Thành phần của Sâu riêng

L IC M N u tiên, em xin chân thành c m n ban Giám Hi u, ban ch nhi m khoa Công ngh sinh h c tr ng rèn luy n môi tr i h c M Tp.HCM t o u ki n cho em đ c h c t p ng t t nh t Em xin chân thành g i c m n t t c quý th y cô khoa Công ngh sinh h c t n tình gi ng d y trang b cho em nh ng ki n th c c n thi t su t th i gian h c đ i h c Em xin g i l i c m n sâu s c đ n cô Nguy n Tr n h ông Ph ng tr c ti p ng d n truy n đ t cho em nh ng ki n th c kinh nghi m quý báu su t trình th c hi n đ tài Chân thành c m n thành viên phòng thí nghi m Cơng ngh t bào th c v t nhi t tình giúp đ su t th i gian th c hi n đ tài Cu i cùng, xin t lòng bi t n sâu s c đ n gia đình C m n nh ng tình c m mà ba m anh ch dành cho con, s b c h n đ ng h c t p đ ng h đ ng viên c a gia đình giúp v ng ng đ i   CÁC CH VI T T T MS : Murashige & Skoog BA : N6 – benzyladenin NAA : 1-Naphthaleneacetic acid   DANH M C CÁC B NG B ng 1: Thành ph n c a S u riêng (tính cho 100 gram th t qu t B ng 2: N ng đ HgCl2 th i gian kh m u i) [10] nghi m th c 17 B ng 3: nh h ng c a BA trình t o c m ch i t đ t thân 18 B ng 4: nh h ng c a BA trình t o c m ch i t phơi h u tính h t S u riêng tháng tu i 19 B ng 5: nh h ng c a BA trình t o c m ch i t phơi h u tính h t S u riêng tháng tu i 20 B ng 6: nh h riêng tr ng c a BA q trình t o c m ch i t phơi h u tính h t S u ng thành 21 B ng 7: nh h ng c a NAA trình t o r t ch i 22 B ng 8: K t qu kh m u sau ngày theo dõi 24 B ng 9: K t qu t o c m ch i t phôi h t h u tính tr tr ng thành in vitro môi ng MS b sung BA (4 tu n tu i) 29 B ng 10: K t qu t o r t ch i S u riêng in vitro môi tr ng MS b sung BA (4 tu n tu i) 33   DANH M C CÁC HÌNH Hình 1: Cây s u riêng Hình 2: Cơng th c c u t o c a auxin Hình 3: Cơng th c c u t o c a cytokinin 10 Hình 4: t thân sau kh m u đ Hình.5: t thân sau c y tu n môi tr c c y môi tr ng MS 24 ng MS có b sung BA 26 Hình 6: Phơi h t h u tính tháng tu i mơi tr ng MS có b sung BA 27 Hình 7: Phơi h t h u tính tháng tu i mơi tr ng MS có b sung BA 27 Hình 8: Phơi h t h u tính tr ng thành 28 Hình 9: Ch i môi tr ng MS sau tu n nuôi c y 30 Hình 11: Ch i môi tr ng MS + BA mg/l sau tu n nuôi c y 30 Hình 10: Ch i mơi tr ng MS + BA mg/l sau tu n nuôi c y 30 Hình 12: Ch i môi tr ng MS + BA mg/l sau tu n nuôi c y 30 Hình 13: Ch i mơi tr ng MS + BA mg/l sau tu n nuôi c y 31 Hình 15: Ch i mơi tr ng MS + BA mg/l sau tu n ni c y 31 Hình 14: Ch i môi tr ng MS + BA mg/l sau tu n ni c y 31 Hình 16: Ch i môi tr ng MS + BA mg/l sau tu n nuôi c y 31 Hình 17: Ch i mơi tr ng MS + BA mg/l sau tu n nuôi c y 32   Hình 18: Ch i môi tr ng MS + BA mg/l sau tu n ni c y 32 Hình 19: Ch i môi tr ng MS + BA 10 mg/l sau tu n nuôi c y 32 Hình 20: Ch i mơi tr ng MS 34 Hình 21: Ch i mơi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n nuôi c y 34 Hình 22: Ch i mơi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n ni c y 35 Hình 23: Ch i môi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n ni c y 35 Hình 24: Ch i môi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n nuôi c y 35 Hình 25: Ch i mơi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n nuôi c y 35 Hình 26: nh sinh tr ng S u riêng t nhiên tháng tu i c t d c 36 Hình 27: nh sinh tr ng S u riêng in vitro c t d c 36 Hình 28: Thân s u riêng t nhiên tháng tu i c t ngang 36 Hình 29: Thân s u riêng in vitro c t ngang 36 Hình 30: Lá S u riêng t nhiên tháng tu i c t ngang 37 Hình 31: Lá S u riêng in vitro c t ngang 37 Hình 32: R S u riêng ngồi t nhiên tháng tu i c t ngang 37 Hình 33: R S u riêng in vitro c t ngang 37   M CL C I T NG QUAN TÀI LI U I.1 Gi i thi u S u riêng I.1.1 H Malvaceae[9] I.1.2 V trí phân lo i [16] I.1.3 Phân b , sinh thái, sinh tr ng phát tri n [7] I.1.4 Thành ph n hóa h c I.2 Nghiên c u n I.2.1 Trong n I.2.2 Ngoài n c c c I.3 Nuôi c y mô th c v t I.3.1 Gi i thi u v nuôi c y mô th c v t[1] I.3.2 Vai trị c a ni c y mơ [3] I.4 Vai trò c a ch t u hòa sinh tr ng th c v t [12] I.4.1 Auxin I.4.2 Cytokinin I.5 Các y u t nh h ng đ n q trình ni c y mô[12] 10 I.5.1 Ánh sáng 10 I.5.2 Nhi t đ 11 I.5.3 pH 11 I.5.4 Mu i khoáng 11 I.5.5 Ngu n Carbon 11 I.5.6 Vitamin 12 I.5.7 Agar 12 I.6 Phát sinh hình thái ch i b t đ nh 12 I.6.1 Phát sinh hình thái ch i b t đ nh: 12 I.6.2 Phát sinh hình thái r b t đ nh [4] 13 II V T LI U VÀ PH NG PHÁP NUÔI C Y 15 II.1.V t li u 15 II.1.1 a m th i gian th c hi n 15   II.1.2 II.1.3 II.1.4 II.1.5 II.2.Ph c c c c c t i t ng nghiên c u 15 i u ki n nuôi c y in vitro S u riêng: 15 i u ki n nuôi c y 16 Hố ch t dùng ni c y mô 16 ng pháp nghiên c u 17 II.2.1 Thí nghi m 1: Kh o sát n ng đ HgCl2 th i gian kh m u 17 II.2.2 Thí nghi m 2: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh m ch i t đ t thân 18 II.2.3 Thí nghi m 3: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh m ch i t phôi h t h u tính tháng tu i 18 II.2.4 Thí nghi m 4: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh m ch i t phơi h t h u tính tháng tu i 20 II.2.5 Thí nghi m 5: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh m ch i t phôi h t h u tr ng thành 21 II.2.6 Thí nghi m 6: Kh o sát s nh h ng c a NAA đ n kh n ng phát sinh r a ch i S u riêng 21 II.2.7 Gi i ph u r , thân, lá, đ nh sinh tr ng S u riêng tháng tu i nhiên S u riêng in vitro 10 tu n tu i 22 Quy trình gi i ph u: 22 II.3.X lý s li u 23 III K T QU VÀ TH O LU N 24 III.1 Thí nghi m 1: Kh o sát n ng đ HgCl2 th i gian kh m u 24 III.2 Thí nghi m 2: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t đ t thân 26 III.3 Thí nghi m 3: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t phơi h t h u tính tháng tu i 26 III.4 Thí nghi m 4: Kh o sát s nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ch i t phơi h t h u tính tháng tu i 27 III.5 Thí nghi m 5: Kh o sát s ch i t phôi h t h u tr nh h ng c a BA đ n kh n ng phát sinh c m ng thành 27   III.6 Thí nghi m 6: Kh o sát s nh h ng c a NAA đ n kh n ng phát sinh r c a ch i S u riêng 33 III.7 Gi i ph u r , thân, lá, đ nh sinh tr ng S u riêng tháng tu i t nhiên S u riêng in vitro 10 tu n tu i 36 IV K T LU N VÀ NGH 38 IV.1 K t lu n 38 IV.2 ngh 38   TV N  Trái m t lo i th c ph m thi t y u cu c s ng ng qu kinh t cao, nh ng n m g n nhi u nhà v n c i t o v i Do hi u n t p, chuy n đ i c c u tr ng c hi u qu th p sang tr ng chuyên canh n trái S u riêng (Durio zibethinus Murray) m t lo i trái r t đ t cao n c a chu ng có giá tr kinh c ta, S u riêng lo i trái d tiêu th , giá bán cao h n h n nhi u lo i trái khác nên di n tích tr ng ngày m t gia t ng  Cây S u riêng thu c h Malvaceae, có ngu n g c t Malaysia Sau đ phát tri n sang m t s c c vùng nhi t đ i nh : Indonesia, Thái Lan, n Philippines, Hawaii, Brunei, Mianma, Vi t Nam, Lào, Campuchia… Ngồi ra, cịn đ c tr ng m ts n c nhi t đ i khác Trung Nam M , m t s n c châu Phi châu Úc S u riêng du nh p vào n c ta t Thái Lan tr ng đ u tiên (Biên Hòa) Hi n nay, S u riêng đ c tr ng ph bi n Tre, Ti n Giang, Bình D Nguyên nh ng, kl k, Lâm Tân Quy t nh phía Nam nh B n ng Nai M t s n i c a t nh mi n Trung, Tây ng, Qu ng Nam, Th a Thiên – Hu … c ng tr ng đ c S u riêng nh ng trái mùi th m[10]  S u riêng có mùi v r t h p d n, hàm l ng ch t dinh d ng cao nh : lipid, protein, acid amin, calcium ch t th m nh : thiols esters, hydrogen sufide, diethyl sunfide nên đ c nhi u ng i tiêu dùng a chu ng Không nh ng th b ph n c a nh : v , h t, qu c ng làm nguyên li u cho ngành d c li u, thân dùng làm v t li u g [10]  S u riêng có th nhân gi ng b ng c hai ph nhân vơ tính (chi t, ghép) M i ph ng pháp h u tính (b ng h t) ng pháp đ u có u nh c m riêng Nhân gi ng h u tính (b ng h t) đ n gi n, t n kém, h s nhân gi ng th p Cây có b r kh e nh ng r t lâu cho trái, khó gi đ v c đ c tính c a m , n không đ ng đ u Nhân gi ng vô tính (chi t, ghép) có u m gi đ c 1    nh ng đ c tính t t c a m , cho trái nhanh nh ng địi h i nơng dân ph i có kinh nghi m nhân gi ng, ti m n nguy c nhi m b nh qua m t ghép, chi t H s nhân gi ng c a hai ph ng pháp th công không cao, không đ ng đ u nên c n ph i có gi i pháp t o ngu n gi ng l n đ ng đ u đ cung c p cho s n xu t, ph ng pháp nuôi c y mơ có th gi i quy t đ c v n đ Ph ng pháp nuôi c y mô c ng công c h u hi u cho công ngh chuy n gen, t o đ t bi n th c v t nh m t o bi n d ph c v trình ch n t o gi ng Do đó, chúng tơi ti n hành nghiên c u đ tài “Nuôi c y in vitro S u riêng (Durio zibethinus Murray)” nh m ph c v cho trình ch n l c t o gi ng m i 2    Hình 22: Ch i mơi tr ng MS + Hình 23: Ch i môi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n nuôi c y NAA mg/l sau tu n ni c y Hình 24: Ch i mơi tr Hình 25: Ch i môi tr ng MS + NAA mg/l sau tu n nuôi c y ng MS + NAA mg/l sau tu n nuôi c y 35    III.7 Gi i ph u r , thân, lá, đ nh sinh tr tu i t tr ng S u riêng tháng nhiên S u riêng in vitro 10 tu n tu i môi ng MS Sau nhu m m u quan sát d i kính hi n vi, ta th y c u trúc thân, lá, r c a S u riêng t nhiên tháng tu i S u riêng in vitro 10 tu n tu i khơng có s khác bi t l n Tuy nhiên, đ nh sinh tr mơ có ph n ng n to h n đ nh sinh tr ng c a ni c y ng ngồi t nhiên S kh i tr S kh i nh sinh ng Ch i bên Ch i bên tr Hình 26: nh sinh tr nh sinh ng ng S u \ Hình 27: riêng ngồi t nhiên tháng tu i c t d c nh sinh tr ng S u riêng in vitro c t d c G Libe Bi u bì Hình 28: Thân S u riêng t nhiên tháng tu i c t ngang Hình 29: Thân S u riêng in vitro c t ngang 36    Mô khuy t Mơ khuy t Bó d n ph Mơ gi u Bi u bì Mơ gi u Bó d n ph Bó d n Bó d n Bi u bì Hình 30: Lá S u riêng ngồi t nhiên tháng tu i c t ngang Hình 32: R S u riêng t nhiên tháng tu i c t ngang Hình 31: Lá S u riêng in vitro c t ngang Hình 33: R S u riêng in vitro c t ngang 37    IV K T LU N VÀ IV.1 NGH K t lu n T nh ng k t qu thu đ c qua thí nghi m, chúng tơi rút nh ng k t lu n sau: n ng đ HgCl2 0.1%, th i gian kh m u 10 phút s l - ng m u s ng không nhi m cao nh t (76.67%) - Ch i bên, phôi h t S u riêng h u tính tháng tu i khơng có kh n ng t o ng MS b sung BA n ng đ t đ n 10 mg/l c m ch i môi tr - Trên môi tr ng thành t o đ tr ng MS có b sung BA mg/l phơi h u tính t h t S u riêng c c m ch i t t nh t H u h t, phôi nuôi c y mơi tr đ u phân hóa t o c m ch i v i nhi u ch i Ch i thu đ ng c t m t m u ni c y đ t trung bình 5.11 ch i m t m u nuôi c y - Trên mơi tr ng MS có b sung NAA mg/l ch i S u riêng t o đ nh t H u h t phôi nuôi c y môi tr nhi u ch i S r đ cr t t ng đ u phân hóa t o c m ch i v i c t m t m u nuôi c y đ t trung bình 5.11 r chi u dài r trung bình 2.59 cm IV.2 ngh N u có u ki n ti p t c nghiên c u: - T o bi n d S u riêng in vitro b ng ph ng pháp chi u x ho c tia UV nh m t o dòng m i 38    TÀI LI U THAM KH O Tài li u n c 1) Ngơ Xn Bình (2009), Ni c y mơ t bào th c v t, Nhà xu t b n Khoa h c K thu t 2) D ng Công Kiên (2002), Nuôi c y mô th c v t, Nhà xu t b n i h c Qu c gia TP H Chí Minh 3) Nguy n cL ng (2011), Công ngh t bào, Nhà xu t b n i h c Qu c gia TP H Chí Minh 4) Võ Th B ch Mai (2004), S phát tri n ch i r , Nhà xu t b n i h c Qu c gia TP H Chí Minh 5) Hu nh V n Thành, Phòng tr b nh Phytophthora gây h i S u riêng, H i th o S u riêng B n Tre ngày 19/9/2000, trang 1-7, S Nông Nghi p-Phát Tri n Nông Thôn B n Tre – Chi c c BVTV Vi n nghiên c u Cây n qu mi n nam 6) Hu nh V n T n, Nguy n Minh Châu, 2003 K t qu b ph c hi n t ng s c đ u nghiên c u kh c ng c m trái S u riêng Monthong tr ng t i B n Tre, K t qu nghiên c u khoa h c công ngh rau qu 2001- 2002, Vi n nghiên c u Cây n qu mi n Nam, Nhà xu t b n Nông nghi p TP H Chí Minh 7) Nguy n V n Tuy n (2012), K thu t tr ng S u riêng, Nhà xu t b n Thanh Niên 8) Tr n Th T c (2004), Cây S u riêng Vi t Nam, Nhà xu t b n Nông Nghi p 9) Hoàng Th S n (2006), Phân lo i h c th c v t, Nhà xu t b n i h c S Ph m 10) Nguy n V n Vàn (2009), K thu t canh tác n trái-quy n 4: Cây S u riêng, NXB t ng h p thành ph H Chí Minh 11) Tr n Vinh, Bình n m t s đ u dòng S u riêng cl k ph ng pháp m i đ nhân gi ng vơ tính K t qu nghiên c u khoa h c Công ngh nông nghi p 19696-1997, B Nông Nghi p-Phát Tri n Nông Thôn, Nhà xu t b n Nông nghi p Hà N i 1998, trang 115-118 12) Bùi Trang Vi t (2000), Sinh lý th c v t đ i c b n ng, Ph n II: Phát tri n, Nhà xu t i h c Qu c gia, TP H Chí Minh Tài li u ngồi n c 39    13) Hameed B., Hakimi H., Utilization of durian (Durio zibethinus Murray) peel as low cost sorbent for the removal of acid dye from aqueous solutions, Biochemical Engineering Journal, Volume 39, Issue 2, 15 April 2008, Pages 338–343 14) Komsil Pholdaeng, Sunanta Pongsamart, Studies on the immunomodulatory effect of polysaccharide gel extracted from Durio zibethinus in Penaeus monodon shrimp against Vibrio harveyi and WSSV, Fish & Shellfish Immunology, Volume 28, Issue 4, April 2010, Pages 555–561 15) Mahani A., Abidin Z.,Aishah A.,Sugeng Triwahyono, Hazirah Adam H., Nazirah Kamarudin N., Recovery of gold(III) from an aqueous solution onto a Durio zibethinus husk, Biochemical Engineering Journal,Volume 54, Issue 2, 15 April 2011, Pages 124–131 Tài li u internet 16) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?id=66656 40    PH L C I Thành ph n môi tr ng MS (Murashige Skoog) c b n B NG 1: THÀNH PH N MU I KHOÁNG C B N (mg/l) Stock I Stock II Stock III NH4NO3 KNO3 KH2PO4 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O Na2EDTA FeSO4.7H2O Mn2SO4.4H2O H3BO3 ZnSO4.7H2O KI Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 1650,00 1900,00 170,00 370,00 440,00 37,30 27,80 22,30 6,20 8,60 0,83 0,25 0,025 0,025 B NG 2: THÀNH PH N VITAMIN C A MOREL (mg/l) Morel’s Vitamin Pirydoxine (B6) Biotin (II) Meso-inositol Nicotinic Acid (P.P) Thiamin-HCl (B1) Pantotheate-Ca 1,00 0,01 100,00 1,00 1,00 1,00 i    II Phân tích th ng kê ANOVA 1) K t qu x lý th ng kê c a thí nghi m T l m u s ng vô trùng % Nghi m th c S li u g c S li u chuy n đ i 6.67 14.97 3.33 10.51 20 26.57 16.67 24 14.97 14.97 23.33 28.88 20 26.57 26.67 31.09 36.67 37.27 33.33 35.26 40 39.23 36.67 37.27 23.33 28.88 30 33.21 80 63.43 83.33 65.09 66.67 54.74 60 50.77 53.33 46.91 63.33 52.73 ii    53.33 46.91 56.67 48.83 46.67 43.09 ANOVA Table for KET QUA by NGHIEM THUC Table of Means for KET QUA by NGHIEM THUC Multiple Range Tet for KET QUA by NGHIEM THUC iii    2) K t qu x lý th ng kê c a thí nghi m ANOVA Table for KET QUA by NGHIEM THUC iv    Table of Means for KET QUA by NGHIEM THUC v    Multiple Range Tet for KET QUA by NGHIEM THUC vi    3) K t qu x lý th ng kê c a thí nghi m a) K t qu x lý th ng kê s r ANOVA Table for KET QUA by NGHIEM THUC Table of Means for KET QUA by NGHIEM THUC vii    Multiple Range Tet for KET QUA by NGHIEM THUC b) K t qu x lý th ng kê chi u dài r ANOVA Table for KET QUA by NGHIEM THUC viii    Table of Means for KET QUA by NGHIEM THUC Multiple Range Tet for KET QUA by NGHIEM THUC ix