ỨNG DỤNG kỹ THUẬT GIẢI TRÌNH tự CHUỖI để xác ĐỊNH KIỂU GEN và các đột BIẾN KHÁNG THUỐC của SIÊU VI VIÊM GAN b

14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… Home Page | Tài liệu chuyên môn | Bạn cần biết hệ | Thông tin hội nghị | Liên   ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ  XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊU VI VIÊM GAN B Hồ Tấn Đạt, Phạm Thị Thu Thủy, Nguyễn Bảo Toàn, Nguyễn Thị Kiều Oanh, Nguyễn Thanh Tòng Trung Tâm Y Khoa MEDIC, TP Hồ Chí Minh Tóm Tắt Tám kiểu gen siêu vi viêm gan B (HBV) xác định (Từ A đến H) dựa vào khác % gen HBV, phân bố kiểu gen khác châu lục, nước khác Việc xác định kiểu gen HBV ngày quan tâm kiểu gen HBV có liên quan đến biểu triệu chứng lâm sàng, diễn tiến bệnh đáp ứng với điều trị viêm gan siêu vi B Bên cạnh đó, vấn đề phát đột biến kháng thuốc, đặc biệt đột biến kháng Lamivudine điều trị HBV giữ vai trò quan trọng để từ có lựa chọn thuốc hiệu điều trị viêm gan siêu vi B Chúng tơi ứng dụng kỹ thuật giải trình tự chuỗi (Sequencing) hệ thống OpenGene với thuốc thử TruGene (Bayer) việc xác định kiểu gen đột biến kháng thuốc Lamivudine công bố HBV Trong thời gian từ tháng 8/2004 đến tháng 5/2006, phịng xét nghiệm Trung Tâm Y Khoa MEDIC, chúng tơi thực giải trình tự chuỗi cho 122 trường hợp bệnh nhân Việt Nam viêm gan siêu vi B mãn tính điều trị Lamivudine Nam chiếm 97 trường hợp (79,5%), nữ 25 trường hợp (20,5%), với tuổi trung bình bệnh nhân 33,9 ± 10,4 Tất trường hợp HBVDNA [+], HBeAg [+] 100 trường hợp (82,0 %) HBeAg [-] 22 trường hợp (18,0 %) Chỉ có kiểu gen HBV kiểu gen B C, kiểu gen B 76 trường hợp (62,3 %) kiểu gen C 46 trường hợp (37,7 %) Tổng cộng có 78 trường hợp (63,9%) có đột biến kháng Lamivudine, tỷ lệ kiểu đột biến sau: L180M & M204I (11,5%); L180M & M204V (36,1%); L180M, M204V & V173L (0,8%); L180M, M204V & V207I (0,8%); M204I (12,3%); M204I & V207I (0,8%); M204V (1,6%) Trong 76 trường hợp kiểu gen B có 49 trường hợp (64,5%) có đột biến kháng Lamivudine, 46 trường hợp kiểu gen C có 29 trường hợp (63,0%) có đột biến kháng Lamivudine Tất bệnh nhân điều trị Lamivudine với thời gian điều trị trung bình 2,5 ± 0,9 năm với số trường hợp tương ứng cho điều trị 1, 2, 3, năm 18, 41, 45, 18 trường hợp Tỷ lệ có đột biến kháng Lamivudine sau 1, 2, 3, năm điều trị Lamivudine 27,8%; 63,4%; 71,1%; 83,3% Qua kết bước đầu đạt thấy kỹ thuật giải trình tự chuỗi giữ vai trò quan trọng việc xác định kiểu gen siêu vi viêm gan B việc nhận diện đột biến kháng thuốc Lamivudine để từ có phác đồ điều trị tối ưu www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 1/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ…   Summary APPLYING SEQUENCING TO IDENTIFY HEPATITIS B VIRUS GENOTYPES AND MUTATIONS Hepatitis B Virus (HBV) can be classified into genotypes A through H based on an intergroup divergence of 8% or more in the complete nucleotide sequence, and the different distribution of various genotypes in different continents, countries The identification of HBV genotypes are more concerned as it is HBV genotypes relating to clinical manifestation, activity of liver disease as well as treatment responses of Hepatitis B Additionally, the discovery of resistance to medicines in HBV treatment plays a very important role from which we can have an appropriate and effective choice in Hepatitis B treatment.We have applied the Sequencing by OpenGene system with Trugene HBV Genotyping kit (Bayer) to identify Hepatitis B Virus Genotypes and Lamivudine – resistant mutation From August 2004 to May 2006, in MEDIC laboratory, we have implemented sequencing for 122 cases Vietnamese with Chronic Hepatitis B on Lamivudine treatment in which: 97 cases are males (take 79.5%) and 25 cases are females (take 20.5%), medium age: 33.9±10.4 All cases are HBVDNA [+] in which: 100 cases are HBeAg [+] (82.0%) and 22 cases are HBeAg [-] (18.0%) There are only two genotypes of HBV: genotype B and genotype C, in which 76 cases are genotypes B (62.3%) and 46 cases are genotype C (37.7%) Totally there are 78 cases (63.9%) mutations with following established proportion and types: L180M & M204I (11.5%); L180M & M204V (36.1%); L180M, M204V & V173L (0.8%); L180M, M204V & V207I (0.8%); M204I (12.3%); M204I&V207I (0.8%); M204V (1.6%) There are 49 cases mutations in 76 cases of genotypes B (64.5%) and 29 cases in 46 cases of genotypes C (63.0%) All patients are on Lamivudine treatment with average time is 2.5±0.9 years, the corresponding number of patients in treatment period of 1, 2, 3, year are 18, 41, 45, 18 The proportion of developing mutations after 1, 2, 3, years of treatment with Lamivudine is 27.8%; 63.4%; 71.1%; 83.3% We have found that - with above preliminary results - the sequencing plays a very important role in identifying Hepatitis B Virus Genotypes and Mutations From those results we can approach an optimal treatment course I Đặt vấn đề: Những tiến điều trị viêm gan siêu vi B (HBV) góp phần đáng kể việc hạn chế biến chứng bệnh Cho đến có loại thuốc điều trị HBV FDA (Food and Drug Administration: Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Mỹ) công nhận Interferone, Lamivudine, Adefovir Entecavir, Lamivudine xem thuốc uống lựa chọn Tuy nhiên trình điều trị Lamivudine có vấn đề phát sinh: Vấn đề đột biến kháng Lamivudine www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 2/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… HBV, tỉ lệ đột biến kháng xảy ngày cao tăng theo thời gian dùng thuốc Lamivudine Một vấn đề ngày quan tâm kiểu gen HBV (HBV Genotype) Khác với kiểu gen siêu vi viêm gan C (HCV) có vai trị quan trọng việc đánh giá điều trị đặc hiệu vai trò kiểu gen HBV chưa rõ ràng Sự phân bố kiểu gen HBV thay đổi tùy theo vùng địa dư, châu lục hay nước có kiểu gen vượt trội khác Có nhiều kỹ thuật sinh học phân tử dùng để xác định đột biến kháng thuốc HBV xác định kiểu gen HBV Chúng tơi sử dụng kỹ thuật giải trình tự chuỗi (Sequengcing) để đồng thời vừa xác định đột biến kháng thuốc Lamivudine HBV vừa xác định kiểu gen HBV, khảo sát kiểu gen vượt trội người Việt Nam đánh giá loại tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine theo thời gian điều trị Lamivudine Mục tiêu nghiên cứu là: (1) Xác định kiểu gen HBV bệnh nhân Việt Nam; (2) Khảo sát kiểu đột biến tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine bệnh nhân điều trị Lamivudine liên tục II Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 1, Đối tượng nghiên cứu: Bệnh nhân người Việt Nam, chẩn đoán viêm gan siêu vi B mãn tính điều trị liên tục Lamivudine Các bệnh nhân chia làm nhóm với thời gian điều trị liên tục Lamivudine tương ứng 1, 2, 3, năm Có xét nghiệm HBVDNA dương tính Khơng bị đồng nhiễm siêu vi viêm gan C 2, Kỹ thuật thực hiện: 2.1, Kỹ thuật giải trình tự chuỗi: Huyết bệnh nhân tách lưu ống mẫu tinh sạch, mẫu chưa thực lưu nhiệt độ – 200C DNA HBV tách chiết theo nguyên tắc hấp thụ hạt Silicate (Phương pháp BOOM) rửa Ethanol 70% Thực phản ứng trùng hợp chuỗi (PCR) thuốc thử TruGene HBV Genotyping (Bayer), máy luân nhiệt Bio-Rad theo hướng dẫn nhà sản xuất Sau kiểm tra có sản phẩm khuếch đại (Amplicons) điện di thạch Agarose tiếp tục thực phản ứng cắt đoạn (Clip reaction) theo hướng dẫn nhà sản xuất máy luân nhiệt, tiếp tục thực điện di thạch Acrylamide với hệ thống OpenGene Tín hiệu tự động thu nhận từ hệ thống điện di phần mềm máy tính xếp trình tự chuỗi mẫu, trình tự chuỗi so sánh với thư viện www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 3/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… gen (Gene Librarian) có sẵn cung cấp nhà sản xuất (Bayer) Kết thu nhận kiểu gen HBV đột biến kháng Lamivudine công bố 2.2, HBeAg: Kỹ thuật thực theo phương pháp điện hóa phát quang, thuốc thử hãng Abbott, thực máy Architect (Abbott) 3, Phương pháp nghiên cứu: Cắt ngang 4, Thống kê: Phần mềm SPSS for Win, Ver 7.5 III, Kết quả: 1, Tổng số có 122 trường hợp thực giải trình tự chuỗi: Tuổi nhỏ 10, lớn 63 với độ tuổi trung bình 33,9 ± 10,4 Nam có 97 trường hợp chiếm 79,5% nữ có 25 trường hợp chiếm 20,5% 2, Kiểu gen HBV 122 trường hợp: Chỉ có kiểu gen HBV xác định kiểu gen B C Trong kiểu gen B 76 trường hợp (62,3%) kiểu gen C 46 trường hợp (37,7%) 3, Kết HBeAg: Tất 122 trường hợp có HBVDNA dương tính, HBeAg âm tính 22 trường hợp (18%) HBeAg dương tính 100 trường hợp (82%) Kết HBeAg kiểu gen khác ghi nhận Bảng Tỉ lệ HBeAg kiểu gen B, C   Kiểu gen B Kiểu gen C Số lượng Phần trăm Số lượng Phần trăm HBeAg âm tính 12 15,8% 10 21,7% HBeAg dương tính 64 84,2% 36 78,3% 4, Kiểu gen HBV đột biến kháng Lamivudine: Bảng Tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine kiểu gen HBV www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html ể ể 4/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ…   Kiểu gen B Kiểu gen C Số lượng Phần trăm Số lượng Phần trăm Không có đột biến kháng Lamivudine 27 35,5% 17 37% Có đột biến kháng Lamivudine 49 64,5% 29 63% 5, Các kiểu đột biến kháng Lamivudine tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine theo thời gian điều trị: Tổng cộng có 78 (63,9%) trường hợp có đột biến kháng Lamivudine Bảng Tỷ lệ loại đột biến kháng Lamivudine tỉ lệ phần trăm Loại đột biến L180M, M204I L180M, M204V L180M, M204V & V173L L180M, M204V M204I M204I, M204V & V207I V207I Số lượng 14 44 1 15 Tỉ lệ % 11,5 36,1 0.8 0,8 12,3 0,8 1,6 Ghi chú: L (Leucine); M (Methionine); I (Isoleucine); V (Valine) Có nhóm bệnh nhân khảo sát dựa thời gian điều trị Lamivudine, số lượng bệnh nhân sau 1, 2, 3, năm điều trị Lamivudine tương ứng 18, 41, 45, 18 trường hợp Thời gian điều trị Lamivudine trung bình 2,5 ± 0,9 năm Bảng Tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine thời gian điều trị Lamivudine   năm năm năm năm Số lượng Phần trăm Số lượng Phần trăm Số lượng Phần trăm Số lượng Phần trăm Khơng có đột biến kháng Lamivudine 13 72,2% 15 36,6% 13 28,9% 16,7% Có đột biến kháng Lamivudine 27,8% 26 63,4% 32 71,1% 15 83,3% IV, Bàn luận: 1, Kiểu gen HBV: www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 5/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… Có cách phân loại HBV: Kiểu huyết (Serotype) kiểu gen (Genotype) Trước người ta phân HBV thành kiểu huyết adr, adw, ayr ayw dựa vào kháng nguyên kháng nguyên bề mặt HBV (HBsAg) Tuy nhiên ý nghĩa kiểu huyết chưa nghiên cứu nhiều Với phát triển sinh học phân tử, ngày người ta phân loại HBV dựa vào nghiên cứu gen HBV phân HBV thành loại đặt tên từ A đến H dựa vào khác 8% tồn bộ gen HBV Có nhiều kỹ thuật dùng để xác định kiểu gen HBV kỹ thuật giải trình tự chuỗi (Sequencing), đa hình đoạn cắt giới hạn (RFLP), phản ứng lai đoạn dò (LiPA), phản ứng trùng hợp chuỗi với đoạn mồi đặc hiệu (PCR with Specific Primers), phản ứng miễn dịch gắn men (Enzyme-linked immunoassay)…Kỹ thuật dùng để xác định kiểu gen HBV kỹ thuật giải trình tự chuỗi bên cạnh việc xác định kiểu gen HBV chúng tơi cịn tìm đột biến kháng Lamivudine lần thực giải trình tự chuỗi Vai trị kiểu gen HBV chưa nghiên cứu nhiều có nhiều nghiên cứu với số liệu nhỏ, rãi rác công bố với kết không phù hợp nhau, điều khác với vai trò kiểu gen HCV vấn đề điều trị viêm gan siêu vi C Kiểu gen HBV phân bố châu lục vùng lãnh thổ khác khác Kiểu gen HBV chủ yếu Đông Nam Á kiểu gen B C, điều phù hợp với kết chúng tơi với 122 trường hợp thực giải trình tự chuỗi có 76 trường hợp (62,3%) kiểu gen B 46 trường hợp (37,7%) kiểu gen C Trong 122 trường hợp thực giải trình tự chuỗi (HBV DNA dương tính) chúng tơi ghi nhận HBeAg âm tính 22 trường hợp (18%) HBeAg dương tính 100 trường hợp (82%) Có vài nghiên cứu công bố cho thấy kiểu gen B HBV có thải trừ HBeAg cao so với kiểu gen C Tuy nhiên kết (Bảng 1) khơng có khác biệt rõ rệt tỉ lệ HBeAg âm tính kiểu gen B C (15,8% 21,7%) Vai trò kiểu gen HBV diễn tiến bệnh viêm gan siêu vi B nghiên cứu, kết cho thấy kiểu gen C dường làm cho rối loạn chức gan nhiều kiểu gen B kiểu gen C dễ diễn tiến đến xơ gan nhiều kiểu gen B Mối liên hệ kiểu gen HBV ung thư tế bào gan ghi nhận: Kiểu gen B thường kết hợp với phát triển ung thư tế bào gan người trẻ tuổi, nghiên cứu khác lại cho thấy kiểu gen C thường kết hợp với ung thư tế bào gan có tỉ lệ tái phát ung thư tế bào gan cao sau phẫu thuật cắt bỏ ung thư tế bào gan so với kiểu gen B Anh hưởng kiểu gen HBV với đáp ứng điều trị Lamivudine chưa nghiên cứu nhiều, nghiên cứu cho thấy dường bệnh nhân kiểu gen B dễ phát triển đột biến kháng Lamivudine kiểu gen khác Kết chúng tơi ghi nhận (Bảng 2) tỉ lệ có đột biến kháng Lamivudine kiểu gen B (64,5%) kiểu gen C (63%) gần Do vấn đề ảnh hưởng kiểu gen HBV cần phải nghiên cứu lâu dài số lượng bệnh nhân nhiều www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 6/9 14:27, 21/10/2022 2, Các kiểu Lamivudine: ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… tỷ lệ đột biến kháng Lamivudine bệnh nhân điều trị Lamivudine thuốc uống lựa chọn điều trị viêm gan siêu vi B mãn tính có nhiều ưu điểm giá thành chấp nhận được, an tồn, tác dụng phụ, dễ sử dụng (Dùng đường uống), nhiên có nhược điểm mà ngày nhiều người quan tâm vấn đề đột biến kháng Lamivudine siêu vi viêm gan B tỉ lệ đột biến kháng thuốc Lamivudine tăng theo thời gian sử dụng Lamivudine Vị trí đột biến kháng Lamivudine xảy vùng C (Domain C) đoạn gen chép ngược (RT: Reverse Transcriptase) HBV chủ yếu kiểu YMDD (tyrosinemethionine-aspartate-aspartate), Methionine thay Valine, Isoleucine Serine (Đột biến rtM204V/I/S) Những đột biến khác liên quan đến kháng Lamivudine đột biến thay Leucine thành Methionine vùng B (Domain B) đột biến rtL180M; Đột biến V173L; Đột biến V207I Trong 122 trường hợp giải trình tự chuỗi có 78 trường hợp (63,9%) có đột biến kháng Lamivudine Có nhiều kiểu đột biến kháng Lamivudine, chủ yếu đột biến vị trí 204 có kèm khơng đột biến rtL180M, V173L, V207I Kết cho thấy có nhiều dạng đột biến kháng Lamivudine (Bảng 3) chiếm nhiều đột biến rtL180M M204V (36,1%) Lamivudine dùng điều trị viêm gan siêu vi B thường với thời gian điều trị kéo dài, tối thiểu phải năm Nhiều nghiên cứu công bố cho thấy tỉ lệ xuất đột biến kháng Lamivudine HBV lại tăng dần theo thời gian điều trị Lamivudine Theo Guan R cộng sự, tỉ lệ xuất đột biến kháng Lamivudine sau năm điều trị Lamivudine 14%, tỉ lệ tăng dần theo thời gian điều trị Lamivudine 38%, 49%, 66% 69% tương ứng với thời gian điều trị Lamivudine 2, 3, 4, năm Một nghiên cứu khác T-T Chang cộng cho thấy tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine sau năm điều trị Lamivudine 17%, tăng dần theo thời gian điều trị Lamivudine 2, 3, năm tương ứng 40%, 57%, 67% Kết khảo sát tỉ lệ có đột biến kháng Lamivudine nhóm bệnh nhân có điều trị liên tục Lamivudine với nhóm thời gian điều trị khác (Bảng 4) chúng tơi cho thấy tỉ lệ có đột biến kháng Lamivudine sau năm điều trị Lamivudine 27,8%, tỉ lệ tăng dần theo nhóm có thời gian điều trị Lamivudine tăng dần 2, 3, năm 63,4%, 71,1% 83,3% So sánh với cơng trình cơng bố thấy tỉ lệ có đột biến kháng Lamivudine sau thời gian điều trị Lamivudine nghiên cứu chúng tơi cao Có nhiều nguyên nhân ảnh hưởng đến việc xuất đột biến kháng Lamivudine trình điều trị, nhiên có yếu tố quan trọng làm cho tỉ lệ đột biến kháng Lamivudine cao vấn đề sử dụng thuốc Lamivudine có theo hướng dẫn bác sĩ điều trị không, điều trị Lamivudine thành nhiều đợt khác trước bệnh nhân đưa vào nhóm nghiên cứu Kết cho thấy tỉ lệ cao đột biến kháng Lamivudine, việc phát đột biến kháng Lamivudine kịp thời giữ vai trò quan trọng www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 7/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… trình điều trị viêm gan siêu vi B Lamivudine để từ thay đổi thuốc điều trị thích hợp nhằm đạt mục tiêu điều trị V, Kết luận: Kiểu gen HBV Việt Nam chủ yếu B C, nhiên vai trò kiểu gen HBV diễn tiến bệnh đáp ứng điều trị chưa biết rõ Các kiểu đột biến kháng Lamivudine nhóm bệnh nhân chúng tơi đa dạng, đặc biệt tỉ lệ đột biến kháng thuốc Lamivudine cao tăng dần theo thời gian dùng thuốc Lamivudine Qua kết bước đầu đạt thấy kỹ thuật giải trình tự chuỗi giữ vai trị quan trọng áp dụng xét nghiệm thường qui việc xác định kiểu gen siêu vi viêm gan B việc nhận diện đột biến kháng thuốc Lamivudine để từ có phác đồ điều trị tối ưu REFERENCE Anna S K Lok and Brian J McMahon Chronic Hepatitis B: Update of Recommendations Hepatology, Vol 39, No 3, 2004 Bernhard Zollner Viral features of Lamivudine resistant Hepatitis B genotypes A and D Hepatology Volume 39, Jan 2004, Issue 1, p 42-50 B Zollner et Al Prevalence, Incidence, and Clinical relevance of the reverse transcriptase V207I mutation outside the YMDD motif of the Hepatitis B Virus polymesase during Lamivudine therapy Journal of Clinical Microbiology, May 2005, p 2503-2505, Vol 43, No Chi-Jen Chu and Anna S K Lok Clinical significance of Hepatitis B Virus Genotypes Hepatology, Vol 35, No 5, 2002 Chi-Jen Chu et Al Hepatitis B Virus genotype B is associated with earlier HBeAg seroconversion compared with Hepatitis B Virus genotype C Gastroenterology June 2002 Volume 122, Number Emmet B Keeffe et Al A treatment Algorithm for the Management of chronic Hepatitis B Virus infection in the United States Clinical Gastroenterology and Hepatology Vol 2, No February 2004 Entecavir ( Baraclude): An Overview www.HIVandHepatitis.com Erwin Sablon and Fred Shapiro Hepatitis B and C genotyping: methodologies and implications for patient management Journal of Gastroenterology and Hepatology 2004 19 S329-S337 Erwin Sablon et Al Early detection of Hepatitis B Drug Resistance: Implications for Patient Management Expert Rev Mol Diagn 535-547 2003 www.future-drugs.com 10 FDA Approves New treatment for chronic Hepatitis B FDA Tall Paper www.fda.gov.com 11 Hajime Sumi et Al Influence of Hepatitis B Virus Genotypes on The Progression of Chronic Type B Liver Disease Hepatology, Vol 37, No 1, 2003 www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 8/9 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… 12 Harald H Kessler Detection of Mutations in the Hepatitis B Virus Polymerase Gene Clinical Chemistry 2003 49 No p 989-992 13 Hideo Naito et Al Rapid and Specific Genotyping System for Hepatitis B Virus corresponding to six Major Genotypes by PCR using Type-Specific Primers Journal of Clinical Microbiology, January 2001, p 362-364, Vol 39, No 14 Huy Thien-Tuan Tran et Al Recombination of genotypes B and C in Hepatitis B Virus isolated from a Vietnamese patient with fulminant Hepatitis Journal of Infection Disease 56, p 35-37 2003 15 Jin-de Chen et Al Hepatitis B genotypes correlate with tumor recurrence after curative resection of HepatoCellular Carcinoma Clinical Gastroenterology and Hepatology January 2004 Vol Number 16 Man-Fung Yuen et Al Significance of Hepatitis B Genotype in Acute exacerbation, HBeAg seroconversion, Cirrhosis-related Carcinoma Hepatology, Vol 37, No 3, 2003 complications, and HepatoCellular 17 Marion G Peters et Al Adefovir difivoxilefovir Dipivoxil Alone or in Combination with Lamivudine in Patients with Lamivudine-Resistant Chronic Hepatitis B Gastroenterology Vol 126, No 1, January 2004 18 Morris Sherman et Al The Management of Chronic Viral Hepatitis: A Canadian Consensus Conference 2004 Canadian J Gastroenterol Vol 18, No 12 December 2004 p 715-728 19 Scott K Fung et Anna SF Lok Management of Hepatitis B Patients with Antiviral Resistance Antiviral Therapy 9: 1013-1026 International Medical Press 2004 20 Stephen Locarnini Hepatitis B Viral Resistance: Mechanisms and Diagnosis Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, Victoria, Australia 21 Stephen Locarnini et Al Management of Antiviral of Antiviral Resistance in Patients with Chronic Hepatitis B Antiviral Therapy 9: 679-693 International Medical Press 2004 22 Ting-Tsung Chang et Al Four years of Lamivudine Treatment in Chinese Patients with Chronic Hepatitis B Journal of Gastroenterology and Hepatology 19, p 12761282 2004 23 Toumy Guettouche and H J Hnatyszyn Chronic Hepatitis B and viral genotype: The clinical significance of determining HBV genotypes Antiviral Therapy 10: 593 – 604 2005 24 William E Delaney et Al The Hepatitis B Virus Polymerase mutation rtV173L is selected during Lamivudine therapy and Enhances viral replication in vitro Journal of Virology, Vol 77, No 21, p 11833-11841 Nov 2003   Home Page | Tài liệu chuyên môn | Bạn cần biết | Thông tin hội nghị | Liên hệ Copyright © 2005 Dr Phạm Thị Thu Thủy - Khoa gan - Trung tâm Y khoa Tp Hồ Chí Minh www.drthuthuy.com/reseach/GiaiTrinhTuChuoi.html 9/9 ... 14:27, 21/10/2022 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ… HBV, tỉ lệ đột biến kháng xảy ngày cao tăng theo thời gian dùng thuốc Lamivudine... TRÌNH TỰ CHUỖI ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN VÀ CÁC ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA SIÊ…   Kiểu gen B Kiểu gen C Số lượng Phần trăm Số lượng Phần trăm Khơng có đột biến kháng Lamivudine 27 35,5% 17 37% Có đột biến. .. nước có kiểu gen vượt trội khác Có nhiều kỹ thuật sinh học phân tử dùng để xác định đột biến kháng thuốc HBV xác định kiểu gen HBV Chúng sử dụng kỹ thuật giải trình tự chuỗi (Sequengcing) để đồng