CHẨN đoán VIRUS lở mồm LONG MÓNG BẰNG kỹ THUẬT ELISA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ^U] BÁO CÁO CHẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC GIA CẦM BẰNG SHPT Đề tài: CHẨN ĐOÁN VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG BẰNG KỸ THUẬT ELISA Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS.Nguyễn Ngọc Hải Thực hiện: Trương thị thùy lam Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 10/2009 NỘI DUNG LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com I Đặt vấn đề II Khái niệm III Tình hình bệnh LMLM nước ta IV Thiệt hại bệnh LMLM gây V Virus LMLM Hình thái Cấu trúc kháng nguyên Sức đề kháng VI Một số đặc điểm dịch tễ học Động vật cảm nhiễm Đường xâm nhập virus Đường truyền lây Chất chứa thải virus VII Cách sinh bệnh VIII Triệu chứng bệnh tích Triệu chứng Thể thơng thường Thể biến chứng Thể ác tính Bệnh tích IX Phân loại biến chủng virus X Chẩn đoán Phân lập virus Các phản ứng huyết lọc XI Một số biện pháp phòng trị bệnh XII Kết luận U Tài liệu tham khảo: I Đặt vấn đề LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Trong năm gần đây, nghành chăn ni nước nói chung liên tục phát triển So với 2004, năm 2005 đàn trâu tăng 1,8%, bò sữa 8,7%, bò thịt 12,9%, dê, cừu 1,31%, lợn 5% Sản xuất nơng nghiệp nói chung chiếm 30% GDP nước, riêng nghành chăn nuôi chiếm khoảng ¼ GDP sản xuất nơng nghiệp Thu nhập chăn nuôi tổng thu nhập nông nghiệp qua năm tăng (2004: 21,6%) dự kiến năm 2006 đạt tỉ trọng tổng giá trị sản lượng nông nghiệp 24% Thế nhưng, dịch bệnh thường xuyên mối đe dọa nguy hiểm cho chăn nuôi gia súc nước, đặc biệt bệnh LMLM Bệnh LMLM bệnh truyền nhiễm nguy hiểm động vật móng guốc trâu, bị, dê, cừu, lợn loài nhai lại hoang dã Bệnh xảy nhiều nước khắp châu lục giới Từ 1995 đến nay, dịch LMLM trâu, bò lợn xảy hầu hết tỉnh nước Ngồi ra, tình hình bệnh xảy Đông Nam Á nước khác nhiều năm qua chứng minh tầm quan trọng bệnh LMLM Bệnh thường gây nên hậu nghiêm trọng mặt kinh tế, xã hội bảo vệ môi trường nên xếp số thuộc bảng A danh mục bệnh truyền nhiễm gia súc, đồng thời ghi vào danh sách thức Bộ luật quốc tế Tổ chức dịch tễ giới (OIE) quan hệ buôn bán, vận chuyển động vật sản phẩm động vật nước Bệnh gây thành dịch cho hàng loạt trâu bò thời gian, làm tê liệt cày kéo Do vùng có bệnh xảy ra, nhiều vùng gặp nhiều khó khăn chăn nuôi gieo trồng Bệnh LMLM lây lan nhanh, mạnh rộng, bệnh cấp tính tất lồi động vật hai móng hoang dã gia súc Bị, trâu, dê, cừu, lợn loài thường bị nhiễm bệnh nhiều Bò thường mắc bệnh nhiều trâu, ngựa khơng mắc bệnh Tỷ lệ mắc bệnh đạt gần 100% gây ổ dịch vùng rộng lớn Tỷ lệ chết thường thấp khoảng - % gia súc trưởng thành, gia súc non bê, nghé, lợn tỷ lệ chết cao từ 20 - 50% Mặc dù bệnh xuất bệnh nhẹ, thường gây tử vong thấp, ngoại trừ vật non hay suy nhược thiệt hại kinh tế quan trọng II Khái niệm: Bệnh LMLM bệnh truyền nhiễm virus thuộc họ Picornaviridae gây nên Bệnh có đặc điểm sốt, bọng nước niêm mạc miệng, da móng, gờ móng kẻ móng đầu vú, bầu vú tất lồi thú có móng chẻ, gia súc thú hoang dã LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bệnh có tính chất dịch lớn, lây lan nhanh mạnh gây thiệt hại lớn kinh tế Mơ hình dịch lở mồm long móng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Virus lở mồm long móng Gia súc mẫn cảm bệnh lở mồm long móng Tiêm phịng khơng hiệu -Khơng phù hợp kháng nguyên -Thao tác tiêm phòng Điều kiện tự nhiên thuận lợi cho phát triển virus (pH, ẩm độ, tốc độ gió, lượng mưa) Sự thiếu hiểu biết bệnh -Thiếu thông tin bệnh -Do thông tin không hệ thống -do thông tin không giá trị Kiểm soát vận chuyển qua biên giới quốc gia vùng thiếu hiệu • Kiểm sốt thiếu hiệu quyền địa phương • Khơng có hợp tác quan hữu Sự coi thường pháp luật người mua bán Dịch lở mồm long móng hình thành phát triển LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Một số hình ảnh LMLM Phát 200 heo bị lở mồm long móng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Heo bị viêm móng, thối móng lại khó khăn đứng khơng Viêm loét gây thối móng móng dễ dàng sứt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Những dấu hiệu bệnh lở mồm long móng xuất heo, trâu, bị Móng chân bị viêm có mủ móng dễ sứt Nổi mụn nước niêm mạc mũi vành mũi móng sứt móng viêm loét gây thối LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Mụn vỡ gây viêm loét kẽ móng chân III Tình hình bệnh LMLM nước ta Bệnh LMLM phát nước ta từ gần kỷ Sau bệnh lan rộng ba Bắc, Trung, Nam, bệnh xảy miền núi, trung du, đồng ven biển Ở Việt Nam, dịch LMLM phát lần năm 1868 Nha Trang Sau bệnh xảy nhiều tỉnh Nam Bộ (1920), Quảng Ngãi (1937-1940), Thừa Thiên (1952), tỉnh phía Nam phía Bắc Trung Bộ (1953-1954), bệnh phát 11 tỉnh từ Việt Bắc, Tây Bắc vào đến Nghệ An, Hà Tĩnh thành phố Hà Nội, Hải Phịng, Nam Định Ở tỉnh phía bắc từ 1954-1960 có 724 ổ dịch LMLM xảy ra, 13.000 trâu bị mắc bệnh bị chết 417 trâu bị Thời gian gần bệnh có xu hướng gia tăng vận chuyển gia súc qua biên giới Lào Campuchia Bệnh dịch gia tăng phạm vi lây lan, quy mô số đầu gia súc bị bệnh, loại gia súc bị bệnh, thời gian kéo dài LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bệnh xảy gây thiệt hại kinh tế Nhà nước nhân dân, phải đình việc mua bán vận chuyển, giết mổ động vật, ảnh hưởng lớn đến việc phát triển chăn nuôi sức kéo cho trồng trọt Từ năm 1965 đến nay, áp dụng biện pháp tích cực phịng chống bệnh nên khơng thấy dịch LMLM tỉnh phía Bắc Nhưng tỉnh phía Nam bệnh LMLM lưu hành số tỉnh miền Trung, miền Nam miền Bắc gây thiệt hại cho đàn trâu, bị lợn Năm 2005, phủ phê duyệt chương trình phịng, chống bệnh LMLM quốc gia giai đoạn 20062010 với mục tiêu khống chế bệnh LMLM, bước đến toán bệnh Việt Nam IV Thiệt hại bệnh LMLM gây ¾ Bệnh LMLM thường gây nên hậu ngiêm trọng mặt kinh tế, xã hội bảo vệ mơi sinh ¾ Bệnh lây lan nhanh làm cho nhiều loại gia súc trâu, bò, lợn, dê…của nhiều gia đình, nhiều huyện, nhiều tỉnh bị nhiễm bệnh thời gian ngắn - đàn gia súc giảm nhanh số đầu suất chăn nuôi Sức sinh sản gia súc giảm sút nhiều xẩy thai, vô sinh ¾ Đàn trâu, bị nước ta chủ yếu dùng để cầy kéo, bị dịch LMLM giảm sức cầy kéo, ảnh hưởng trực tiếp đến ngành trồng trọt, suất trồng thường bị giảm thiếu sức kéo, chậm thời vụ gieo trồng ¾ Làm cho trâu, bị, lợn…ăn uống kém, lại khó khăn, giảm tiết sữa, dễ gây phụ nhiễm bệnh khác ¾ Gây biến chứng tim, dễ bị chết đột ngột ¾ Chi phí cho cơng tác phịng chống dịch lớn phải mua văcxin từ nước để tim phòng việc khử trùng, tiêu độc vùng có dịch, chuồng trại, bãi chăn đốt, chơn súc vật chết, địi hỏi chi phí lớn… V Virus LMLM LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Virus sốt lở mồm long móng (Foot and mouth disease virus) Hình thái Virus LMLM thuộc loại virus nhỏ virus qua lọc, thuộc họ Picornaviridae, chi Aphthovirus Hạt virus gồm phần trung tâm acid nuleic 31%, bao bọc capside ( protein) gồm 60 capsomere, khơng vỏ bọc Dưới kính hiển vi điện tử, virus thường có dạng hình cầu hay hình dâu, đường kính 20-28 nm, gồm 20 mặt đối xứng, 30 cạnh 10 đỉnh Cấu trúc kháng nguyên Virus có cấu trúc kháng ngun sợi, khơng có tính sinh kháng thể đặc tính kháng ngun có vai trị gây nhiễm Những protein tạo nên capside có tính chất kháng nguyên khả sinh kháng thể, gồm loại : VP1, VP2, VP3, VP4 (VP: viral protein) VP1, VP2, VP3 tạo nên bề mặt khối 20 mặt đối xứng (phân tử 12S) VP4 protein bên capside, kết dính ARN virus với mặt hộp protein (tức capside) VP1 tham gia việc cố định virus tế bào tạo nên yếu tố cấu trúc sinh miễn dịch Sức đề kháng ¾ Virus LMLM khơng có vỏ bọc, chúng có sức đề kháng cao dung môi hữu ( cồn, ete…) Tuy nhiên virus LMLM mẫn cảm với ánh sáng mặt trời, acid, formol…Virus bền vững khoảng pH = – 7.7, nhanh chóng bị vô hoạt độ pH cao thấp (pH 11) Virus hoàn toàn khả gây nhiễm pH Như thịt chín mềm (do hình thành acid lactic) phá hủy nhanh chóng virus thu hồi thịt từ thú bị LMLM để chế biến vài điều kiện (không vấy nhiễm sở chế biến, loại bỏ xương, khử mỡ) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ¾ Virus chịu nhiệt Đun 60-700C virus chết sau 5-10 phút, đun sôi 1000C virus chết Trong mặt đất ẩm virus trì độc lực đến 42 ngày mùa hè, 146-163 ngày mùa đông Trong tủy xương, nước bọt, phủ tạng virus sống 40 ngày Virus tồn lâu da muối thịt đông lạnh Để tồn trữ virus người ta dùng glycerin 50% Để diệt virus thể vật, nên dùng loại acid nhẹ dấm ăn, phèn chua, chanh, khế, acid lactic… VI Một số đặc điểm dịch tễ học Động vật cảm nhiễm Virus LMLM gây bệnh tự nhiên loài vật có móng guốc chẵn (trâu, bị, heo, dê, cừu…) Người động vật ăn thịt mắc bệnh LMLM Tuy nhiên bệnh LMLM người khơng có ý nghĩa quan trọng lâm sàng bệnh lý Mức độ mẫn cảm với virus loài khơng giống Các lồi động vật móng guốc có độ mẫn cảm ngang mức độ phát bệnh lâm sàng khác Trâu bò mắc bệnh nhiều nhất, bệnh thường biểu rõ nặng hơn, sau đến heo sau dê cừu Chó mèo nhiễm bệnh, ngựa, gia cầm, chim khơng mắc bệnh người ta gây bệnh cho vịt, voi, lạc đà, nhiều loại sơn dương mắc bệnh Đường xâm nhập virus Virus LMLM xâm nhập vào thể động vật cảm nhiễm nhiều đường Hai đường xâm nhập tự nhiên virus đường tiêu hóa đường hô hấp Sau phát triển khu vực cuống họng, virus lan sang vùng kế cận, vào hệ thống tuần hoàn hệ lâm ba dẫn tới tế bào, quan khắp thể Ngoài virus cịn xâm nhập vào thể qua vết thương hay sây sát da, vú Đường truyền lây Virus lây truyền trực tiếp tiếp xúc gia súc bệnh gia súc khỏe qua nước bọt, dịch mụn nước, nước tiểu, phân, sữa Đây đường phổ biến Ngồi virus lây truyền gián tiếp qua nhiều đường: Qua trung gian sinh vật Những thú không cảm nhiễm gà, vịt chim hoang dã… Qua trung gian vô sinh thức ăn, nước uống, rơm cỏ độn chuồng, dụng cụ, phương tiện vận chuyển… Virus cịn lây lan qua việc vứt rác, rửa thịt mổ theo dòng nước chảy hay theo di chuyển gia súc sản phẩm chăn nuôi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Virus xâm nhập từ hệ tuần hồn thú mẹ vào phơi thai, hít phải bụi chứa virus nơi nhiễm Chất chứa thải virus Virus chứa nhiều mụn nước sơ phát khơng cịn độc lực vào ngày thứ sau vỡ Virus thải qua nước miếng lẫn nước mụn mảnh ngoại bì mụn bị vỡ niêm mạc lưỡi miệng Mụn nước chân, đầu vú nơi khác sữa, nước tiểu… chứa virus VII Cách sinh bệnh Trong tự nhiên thời kì nung bệnh từ 2-7 ngày, có 24 kéo dài đến 11 ngày Theo OIE thời gian nung bệnh tối đa 21 ngày, đặc biệt typ A tìm virus sau thú mắc bệnh tuần Nếu gia súc tiêm phòng hay có miễn dịch thời gian nung bệnh dài hơn, phát sau 20 ngày Trong đàn giai đoạn ủ bệnh trường hợp điển hình kéo dài (2-10 ngày), nhiên bệnh lập lại vài lần thời gian ủ bệnh ngắn Đặc biệt trường hợp nhốt chật thời gian ủ bệnh ngắn Ngồi thời gian nung bệnh cịn khác phụ thuộc vào chủng virus, số lượng virus đường xâm nhập Với đường tự nhiên, số lượng virus nhiều thời gian ủ bệnh ngắn (2-3 ngày) lên tới 10-16 ngày virus Virus xâm nhập thể qua đường tiêu hóa, hơ hấp qua tổn thương da Trước tiên virus nhân lên lớp thượng bì ống tiêu hóa da, gây thủy thủng số tế bào hình thành mụn nước sơ phát Sau virus phân tán vào máu gây nhiễm virus máu, thú sốt cao, lúc virus có khả lây nhiễm qua thú khác hạt khí dung Virus theo máu đến quan phủ tạng gây bệnh toàn thân Đến cuối giai đoạn sốt, virus nhân lên tế bào phân chia mạnh gây nên mụn nước thứ phát miệng, chân, núm vú…Dịch mụn nước giai đoạn gây nhiễm mạnh mẽ Sau mụn vỡ, vết tích thượng bì lấp nhanh chóng Nếu mụn nước bị sây sát, nhiễm khuẩn sinh mủ gây hoại tử, bại huyết làm vật chết suy yếu Ở thú mang thai, virus theo tuần hồn thú mẹ qua thai làm sẩy thai Con vật non chết thối hóa tim trước hình thành mụn nước thứ phát VIII Triệu chứng bệnh tích Triệu chứng: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Thời gian nung bệnh từ - ngày, trung bình - ngày, gồm thể bệnh 1.1 Thể thơng thường: • • • • • • • Bệnh hay gặp vùng nhiệt đới, thú ủ rũ, lông dựng, da mũi khô, thú sốt cao 40 – 410C kéo dài ngày Xuất mụn nước da, vành móng kẻ chân, lưỡi, vú làm thú ăn, nhai khó khăn Ở miệng: Lưỡi có mụn to đầu lưỡi, gốc lưỡi hai bên lưỡi, xoang miệng má, lỗ chân răng, mơi có mụn lấm hạt ké, hạt bắp Sau mụn vỡ tạo thành vết loét đáy nhỏ phủ màu xám Nước dãi chảy nhiều bọt xà phịng Ở mũi: Niêm mạc có mụn nước, đặt biệt vành mũi có mụn loét, nước mũi lúc đầu sau đục dần Ở chân, kẽ móng có mụn nước từ trước sau, mụn vỡ làm long móng Ngồi da : Xuất mụn loét vùng da mỏng bụng, bẹn, vú, đầu núm vú … Thú giảm sản lượng sữa, sau sữa đổi thành màu vàng, vắt sữa khó gây viêm vú Sau hàng loạt mụn nước vỡ dần dẫn đến nhiễm trùng máu, nhiễm trùng da, thú sốt cao, suy nhược dần 1.2 Thể biến chứng • Những biến chứng xảy điều kiện vệ sinh, chăm sóc làm mụn vỡ dẫn đến nhiễm trùng, chân bị long móng, thối móng, thối xương làm thú què Vú bị viêm tắt sữa Các mụn khác vỡ gây nhiễm vi khuẩn kế phát, bại huyết • Bệnh lỡ mồm long móng ghép với bệnh ký sinh trùng hay vi khuẩn khác có sẵn máu (tiêm mao trùng, lê dạng trùng ) làm vật mau chóng chết 1.3 Thể ác tính Trên bê nghé triệu chứng sốt cao, thú bị tiêu chảy chết đột ngột trước xuất mụn nước thượng bì viêm ruột cấp tính, viêm phổi cấp viêm tim cấp tính Bệnh tích Bệnh tích bệnh LMLM chủ yếu nằm ngồi thể, da, niêm mạc Đó mụn nước thể, khỏi cách nhanh chóng trừ bị phụ nhiễm Bệnh tích bên chủ yếu hoại tử bắp, tim, viêm tim cấp, tim mềm nhạt, dễ vỡ, có đốm xám đỏ hay vàng thối hóa nên gọi bệnh tim hổ, bệnh tích có ý nghĩa quan trọng kiểm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com soát giết mổ Ngồi gặp biểu bại huyết, viêm màng phổi - phổi, viêm dày - ruột cấp tính IX Phân loại biến chủng virus Có typ virus LMLM là: O, A, C, SAT 1, SAT 2, SAT 3, Asia 1; chúng gây triệu chứng lâm sàng giống không gây miễn dịch cho Những typ lại phân chia thành nhiều typ phụ khác đặc tính miễn dịch học (cấu trúc kháng nguyên, độc lực…) Bảng số typ phụ typ virus LMLM Typ Số typ phụ O 11 A 32 C 05 ASIA 03 SAT 07 SAT 03 SAT 04 Tổng số 65 Khơng có miễn dịch chéo typ có miễn dịch chéo số typ phụ phạm vi typ Đối với typ O, A, C, ổ dịch có kết hợp typ này, thông thường typ chiếm ưu X Chẩn đoán Để chuẩn đoán bệnh LMLM, vào dấu hiệu lâm sàng bệnh Trâu bò mắc bệnh lúc đầu có triệu chứng sốt cao, mệt mỏi, ăn đứng khó khăn, thường đứng yên chỗ, bị sữa lượng sữa giảm nhiều Sau đó, vật thường chép miệng, chảy nhiều nước bọt Các mụn nước lúc đầu chứa đầy dịch màu vàng rơm, sau trở nên đục, hình thành niêm mạc mơi, thân lưỡi vịm miệng Mụn nước thấy gốc móng phần da móng, phần da khơng có lơng đầu vú, bầu vú, âm hộ…Lợn có triệu chứng tương tự trâu bò Mụn nước đầu mõm kẻ móng thường to mau vỡ Khi móng bị tổn thương, vật bị đau khơng thể lại được, thường quỳ chỗ di LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com chuyển đầu gối Tuy nhiên, điều bị phủ nhận bệnh có triệu chứng tương tự (Trần Đình Từ, 1998; Kitching, R.P ctv, 2002) Ở trâu bò, bệnh viêm miệng mụn nước (vesicular atomati) giống bệnh lở mồm long móng, lợn, ngồi hai bệnh trên, cịn có hai bệnh bệnh mụn nước lợn (swine vesicular disease, SVD) bệnh bọng nước ban đỏ (vesicular exanthema of swine, VES) khác nguyên lại có triệu chứng lâm sàng giống Để chuẩn đốn phân biệt bệnh này, bước đầu sử dụng phương pháp đơn giản dựa vào loài cảm thụ Địa dư bệnh lý (Trần Thanh Phong, 1996; Trần Đình Từ, 1998) Sự phát sớm gia súc nhiễm bệnh bệnh, trước xuất dấu hiệu lâm sàng yếu tố chủ yếu cho khống chế bệnh hiệu quả, ngăn chặn bệnh lây lan Điều địi hỏi phải có phương pháp chẩn đốn nhanh, nhạy đặc hiệu, xác, cho kết vịng 24 Hơn nữa, xác định kịp thời týp đặc hiệu virus thực địa đặc tính phân tử cần thiết để thực tim phòng khẩn cấp với kháng nguyên tương ứng để đánh dấu nguồn gốc ổ dịch (Callens, M cvt, 1997; Reid, S M cvt, 1998, 2002; Re1mond, M cvt, 2002; Anon, 2002) Nhiều kĩ thuật phân tích khác sử dụng để phát acid nucleic virus, kháng nguyên, đáp ứng miễn dịch vật chủ, bao gồm kết hợp bổ thể (complement fixation), trung hòa virus (virus neutralization), ELISA (enzyme _ linked immunosorbent assay), RT _ PCR (reverse transcription polymerase chain reaction), việc xác định trình tự nhân lên chuỗi acid nucleic (nucleic acid sequence _ based amplification, NASBA), (Anon, 2000, 2002; Collins, R.A cvt, 2002; Feng, Q., 2003) Phân lập virus Cùng với hướng dẫn kĩ thuật chẩn đốn phịng thí nghiệm Tổ chức dịch tễ giới (OIE,2000,2002), tác giả Trần Thanh Phong (1996), Tơ Long Thành (2000), Nguyễn Trí Nhân (2003), Remond, M, cvt ( 2002), Sutmoller, P cvt (2003) giới thiệu phương pháp phân lập virus LMLM Nguyên tắt phương pháp chuẩn đoán bệnh dựa biểu bệnh đặc trưng tế bào nhiễm virus.Với phương pháp phân lập virus, dựa vào kết nhận định bệnh phẩm (mụn nước,biểu mơ) nghi có phải virus LMLM hay khơng Virus LMLM (nếu có) cịn sống mẫu mơ vật bệnh chuyển qua nuôi cấy môi trường tế bào động vật mẫn cảm Môi trường nuôi cấy ủ 48 quan sát hàng ngày Virus LMLM công LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vào tế bào gây biểu tế bào đặc trưng, biểu gọi CPE (cytopathic effect, tác động gây bệnh lý tế bào) Nếu quan sát thấy tế bào biểu CPE, ta kết luận mẫu có diện virus LMLM, khơng biết týp virus Tuy nhiên, biểu CPE virus LMLM nhầm lẩn với virus bệnh mụn nước lợn (swine vesicular disease virus), nên phương pháp thường sử dụng kết hợp với kĩ thuật ELISA để khẳng định lại kết Tóm lại, sau ni cấy virus LMLM tế bào mẫn cảm, quan sát thấy biểu CPE, dịch môi trường nuôi cấy chuyển qua cho thực ELISA để khẳng định lại kết Nếu CPE âm tính, dịch mơi trường ni cấy thứ chuyển vào bình ni cấy tế bào khác quan sát kết CPE 48 Nếu kết dương tính, xác nhận lại ELISA Nếu CPE âm tính ELISA mẫu ngun gốc âm tính kết luận mẫu khơng chứa virus LMLM Ngồi ra, Sutmoller, P cvt (2003), đề cập đến việc phân lập virus để phát động vật mang trùng dai dẳng Q trình nghiên cứu trâu bị nhiễm bệnh kéo dài cách thu thập mẫu probing (chỉ niêm mạc) từ họng phát triển Hà Lan năm 1959 (Bekkum, 1959) áp dụng phương pháp thường quy hầu hết quốc gia khác ổ dịch LMLM Dịch mảnh vụn từ hầu phía thực quản (oesophagus, OP fluid) lấy chén nhỏ nối với tay cầm sắt (vì gọi probing hay chén probang) Grac Tallgren sử dụng (Sutmoller, P Cottral, G.E., 1967; Hedger, R.S Sutbbins, 1971) Phản ứng huyết lọc Kỹ thuật ELISA ELISA phân tích sử dụng kháng thể để nhận diện protein Ở kháng thể đặc hiệu cho kháng nguyên Biện pháp thích hợp để phát kháng nguyên virus LMLM giám định serotype virus phương pháp ELISA Đây phản ứng sandwich gián tiếp sử dụng kháng huyết thỏ kháng lại serotype virus LMLM làm kháng thể bắt, kháng huyết chuột lang kháng lại serotyp virus LMLM làm kháng thể nhận diện Kháng thể phát huyết bị kháng chuột lang gắn với enzyme (OIE, 20000; Tơ Long Thành, 2000) Ngun lí: Thơng thường kết hợp kháng nguyên – kháng thể phát mắt thường Kĩ thuật ELISA lợi dụng đặc tính hấp thụ tự nhiên protein lên polyethylene để gắn kháng nguyên kháng thể lên giá (bề mặt đĩa nhựa) cho kháng nguyên kháng thể tương ứng có đánh dấu LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com enzyme vào tạo phản ứng Sau loại bỏ chất đánh dấu không kết hợp, cho thêm vào hỗn dịch chất màu Nhờ hoạt tính xúc tác enzyme làm giải phóng oxy nguyên tử [O] từ H2O2 để oxy hóa chất màu làm thay đổi màu hỗn dịch (Lê Văn Hùng, 2002) Ưu điểm phương pháp ELISA: Phản ứng có tính đặc hiệu cao Kháng huyết thỏ đặc hiệu với typ virus chọn lọc kháng nguyên virus từ protein cạnh tranh khác tập trung chúng lại giúp gia tăng khả phát virus Độ nhạy cao dùng với kháng thể đơn dịng Có thể kĩ thuật huyết lọc nhạy với mục đích chẩn đốn định typ Khả định typ virus từ mẫu kháng nguyên không nguyên vẹn cao Các thành phần phụ hỗ trợ không quan trọng Kết đọc đo quang phổ nên khách quan xác Phương pháp đơn giản, nhanh có tính lặp lại Hóa chất có thời hạn sử dụng lâu dễ dàng chẩn đốn Ngồi ra, số phản ứng huyết lọc khác Elisa cạnh tranh pha lỏng (liquid phaseblocking enzyme - linked immunosorbent assay) (OIE, 2000) kết hợp bổ thể gián tiếp ngăn trở ngưng kết hồng cầu cho kết tương tự với phản ứng trung hòa huyết độ nhạy tính đặc hiệu để phát virus XI Một số biện pháp phòng trị bệnh Phải thực nghiêm túc biện pháp sau: • Vệ sinh: cách ly thú bệnh, tiêu độc sát trùng chuồng trại, xử lý chất thải, kiểm sốt chặt chẽ cơng tác vận chuyển động vật, dụng cụ thức ăn chăn ni • Vaccine: sử dụng vaccine để tạo miễn dịch cho thú • Các biện pháp kết hợp: tùy vào điều kiện dịch tễ tự nhiên, kinh tế xã hội khu vực, quốc gia có bệnh LMLM mà có biện pháp phù hợp tập trung thực biện pháp tổng hợp sau: Tăng cường hệ thống thú y từ trung ương đến địa phương, đào tạo thú y viên sở có đủ trình độ phát chẩn đốn nhanh, xác bệnh LMLM Tăng cường khả chẩn đoán lâm sàng chẩn đốn phịng thí nghiệm Phải xác định nguồn virus xác định serotype Thực tiêm phòng gồm tiêm phòng bao vây có dịch xảy tiêm phịng hàng năm vùng có dịch cũ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com • • • • Khống chế chặt chẽ ổ dịch không để lây lan, tăng cường kiểm soát gia súc, người, vật dụng, thức ăn chăn nuôi…ra vào vùng dịch Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh giai đoạn, xác định yếu tố nguy cơ, nắm đặc điểm bệnh để có biện pháp khống chế Giám định chất lượng vaccine hiệu lực chủng loại Tiêu độc sát trùng nghiêm ngặt Xác định thời gian khống chế bệnh biện pháp kỹ thuật, sách đầu tư…thực thời gian Có chương trình hợp tác quốc tế chặt chẽ với nước khu vực Đối với nơi xảy dịch: Thực tích cực việc bao vây dập tắt ổ dịch biện pháp Xử lý triệt để gia súc mắc bệnh cách tiêu diệt hoàn toàn tránh lây lan diện rộng, đem gia súc chơn nơi xa dân cư thiêu đốt Cách ly triệt để đàn gia súc số lượng nhiễm bệnh nhiều Tiêu độc hàng ngày chuồng nuôi, chất thải chất môi giới truyền bệnh, kể phương tiện lại nước vôi đặc 1020%, vôi bột xút 2%, formol 2%, crezin 5%, virkou, Bencocid, Biokide Tiêm phòng khẩn cấp cho động vật dễ bị lây nhiễm cách tiêm phịng bao vây từ phía ngồi vào tâm ổ dịch Đối với nơi chưa có dịch: Tuy chưa nhiễm bệnh, vùng phải thực mạnh biện pháp sau: Cần phát bệnh sớm, chẩn đoán tốt thực chẩn đoán định kỳ ngăn ngừa bệnh từ xa Thực cách ly nghiêm ngặt động vật có biểu triệu chứng lở mồm long móng nuôi chung Ngăn chặn vật môi giới truyền bệnh, tăng cường theo dõi, chăm sóc đàn vật ni vùng dịch Tiêu độc định kỳ môi trường, nơi liên quan đến chăn nuôi động vật, vùng ổ dịch cũ nơi phát sinh để diệt mầm bệnh LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Xử lý vệ sinh thú y triệt để phương tiên vận chuyển thức ăn chăn nuôi, vật dụng (quần áo) nước uống Tốt nên định kỳ tiêm phòng vaccin LMLM, lần/năm ƒ Đối với thú nhai lại (trâu, bò, dê, cừu): sử dụng vaccin AFTOVAX ƒ Đối với heo: sử dụng vaccin AFTOPOR Điều trị: Tiêu độc sát trùng chuồng trại khu vực xung quanh cách hàng ngày phun xịt thuốc sát trùng Biodine với nồng độ pha loãng 1/200, liên tục tuần sau gia súc chữa khỏi bệnh Việc điều trị chủ yếu chữa trị triệu chứng (các vết thương miệng, vùng rìa móng, giảm sốt…) sử dụng loại kháng sinh để ngăn ngừa phụ nhiễm biến chứng xảy gia súc XII Kết luận: Bệnh lở mồm long móng bệnh truyền nhiễm nguy hiểm gia súc lây lan nhanh, mạnh rộng bệnh cấp tính tất lồi động vật hai móng hoang dã gia súc Bệnh gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi giảm sút sức cày kéo, ảnh hưởng trực tiếp đến ngành trồng trọt, suất trồng thiếu sức kéo, chậm thời vụ gieo trồng gây hậu nghiêm trọng kinh tế, xã hội bảo vệ môi trường đe dọa trực tiếp đến sức khoẻ người ta phải có biện pháp phịng trị thích hợp tăng cường công tác kiểm dịch động vật sản phẩm, tiêm phòng văcxin để bảo vệ cung cấp nguồn sức kéo nguồn thực phẩm an toàn cho người sử dụng cho xuất Một số đề suất: ¾ Đề nghị hộ chăn ni nên liên hệ với cán kỹ thuật viên nông nghiệp địa phương Trạm Thú Y huyện, thành thị để hướng dẫn cụ thể tiêm phòng cho gia súc biện pháp tốt để phịng chống bệnh lở mồm long móng ¾ Đề nghị hộ buôn bán giết mổ động vật nên mua gia súc có nguồn gốc rõ ràng (gia súc tiêm phịng bệnh lở mồm long móng), có giấy chứng nhận qua kiểm dịch quan thú y địa phương LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ¾ Đề nghị tiêm phịng văcxin lở mồm long móng phải tiến hành khẩn cấp, bắt buộc cho toàn đàn gia súc vành đai bảo vệ ¾ Khi có tượng nghi dịch, chủ nuôi phải báo cho quan Thú Y gần để khám nghiệm xác định bệnh ¾ Phải tuyên truyền nhiều hình thức tằm quan trọng biện pháp phòng chống dịch để người dân tự giác thực hiện, vận động người khác tham gia… U Tài liệu tham khảo: THS THÁI THỊ THỦY PHƯỢNG, 2006 BỆNH LMLM Ở GIA SÚC NHÀ XUẤT BẢN NÔNG NGHIỆP TP HCM PGS TS PHẠM SỸ LĂNG – PGS TS, 2002 NGUYỄN THIỆN MỘT SỐ BỆNH MỚI DO VIRUT Ở GIA SÚC GIA CẦM NHẬP NỘI VÀ BIỆN PHÁP PHỊNG TRỊ NHÀ XUẤT BẢN NƠNG NGHIỆP HÀ NỘI BS VĂN ĐĂNG KỲ, 1999 KỸ THUẬT PHỊNG CHỐNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG VÀ BỆNH NHIỆT THÁN Ở GIA SÚC NHÀ XUÁT BẢN NÔNG NGHIỆP HUỲNH THỊ THANH THỦY, 5/2003 VÀI ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC CỦA BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG TRÊN TRÂU, BỊ, HEO TẠI TP HỒ CHÍ MINH LUẬN ÁN THẠC SỸ KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP TP HỒ CHÍ MINH VÕ THỊ THU THỦY –TPHCM, 2005 KHẢO SÁT TÌNH HÌNH CHĂN NUÔI VÀ SỰ HIỆN DIỆN CỦA KHÁNG THỂ SAU KHI TIÊM PHỊNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG Ở HEO VÀ BÒ TRÊN MỘT SỐ HỘ Ở HUYỆN CHÂU ĐỨC, TỈNH BÀ RỊA-VŨNG TÀU CHUYÊN NGÀNH THÚ Y TRƯỜNG ĐH NÔNG LÂM TPHCM BS VĂN ĐĂNG KỲ,1999 KỸ THUẬT PHỊNG CHỐNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG VÀ BỆNH NHIỆT THÁN Ở GIA SÚC NHÀ XUẤT BẢN NÔNG NGHIỆP WWW.GOOGLE.COM.VN LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... thiệt hại lớn kinh tế Mơ hình dịch lở mồm long móng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Virus lở mồm long móng Gia súc mẫn cảm bệnh lở mồm long móng Tiêm phịng khơng hiệu -Không... phí lớn… V Virus LMLM LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Virus sốt lở mồm long móng (Foot and mouth disease virus) Hình thái Virus LMLM thuộc loại virus nhỏ virus qua lọc,... ĐĂNG KỲ, 1999 KỸ THUẬT PHÒNG CHỐNG BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG VÀ BỆNH NHIỆT THÁN Ở GIA SÚC NHÀ XUÁT BẢN NÔNG NGHIỆP HUỲNH THỊ THANH THỦY, 5/2003 VÀI ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC CỦA BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG TRÊN