T NG QUAN TÀI LI U
Gi i thi u cây S u riêng
Phân loại các loài thực vật thường gặp là cây thân thảo hoặc cây bụi, nhưng cũng có một số loài là cây gỗ hoặc dây leo Lá của chúng thường mọc so le, có thể có thùy hình lông chim hoặc lá kép với gân lá hình lông chim Mép lá thường nguyên, nhưng khi có răng cưa thì một gân sẽ kết thúc tại đỉnh mỗi răng, và có lá kèm Thân cây chứa các ngách nhụy và thường có các khoang nhụy Lông phủ bề mặt thường hình sao và có độ dày khác nhau.
Các hoa m có thể thành các cành hoa hữu hạn hoặc vô hạn nách lá, thường suy giảm thành một hoa duy nhất, nhưng cũng có thể có nhiều hoa lẻ, với lá mộc dày hoặc mỏng cùng Chúng thường mang các lá bắc dày dạn và có thể là đực tính hay cái tính, thường đối xứng với các lá bắc dày, tạo thành một đài ph Hoa có 5 lá đài mềm mại, thường xuyên nhất là hợp sinh cùng lá đài Năm cánh hoa xếp đè lên nhau, số lượng thường từ 5 tới vô số, hợp sinh ít nhất từ cuống của chúng, nhưng thường tạo thành một ngụy nhụy Các nhụy hợp thành từ 2 tới nhiều lá noãn hợp sinh, với noãn đính trên trục Nhụy hình đầu hoặc có thùy Các hoa có các tuyến mật bao gồm nhiều lông có tuyến bó chất, thường nằm trên các lá đài Phần lân thường là nhụy chồng, nhụy hay nhụy kiên.
H : Malvaceae Chi: Durio Loài: Durio zibethinus Murray
Sầu riêng là cây thân gỗ, sống lâu năm, cao tới 40 mét, với thân thẳng và cành phân nhánh thấp Lá của sầu riêng thuộc loại lá đơn, mọc cách, có hình dạng tròn hoặc tù, mặt trên màu xanh sáng và mặt dưới có lông mịn, màu nâu óng ánh Kích thước lá dài khoảng 12-20 cm và rộng từ 4-6 cm.
Cu ng lá d y, dài 1,3-3 cm[7]
Hoa Sù riêng là loại hoa lưỡng tính, thường mọc thành chùm từ 3-30 hoa trên các cành lớn, ít khi mọc trên cành nhỏ Hoa có 5 cánh, với đài phía ngoài có 3 cánh, và vành hoa màu kem hơi xanh Nhụy dài hơn cánh, gồm 5 bó hoa dính với nhau ở phần gốc Bầu nhụy hình trái xoan, có vòi dài và đầu nhụy tròn với 5 nhị, khi chín có nhựa dính Thời gian từ khi nở đến khi thành hoa khoảng 2-3 ngày.
Trái có hình chóp nhọn với gai hình đòng và kích thước đa dạng, màu sắc của trái phụ thuộc vào giống, có thể là xanh nhạt hoặc vàng đậm Sau khi đậu, trái phát triển nhanh trong khoảng 5-13 tháng, chín vào khoảng tháng 15-16 Trái lớn, có 5 lá noãn, khi chín sẽ tách ra thành 5 ô, mỗi ô chứa từ 1-7 hạt, bên ngoài được bao bọc bởi lớp cùi mềm Cùi chiếm 22-30% trọng lượng trái, có vị ngọt, béo và thơm, với màu sắc từ vàng, trắng ngà đến vàng cam.
Hạt sù riêng có màu vàng nâu sáng, bóng mịn, bên trong chứa nhiều tinh bột, dầu và protein Tùy thuộc vào giống và điều kiện thổ nhưỡng, trái có thể có hình dạng to (dài khoảng 5cm, rộng 3-4cm) hoặc hình dạng lép, lòng Hạt có thể luộc, rang nhưng không nên ăn nhiều do có tính độc.
R S u riêng là loại rễ cọc, chắc khỏe, có khả năng đâm sâu từ 5-6 mét và phát triển tốt trong điều kiện không thuận lợi như đất ngập nước hay không có tầng sỏi đá phía dưới Sự phân bố rễ phụ thuộc vào nhiều yếu tố như chất đất, mức nước ngầm, loại cây giống và kỹ thuật chăm sóc.
I.1.3 Phân b , sinh thái, sinh tr ng và phát tri n [7]
Sầu riêng là loại cây trồng yêu cầu đất có độ pH từ 5-6,5, với độ dày khoảng 3-4 mét và khả năng thoát nước tốt Các loại đất phù hợp bao gồm đất cát, đất phù sa, đất bazan và đất xám, đặc biệt là ở các tỉnh miền Đông Nam Bộ và Tây Nguyên, nơi có điều kiện lý tưởng cho sự phát triển của sầu riêng.
Không nên trồng cây trên đất có hàm lượng mùn thấp và nghèo dinh dưỡng, vì đất này thoát nước nhanh, không giữ ẩm tốt cho cây Ngoài ra, cũng không nên trồng trên những chân đất sét, vì khả năng thoát nước kém sẽ ảnh hưởng đến sự phát triển của cây.
Sầu riêng là loại cây trái nhiệt đới đặc trưng, ưa khí hậu nóng và ẩm, với nhiệt độ không quá cao và không quá thấp, cần nhiệt độ không dưới 15 độ C Trên thế giới, sầu riêng thường được trồng trong vùng nhiệt đới từ vĩ độ 17-18 Để sinh trưởng và phát triển bình thường, cây sầu riêng cần nhiệt độ từ 24-30 độ C.
Sầu riêng là cây ưa khí hậu ẩm, với độ ẩm không khí khoảng 75-85% Loại cây này chịu hạn kém và thích hợp với những vùng có lượng mưa hàng năm từ 1600-4000 mm, lý tưởng nhất là khoảng 2000 mm Do đó, trong mùa khô và những vùng đất hạn chế vào mùa mưa, cần phải chăm sóc đặc biệt cho cây, đặc biệt là ở những vùng đất cao tại miền Nam B và Tây Nguyên.
Cây Sầu riêng ưa ánh sáng tán xạ hơn là ánh sáng trực tiếp, với yêu cầu khoảng 2000 lux/nm Khi cây lớn, nhu cầu ánh sáng cũng tăng lên, và cây cần tránh bị che bóng Thân cây Sầu riêng yếu, giòn và dễ bị gãy dưới tác động của gió và bão, vì vậy cần trồng ở những vùng kín gió, có hàng cây chắn gió xung quanh để bảo vệ cây khỏi những tác động xấu.
C m S u riêng có hàm l ng các ch t dinh d ng cao nh : lipid, protein, acid amin, calcium và các ch t th m nh thiols esters, hydrogen sufide, diethyl sunfid[10]
B ng 1: Thành ph n c a S u riêng (tính cho 100 gram th t qu t i) [10]
Nghiên c u trong và ngoài n c
N m 1996, Tr n Vinh nghiên c u tuy n ch n m t s cây đ u dòng S u riêng kl k và ph ng pháp m i đ nhân gi ng[11]
N m 2000, Hu nh V n Thành nghiên c u phòng tr b nh Phytophthora gây h i trên cây S u riêng[5]
N m 2003, Hu nh V n T n, Nguy n Minh Châu nghiên c u hi n t ng s ng c m trái cây S u riêng Monthong tr ng t i B n Tre[6]
Trong n c ch a có các nghiên c u v nuôi c y mô cây S u riêng
N m 2008, Hameed B cùng các đ ng s đã nghiên c u s d ng v S u riêng (Durio zibethinus Murray) chi phí th p đ h p th lo i b thu c nhu m acid t dung d ch n c[13]
Vào năm 2010, Komsil Pholdaeng cùng các đồng sự đã nghiên cứu tác động của gel polysaccharide chiết xuất từ Durio zibethinus đối với Penaeus monodon, nhằm chống lại vi khuẩn Vibrio harveyi và virus WSSV.
N m 2011, Mahani A cùng các đ ng s đã nghiên c u dùng v S u riêng thu h i dung d ch vàng[15.
Nuôi c y mô th c v t
I.3.1 Gi i thi u v nuôi c y mô th c v t[1]
Nuôi cấy mô tế bào thực vật là phương pháp phổ biến để nghiên cứu và phát triển các phần của thực vật như tế bào, mô và cơ quan trong điều kiện vô trùng Hệ thống nuôi cấy mô thực vật thường được áp dụng trong các nghiên cứu liên quan đến sinh lý học, sinh hóa học, di truyền học và cấu trúc của thực vật.
Kỹ thuật nuôi cấy mô, tế bào và cơ quan thực vật hiện nay đã được áp dụng rộng rãi tại nhiều phòng thí nghiệm trên toàn thế giới Nhiều phương pháp đã được phát triển nhằm nhân giống, chọn lọc các đặc điểm mong muốn khác nhau, tạo dòng tế bào, nhân nhanh các kiểu di truyền để tạo ra các cây đột biến nuôi cấy noãn và túi phấn Các kỹ thuật này bao gồm đa dạng hóa các kiểu di truyền bằng cách tạo đột biến và nhân dòng soma, cũng như nuôi cấy tế bào trong môi trường giàu khoáng, vitamin và các chất điều hòa sinh trưởng thực vật Nhiều kỹ thuật nuôi cấy mô đã được nghiên cứu và ứng dụng Trong tương lai, các mô đun nuôi cấy sẽ được sử dụng với công cụ cơ bản và người ta đã sử dụng nhiều thuật ngữ chuyên biệt để phân biệt các kiểu nuôi cấy khác nhau: cây cây, cây phôi, cây cơ quan, cây mô, cây tế bào, cây tế bào trần, cây túi phấn và hạt phấn.
- Rút ra quy lu t v m i t ng quan gi a các b ph n trong cây
- T o thu n l i cho công tác nghiên c u v các quy lu t sinh tr ng, phát tri n cùng m i quan h gi a chúng và môi tr ng bên ngoài
- Tìm ra đ c nh ng c ch b o v th c v t giúp cho vi c phòng b nh th c v t t t h n
- Ph ng pháp nuôi c y mô đ c s d ng đ ph c tráng và nhân nhanh các gi ng cây tr ng quý, có giá tr kinh t cao
- S d ng ph ng pháp nuôi c y mô và t bào trong công tác ch n gi ng cây tr ng
Bằng phương pháp nuôi cấy mô, sau một thời gian ngắn, chúng ta có thể tạo ra một sinh khối lớn có hoạt chất sinh học độc đáo, bao gồm các alkaloid, glycoside, steroid, và các chất bám dính dùng trong thực phẩm Những chất này có khả năng kìm hãm sự sinh trưởng của vi khuẩn, góp phần quan trọng trong nông nghiệp.
- Ki m soát đ c d ch b nh cây tr ng B ng ph ng pháp nuôi c y mô hay nuôi c y t bào, có th lo i đ c nh ng cá th mang b nh hay mang m m b nh
- Ki m soát đ c ch t l ng gi ng thông qua ki m soát ki u gen c a gi ng đem vào s n su t
- Ki m soát đ c toàn b k thu t t khâu nhân gi ng đ n khâu thu ho ch
- T o ra s đ ng lo t v gi ng, t đó t o ra s đ ng lo t c a s n ph m cu i.
Vai trò c a ch t đi u hòa sinh tr ng th c v t [12]
Auxin có tá ng s ph thích s p
Auxin n n s kh i r ng g c, tíc h thành r b v i các v nin), nh t l
Auxin t h p ch i ng AIA, vài c qua c t ng h p trong lá tr ác đ ng m hân chia t phân hóa m ng đ cao này (Mai T h l y ph b t đ nh (K vitamin (nh là các h p
Cytokinin d n xu t c ch các qu n i sinh đó ng cây t t ng đ có th là d an đ u đ
Hình 2: C ng n th r ng thàn nh m lên bào, kích mô d n kích thích
Tr n Ng c h n g c c a Kuroha và h thiamin ch t ortho- a adenin, uá trình sin óng vai trò i đ n gi n d n xu t ha c g i là aux
Công th c hân, trong h d i ánh n s t ng t h thích s h s t o s
Tiến hành khảo sát các khúc cấu trúc của diphenolic, một chất điển hình trong hóa học hữu cơ, cho thấy vai trò quan trọng của nó trong các phản ứng hóa học Acidindo, một hợp chất có nguồn gốc từ diphenolic, được tổng hợp theo những cơ chế phân tử phức tạp Sau quá trình nghiên cứu, chúng tôi đã hình thành các kết quả quan trọng liên quan đến cấu trúc và tính chất của diphenolic, mở ra hướng đi mới cho các ứng dụng trong ngành hóa học.
2002) Tro hông t ng c (nh acid u hòa sinh sinh, trao ng trong s ol-3-acetic t c a AIA gh a r ng. a auxin sinh và lá u đó, auxin bào, s aci h mô s o, nh ng c n
980) Auxi p c a cà c ong s t o g h p đ c d cafeic, ac h tr ng th đ i ch t, đi u bi n
AIA có vai trò quan trọng trong sự phát triển của thực vật, đặc biệt là trong việc di chuyển và chuyển hóa auxin, một loại hormone thực vật Auxin có khả năng kích thích sự phát triển của các chức năng cần thiết, nhờ vào tryptophan và các acid amin khác Sự tương tác giữa các chất này giúp điều chỉnh quá trình sinh trưởng và phát triển của cây, từ đó ảnh hưởng đến khả năng thích nghi của chúng trong môi trường.
Mô phân sinh là nơi tập trung các cytokinin, đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển của thực vật Cytokinin không chỉ kích thích sự phân chia tế bào mà còn ngăn chặn quá trình lão hóa, giúp tái sinh mô Trong quá trình hình thành chồi, cytokinin có thể tác động riêng rẽ hoặc kết hợp với các yếu tố khác để thúc đẩy sự phát triển Nồng độ cytokinin cao thường dẫn đến việc hình thành nhiều chồi, nhưng cũng có những giới hạn nhất định trong việc điều chỉnh nồng độ này Cytokinin có thể kích thích sự phát triển chồi nhánh, nhưng nồng độ quá cao lại có thể làm cho chồi khó phát triển Một số loài thực vật chỉ hình thành chồi khi được chuyển sang môi trường thích hợp, không có cytokinin Cytokinin cần thiết cho giai đoạn hình thành chồi nhưng cũng có tác dụng ức chế sự kéo dài của chồi, cho thấy sự cần thiết phải điều chỉnh nồng độ cytokinin một cách hợp lý.
Các y u t nh h ng đ n quá trình nuôi c y mô[12]
I.5.1 Ánh sáng Ánh sáng có tác đ ng đ n s t ng tr ng và kh n ng phát sinh hình thái c a t bào trong nuôi c y in vitro M i loài th c v t khác nhau có nh ng đáp ng khác nhau v i t ng lo i ánh sáng, c ng đ và th i gian chi u sáng khác nhau C ng đ chi u sáng cao làm t ng s thoát h i n c, môi tr ng nuôi c y b khô và n c trong t bào s gi m xu ng gây nh h ng đ n s phân chia và t ng tr ng c a chúng
C ng đ chi u sáng y u làm nh h ng đ n s d tr ch t dinh d ng c a cây vì s quang h p kém h n s hô h p
Nhiệt độ trong kho từ 17-25°C thường được áp dụng để kiểm soát sự phát triển và sinh trưởng của tế bào nuôi cấy Mỗi loài thực vật có yêu cầu nhiệt độ khác nhau Toivonen và cộng sự (1992) nhận thấy rằng khi giảm nhiệt độ trong quá trình nuôi cấy, sẽ làm tăng lượng acid béo tổng hợp trong mỗi tế bào (tính theo trọng lượng khô).
I.5.3 pH pH c a môi tr ng nh h ng đ n s hòa tan các mu i khoáng c n thi t cho cây Ng i ta th ng ch nh pH kho ng 5,7 - 5,8; đây là m c t t đ cây có th h p th mu i khoáng
Nhu c u khoáng c a mô, t bào th c v t tách r i không khác nhi u so v i nhu c u c a cây ngoài t nhiên Vì v y, vi c b sung đ y đ các khoáng đa l ng và vi l ng là đi u c n thi t
Nguyên liệu carbon cho mô nuôi cấy là rất quan trọng Mô tế bào nuôi cấy cần có sự quang hợp hiệu quả, vì vậy cần bổ sung glucid cần thiết để hỗ trợ sự phát triển của mô trong môi trường nuôi cấy.
Vitamin đóng vai trò quan trọng trong việc xúc tác các quá trình chuyển hóa khác nhau Trong nuôi cấy mô, các vitamin thường được sử dụng bao gồm thiamin HCl (vitamin B1), pyridoxine HCl (vitamin B6), acid nicotinic và myo-inositol.
Agar là một polysaccharide có trọng lượng phân tử cao, được chiết xuất từ tảo Gelidium Nó có tác dụng làm giá thể giúp mô nuôi cấy phát triển mà không bị ảnh hưởng bởi môi trường thiếu oxy.
Phát sinh hình thái ch i b t đ nh
Sự phát sinh hình thái thực vật là quá trình phát triển của tế bào, mô và cơ quan trong thực vật, phụ thuộc vào hai quá trình cơ bản: sự điều hòa hướng kéo dài của tế bào và sự kiểm soát vị trí cũng như hướng phân chia của tế bào.
Chì bột đỉnh xuất hiện không chỉ liên quan đến mô chóp mà còn xuất hiện gần các vật thể sống, gần chất cặn, gần vùng phát sinh libe - mạch học ngoài biểu bì Do đó, chúng có thể có nguồn gốc nội sinh hoặc ngoại sinh do một số khối phân hóa các tế bào trưởng thành Chúng cũng khởi sinh bằng những phân chia tế bào và sắp xếp tế bào giống như sinh mô chóp và có mạch gần liên quan đến mạch của thân.
Chỉ phân sinh ngọn là nơi tập trung các tế bào biểu bì, mô hàng rào, mô khuyết và mô bao quanh mạch của mô cây Trước khi phân hóa, các tế bào đã trải qua quá trình tái hoạt động để hình thành tổn phát sinh của chỉ đỉnh tỏa mời Quá trình tái hoạt động này có thể xảy ra trên cây nguyên bản bằng cách đàn áp các yếu tố cản trở hoặc trên mô cây trong các môi trường nuôi cấy có bổ sung chất điều hòa thích hợp Theo Buvat, quá trình tái hoạt động bao gồm hai giai đoạn: giai đoạn khử phân hóa và giai đoạn tái phân hóa.
Trong giai đoạn khởi đầu phân hóa, tế bào bắt đầu phân chia và các cơ quan bên trong tế bào biến đổi để phù hợp với trạng thái của các tế bào mô phân sinh thực vật Các biến đổi như nhân, không bào lớn dần và ti thể, lớp tế bào phân chia thành các bóng nhỏ Một số biến đổi khác có thể xảy ra trước khi bắt đầu giai đoạn khởi đầu phân hóa, chẳng hạn như sự tích lũy tinh bột trong các lớp học, điều này có thể ảnh hưởng đến sự phát triển của mô phân sinh.
Sau quá trình chuyển tiếp, tế bào chuyển từ trạng thái mô phân sinh thô sang trạng thái mô phân sinh có khả năng sinh trưởng Trong tế bào, có sự phân chia không bào thành những không bào nhỏ Tế bào có kích thước lớn, với vách màng, tế bào chất dày đặc, nhân và hạch nhân cũng rất to (Esau, 1972; Bùi Trang Việt, 2003).
Tái phân hóa là quá trình quan trọng trong mô phân sinh, nơi tế bào trở lại trạng thái mô phân sinh hoạt động Quá trình này diễn ra qua hai bước: bước một, tế bào trở về trạng thái mô phân sinh hoạt động, tạo thành các không bào trung tâm và kích thích tế bào gia tăng kích thước, dẫn đến hình dạng đặc trưng; bước hai, các lớp phân hóa và các chất sống cần thiết như hạch nhân, tế bào chất, chất dự trữ và các chất tiểu phân như tanin và tinh dầu được tổng hợp Cuối cùng, các tế bào này có thể trở lại giai đoạn phân chia tế bào mới hoặc tiếp tục phân hóa mà không cần trải qua sự phân chia tế bào.
I.6.2 Phát sinh hình thái r b t đnh [4]
R b t đnh có th có tr h di p c a m t cây con, các m u và lóng c a thân và r H u h t r b t đnh phát sinh ki u n i sinh, m c dù v n có nh ng tr ng h p phát sinh ngo i sinh
Rễ bất định là những rễ phát triển từ thân cây, giúp cây có khả năng thích nghi và sinh trưởng Chúng xuất hiện ở các loại cây như cây một lá mầm, cây hai lá mầm, cây thảo mộc, cây thân gỗ, cây sống hồi sinh và cây ký sinh Rễ bất định thường được hình thành từ cành giâm, đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì sự sống và phát triển của cây.
S hình thành r b t đnh g m ít ra là hai giai đo n: giai đo n t o s kh i r t vài t bào c a t ng phát sinh libe - m c hay chu luân, và giai đo n kéo dài s kh i r này (Mai Tr n Ng c Ti ng và c ng s , 1980).
Rễ bậc đỉnh thường được khởi sinh từ các mô mạch dẫn, và sự phân hóa của các mô này phụ thuộc vào độ tuổi của cơ quan Nếu cơ quan còn non, rễ bậc đỉnh sẽ được khởi sinh bởi một nhóm tế bào ngoài vi của hệ thống mạch dẫn Ngược lại, nếu cơ quan đã già, vị trí khởi sinh sẽ nằm sâu hơn, gần với tổ chức mạch Các thân non sẽ tạo ra sự khởi sinh từ mô mạch giữa các bó mạch dẫn, trong khi các thân già sẽ hình thành từ tia mạch Rễ bậc đỉnh xuất phát từ vùng giữa các tia mạch hoặc tổn thương phát sinh, làm cho rễ gắn liền với mô và liên kết với các cơ quan khác Điều này thu hút sự chú ý trong việc thiết lập mối liên hệ giữa hai cơ quan này.
V T LI U VÀ PH NG PHÁP NUÔI C Y
V t li u
II.1.1 a đi m và th i gian th c hi n a đi m: Phòng công ngh t bào - Khoa Công Ngh Sinh H c Tr ng i H c
H t S u riêng đ c mua các đi m bán c m S u riêng Thân; qu S u riêng 1, 2 tháng tu i l y huy n c Tr ng, t nh Lâm ng: dùng làm v t li u kh i đ u nuôi c y in vitro
II.1.3 i u ki n nuôi c y in vitro cây S u riêng:
- D ng c pha môi tr ng: becher, ng đong, ca nh a, micropipette, đ a th y tinh
- D ng c c y: dao m , đa petri, đèn c n, bông th m n c, chai môi tr ng Thi t b :
- èn hu nh quang t o ngu n sáng
II.1.3.2 Môi tr ng nuôi c y
S d ng môi tr ng nuôi c y MS c b n, b sung m t s thành ph n:
Ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t: BA, NAA v i n ng đ thay đ i
S d ng chai thu tinh 500 ml, cho vào m i chai 80 ml môi tr ng, h p kh trùng
- Th i gian chi u sáng : 16 gi /ngày
II.1.5 Hoá ch t dùng trong nuôi c y mô
- Các hoá ch t pha môi tr ng nuôi c y th c v t: MS
- Ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t: N 6 -Benzyladenin (BA).
Ph ng pháp nghiên c u
II.2.1 Thí nghi m 1: Kh o sát n ng đ HgCl 2 và th i gian kh m u
M c đích thí nghi m: tìm ra ph ng pháp kh m u thích h p nh m thu nh n đ t thân vô trùng cho thí nghi m ti p theo
V t li u thí nghi m: cành S u riêng non
Môi tr ng nuôi c y: Môi tr ng MS
B ng 2: N ng đ HgCl2 và th i gian kh m u các nghi m th c
Nghi m th c N ng đ HgCl2 Th i gian kh m u
Mô tả thí nghiệm: Chúng tôi tiến hành thí nghiệm cắt tỉa đọt thân cây Sầu riêng non ở độ cao 2-3 cm, sau đó ngâm vào dung dịch HgCl2 trong 10 phút Tiếp theo, chúng tôi sử dụng dung dịch vô trùng để xử lý cây trong 3 phút, và cuối cùng là rửa sạch bằng nước vô trùng 3 lần Thí nghiệm này nhằm đánh giá hiệu quả của HgCl2 và thời gian khử trùng.
R a n c c t vô trùng 5 l n, c y vào môi tr ng
Th i gian theo dõi: 1 tu n
Ch tiêu đánh giá: s m u còn s ng và không nhi m
II.2.2 Thí nghi m 2: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t đ t thân
M c đích thí nghi m: Kh o sát n ng đ ch t đi u hòa t ng tr ng th c v t nh m tìm ra môi tr ng thích h p t o c m ch i t đ t thân cây S u riêng
V t li u thí nghi m: đ t thân vô trùng
Môi tr ng nuôi c y: Môi tr ng MS b sung BA theo các n ng đ khác nhau
B ng 3: nh h ng c a BA trong quá trình t o c m ch i t đ t thân
Nghi m th c N ng đ BA (mg/l)
Mô t thí nghi m: C y đ t thân vô trùng vào môi tr ng MS b sung ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t v i n ng đ khác nhau
Th i gian theo dõi: 4 tu n
Ch tiêu đánh giá: S ch i và hình thái ch i
II.2.3 Thí nghi m 3: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t phôi h t h u tính 1 tháng tu i
M c đích thí nghi m: Kh o sát n ng đ ch t đi u hòa t ng tr ng th c v t nh m tìm ra môi tr ng thích h p t o c m ch i t phôi h t h u tính 1 tháng tu i
V t li u thí nghi m: Phôi h t h u tính 1 tháng tu i
Môi tr ng nuôi c y: Môi tr ng MS b sung BA theo các n ng đ khác nhau
B ng 4: nh h ng c a BA trong quá trình t o c m ch i t phôi h u tính h t S u riêng 1 tháng tu i
Nghi m th c N ng đ BA (mg/l)
Mô t thí nghi m: C y phôi h t h u tính vô trùng 1 tháng tu i vào môi tr ng MS b sung ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t v i n ng đ khác nhau
Th i gian theo dõi: 4 tu n
Ch tiêu đánh giá: S ch i và hình thái ch i
II.2.4 Thí nghi m 4: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t phôi h t h u tính 2 tháng tu i
M c đích thí nghi m: Kh o sát n ng đ ch t đi u hòa t ng tr ng th c v t nh m tìm ra môi tr ng thích h p t o c m ch i t phôi h t h u tính 2 tháng tu i
V t li u thí nghi m: phôi h t h u tính 2 tháng tu i
Môi tr ng nuôi c y: Môi tr ng MS b sung BA theo các n ng đ khác nhau
B ng 5: nh h ng c a BA trong quá trình t o c m ch i t phôi h u tính h t S u riêng 2 tháng tu i
Nghi m th c N ng đ BA (mg/l)
Mô t thí nghi m: C y phôi h t h u tính vô trùng 2 tháng tu i vào môi tr ng MS b sung ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t v i n ng đ khác nhau
Th i gian theo dõi: 4 tu n
Ch tiêu đánh giá: S ch i và hình thái ch i
II.2.5 Thí nghi m 5: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t phôi h t h u tr ng thành
M c đích thí nghi m: Kh o sát n ng đ ch t đi u hòa t ng tr ng th c v t nh m tìm ra môi tr ng thích h p t o c m ch i t phôi h t tr ng thành
V t li u thí nghi m: phôi h t tr ng thành
Môi tr ng nuôi c y: Môi tr ng MS b sung BA theo các n ng đ khác nhau
B ng 6: nh h ng c a BA trong quá trình t o c m ch i t phôi h u tính h t S u riêng tr ng thành
Nghi m th c N ng đ BA (mg/l)
Mô t thí nghi m: C y phôi h t h u tính vô trùng tr ng thành vào môi tr ng
MS b sung ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t v i n ng đ khác nhau
Th i gian theo dõi: 4 tu n
Ch tiêu đánh giá: S ch i và hình thái ch i
II.2.6 Thí nghi m 6: Kh o sát s nh h ng c a NAA đ n kh n ng phát sinh r c a ch i cây S u riêng
Kh o sát n ng đ ch t đi u hòa t ng tr ng th c v t nh m tìm ra môi tr ng t t nh t t o r cho cây S u riêng in vitro
V t li u thí nghi m: phôi h t tr ng thành
Môi tr ng nuôi c y: Môi tr ng MS b sung NAA theo các n ng đ khác nhau
B ng 7: nh h ng c a NAA trong quá trình t o r t ch i cây S u riêng in vitro
Nghi m th c N ng đ NAA (mg/l)
Mô t thí nghi m: C y ch i in vitro 2.5-3.5 cm vào môi tr ng MS b sung ch t đi u hoà t ng tr ng th c v t v i n ng đ khác nhau
Th i gian theo dõi: 4 tu n
Ch tiêu đánh giá: S r và chi u dài r
II.2.7 Gi i ph u r , thân, lá, đ nh sinh tr ng cây S u riêng 3 tháng tu i ngoài t nhiên và cây S u riêng in vitro 10 tu n tu i
Mục đích của thí nghiệm là so sánh sự khác biệt giữa cấu trúc rễ, thân và lá của cây Sầu riêng 3 tháng tuổi ngoài tự nhiên và cây Sầu riêng in vitro 10 tuần tuổi trong môi trường MS.
V t li u thí nghi m: Cây sau 4 tu n nuôi c y thí nghi m 6 nghi m th c 3 đ c chuy n sang nuôi c y trên môi tr ng MS 6 tu n đ làm v t li u gi i ph u
C đnh trong dung d ch FAA (acetic acid: formalin: ethanol 95%: n c c t theo t l 5:10:50:35) trong 24 gi
- Ngâm trong butanol 100% trong 1gi
- R a s ch thu c nhu m r i quan sát d i kính hi n vi.
X lý s li u
Th ng kê và x lý s li u b ng ph n m m Microsoft Office Excel 2007 và Stagraphics Plus 3.0.
K T QU VÀ TH O LU N
Thí nghi m 1: Kh o sát n ng đ HgCl 2 và th i gian kh m u
Hình 4: t thân sau kh m u đ c c y trên môi tr ng MS
B ng 8: K t qu kh m u sau 7 ngày theo dõi
Trong cùng m t c t các s có cùng m u t không khác bi t m c ý ngh a 0.05 (P
