kl nghien cuu tong hop va khao sat 2015 660 63

0 TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU T NG Ả N NG PV ẢO S T NG NẤM, KHUẨN CỦ NANO CHITOSAN KẾT H P DỊCH CHIẾT CÂY CẦN TÂY (Apium graveolens) Ngƣời hƣớng dẫn : TS TRẦN THỊ DUNG Ngƣời thực : NGUYỄN TRIẾT LÃM Lớp : 10060301 Khoá : 14 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2015 i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành tốt khóa luận này, tơi xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: - TS Trần Thị Dung, ngƣời hƣớng dẫn khoa học trực tiếp, tận tình hƣớng dẫn phƣơng pháp nghiên cứu đóng góp nhiều ý kiến q báu, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận - Trƣờng Đại học Tơn Đức Thắng, tập thể Thầy Cô khoa Khoa Học Ứng Dụng - Các Thầy Cô tận tâm giảng dạy, truyền thụ kiến thức quý báu trình học tập trƣờng - Tập thể lớp 10060301, ngƣời thân giúp đỡ, động viên suốt q trình học tập hồn thành khóa luận ii Ờ C M ĐO N Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi đƣợc hồn thành trƣờng Đại học Tơn Đức Thắng dƣới hƣớng dẫn khoa học TS Trần Thị Dung Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chƣa công bố dƣới hình thức trƣớc Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá đƣợc tơi thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngồi ra, khóa luận tơi có sử dụng số nhận xét, đánh giá nhƣ số liệu tác giả, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung khóa luận Trƣờng Đại học Tơn Đức Thắng không liên quan đến vi phạm tác quyền, quyền tơi gây q trình thực (nếu có) TP Hồ Chí Minh, ngày tháng Tác giả (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Triết Lãm năm 2015 iii TÓM TẮT Đề tài: “Nghiên cứu tổng hợp khảo sát khả kháng nấm, khuẩn nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây (Apium graveolens)” Giáo viên hƣớng dẫn: TS Trần Thị Dung Nội dung đề tài: Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây, khảo sát tác dụng kháng nấm kháng khuẩn nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Điều kiện tốt để tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây sau khảo sát là: - Thời gian ngâm chiết mẫu nƣớc nóng 80 0C: 10 phút - Nồng độ dịch chiết cần tây: 0,01 g/mL - Nồng độ dung dịch chitosan: % - Nhiệt độ tạo dịch chiết cần tây nano chitosan: 70 0C - T lệ dịch chiết / dung dịch chitosan đƣợc hòa tan HCl 0,5% là: mL dịch chiết kết hợp với dung dịch chitosan vừa đủ 100 mL - Thời gian tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây là: 160 phút Tác dụng kháng khuẩn nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây cao Nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây có tác dụng kháng chủng vi khuẩn gram dƣơng nhƣ Bacillus subtilis, Staphyloccus aureus tốt chủng vi khuẩn gram âm nhƣ Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Trong tác dụng kháng cao chủng vi khuẩn Bacillus subtilis thấp chủng Pseudomonas aeruginosa iv Tác dụng kháng nấm nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây lên chủng nấm khảo sát cho kết cao Tác dụng kháng nấm giảm dần theo thứ tự Fusarium ambrosium, Sclerotium rolfsii, Phytophthora capsici v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ……………………………………………………………………… …i LỜI CAM ĐOAN……………………………… …… …………………………… ii TÓM TẮT …………………………………………………………………………… iii DAH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT …………… ……………………………… viii DANH MỤC CÁC BẢNG ………………………………………………………… ix DANH MỤC CÁC HÌNH……………… ……… ………………………………… x Chƣơng MỞ ĐẦU 14 1.1 Đặt vấn đề 14 1.2 Mục tiêu 1.3 cầu Chƣơng TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu công nghệ nano 2.1.1 Khái niệm nguồn gốc 2.1.2 Cơ sở khoa học 2.1.3 Ứng dụng 2.2 Giới thiệu chitin – chitosan 2.2.1 Giới thiệu chung 2.2.2 Cấu trúc 2.2.3 Tính chất 2.2.4 Ứng dụng chitin-chitosan dẫn xuất 2.3 Giới thiệu nano chitosan vật liệu nano chitosan 10 2.3.1 Giới thiệu chung 10 2.3.2 Các phƣơng pháp tổng hợp vật liệu nano chitosan 10 2.3.3 Các phƣơng pháp phân tích hạt nano chitosan 22 vi 2.3.4 Ứng dụng nano chitosan loại vật liệu nano chitosan 26 2.3.5 Tình hình nghiên cứu liên quan đến đề tài 28 2.4 Giới thiệu cần tây 28 2.4.1 Phân loại thực vật 28 2.4.2 Đặc điểm phân bố cần tây 29 2.4.3 Tính chất dƣợc lý 29 2.5 Đại cƣơng số hợp chất hữu tự nhiên 29 2.5.1 Alkaloid 29 2.5.2 Flavonoid 30 2.5.3 Saponin 31 2.5.4 Tanin… 31 2.6 Sơ lƣợc vi khuẩn sử dụng nghiên cứu 32 2.6.1 Staphylococcus aureus 32 2.6.2 Escherichia coli 34 2.6.3 Bacillus subtilis 35 2.6.4 Pseudomonas aeruginosa 36 2.7 Sơ lƣợc vi nấm sử dụng nghiên cứu 37 2.7.1 Fusarium ambrosium 37 2.7.2 Phytophthora capsici 38 2.7.3 Sclerotium rolfsii 39 Chƣơng V T LIỆU VÀ PHƢƠNG PH P NGHIÊN CỨU 41 3.1 Địa điểm 41 3.2 Thời gian 41 3.3 Vật liệu thí nghiệm 41 3.3.1 Mẫu cần tây 41 vii 3.3.2 Chủng vi khuẩn nấm thử nghiệm 41 3.4 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 41 3.5 Thiết bị chuyên dụng 41 3.6 Môi trƣờng phân lập, nuôi cấy vi khuẩn nấm 42 3.6.1 Môi trƣờng TCP 42 3.6.2 Môi trƣờng PGA 42 3.6.3 Nƣớc muối sinh lý 42 3.7 Phƣơng pháp thí nghiệm 42 3.7.1 Nội dung 1: Định tính số hợp chất dịch chiết cần tây 44 3.7.2 Nội dung 2: Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng trình chiết dịch chiết đến kết tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 45 3.7.3 Nội dung 3: Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 47 3.7.4 Nội dung 4: Khảo sát tác dụng kháng khuẩn dung dịch nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 49 3.7.5 Nội dung 5: Khảo sát khả kháng nấm dung dịch nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 51 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LU N 53 4.1 Kết định tính số nhóm chất tự nhiên dịch chiết cần tây 53 4.1.1 Định tính Saponin 53 4.1.2 Định tính Tanin 53 4.1.3 Định tính Flavonoid 54 4.1.4 Định tính Alkaloid 54 4.2 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng dịch chiết cần tây đến trình tạo nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 55 viii 4.2.1 Khảo sát thời gian chiết dịch chiết cần tây đến trình tạo nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 55 4.2.2 Khảo sát nồng độ dịch chiết dịch chiết cần tây tới kết tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 55 4.3 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 56 4.3.1 Khảo sát nhiệt độ ảnh hƣởng tới trình tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 56 4.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian tạo nano tới trình tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 57 4.4 Kết đo FT-IR chụp TEM nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây 57 4.4.1 Kết đo FT-IR 57 4.4.2 Kết chụp TEM 59 4.5 Kết khảo sát tác dụng kháng khuẩn nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây………… 59 4.6 Kết khảo sát tác dụng kháng nấm nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây………… 63 Chƣơng KẾT LU N VÀ ĐỀ NGH 66 5.1 Kết luận 66 5.2 Đề nghị 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………… ……………… …………………… 68 PHỤ LỤC…………………………………………………………………………… 73 ix DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TCP Môi trƣờng cao thịt - peptone PGA Potato glucose agar EDTA Etheylene diamin – tetra –acetic -acid TEM Transmission elechitinron microscopy DA Độ acetyl hóa DDA Độ deacetyl hóa FT-IR Fourier transform infrared spectroscopy 74 3.00 229.570 76.523 0.04 0.35 -Total 12.00 913.200 76.100 Within 2.57 0.74 0.61 Bartlett's test Chi-square = 12.571 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File :Keyboard Function : RANGE Error Mean Square = 0.3670 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.213 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 72.82 C Mean = 79.56 A Mean 2= 79.56 A Mean 4= 76.52 B Mean = 75.49 B Mean 3= 75.49 B Mean = 76.52 B Mean 1= 72.82 C - Kết nồng độ dịch chiết cần tây ảnh hƣởng tới kết tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file: NDCHIET Title: NDC Function: ANOVA-1 Data case no to 12 75 One way ANOVA grouped over variable (B) with values from to Variable (NDC) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 66.432 2.903 22.144 61.028 0.0000 0.363 Total 11 69.335 Coefficient of Variation = 0.75% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 237.570 79.190 0.08 0.35 3.00 254.360 84.787 0.79 0.35 3.00 237.890 79.297 0.39 0.35 3.00 238.820 79.607 0.81 0.35 -Total 12.00 968.640 Within 80.720 0.60 Bartlett's test Chi-square = 6.211 Number of Degrees of Freedom = 2.51 0.72 76 Approximate significance = 0.000 Data File :Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.3630 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.206 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 79.19 B Mean 2= 84.79 A Mean = 84.79 A Mean = 79.61 B Mean = 79.30 B Mean = 79.30 B Mean = 79.61 B Mean = 79.19 B - Kết thời gian tổng hợp ảnh hƣởng tới kết tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file:TGTHOP Title: TGT Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (D) with values from to Variable (TGT) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1.475 0.492 1.793 0.2263 77 Within 2.194 0.274 Total 11 3.669 Coefficient of Variation = 0.63% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 251.680 83.893 0.96 0.30 3.00 248.850 82.950 0.36 0.30 3.00 250.720 83.573 0.11 0.30 3.00 251.030 83.677 0.21 0.30 -Total 12.00 1002.280 Within 83.523 0.52 Bartlett's test Chi-square = 7.531 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File :Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.2740 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.048 Original Order at alpha = 0.010 Ranked Order 0.58 0.17 78 Mean 1= 83.89 A Mean 1= 83.89 A Mean = 82.95 A Mean = 83.68 A Mean = 83.57 A Mean = 83.57 A Mean = 83.68 A Mean = 82.95 A - Kết nhiệt độ tổng hợp ảnh hƣởng tới kết tổng hợp nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file: NDTHOP Title: NDTH Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (C) with values from to Variable (NDTH) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 4.224 0.467 1.408 24.115 0.0002 0.058 Total 11 4.691 Coefficient of Variation = 0.28% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 257.280 85.760 0.09 0.14 79 3.00 253.720 84.573 0.43 0.14 3.00 254.970 84.990 0.21 0.14 3.00 252.460 84.153 0.02 0.14 -Total 12.00 1018.430 Within 84.869 0.65 0.19 0.24 Bartlett's test Chi-square = 10.993 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File : Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.05800 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4822 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 85.76 A Mean Mean = 84.57 BC Mean = Mean = 84.99 B Mean = 84.15 Mean C Mean = 85.76 A 2= 84.99 B 84.57 BC = 84.15 C - Kết kháng khuẩn E coli dung dịch nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file:EC Title: EC 80 Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (EC) with values from to Variable (NT) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 1524.417 2.280 508.139 1782.941 0.0000 0.285 Total 11 1526.697 Coefficient of Variation = 4.31% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.31 3.00 27.100 9.033 0.21 0.31 3.00 92.200 30.733 0.72 0.31 3.00 29.300 9.767 0.76 0.31 -Total 12.00 148.600 Within Bartlett's test Chi-square = 21.744 12.383 0.53 11.78 3.40 81 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Data File : Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.2050 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.9065 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 0.0000 C Mean = 30.73 A Mean = 9.030 B Mean 4= 9.770 B Mean 3= 30.73 A Mean 2= 9.030 B Mean = 9.770 B Mean = 0.0000 C - Kết kháng khuẩn P aeruginosa dung dịch nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file: PA Title: PA Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (PA) with values from to Variable (NT) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean 82 Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 1407.016 0.473 469.005 7926.856 0.0000 0.059 Total 11 1407.489 Coefficient of Variation = 1.87% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.14 3.00 21.200 7.067 0.25 0.14 3.00 87.000 29.000 0.36 0.14 3.00 47.900 15.967 0.21 0.14 -Total 12.00 156.100 Within 13.008 11.31 3.27 0.24 Bartlett's test Chi-square = 17.287 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Data File :Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.05900 83 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4863 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 0.0000 Mean = 7.070 Mean = Mean = D Mean C 3= 29.00 A Mean 4= 15.97 B 29.00 A Mean = 7.070 C 15.97 B Mean = 0.0000 D - Kết kháng khuẩn B subtilis dung dịch nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file: BS Title: BS Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (BS) with values from to Variable (NT) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 1689.949 1.620 563.316 2781.808 0.0000 0.203 Total 11 1691.569 Coefficient of Variation = 3.46% 84 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.26 3.00 23.800 7.933 0.15 0.26 3.00 35.600 11.867 0.86 0.26 3.00 96.500 32.167 0.21 0.26 -Total 12.00 155.900 12.992 Within 12.40 3.58 0.45 Bartlett's test Chi-square = 24.200 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Data File : Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.2030 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.9020 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 0.0000 Mean = 7.930 Ranked Order D Mean C Mean 4= 3= 32.17 A 11.87 B 85 Mean = 11.87 B Mean 2= 7.930 C Mean = 32.17 A Mean = 0.0000 D - Kết kháng khuẩn S aureus dung dịch nano chitosan kết hợp dịch chiết cần tây Data file: SA Title: SA Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (SA) with values from to Variable (NT) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 1386.109 0.940 462.036 3932.226 0.0000 0.117 Total 11 1387.049 Coefficient of Variation = 2.31% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 21.000 7.000 0.44 0.20 3.00 26.900 8.967 0.38 0.20 3.00 29.800 9.933 0.35 0.20 3.00 100.000 33.333 0.12 0.20 86 -Total 12.00 177.700 14.808 Within 11.23 3.24 0.34 Bartlett's test Chi-square = 2.397 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.548 Data File :Keyboard Function :RANGE Error Mean Square = 0.1170 Error Degrees of Freedom = 21 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.6848 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 7.000 D Mean = 33.33 A Mean = 8.970 C Mean 3= 9.930 B Mean = 9.930 B Mean 2= 8.970 C Mean = 33.33 A Mean = 7.000 D 87 88 ... khô puckery miệng sau ăn trái chƣa chín rƣợu vang đỏ Cũng thế, phân hủy tanin theo thời gian đóng vai trị quan trọng việc làm cho trái chín ủ rƣợu vang 2.6 Sơ lƣợc vi khuẩn sử dụng nghi n cứu... cam, flavonol màu vàng nhạt đến màu vàng, chalcone màu vàng đến cam-đỏ Các isoflavone, flavanone, flavanonol, leucoantocyanidine, catechin kết tinh khơng màu Antocyanidine có màu đỏ, tím, xanh... thƣờng gặp D-glucose; kế D-galachitinose; L-Rhamnose; L-Arabinose… Chalcone diện tự nhiên, flavanol flavanonol gặp, flavone flavonol phân bố rộng rãi tự nhiên Các glycosid flavonol nhƣ: rutin, quercitrin,