast difference +/- limits t0 - t1 -0.08333 0.64243 t0 - t2 -0.83333 0.64243 * t0 - t3 5.06667 0.64243 * t1 - t2 -0.75000 0.64243 * t1 - t3 5.15000 0.64243 * t2 - t3 5.90000 0.64243 * -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 87 * Đƣờng kính mơ sẹo Analysis of Variance for DKK.dk - Type III Sums of Squares -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -MAIN EFFECTS A:DKK.dot 0404167 0202083 4.099 0755 B:DKK.nt 3372917 1124306 22.803 0011 RESIDUAL 0295833 0049306 -TOTAL (CORRECTED) 4072917 11 -0 missing values have been excluded All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for DKK.dk -95% Confidence Level Count Average Stnd Error for mean -GRAND MEAN 12 6208333 0202702 5712190 6704477 A:DKK.dot d1 6000000 0351090 5140654 6859346 d2 5625000 0351090 4765654 6484346 d3 7000000 0351090 6140654 7859346 B:DKK.nt to 7166667 0405403 6174380 8158954 t1 6833333 0405403 5841046 7825620 t2 7500000 0405403 6507713 8492287 t3 3333333 0405403 2341046 4325620 -Multiple range analysis for DKK.dk by DKK.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -t3 3333333 X t1 6833333 X to 7166667 X t2 7500000 X -contrast difference +/- limits to - t1 0.03333 0.14033 to - t2 -0.03333 0.14033 to - t3 0.38333 0.14033 * t1 - t2 -0.06667 0.14033 t1 - t3 0.35000 0.14033 * t2 - t3 0.41667 0.14033 * -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA VI KHUẨN METHYLOBACTERIUM SP LÊN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN Ở CÂY LÚA (Ozyra sativa L) NUÔI CẤY IN VITRO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành:Công nghệ sinh học Giáo vi? ?n... KHUẨN METHYLOBACTERIUM SP LÊN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN Ở CÂY LÚA (Oryza sativa L) NUÔI CẤY IN VITRO? ?? Mục đích Tìm hiểu ảnh hƣởng vi khuẩn Methylobacterium sp lên phát sinh quan lúa: mô sẹo, chồi, rễ... học Nơng Lâm TPHCM Tháng 8/2006 “ KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA VI KHUẨN METHYLOBACTERIUM SP LÊN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN CÂY LÚA (Oryza sativa L.) NUÔI CẤY IN VITRO? ?? Giáo vi? ?n hƣớng dẫn: PGS TS Bùi Văn Lệ