14:27, 21/10/2022 XÁC ĐỊNH HCV GENOTYPE BẰNG KỸ THUẬT LiPA XÁC ĐỊNH HCV GENOTYPE BẰNG KỸ THUẬT LiPA BS Hồ Tấn Đạt DNA-Lab- Trung Tâm Y khoa-Medic Viêm gan tình trạng viêm tế bào gan Nguyên nhân gây viêm gan nhiều: Do virus, thuốc, hóa chất, rượu, tự kháng thể…Trong đó, tác nhân virus quan tâm nhiều vấn đề lây lan cộng đồng, điều trị chủng ngừa bệnh Cho tới nay, người ta xác định loại virus gây viêm gan chủ yếu, virus gây viêm gan siêu vi A, B, C, D, E, G Trong đó, virus viêm gan siêu vi C (HCV: Hepatitis C Virus) tác nhân quan tâm nhiều diễn tiến bệnh & cơng việc chế tạo vacxin chưa có nhiều hứa hẹn Việt Nam nước nằm vùng dịch tể virus gây viêm gan siêu vi C HCV virus có gene RNA, chu kỳ nhân đôi virus phải sử dụng men RNA polymerase, mà men khả sửa sai q trình tổng hợp RNA, từ làm cho gen virus đa dạng nên người ta phân virus thành nhiều loại (Type) khác Viêm gan siêu vi C bệnh nguy hiểm triệu chứng lâm sàng thường không rõ ràng (Khoảng 90% trường hợp triệu chứng), hậu bệnh để lại thường nặng nề như: 50%-80% chuyển qua viêm gan mạn tính, có tới 20%-25% bệnh nhân viêm gan mạn tính diễn tiến qua xơ gan ung thư gan Virus HCV lây truyền HIV: Qua đường máu, sinh dục, mẹ qua Tuy nhiên, điều đặc biệt mà ta cần lưu ý khoảng 50% bệnh nhân không rõ đường truyền HCV Như vấn đề phòng bệnh cộng đồng nhiều khó khăn Điều trị viêm gan siêu vi C có cách: Điều trị đặc hiệu điều trị không đặc hiệu Điều trị không đặc hiệu đơn dùng thuốc bổ hổ trợ chức gan, khơng tiêu diệt HCV khơng ngăn chặn diễn tiến đến xơ gan ung thư gan www.drthuthuy.com/reseach/VGCLiPa.htm 1/2 14:27, 21/10/2022 XÁC ĐỊNH HCV GENOTYPE BẰNG KỸ THUẬT LiPA Điều trị đặc hiệu phải dùng Interferon, phương pháp điều trị tốn tiền bạc thời gian thường phải kéo dài, đồng thời bệnh nhân phải chịu tác dụng phụ thuốc Do đó, để điều trị hiệu quả, người bác sĩ cần biết người bệnh nhiễm siêu vi C loại (type) type nhiều type phụ khác, mà type cần cách điều trị thích hợp (Lựa chọn thuốc điều trị, thời gian cần thiết cho điều trị, tiên đoán khả hết bệnh hay dễ tái phát bệnh) Nhờ xác định kiểu gene virus mà Bác sĩ chọn phác đồ điều trị thích hợp cho bệnh nhân, giúp tiết kiệm tiền thời gian cho điều trị Về mặt kỹ thuật thực hiện, phương pháp ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử Kỹ thuật sử dụng rộng rãi nước giới nhờ vào ích lợi nó: Xác định type subtype HCV thường gặp; Đạt độ nhạy & đặc hiệu; Dễ thực phòng xét nghiệm lâm sàng Phương pháp thực bán tự động (Khơng phải hệ thống tự động hồn tồn) Có hai giai đoạn khác nhau: khuếch đại gene (Dựa theo phương pháp PCR) lai sản phẩm khuếch đại Khuếch đại đoạn gene HCV: Giai đoạn có bước chính: Ly trích tinh RNA: Thực chủ yếu tay, ngăn kính cách ly Dụng cụ chủ yếu máy ly tâm lạnh Khếch đại đoạn gene HCV: Thực hoàn toàn tự động máy luân nhiệt ( Máy PCR) Sau giai đoạn đoạn gene cuả HCV khuếch đại lên hàng tỉ lần Điện di để kiểm tra có sản phẩm khuếch đại Điện di gel agarose, chụp hình phân tích gel hệ thống Gel Doc Ba bước thực phòng riêng biệt Lai sản phẩm khuếch đại Chuẩn bị hoá chất: Thực tủ kính riêng, vơ trùng Các bước lai đoạn gene khuếch đại với Probes gắn sẵn strip( Là que có gắn sẵn probes) thực chủ yếu tay Thiết bị cần thiết ủ nhiệt xác 50 o C có lắc Sau lai, kết kiểu gene HCV đọc phân tích theo bảng mà nhà sản xuất cung cấp(Hãng Bayer) Sau đó, kết chụp hình in cho bệnh nhân hệ thống Gel Doc www.drthuthuy.com/reseach/VGCLiPa.htm 2/2 ...14:27, 21/10/2022 XÁC ĐỊNH HCV GENOTYPE BẰNG KỸ THUẬT LiPA Điều trị đặc hiệu phải dùng Interferon, phương pháp điều trị tốn tiền bạc... bệnh) Nhờ xác định kiểu gene virus mà Bác sĩ chọn phác đồ điều trị thích hợp cho bệnh nhân, giúp tiết kiệm tiền thời gian cho điều trị Về mặt kỹ thuật thực hiện, phương pháp ứng dụng kỹ thuật sinh... thực hiện, phương pháp ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử Kỹ thuật sử dụng rộng rãi nước giới nhờ vào ích lợi nó: Xác định type subtype HCV thường gặp; Đạt độ nhạy & đặc hiệu; Dễ thực phòng xét