TỔNG QUAN
LORNOXICAM
Hình 1.1 Công thức cấu tạo của lornoxicam [46]
- Tên khoa học: [6-chloro-4-hydroxy-2-methyl-N-2-pyridyl-5H-thieno(2,3-e)- [(1,2)]-thiazin-2-carboxamid-1,1-dioxid]
- Công thức phân tử: C13H10ClN3O4S2
- Bột kết tinh màu vàng, vị đắng, ít tan trong cloroform, rất ít tan trong methanol, hầu như không tan trong nước Nhiệt độ nóng chảy 225 o C - 230 o C
- Lornoxicam tồn tại ở hai dạng thù hình có độ tan khác nhau [114]
Lornoxicam có tính acid yếu với hằng số phân ly pKa = 4,7, dẫn đến khả năng tan hạn chế trong môi trường acid Chất này có tính hơi thân dầu, với hệ số phân bố là 1,8 trong n-octanol và đệm pH 7,4 Độ tan của lornoxicam phụ thuộc vào pH, và tan tốt hơn trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 và 7,4 nhờ vào sự hình thành liên kết hydro và tương tác tĩnh điện giữa nhóm OH và natri hydroxyd có trong dung dịch đệm phosphat.
- Lornoxicam là chất lƣỡng tính trong khoảng pH 2 - 5 và ở dạng anion khi pH ≥ 6 Tồn tại ở dạng đồng phân hỗ biến keto-enol [42]
Bảng 1.1 Độ tan của lornoxicam trong các môi trường pH khác nhau ở nhiệt độ 25 o C± 0,5 o C[43]
Môi trường Độ tan trung bình ± SD
Dung dịch acid hydrocloric 0,1N (pH=1,2) 0,006 ± 0,002
Dung dịch đệm phosphat (pH=7,4) 0,305 ± 0,083
Lornoxicam có khả năng hòa tan chậm nhưng hấp thu nhanh và gần như hoàn toàn qua đường tiêu hóa Nồng độ tối đa trong huyết tương đạt được sau khoảng 1 - 3 giờ sau khi uống thuốc Tuy nhiên, việc tiêu thụ thức ăn có thể làm giảm và làm chậm quá trình hấp thu Lornoxicam, kéo dài thời gian đạt nồng độ tối đa từ 1,5 đến 2,3 giờ.
Thể tích phân bố của LNX khi sử dụng qua đường uống và tiêm tĩnh mạch dao động từ 5-10L, tương đương với thể tích huyết tương và tương tự như các oxicam khác LNX có khả năng liên kết mạnh với protein huyết tương, chủ yếu là albumin.
(99%) Dễ dàng thâm nhập vào các tổ chức bao khớp, đặc biệt là hoạt dịch khớp
Lornoxicam bị chuyển hóa phần lớn qua gan Giống nhƣ các NSAIDS khác, enzym cytochrome P450 2C9 đóng một vai trò quan trọng trong quá trình chuyển hóa của LNX
Lornoxicam được thải trừ qua thận (khoảng 42%) và phân (51%) dưới dạng 5 ’ -hydroxy-lornoxicam Thời gian bán thải 3 - 5 giờ [46], [69], [70], [94]
1.1.4 Chỉ định và chống chỉ định
- Điều trị viêm khớp, viêm xương khớp mãn tính
- Giảm đau trước và sau phẫu thuật phụ khoa, phẫu thuật chỉnh hình, phẫu thuật răng miệng
- Bệnh nhân mẫn cảm với các thuốc chống viêm giảm đau phi steroid, xuất huyết tiêu hóa, rối loạn đông máu, suy tim, suy giảm chức năng gan thận
- Lornoxicam không đƣợc khuyến cáo sử dụng khi mang thai, nuôi con bú và ba tháng cuối thai kỳ [47], [69], [70], [77]
1.1.5 Tác dụng không mong muốn
Lornoxicam, giống như các NSAIDs khác, có thể gây ra một số tác dụng phụ nhẹ như rối loạn tiêu hóa, buồn nôn, tiêu chảy, đau đầu và đau dạ dày Mặc dù hiếm gặp, nhưng người dùng cũng có thể gặp phản ứng chảy máu, co thắt khí quản và rất hiếm khi xảy ra hội chứng Steven-Johnson.
1.1.6 Một số chế phẩm lornoxicam trên thị trường
Bảng 1.2 Một số chế phẩm chứa lornoxicam trên thị trường Dạng bào chế
Tên biệt dƣợc Nhà sản xuất Hàm lƣợng
Vocfor Công ty CP dƣợc phẩm Me Di Sun -
Arbuntec 4 Công ty CP dƣợc phẩm Me Di Sun -
Focgo Nhà máy sản xuất dƣợc phẩm
Larfix Kusum Healthcare Private Limited
Livorax-4 Micro Labs., Ltd - Ấn Độ 4
Lorcam Pharmed Ltd - Nhật Bản 4; 8
Viên nén giải phóng kéo dài
Flexilor SR Glenmark Pharmaceuticals Ltd - Ấn Độ 16 Lorfecam Sun Pharma Laboratories Ltd - Ấn Độ 16
Xofen SR Torrent Pharmaceuticals Ltd - Ấn Độ 16
Lorna Adcock Ingram Healthcare Pvt Ltd
1.1.7 Phương pháp định lượng lornoxicam trong chế phẩm và trong dịch sinh học
1.1.7.1 Phương pháp định lượng lornoxicam trong chế phẩm a Phương pháp đo quang
Phương pháp quang phổ tử ngoại là một kỹ thuật hiệu quả để định lượng lornoxicam trong nguyên liệu và chế phẩm Quá trình này bao gồm việc kiềm hóa dược chất, sau đó tạo phức màu và đo phổ hấp phụ ở bước sóng 460nm Ngoài ra, dược chất cũng có thể được oxy hóa và tạo phức màu với thuốc thử, sau đó đo phổ hấp thụ UV-Vis tại bước sóng từ 530 đến 650nm.
Phương pháp quang phổ tử ngoại được sử dụng để đánh giá độ hòa tan của lornoxicam trong môi trường dịch vị nhân tạo với dung dịch acid hydrochloric 0,1N pH 1,2, cũng như trong môi trường dịch ruột nhân tạo với dung dịch đệm phosphat pH 6,8.
Sahoo S K và cộng sự (2012) đã xác định lornoxicam trong HPTR bằng phương pháp quang phổ tử ngoại ở bước sóng 377 nm trong môi trường kiềm Ngoài ra, phương pháp sắc ký lớp mỏng cũng được sử dụng để định lượng trực tiếp trên bản mỏng, thông qua kỹ thuật densitometer, bằng cách chiếu chùm tia vào vết sắc ký và đo cường độ hấp thụ hoặc phổ huỳnh quang.
Patel D J và cộng sự đã phát triển phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao để định lượng đồng thời lornoxicam và paracetamol trong viên nén kết hợp Họ sử dụng bản mỏng Merck TLC silica gel 60F-254 và hệ dung môi gồm ethyl acetat, methanol, toluen và acid acetic theo tỷ lệ 7:2,5:1:0,5 Đo mật độ hấp thụ được thực hiện ở bước sóng 270 nm.
Trong phương pháp này LNX thường được hòa tan vào các dung môi như: natri hydroxyd, methanol trước khi hòa tan vào pha động để tiêm vào sắc ký
Mahesh Attimarad (2010) đã sử dụng phương pháp HPLC để định lượng LNX trong viên nén, với cột Zorbax eclipse XBD C18 (150 mm x 4,6 mm, 5 μm) Pha động được sử dụng là methanol và 0,1% acid formic trong nước theo tỉ lệ 80:20, với tốc độ dòng 0,8 ml/phút và detector UV hoạt động ở bước sóng 381 nm.
20 μl Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp là 0,013 àg/ml và 0,416 àg/ml, thời gian lưu là 2,63 ± 0,08 phỳt [58]
Zhang J và cộng sự (2012) đã thực hiện nghiên cứu định lượng LNX trong chế phẩm tiêm bằng phương pháp HPLC với cột Shimadzu ODS (15cm x 4,6mm, 5μm) Họ sử dụng pha động natri acetat (0,05 mol/l, pH 5,8) và methanol (55 : 45) với tốc độ dòng 1 ml/phút, cùng với detector UV ở bước sóng 290 nm Kết quả cho thấy giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp lần lượt là 0,010 àg/ml và 0,350 àg/ml.
Sharma M C (2011) đã thực hiện việc định lượng đồng thời LNX và paracetamol trong viên nén kết hợp bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu sử dụng cột Phenomenex Luna C18 pha đảo với kích thước 250 mm x 4,6 mm và kích thước hạt 5 μm Pha động được sử dụng là ethyl acetat: methanol: nước với tỷ lệ 2,5: 70: 28,5, với tốc độ dòng là 1 ml/phút và detector UV hoạt động ở bước sóng 234 nm.
Nghiên cứu của Patil K R và cộng sự (2009) đã xác định được lượng LNX trong chế phẩm bằng phương pháp HPLC với cột Zorbax SB C18 (75mm x 4,6 mm, 3,5 μm) Phương pháp sử dụng tốc độ dòng 1 ml/phút, pha động là dung dịch acid trifluoroacetic (0,05%; tt/tt) : acetonitril theo tỷ lệ 70 : 30, với thể tích tiêm mẫu 10 μl và detector UV ở bước sóng 295 nm Kết quả cho thấy giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng lần lượt là 0,012 àg/ml và 0,380 àg/ml, thời gian lưu đạt 4,9 phút.
1.1.7.2 Phương pháp định lượng lornoxicam trong dịch sinh học
Quá trình thực hiện đề tài luận án yêu cầu định lượng nồng độ LNX trong huyết tương sau khi động vật thí nghiệm uống viên nghiên cứu Việc bào chế viên LNX 12 mg kiểm soát giải phóng là nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam, do đó, xây dựng và thẩm định quy trình định lượng LNX trong huyết tương là cần thiết Phương pháp HPLC đã được nhiều tác giả áp dụng để định lượng LNX trong huyết tương, và một số nghiên cứu sử dụng phương pháp này đã được tóm tắt trong bảng dưới đây.
Bảng 1.3 Một số phương pháp định lượng lornoxicam trong huyết tương
Phương pháp xử lý mẫu Dung môi Chuẩn nội Kết quả
Sắc ký lỏng hiệu năng cao detector khối phổ
Phương pháp chiết bằng dung môi hữu cơ
Ethyl acetat Meloxicam 5,130 ng/ml [110]
Sắc ký lỏng hiệu năng cao detector
Phương pháp chiết qua cột trao đổi ion C18
Phương pháp chiết bằng dung môi hữu cơ
Diethyl ether Piroxicam 40 ng/ml,
Tawfeek H T và cộng sự (2014) đã xây dựng phương pháp định lượng LNX trong huyết tương bằng phương pháp HPLC, detector UV ở bước sóng
Phương pháp phân tích sử dụng bước sóng 377 nm để xử lý mẫu thông qua chiết lỏng - lỏng với dung môi diethyl ether và chất chuẩn nội piroxicam Sau khi lắc xoáy và ly tâm, dung môi hữu cơ được bốc hơi trong dòng khí nitơ ở nhiệt độ 40 o C Mẫu được hòa tan trong 500 μl dung dịch pha động và định lượng bằng cột Kromasil C18 (250 mm x 4,6 mm, 10 μm) với tốc độ dòng 1,2 ml/phút, thể tích tiêm mẫu 20 μl và thời gian lưu 3,9 phút Pha động sử dụng kali monophosphat - acetonitril theo tỷ lệ 60:40, với giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng lần lượt là 40 ng/ml và 50 ng/ml.
Yehia S A và cộng sự (2017) đã phát triển và xác thực phương pháp định lượng LNX trong huyết tương thông qua kỹ thuật HPLC với detector UV ở bước sóng 385 nm Mẫu được xử lý bằng phương pháp chiết lỏng - lỏng sử dụng dung môi dichloromethan và chất chuẩn nội tenoxicam Pha dung môi hữu cơ được bốc hơi trong dòng khí nitơ ở nhiệt độ 35 o C, sau đó hòa tan cặn bằng 0,2 ml acetonitril và định lượng với cột Supelcosil TM LC-18-TY (150 mm x 4,6 mm, 3 µm) Pha động sử dụng dung dịch natri dihydro phosphat 0,1 M và methanol theo tỷ lệ 50:50 với tốc độ dòng 1,5 ml/phút.
MỘT SỐ KỸ THUẬT VÀ CÔNG NGHỆ BÀO CHẾ ĐƢỢC ÁP DỤNG
Để nâng cao độ tan và tốc độ hòa tan của LNX, các nghiên cứu thường đề xuất các phương pháp cải thiện thông qua việc tác động vào bản thân dược chất Các biện pháp này bao gồm việc giảm kích thước tiểu phân để tăng diện tích tiếp xúc, sử dụng chất diện hoạt để cải thiện tính thấm, bào chế hệ phân tán rắn và hệ tiểu phân nano Ngoài ra, việc thay đổi tính chất hóa học của dược chất như sử dụng dạng tiền thuốc hoặc thay thế bằng dạng muối cũng được xem xét.
1.2.1 Bào chế hệ phân tán rắn
Hệ phân tán rắn là hệ thống trong đó một hoặc nhiều dược chất được phân tán hoặc hòa tan trong một chất mang hoặc hỗn hợp chất mang không có hoạt tính dược lý Các hệ này được bào chế thông qua các phương pháp thích hợp nhằm tối ưu hóa hiệu quả dược lý.
Hệ phân tán rắn giúp tăng cường độ tan và tốc độ hòa tan của các dược chất ít tan, mang lại khả năng hòa tan tốt hơn so với nguyên liệu ban đầu Việc chế tạo hệ phân tán rắn đã được áp dụng rộng rãi để nâng cao độ tan của nhiều dược chất, đặc biệt là nhóm thuốc giảm đau chống viêm, từ đó cải thiện sinh khả dụng của thuốc.
Hệ phân tán rắn mang lại lợi thế vượt trội so với các phương pháp tăng độ tan khác như tạo muối, sử dụng hỗn hợp dung môi hay giảm kích thước tiểu phân Phương pháp này cho phép lựa chọn công thức và quy trình đa dạng, từ đó linh hoạt trong việc thiết kế các dạng bào chế đường uống cho các dược chất ít tan trong nước.
Cơ chế làm tăng độ tan của hệ phân tán rắn
- Thay đổi trạng thái kết tinh của dƣợc chất hoặc chuyển từ dạng kết tinh sang dạng vô định hình có khả năng hòa tan dƣợc chất tốt hơn
Giảm kích thước tiểu phân dược chất là một quá trình quan trọng, trong đó dược chất được phân tán ở mức độ rất mịn, thậm chí đạt đến mức độ phân tử khi hệ có cấu trúc dung dịch rắn.
- Cải thiện tính thấm ướt môi trường hòa tan của dược chất
- Làm giảm năng lƣợng của sự hòa tan
Theo sinh dược học, độ tan của dược chất ảnh hưởng lớn đến mức độ và tốc độ hấp thu LNX có độ tan kém và thấm tốt, khiến quá trình hấp thu qua đường tiêu hóa bị hạn chế Việc bào chế hệ phân tán rắn cho LNX với các chất mang phù hợp như PVP K30 và PEG là một giải pháp hiệu quả để cải thiện đáng kể độ tan và sinh khả dụng của dược chất.
4000, PEG 6000, PEG 8000, Lutrol F-127, các cyclodextrin và dẫn chất [8],
Hamza Y E và cộng sự (2010) đã tiến hành nghiên cứu bào chế hệ phân tán rắn LNX với chất mang PVP K30 bằng phương pháp đông khô Hệ phân tán này được ứng dụng trong việc bào chế lớp bao giải phóng nhanh, nhằm mục tiêu giúp dược chất nhanh chóng được giải phóng khi vào dạ dày, từ đó cung cấp liều giảm đau hiệu quả Kết quả đánh giá sinh khả dụng in vitro cho thấy rằng hệ phân tán lornoxicam - PVP K30 với tỷ lệ 1:5 đã làm tăng đáng kể độ tan của dược chất trong môi trường acid dạ dày.
Nghiên cứu của Bramhane D M và cộng sự (2010) đã chỉ ra rằng việc bào chế HPTR lornoxicam - β-cyclodextrin kết hợp với arginin, một amino acid mới, trong hệ ba pha giúp cải thiện đáng kể độ tan và tốc độ hòa tan của dược chất Phương pháp đông khô được sử dụng để chế tạo các hệ hai pha và ba pha với tỷ lệ khác nhau Sự tạo thành phức lồng dạng rắn được đánh giá thông qua các kỹ thuật như phổ hồng ngoại, phân tích nhiệt vi sai, và phổ nhiễu xạ tia X Để xác định dạng lỏng, các phương pháp phân tích pha hòa tan, đo phổ tử ngoại, sắc ký lỏng hiệu năng cao và phổ cộng hưởng từ đã được áp dụng Kết quả cho thấy sự kết hợp giữa HPTR lornoxicam - β-cyclodextrin và arginin mang lại sự cải thiện đáng kể về độ tan so với lornoxicam nguyên liệu.
1.2.2 Bào chế viên giải phóng nhanh
Viên nén giải phóng nhanh là dạng thuốc rắn phân liều có khả năng rã và hoà tan dƣợc chất trong một thời gian ngắn
Hầu hết các nghiên cứu viên trong lĩnh vực giải phóng nhanh tập trung vào việc tăng tốc độ và mức độ hòa tan của các dược chất ít tan khi đưa vào cơ thể Đặc biệt, họ tận dụng quá trình rã và hòa tan dược chất ngay từ khoang miệng mà không cần nhai hoặc nước Quá trình hấp thu thuốc diễn ra ngay từ khoang miệng và phần trên của bộ máy tiêu hóa trước khi xuống tới dạ dày.
Tốc độ hòa tan của viên nén cũng có thể bị ảnh hưởng bởi thời gian rã của viên Viên nén rã nhanh giúp giải phóng dược chất nhanh chóng trong vài giây dưới dạng hỗn dịch mịn, làm tăng diện tích bề mặt tiếp xúc với môi trường hòa tan, từ đó cải thiện thời gian tác dụng và sinh khả dụng của thuốc.
Sheth S K và cộng sự (2010) đã nghiên cứu viên nén ít đắng rã trong miệng chứa LNX theo phương pháp dập thẳng, sử dụng kỹ thuật tạo phức với
β-cyclodextrin được sử dụng trong quá trình dập viên kết hợp với các tá dược siêu rã như natri starch glycolat, crospovidon và natri croscarmellose Sau khi bào chế, viên nén được đánh giá qua các chỉ tiêu như hàm lượng, độ cứng, độ mài mòn, thời gian rã và khả năng hòa tan Thời gian rã của các công thức dao động từ 22 đến 58 giây Trong số các công thức nghiên cứu, công thức tối ưu được lựa chọn là công thức sử dụng LNX để tạo phức.
-cyclodextrin kết hợp với tá dƣợc siêu rã crospovidon 7,5%, thời gian rã 28 giây, sau 8 phút giải phóng đƣợc 99,85% dƣợc chất [93]
Kalakuntla D R và cộng sự (2010) đã tiến hành nghiên cứu viên nén lornoxicam 8 mg với đặc tính ít đắng và rã trong miệng bằng phương pháp dập thẳng Họ sử dụng kỹ thuật tạo phức với Eudragit E 100 và các tá dược siêu rã như natri starch glycolat và Indion 414 Các viên nén sau khi bào chế được đánh giá về hàm lượng, độ cứng, độ mài mòn, thời gian rã và độ hòa tan Kết quả cho thấy Eudragit E 100 có khả năng che dấu vị đắng hiệu quả, với thời gian rã của các công thức dao động từ 45 đến 80 giây, và công thức tối ưu được xác định là công thức sử dụng LNX tạo phức với Eudragit.
E 100 kết hợp với 4% tá dƣợc siêu rã Indion 414, viên có thời gian rã 45 giây, sau 60 phút giải phóng đƣợc trên 90% dƣợc chất [50]
Metker V và cộng sự (2011) đã nghiên cứu bào chế viên nén rã trong miệng lornoxicam bằng phương pháp tạo hạt ướt, sử dụng tá dược siêu rã Kyron T-314 và tá dƣợc thăng hoa menthol Các công thức nghiên cứu đƣợc bào chế với tỷ lệ menthol, Kyron T-314 khác nhau Kết quả cho thấy tá dƣợc thăng hoa không ảnh hưởng đến độ cứng và làm tăng độ xốp của viên Hàm lƣợng LNX trong các công thức nghiên cứu từ 98,4 - 99,5% Công thức tối ƣu giải phóng 78,37 ± 1,5% dƣợc chất sau 5 phút và giải phóng 97,25 ± 1,3% dược chất sau 30 phút Tá dược siêu rã Kyron T-314 trương nở rất nhanh khi thấm nước làm cho viên rã nhanh Ngoài ra, tá dược thăng hoa menthol làm tăng độ xốp của viên, giúp dƣợc chất giải phóng nhanh hơn [60]
1.2.3 Bào chế viên giải phóng kéo dài
Thuốc giải phóng kéo dài (GPKD) là chế phẩm giúp kéo dài quá trình giải phóng và hấp thu dược chất, duy trì nồng độ thuốc trong máu lâu hơn, từ đó nâng cao hiệu quả điều trị và giảm số lần sử dụng GPKD đặc biệt phù hợp với những dược chất có thời gian bán thải ngắn như lornoxicam, giúp giảm tác dụng không mong muốn, đặc biệt là kích ứng đường tiêu hóa, nhờ vào việc giải phóng dược chất từ từ, tránh tình trạng tập trung lớn tại đường tiêu hóa như khi sử dụng viên nén thông thường.
Nghiên cứu của Ulla S N và cộng sự (2010) đã phát triển viên LNX giải phóng kéo dài bằng phương pháp dập thẳng, sử dụng tá dược hydroxypropylmethyl cellulose (HPMC) để khắc phục thời gian bán thải ngắn của dược chất Mục tiêu là duy trì nồng độ dược chất trong máu lâu hơn, giảm số lần dùng thuốc và tránh tình trạng bỏ quên thuốc Công thức nghiên cứu bao gồm tá dược HPMC K4M, K15M, K100M, cellulose vi tinh thể và magnesi stearat Kết quả cho thấy công thức tối ưu với tá dược HPMC K4M 15% đạt 98,19% dược chất được giải phóng sau 12 giờ.
SINH KHẢ DỤNG
Sinh khả dụng thực sự của thuốc được xác định bởi lượng dược chất đến được nơi tác dụng Tuy nhiên, việc đo lường dược chất tại nơi tác dụng thường gặp khó khăn Đối với các đường dùng toàn thân, dược chất phải được hấp thu vào tuần hoàn máu và sau đó phân bố đến nơi tác dụng Do đó, sinh khả dụng của thuốc trong máu hay huyết tương được sử dụng để định lượng và phản ánh sinh khả dụng tại nơi tác dụng, dựa trên nguyên tắc cân bằng động và mối tương quan giữa nồng độ dược chất trong máu và tại nơi tác dụng.
1.3.1 Đánh giá sinh khả dụng của thuốc
Sinh khả dụng của thuốc được đánh giá theo từng bước của quá trình sinh dƣợc học gồm: sinh khả dụng in vitro và sinh khả dụng in vivo
1.3.1.1 Đánh giá sinh khả dụng in vitro
Sinh khả dụng in vitro là một thử nghiệm quan trọng để đánh giá khả năng giải phóng dược chất từ dạng thuốc Thử nghiệm này được thực hiện thông qua các phương pháp hòa tan hoặc giải phóng dược chất, sử dụng thiết bị chuẩn hóa nhằm mô phỏng điều kiện in vivo một cách sát thực nhất Các điều kiện này bao gồm nhiệt độ khoảng 37°C ± 0,5°C, pH biến thiên từ 1,2 đến 6,8 giống như trong đường tiêu hóa, cùng với sự ảnh hưởng của nhu động và enzym.
Dược điển của các quốc gia như Anh, Mỹ và Việt Nam quy định các tiêu chuẩn chung về thiết bị thử nghiệm, thông số kỹ thuật, điều kiện thử và phạm vi áp dụng cho từng loại thuốc Độ hòa tan in vitro của các chế phẩm LNX thường được đánh giá bằng thiết bị cánh khuấy trong môi trường dịch vị nhân tạo, sử dụng dung dịch acid hydrochloric 0,1 N và dung dịch đệm phosphat pH 6,8 ở nhiệt độ 37 oC ± 0,5 oC, với tốc độ khuấy 50 ± 2 hoặc 100 ± 2 vòng/phút Tỷ lệ phần trăm LNX hòa tan được xác định thông qua phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại.
Sheith S K và cộng sự (2010) đã thực hiện đánh giá sinh khả dụng in vitro của viên nén rã nhanh trong miệng LNX theo tiêu chuẩn USP Nghiên cứu được tiến hành bằng thiết bị cánh khuấy trong môi trường dung dịch acid hydrochloric 0,1N, với nhiệt độ 37 oC ± 0,5 oC và tốc độ khuấy 50 vòng/phút trong thời gian 20 phút Mẫu được hút tại các thời điểm 2, 4 và 6 phút để phân tích kết quả.
8; 10; 15 và 20 phỳt, lọc qua màng lọc 0,22 àm và đo quang ở bước súng 376nm [93]
Hamza Y E và cộng sự (2010) đã tiến hành nghiên cứu bào chế viên nén LNX GPKD và đánh giá sinh khả dụng in vitro bằng thiết bị cánh khuấy Nghiên cứu được thực hiện trong hai môi trường: dung dịch acid hydrocloric 0,1N trong 2 giờ đầu và dung dịch đệm phosphat pH 6,8 trong 6 giờ tiếp theo, với nhiệt độ môi trường duy trì ở 37 o C ± 0,5 o C và tốc độ khuấy 100 vòng/phút Mẫu được thu thập sau từng khoảng thời gian 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8 giờ, sau đó lọc qua màng lọc 0,45 µm và đo quang ở bước sóng 372 nm và 376,8 nm.
Ulla S N và cộng sự (2011) đã tiến hành đánh giá sinh khả dụng in vitro của viên nén LNX 8 mg GPKD bằng cách sử dụng thiết bị cánh khuấy, với nhiệt độ môi trường được duy trì ở 37 o C ± 0,5 o C và tốc độ khuấy 50 vòng/phút Thí nghiệm được thực hiện trong hai giai đoạn: hai giờ đầu trong dung dịch acid hydrochloric 0,1N, sau đó 10 giờ trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 Mỗi giờ, 10 ml dung dịch thử được lấy ra để đo quang tại bước sóng 373 nm và 379 nm.
Hamza Y E và cộng sự (2009) đã tiến hành đánh giá sinh khả dụng in vitro của viên nén hai lớp LNX 8 mg bằng cách sử dụng máy cánh khuấy ở nhiệt độ 37 oC ± 0,5 oC và tốc độ khuấy 100 vòng/phút Thí nghiệm sử dụng 400 ml dung dịch acid hydrochloric 0,1N trong 2 giờ đầu, sau đó chuyển sang môi trường đệm phosphat pH 6,8 trong 6 giờ tiếp theo Mẫu được hủy sau các khoảng thời gian 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8 giờ, lọc qua màng lọc 0,45 µm và đo quang ở bước sóng 372 nm và 376,8 nm tương ứng.
Nghiên cứu của Songa A S và cộng sự (2012) đã tập trung vào việc bào chế và đánh giá sinh khả dụng in vitro của viên nén hai lớp chứa LNX Thử nghiệm hòa tan được thực hiện theo tiêu chuẩn USP 27, sử dụng thiết bị cánh khuấy với tốc độ 50 vòng/phút và nhiệt độ môi trường 37 oC ± 0,5 oC, trong môi trường đệm phosphat pH 7,4 Sau mỗi giờ, 5 ml dung dịch thử được hút ra và đo quang ở bước sóng tương ứng.
Sangeetamohanty và cộng sự (2017) đã bào chế, đánh giá sinh khả dụng in vitro viên nén chứa 8mg LNX GPKD và so sánh với biệt dƣợc
Lofecam 8 mg Nghiên cứu đƣợc tiến hành trên thiết bị cánh khuấy, môi trường hòa tan là 900 ml dụng dịch đệm phosphat pH 7,4, duy trì ở nhiệt độ
37 o C ± 0,5 o C, tốc độ khuấy 100 vòng/phút Mẫu đƣợc hút tại các thời điểm 0;
30; 60; 120; 240; 360; 480 phút và đo quang ở bước sóng 409 nm [83]
1.3.1.2 Đánh giá sinh khả dụng in vivo Đánh giá sinh khả dụng in vivo là thử nghiệm đƣợc thực hiện trên cơ thể sống Trong giai đoạn sàng lọc, người ta có thể sơ bộ đánh giá sinh khả dụng in vivo trên động vật thí nghiệm Với đa số các thuốc, nồng độ hoạt chất trong máu có liên quan trực tiếp đến đáp ứng lâm sàng của thuốc hay hiệu quả điều trị của thuốc Chỉ tiêu in vivo là các thông số đáp ứng sinh học của chế phẩm Trong nghiên cứu SKD thường sử dụng các thông số dược động học như AUC, C max , T max , MRT, tốc độ hấp thu từ kết quả nghiên cứu in vivo [2], [8],
1.3.2 Quy định về đánh giá sinh khả dụng in vivo
Trong nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng (SKD) của các dạng thuốc lornoxicam (LNX), việc lựa chọn đối tượng thử nghiệm và thiết kế nghiên cứu phù hợp là rất quan trọng Phương pháp chủ yếu được sử dụng để định lượng lornoxicam trong dịch sinh học là HPLC hoặc LC-MS/MS.
Nghiên cứu sinh khả dụng (SKD) in vivo hiệu quả nhất được thực hiện trên những người tình nguyện khỏe mạnh Tuy nhiên, đối với các loại thuốc có độc tính cao hoặc nồng độ trong máu thấp, cũng như trong các giai đoạn phát triển sản phẩm, việc đánh giá SKD in vivo có thể được tiến hành trên động vật thí nghiệm.
Chó là loài động vật phù hợp nhất để đánh giá sinh khả dụng của thuốc uống, do hệ tiêu hóa của chúng tương đồng với con người, đặc biệt là dạ dày Trong nghiên cứu sàng lọc chế phẩm thuốc, thỏ và chó thường được sử dụng làm mô hình nghiên cứu để xếp hạng sinh khả dụng.
1.3.2.2 Thiết kế nghiên cứu Đánh giá SKD có thể thực hiện theo mô hình thiết kế đơn liều hoặc đa liều Thời gian nghỉ giữa các lần thử thuốc liên tiếp phải đủ để thuốc dùng lần trước thải trừ hết khỏi cơ thể, thường gấp 10 lần thời gian bán thải của thuốc
Trong đánh giá sinh khả dụng, nghiên cứu chéo thường được áp dụng để giảm thiểu ảnh hưởng của yếu tố cá thể Tuy nhiên, trong các nghiên cứu thăm dò hoặc khảo sát sinh khả dụng, có thể thực hiện đánh giá trên một số cá thể riêng biệt tùy thuộc vào điều kiện thực nghiệm.
Thiết kế thời điểm lấy mẫu là yếu tố quan trọng để ước lượng Cmax và theo dõi đường cong nồng độ thuốc trong huyết tương theo thời gian, nhằm xác định chính xác mức độ hấp thu Đường cong SKD cần thể hiện rõ ràng cả pha hấp thu và pha thải trừ, với ít nhất 3 điểm lấy mẫu trước khi đạt đỉnh Cmax và 4 điểm sau đó để đảm bảo tính chính xác trong việc phân tích.
