SỬ DỤNG CHẾ PHẨM VIRUS ĐA DIỆN NHÂN( NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS NPV) TIÊU DIỆT CÔN TRÙNG

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN LỚP DH8SHNN BÁO CÁO SEMINAR SỬ DỤNG CHẾ PHẨM VIRUS ĐA DIỆN NHÂN( NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS NPV) TIÊU DIỆT CƠN TRÙNG GVHD: Ths LÊ MINH TUẤN NHĨM THỰC HIỆN: TRẦN MINH MẪN LÊ HUỲNH ĐỨC NGUYỄN BÌNH PHONG PHẠM QuỐC PHIÊN NGUYỄN VĂN THÔNG NỘI DUNG BÁO CÁO Đặt vấn đề Nội dung 2.1 Giới thiệu sơ lược thuốc trừ sâu vi sinh 2.2 Giới thiệu virus NPV 2.3 Triệu chứng gây bệnh virus lên côn trùng 2.4 Cách phân lập 2.5 Một số chế phẩm virus 2.6 Các tiêu đánh giá chế phẩm NPV dạng bột 2.7 Cách sử dụng Kết luận Đặt vấn đề Từ trước đến nay, sâu hại mối đe doạ nhiều loại trồng nơng nghiệp Thậm chí có thời điểm sâu hại trồng phát sinh thành trận dịch lớn làm ảnh hưởng đến suất trồng Điển hình số trận dịch lớn xảy ngô Hà Giang vào năm 1991 làm giảm 60% sản lượng thu hoạch Việc tiêu diệt sâu hại trồng có từ lâu đời Từ phương pháp thủ công nhặt sâu việc đời thuốc trừ sâu hoá học ngày tiến thuốc trừ sâu vi sinh Nội dung 2.1 Giới thiệu sơ lược thuốc trừ sâu vi sinh Là chế phẩm sinh học sản xuất từ chủng vi sinh vật nuôi cấy môi trường dinh dưỡng khác theo phương pháp thủ công, bán thủ công phương pháp lên men công nghiệp để tạo chế phẩm có chất lượng cao có khả phịng trừ loại sâu hại trồng nơng, lâm nghiệp Ưu điểm chế phẩm vi sinh vật - - - Không gây ảnh hưởng tiêu cực đến sức khỏe người, vật nuôi, trồng  Khơng gây nhiễm mơi trường sinh thái Có tác dụng cân hệ sinh thái không làm hại kết cấu đất, khơng làm chai đất, thối hóa đất mà cịn góp phần tăng độ phì nhiêu đất Có tác dụng đồng hóa chất dinh dưỡng tiêu diệt côn trùng gây hại, giảm thiểu bệnh hại cây, tăng khả đề kháng bệnh Có khả phân hủy, chuyển hóa chất hữu bền vững, phế thải sinh học, phế thải nơng nghiệp, cơng nghiệp, góp phần làm môi trường Nhược điểm chế phẩm vi sinh vật - Tác động thuốc trừ sâu vi sinh chậm nên hiệu chậm thuốc trừ sâu vi sinh thường có q trình gây bệnh nhiễm bệnh vào thể sâu thời gian ủ bệnh phải 1-3 ngày - Hiệu thuốc ban đầu không cao - Phổ tác dụng thuốc hẹp - Một vài loại thuốc trừ sâu vi sinh bị ảnh hưởng điều kiện thời tiết phun không kỹ thuật, phun điều kiện khơng thích hợp khó đạt hiệu - Giá thành cao 2.2 Giới thiệu virus NPV - - - Virus NPV gồm virus gây bệnh côn trùng thuộc họ Baculoviridae,với tên thương mại Vis ViHa, vùi hình khối đa diện chúng có khả ký sinh nhân tế bào vật chủ Trong thể vùi chứa nhiều virion hình que NPV có tính chun hóa cao Các virus NPV thường ký sinh tế bào hạ bì, thể mở, khí quản, dịch huyết tương biểu bì mơ ruột NPV gây bệnh cho côn trùng thuộc bộ: Cánh cứng, hai cánh, cánh màng, cánh vẩy, cánh mạch, cánh thẳng cánh nửa 2.3 Triệu chứng gây bệnh virus lên côn trùng 2.3.1 Triệu chứng gây bệnh - Khi bị bệnh virus, sâu non thường hoạt động yếu, giảm ăn, thể bị biến màu - Sau - ngày đốt chân thân căng phồng mọng nước thể có màu trắng đục, da sâu mỏng dần dễ bị vỡ - Sau 3-5 ngày dịch trắng chảy - Ở ruộng sâu bị chết nhũn treo ngược lên cành cây, đầu chúc xuống - Sâu chết virus có mùi 2.3.2 Cơ chế gây bệnh virus lẫn thức ăn, đường tiêu hố virus xâm nhiễm vào thể trùng thực q trình phá huỷ tồn chức dịch ruột sâu - Cơ chế gây bệnh sau: Virus  vào ruột  thể vùi giải phóng virion  xâm nhập vào huyết tương  tiếp xúc với tế bào máu  xâm nhập vào thể  gây bệnh côn trùng - Quá trình gây bệnh trải qua giai đoạn: - - - Giai đoạn tiềm ẩn: thường kéo dài từ 6-12 giờ, giai đoạn thể vùi PIB xâm nhập vào tế bào, virion phóng thích ra, chúng tự đính vào vị trí thích hợp màng nhân tế bào thành ruột côn trùng Giai đoạn tăng trưởng: Kéo dài 12-48 giờ, giai đoạn tăng nhanh virion bên dịch ruột sâu, sâu tuổi nhỏ sau 32 thể chứa đầy virion trần Giai đoạn cuối: Đây giai đoạn tạo thành thể vùi, nghĩa virion bao bọc protein giai đoạn cuối sâu chết: Thời kỳ ủ bệnh sâu thường kéo dài từ - ngày phụ thuộc vào tuổi sâu, điều kiện nhiệt độ, ẩm độ, lượng thức ăn Sản xuất virus Sản xuất in vitro Ni dịng tế bào sâu Sản xuất in vivo Tìm ký chủ sâu ngồi đồng để sản xuất Nuôi ký chủ sâu PTN Phương pháp thông dụng rẻ tiền 14 Phương pháp thủ công SX chế phẩm NPV cho nông dân Sau khoảng – ngày nhiễm virus thu sâu bị chết virus Ủ bệnh khoảng – ngày bình thuỷ tinh tối màu Nghiền, lọc phun đồng ruộng Thu sâu hại tuổi trung bình khoẻ ngồi ruộng Ni dụng cụ gia đình xơ, chậu, thúng… Nơi thống mát, thức ăn tươi Khi sâu đạt tuổi – tiến hành nhiễm virus Nguồn virus tinh 15 Phương pháp nuôi sâu chủ PTN Để trứng đẻ hàng ngày vào điều kiện ôn, ẩm độ thích hợp đến trứng nở sâu non Nuôi sâu non thức ăn nhân tạo tới độ tuổi Dịch virus 107 PIB/ml trộn vào thức ăn nhân tạo (có agar khơng có agar) Ni sâu chết T = 28 – 30oC, W > 80%, t = – ngày Thu hồi chế phẩm Bắt sâu xanh ruộng chọn sâu non tuổi - Nuôi cá thể môi trường thức ăn nhân tạo Ghép cặp bướm Ghép vũ vũ hoá hoá 10 cái) cái) 11 –– 22 ra (10 (10 đực đực + + 10 Nuôi lồng Nuôi lồng điều kiện gần với tự nhiên điều kiện gần với tự nhiên Sau giao phối – ngày Thu trứng hàng ngày thời gian – ngày Nuôi sâu non thức ăn nhân tạo tới vào nhộng vũ hố 16 (vịng đời khoảng 30 – 35 ngày) Sản xuất chế phẩm bột kỹ thuật LdMNPV nuôi in vivo Thành phần Phần trăm (w/w) Vai trò LdMNPV 14-18 Tác nhân diệt sâu Mảnh xác sâu 82-86 Tác nhân trơ Tiến hành: Trứng sâu bướm nuôi PTN giữ 6ºC 150 ngày để hồn tất vịng đời phát triển Rửa trứng (trong dung dịch formalin 10% v/v), tráng kỹ cho 10-15 trứng vào cốc thức ăn thể tích 6oz Thành phần mơi trường thức ăn (tính cho 1L): mầm lúa mỳ 120g; casein 25g; hỗn hợp vitamin26862 10g; hỗn hợp Wesson Salt 8g; methyl parahydroxybenzoate 1g; axít sorbic 2g; agar 15g; nước 17 800ml Ấu trùng sâu nở giữ 14 ngày 26ºC phịng lọc khí Khi ấu trùng đạt đến đầu giai đoạn IV, bổ sung vào cốc 1ml dịch chứa 5x106 thể vùi virus/ml giữ 29ºC Thu lấy ấu trùng sâu (có tỷ lệ chết > 70%) sau 14 ngày ủ giữ -20ºC sử dụng Ấu trùng đông lạnh rã đông 24 4ºC, sau nghiền (1,0g ấu trùng : ml nước cất) nồng độ cao 10 giây để giải phóng thể vùi virus 18 Xác sâu nghiền sàng qua máy nghiền rung để loại bỏ mảnh xác sâu lớn Ly tâm dịch liên tục 60l/h vận tốc 15500 rev/phút Lấy phần chất rắn trải lên khay đông lạnh -35ºC 10 Sấy đông khô phần chất rắn 24-36 nghiền thành bột mịn (độ ẩm 3-4%) chứa khoảng 15% (w/w) OV 11 Kiểm tra chất lượng vi sinh sản phẩm thu trước đóng gói kín Thu hồi chế phẩm Đối với chế phẩm dùng Thu nhặt sâu chết cho vào dụng cụ tối màu, giữ nhiệt độ thấp Nghiền nhỏ sâu chết: tỷ lệ nước/ sâu = 3/1 Lọc qua vải mỏng thu hồi dịch Bổ sung phụ gia để sấy phun 20 Đối với chế phẩm bảo quản lâu dài  Nghiền nhỏ sâu chết: tỷ lệ nước/ sâu = 3/1  Lọc qua vải mỏng thu hồi dịch  Ly tâm 10.000 – 20.000 vòng/phút, t – 15 – 20 phút thu hồi tinh thể trắng  Kiểm tra dếm số lượng PIB để đưa tạo chế phẩm  Tạo chế phẩm: - CP dạng dịch thể: Bổ sung chất bám dính, chất chống thối, kháng sinh, chất chống tia tử ngoại… đóng chai tối màu để bảo quản - CP dạng bột: Bổ sung chất bột chất phụ gia, sấy phun để có độ ẩm CP – 10% Tiêu chuẩn hoá chế phẩm Kiểm tra chất lượng chế phẩm: Kiểm tra nồng độ thể vùi hoạt tính sinh học Đóng gói sản phẩm: Đóng chai; đóng gói; dán nhãn ghi rõ ngày SX, hoạt lực, hạn sử dụng, hướng dẫn sử dụng Các tiêu cần đạt sản phẩm  Chế phẩm dạng dịch thể: 107 – 108 PIB/ml, thời gian bảo quản – 12 tháng, HQDS 70 – 100% sau – 10 ngày phun  Chế phẩm dạng bột: 108 – 109 PIB/gram, HLÂ – 10%, thời gian bảo quản – 1222 tháng, HQDS 70 – 100% sau – 10 ngày phun 2.5 Một số chế phẩm virus Chế phẩm virus NPV sâu xanh: Chế phẩm virus sâu xanh với OMĐ tác nhân sinh học quan trọng hệ thống phòng trừ tổng hợp sâu hại Chế phẩm virus sâu đo xanh đay: Cho đến chưa tìm mơi trường thức ăn nhân tạo ni sâu Vì vậy, chế phẩm virus sâu đo đay sản xuất phương pháp thủ cơng Chế phẩm virus NPV sâu róm thơng: Chế phẩm sản xuất phương pháp thủ công Hiệu diệt sâu chế phẩm đạt tới 55.2 – 83.3% Ngoài chế phẩm kể cịn có chế phẩm virus NPV sâu keo da láng sản xuất theo phương pháp thử công 2.6 Tiêu chuẩn hóa sản phẩm Kiểm tra chất lượng chế phẩm: Kiểm tra nồng độ thể vùi hoạt tính sinh học Đóng gói sản phẩm: Đóng chai; đóng gói; dán nhãn ghi rõ ngày SX, hoạt lực, hạn sử dụng, hướng dẫn sử dụng Các tiêu cần đạt sản phẩm  Chế phẩm dạng dịch thể: 107 – 108 PIB/ml, thời gian bảo quản – 12 tháng, HQDS 70 – 100% sau – 10 ngày phun  Chế phẩm dạng bột: 108 – 109 PIB/gram, HLÂ – 10%, thời gian bảo quản – 1225 tháng, HQDS 70 – 100% sau – 10 ngày phun 2.7 Cách sử dụng Hoà thuốc vào bình phun bình thường với liều lượng 1,0 - 1,2 kg/ha Kết luận Hiện với xu phát triển bền vững vừa tạo suất hiệu cao vừa đảm bảo an tồn mơi trường, sản phẩm cơng nghệ ln ưu tiên phát triển Sản phẩm thuốc trừ sâu vi sinh đáp ứng yêu cầu trên, xem giải pháp cho phát triển bền vững Nhìn chung việc nghiên cứu ứng dụng chế phẩm sinh học phòng trừ sâu hại Việt Nam chủ yếu phịng thí nghiệm và quy mơ sản xuất thử nên giá thành cao Tài liệu tham khảo  PGS.TS Nguyễn Xuân Thành 2003 Giáo trình cơng nghệ vi sinh vật sản xuất nơng nghiệp xử lý môi trường nhà xuất nông nghiệp Hà Nội  http://svdanang.com/@f/  http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/4196004#  http://thuviensinhhoc.com/index.php? option=com_content&view=article&id=489:ng-dng-ch-phm-sinhhc-phc-v-cho-cay-trng-hng-i-ung-n-ca-phat-trin-nong-nghip-sinhthai-bn-vng&catid=38:travel-tips&Itemid=872  http://www.baomoi.com/Info/Trien-vong-cua-nen-nong-nghiepsach/79/4381739.epi  http://sokhoahoccn.angiang.gov.vn/xem.asp? maidtt=2032&maidmuc=24  http://www.vietlinh.vn/langviet/toilamnd/caygi/cayanqua/c_7tts.htm  Nguồn: Thông tin KH&CN Lâm Đồng, 3/1999