KHẢO sát KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG kỹ THUẬT NUÔI cấy mô sẹo tạo DỊCH HUYỀN PHÙ cây drosera burmanni vahl TRONG THU NHẬN hợp CHẤT ANTHRAQUINONE

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DICH HUYỀN PHÙ CÂY ̣ Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2003-2007 Sinh viên thực hiện: HỒNG THỊ THU Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************************** KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DICH HUYỀN PHÙ CÂY ̣ Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS BÙI VĂN LỆ HOÀNG THỊ THU TS PHAN PHƢỚC HIỀN ThS QUÁCH NGÔ DIỄM PHƢƠNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Khóa luận đƣợc hoàn thành với s ự quan tâm giúp đỡ nhiều của các thầ y cô, các anh chị các bạn Em xin gƣ̉i lời cảm ơn chân thành đế n : PGS.TS Bùi Văn Lê ̣ , ngƣời đã tâ ̣n tình hƣớng dẫn và ta ̣o mo ̣i điề u kiê ̣n để em thƣ̣c hiê ̣n khóa luâ ̣n này Thạc sĩ Quách Ngô Diễm Phƣơng, ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, dạy ln động viên em hồn cảnh khó khăn Đề tài đƣợc hoàn thành với nhiều nhiệt tình tâm huyết của chị Cảm ơn chị tất Em cảm ơn Tiến sĩ Phan Phƣớc Hiền, dạy giúp đỡ của thầy giúp em nhiều quá trình thực đề tài Thạc sĩ Kiều Phƣơng Nam , ngƣời gợi ý cho em lời khuyên bổ ích Em cảm ơn anh Điề n , anh Hoàng, anh Cƣờng và các anh chi ̣phòng sắ c ký , Viê ̣n Công nghê ̣ Sin h ho ̣c và Công nghê ̣ Môi trƣờng , ĐH Nông Lâm TP HCM Cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình của các anh chị suốt thời gian chúng em thƣ̣c tâ ̣p Cảm ơn anh Bình cùng tồn thể các bạn sinh viên năm tƣ trƣờng ĐH Khoa học Tự nhiên , ĐH Mở sẵn sàng giúp đỡ và đô ̣ng viên nhƣ̃ng lúc gă ̣p khó khăn đề tài Cảm ơn lớp CNSH 29 thân yêu và các ba ̣n thân đã cùng chia sẻ tấ t cả nhƣ̃ng nỗi buồ n vui suố t bố n năm đa ̣i ho ̣c Và hết , cảm ơn bố m ẹ, chị gái em trai yêu quý chăm lo , ủng hộ, tin tƣởng , cảm ơn nhà cho chỡ dựa vững chắc c ̣c sớ ng Tháng 9/2007 Hồng Thị Thu iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓM TẮT Đề tài nghiên cƣ́u “Khảo sát khả ƣ́ng du ̣ng kỹ thuâ ̣t nuôi cấ y mô sẹo, tạo dịch huyền phù Drosera burmanni Vahl thu nhâ ̣n hơ ̣p chấ t anthraquinone” đƣơ ̣c tiế n hành ta ̣i trại thực nghiệm sinh học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đa ̣i ho ̣c Quố c gia thành phố Hồ Chí Minh và phịng sắ c ký , Viê ̣n Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công nghê ̣ Môi trƣờng , Đại học Nơng Lâm, thành phố Hồ Chí Minh tƣ̀ tháng 3/2007 đến hết tháng 8/2007 Kế t quả thu đƣơ ̣c: - Mô se ̣o tƣ̀ mẫu lớp mỏng tế bào D burmanni Vahl đƣơ ̣c hin ̀ h thành môi trƣờng khoáng bản Gamborg’s B5 bổ sung: NAA (0,2 mg/l)/2,4-D (0,2 mg/l), đƣờng 20 g/l, PVP (1,25 mg/l) pH 5,8, điề u kiê ̣n ủ tố i - Các kỹ thuật sắc ký cột , sắ c ký bản mỏng đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng nhằ m lâ ̣p và ly trích hợp chất anthraquinone D burmanni in vitro Hơ ̣p chấ t này đ ƣợc sử dụng nhƣ chất tham chiếu để định lƣợng anthraquinone các thành phần khác của Drosera burmanni Vahl - Kế t quả đinh ̣ lƣơ ̣ng anthraquinone bằ ng kỹ thuâ ̣t HPLC cho thấ y : hàm lƣơ ̣ng anthraquinone rễ là 3,03% so với tro ̣ng lƣơ ̣ng khô, nhiề u thân lá (2,78%); không có sắc tố đỏ 2,8% ở có sắ c tố đỏ là 0,78%; sinh khố i huyề n phù tế bào là 0,02% ( so với tro ̣ng lƣơ ̣ng tƣơi ), không thấ y có sƣ̣ hiê ̣n diê ̣n của anthraquinone dich ̣ môi trƣờng iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com SUMMARY The thesis “Study on application of callus and suspension cultures in Drosera burmanni Vahl to produce anthraquinone compound” was carried out at Plant Biotechnology lab, University of Natural Sciences; and Chromatography room, Research Institute for Biotechnology and Enviromental Technology, University of Agriculture and Forestry, HCM city from March to August, 2007 Results: - Callus of D burmanni Vahl was cultured successfully by using Gamborg’s B5 medium (modified) supplemented with NAA (0,2 mg/l), 2,4-D (0,2 mg/l), succrose (20g/l), PVP (1,25 mg/l), pH was adjusted to 5,8 before autoclaving - Column Chromatography and Thin Layer Chromatography were used to purify anthraquinone compound in D burmanni This compound was used as authentic sample for HPLC technique - Roots of D burmanni contained 3,01% dry weight (DW) of anthraquinone, larger than 2,78% in leaves - Anthraquinone content of red-leaf D burmanni Vahl took 0,78% of DW, compared with 2,78% DW in green-leaf trees - Biomass of D burmanni’s suspension contained 0,02% of fresh weight of anthraquinone, while no quantifiable amounts of anthraquinone has been found in spent medium Ho Chi Minh city, September, 2007 Hoang Thi Thu v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tƣ̣a .i Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Summary v Mục lu ̣c vi Danh sách các chƣ̃ viế t tắ t ix Danh sách các hiǹ h x Danh sách các sơ đồ biểu đồ xii Danh sách các bảng xiii Chƣơng1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu 1.4 Ý nghĩa đề tài Chƣơng 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan về Drosera burmanni Vahl 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Phân bố 2.1.3 Mơ tả hình thái 2.1.4 Đặc tính sinh học 2.1.5 Đặc điểm sinh thái 2.1.6 Thành phần hóa học 2.1.7 Phƣơng pháp nhân giống 11 2.1.8 Tầm quan trọng 12 2.1.8.1 Ý nghĩa về sinh thái 12 2.1.8.2 Ý nghĩa nghiên cứu tiến hóa thực vật 12 2.1.8.3 Gía trị dƣợc tính 12 2.1.8.4 Ứng dụng công nghiệp 14 2.1.8.5 Gía trị kinh tế 15 2.1.9 Các nghiên cứu nƣớc 16 2.2 Tổng quan về kỹ thuật nuôi cấy huyền phù tế bào để thu nhận hợp chất thứ cấp 17 2.2.1 Khái niệm hợp chất thứ cấp 17 2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo 18 2.2.2.1 Khái niệm mô sẹo 18 2.2.2.2 Ứng dụng của nuôi cấy mô sẹo 19 2.2.3 Nuôi cấy dịch huyền phù 19 2.2.3.1 Khái niệm huyền phù tế bào 19 2.2.3.2 Nguyên tắc tạo huyền phù 19 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2.3.3 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến sự tạo huyền phù tế bào 20 2.2.3.4 Các phƣơng pháp nuôi cấy huyền phù 20 2.2.3.5 Các điều kiện nuôi cấy dịch tế bào ảnh hƣởng đến việc sản xuất các hợp chất thứ cấp 22 2.2.4 Các phƣơng pháp gia tăng sự sản xuất hợp chất thứ cấp nuôi cấy huyền phù 22 2.2.4.1 Tối ƣu hóa điều kiện nuôi cấy 22 2.2.4.2 Chọn lọc dòng tế bào có khả sản xuất cao 22 2.2.4.3 Bổ sung tiền chất 22 2.2.4.4 Cố định tế bào 23 2.2.4.5 Cảm ứng sự phân hóa mô 23 2.2.4.6 Nhân tố cảm ứng (elicitor) 23 2.3 Các kỹ thuật sử dụng luận văn 24 2.3.1 Phƣơng pháp ly trích – thu nhận hợp chất 24 2.3.1.1 Sắc ký cột 24 2.3.1.2 Sắc ký nhanh cột khô (Dry Column Flash Chromatography) 26 2.3.1.3 Sắc ký lớp mỏng điều chế 27 2.3.2 Kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp HPLC định lƣợng hợp chất thứ cấp 28 Chƣơng 3: VẬT LIỆU – PHƢƠNG PHÁP 31 Thời gian địa điểm thực 31 3.1 Nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù 31 3.1.1 Vật liệu 31 3.1.2 Phƣơng pháp 33 3.1.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng của thành phần khoáng nồng độ đƣờng lên sự phát triển của mẫu cấy lớp mỏng 33 3.1.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát sự kết hợp loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mô sẹo 34 3.1.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát nồng độ thích hơ ̣p của 2,4-D kết hợp với NAA (0,2 mg/l) để cảm ứng tạo mô sẹo 35 3.1.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng của các kiểu nuôi cấy lên sự tăng sinh khối mô sẹo tạo dịch huyền phù 36 3.1.2.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát sự ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mô sẹo 37 3.2 Ly trić h và cô lâ ̣p hơ ̣p chấ t anthraquinone D burmanni 38 3.2.1 Vật liệu 38 3.2.2 Phƣơng pháp 39 3.3 Định lƣợng hợp chất anthraquinone các nguyên liệu nuôi cấy in vitro khác phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC 40 3.3.1 Vật liệu 40 3.3.2 Phƣơng pháp 40 3.3.2.1 Xác định điều kiện, thơng số kỹ tḥt thích hợp 40 3.3.2.2 Xây dựng đƣờng chuẩn 41 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3.2.3 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hƣởng của cách xử lý mẫu định lƣợng hợp chất anthraquinone 41 3.3.2.4 Thí nghiệm 7: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các phận khác của in vitro 43 3.3.2.5 Thí nghiệm 8: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các mẫu có sắc tố đỏ mẫu không có sắc tố đỏ 44 3.3.2.6 Thí nghiệm Xác định hàm lƣợng anthraquinone mẫu dịch huyền phù tạo đƣợc từ thí nghiệm 45 3.4 Xử lý thống kê 45 Chƣơng 4: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 46 4.1 Nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù 46 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng của thành phần khoáng nồng độ đƣờng lên sự phát triển của mẫu cấy lớp mỏng 46 4.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát sự kết hợp loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mơ sẹo 48 4.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát nồng độ thích hơ ̣p của 2,4-D kết hợp với NAA (0,2 mg/l) để cảm ứng tạo mô sẹo 49 4.1.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng của các kiểu nuôi cấy lên sự tăng sinh khối mô sẹo tạo dịch huyền phù 54 4.1.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát sự ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mô sẹo 56 4.2 Ly trić h và cô lâ ̣p hơ ̣p chấ t anthraquinone D burmanni 58 4.3 Định lƣợng hợp chất anthraquinne các nguyên liệu nuôi cấy in vitro khác phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC 59 4.3.1 Xây dựng đƣờng chuẩn 59 4.3.2 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hƣởng của cách xử lý mẫu định lƣơ ̣ng hợp chất anthraquinone 61 4.3.3 Thí nghiệm 7: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các phận khác của in vitro 62 4.3.4 Thí nghiệm 8: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các mẫu có sắc tố đỏ mẫu không có sắc tố đỏ 64 4.3.5 Thí nghiệm Xác định hàm lƣợng anthraquinnone mẫu dịch huyền phù tạo đƣợc từ thí nghiệm 66 Chƣơng 5: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 68 5.1 Kết luận 68 5.1.1 Nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù 68 5.1.2 Định lƣợng hợp chất anthraquinone sắc ký lỏng cao áp HPLC 68 5.2 Đề nghị 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 PHỤ LỤC viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC CHƢ̃ VIẾT TẮT 2,4-D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid BAP : 6-benzylaminopurine CRD : Completely Randomized Design (Hoàn toàn ngẫu nhiên) ctv : cộng tác viên HPLC : High Performane Liquid Chromatography (Sắ c ký lỏng ao áp ) IAA : 3-indolyl-acetic acid IBA : 3-indolebutyric acid MS : Murashige & Skoog, 1962 NAA : naphthalene acetic acid PVP : poly vinyl pyrrolidone TCL : Thin Cell Layer (Lớp mỏng tế bào ) TLC : Thin Layer Chromatography (Sắ c ký bản mỏng) ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC HÌNH TRANG Hình 2.1 Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl giới Hình 2.2 Hình thái của Drosera burmanni Vahl Hình 2.3 Lá D burmanni Hình 2.4 D burmanni Vahl ngồi tự nhiên Hình 2.5 Cấu trúc hóa học của số flavonoid flavonoid glucoside 10 Hình 2.6 Mơ ̣t sớ loa ̣i Drosera có giá trị kinh tế cao giới 15 Hình 2.7 Hệ thống ni cấy gián đoạn qui mô nhỏ các máy lắc 21 Hình 2.8 Một bioreactor qui mơ phịng thí nghiệm 21 Hình 2.9 Sắ c ký ̣t 24 Hình 2.10 Mơ hiǹ h sắ c ký nhanh cô ̣t khô 26 Hình 2.11 Sắc ký lớp mỏng 27 Hình 2.12 Sơ đờ hoa ̣t ̣ng các bơ ̣ phâ ̣n của máy HPLC 29 Hình 3.1 Cây D burmanni Vahl ni cấy in vitro 31 Hình 4.1 Mô se ̣o đƣơ ̣c hình thành tƣ̀ mẫu lớp mỏng D.burmanni môi trƣờng Gamborg’s B5 bổ sung NAA (0,2 mg/l) 2,4-D với nồ ng đô ̣ thay đổ i 52 Hình 4.2 Mô se ̣o đƣơ ̣c hiǹ h thành tƣ̀ mẫu lớp mỏng lóng thân D burmanni môi trƣờng Gamborg’s B5 bổ sung NAA (0,2 mg/l) 2,4-D với nồ ng đô ̣ thay đổ i 53 Hình 4.3.A Mơ sẹo ni mơi trƣờng lỏng lắc 55 Hình 4.3.B Cụm tế bào quan dƣới kính hiển vi 40X 55 Hình 4.3.C Tế bào đơn quan dƣới kính hiển vi 40X 55 Hình 4.4 Ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mơ se ̣o D burmanni 57 Hình 4.5 Sắc ký đồ HPLC của anthraquinone tham chiếu 14 ppm 60 Hình 4.6 Sắc ký đồ HPLC của anthraquinone tham chiếu 28 ppm 60 x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Multiple range analysis for PHATHOA.ketqua by PHATHOA.nghiemthuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 5.533333 X 19.466667 X 22.233333 X 22.233333 X 36.100000 X 3 52.766667 X -contrast difference +/limits - -16.7000 10.4576 * - -47.2333 10.4576 * - -30.5667 10.4576 * - -13.9333 10.4576 * - -16.7000 10.4576 * - -30.5333 10.4576 * - -13.8667 10.4576 * - 2.76667 10.4576 - 0.00000 10.4576 - 16.6667 10.4576 * - 33.3000 10.4576 * - 30.5333 10.4576 * - 16.6333 10.4576 * - 13.8667 10.4576 * - -2.76667 10.4576 -* denotes a statistically significant difference One-Way Analysis of Variance -Data: THAN.ketqua Level codes: THAN.nghiemthuc Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 9890.8050 1978.1610 128.438 0000 Within groups 184.8200 12 15.4017 -Total (corrected) 10075.625 17 missing value(s) have been excluded LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Table of means for THAN.ketqua by THAN.nghiemthuc -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 000000 0000000 2.2658087 -3.491727 3.491727 38.900000 2.8000000 2.2658087 35.408273 42.391727 3 72.233333 2.7666667 2.2658087 68.741606 75.725060 55.533333 2.7666667 2.2658087 52.041606 59.025060 50.000000 0000000 2.2658087 46.508273 53.491727 22.233333 2.7666667 2.2658087 18.741606 25.725060 -Total 18 39.816667 9250125 9250125 38.391175 41.242158 Multiple range analysis for THAN.ketqua by THAN.nghiemthuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 000000 X 22.233333 X 38.900000 X 50.000000 X 55.533333 X 3 72.233333 X -contrast difference +/limits - -38.9000 6.98345 * - -72.2333 6.98345 * - -55.5333 6.98345 * - -50.0000 6.98345 * - -22.2333 6.98345 * - -33.3333 6.98345 * - -16.6333 6.98345 * - -11.1000 6.98345 * - 16.6667 6.98345 * - 16.7000 6.98345 * - 22.2333 6.98345 * - 50.0000 6.98345 * - 5.53333 6.98345 - 33.3000 6.98345 * - 27.7667 6.98345 * -denotes a statistically significant difference One-Way Analysis of Variance -Data: LA.ketqua Level codes: LA.nghiem_thu Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 714.60667 142.92133 9.224 0008 Within groups 185.93333 12 15.49444 -Total (corrected) 900.54000 17 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Table of means for LA.ketqua by LA.nghiem_thu -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 8.300000 0000000 2.2726229 4.797772 11.802228 16.700000 0000000 2.2726229 13.197772 20.202228 3 27.766667 2.7666667 2.2726229 24.264438 31.268895 22.233333 2.7666667 2.2726229 18.731105 25.735562 13.900000 2.8000000 2.2726229 10.397772 17.402228 13.900000 2.8000000 2.2726229 10.397772 17.402228 -Total 18 17.133333 9277944 9277944 15.703555 18.563112 Multiple range analysis for LA.ketqua by LA.nghiem_thu -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 8.300000 X 13.900000 XX 13.900000 XX 16.700000 XX 22.233333 XX 3 27.766667 X -contrast difference +/limits - -8.40000 7.00446 * - -19.4667 7.00446 * - -13.9333 7.00446 * - -5.60000 7.00446 - -5.60000 7.00446 - -11.0667 7.00446 * - -5.53333 7.00446 - 2.80000 7.00446 - 2.80000 7.00446 - 5.53333 7.00446 - 13.8667 7.00446 * - 13.8667 7.00446 * - 8.33333 7.00446 * - 8.33333 7.00446 * - 0.00000 7.00446 Phụ lục 2.4: thí nghiệm One-Way Analysis of Variance -Data: SG4KIEU.ketqua Level codes: SG4KIEU.nghiemthuc Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 1.7196917 5732306 42.858 0000 Within groups 1070000 0133750 -Total (corrected) 1.8266917 11 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Table of means for SG4KIEU.ketqua by SG4KIEU.nghiemthuc -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 2.0100000 0208167 0667708 1.9010937 2.1189063 2.3466667 0676593 0667708 2.2377604 2.4555729 3 1.9666667 0726483 0667708 1.8577604 2.0755729 2.9133333 0868588 0667708 2.8044271 3.0222396 -Total 12 2.3091667 0333854 0333854 2.2547135 2.3636198 Multiple range analysis for SG4KIEU.ketqua by SG4KIEU.nghiemthuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -3 1.9666667 X 2.0100000 X 2.3466667 X 2.9133333 X -contrast difference +/limits - -0.33667 0.21781 * - 0.04333 0.21781 - -0.90333 0.21781 * - 0.38000 0.21781 * - -0.56667 0.21781 * - -0.94667 0.21781 * -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Phụ lục LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THU? ??T NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE ” đời 1.2 Mục tiêu  Khảo sát khả tạo mô sẹo từ Drosera. .. Drosera burmanni Vahl  Khảo sát khả tạo dịch huyền phù tế bào Drosera burmanni Vahl  Khảo sát hàm lƣợng hợp chất quinone thu đƣợc từ nuôi cấy dịch huyền phù 1.3 Yêu cầu  Tạo đƣợc mô. .. ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************************** KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THU? ??T NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DICH HUYỀN PHÙ CÂY ̣ Drosera