bài 3 KHOA DƯỢC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HUẾ BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM PHÂN TÍCH ĐỘC CHẤT GIÁO TRÌNH THỰC TẬP KIỂM NGHIỆM I (Dành cho đối tượng Dược chính quy và Liên thông chính quy) TÀI LIỆU LƯU HÀNH NỘI.
KHOA DƯỢC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HUẾ BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM - PHÂN TÍCH - ĐỘC CHẤT ……… ……… GIÁO TRÌNH THỰC TẬP KIỂM NGHIỆM I (Dành cho đối tượng Dược quy Liên thơng quy) TÀI LIỆU LƯU HÀNH NỘI BỘ HUẾ - 2021 BÀI KIỂM NGHIỆM VIÊN BAO VITAMIN C 500 mg I Pha dung dịch chuẩn độ iod 0,1N Nguyên tắc: Dung dịch chuẩn iod 0,1N pha từ hóa chất iod kali iod Xác định hệ số hiệu chỉnh K dung dịch chuẩn độ N2S2O3 (K= 1,000): I2 + Na2S2O3 NaI + Na2S2O4 Hệ số hiệu chỉnh K dung dịch Iod 0,1N: K=VoKo/V K : hệ số hiểu chỉnh phải tìm Vo: thể tích dung dịch N2S2O3 tiêu thụ Ko: hệ số hiệu chỉnh dung dịch N2S2O3 V : thể tích dung dịch Iod 0,1N dùng Hóa chất : - Dung dịch chuẩn độ N2S2O3 0,1N - Iod - Kali Iodid - Dung dịch hồ tinh bột 1% Dụng cụ: - Bình định mức 250 ml: - Bình nón nút mài 100ml: - Cốc cỏ mỏ 250 ml: - Phểu thủy tinh - Burette giá - Pipet bầu 25ml: - Pipet vạch 5ml, 10ml: - Đũa thủy tinh - Ống đong 50ml: Cách tiến hành: Cân 3,25g Iod tinh thể , sau cân tiếp 5,00g kali iodid cốc có mỏ 25ml Thêm 30 ml nước khuấy tủ hút tan hoàn toàn Thêm khoảng 100ml nước lọc qua phểu có bơng hút nước vào bình định mức 250ml Tráng cốc 50ml nước cất lọc tiếp vào bình định mức Thêm nước đến vạch, đậy nút, lắc Lấy 25,0ml dung dịch iod vừa pha, cho vào bình nón nút mài, thêm 30ml nước chuẩn độ dung dịch Na 2S2O3 0,1N có mầu vàng nhạt, thêm 2ml dung dịch hồ tinh bột chuẩn độ tiếp cho đén mầu Nếu K>1,000 ta tính lượng nước cần thêm vào theo cơng thức (k-1)V, với V thể tích dung dịch chuẩn độ cần phải hiệu chỉnh để có hệ số k=1,000 Sau thêm nước để hiệu chỉnh, chuẩn độ lại để xác định hệ số II Kiểm nghiệm viên bao vitamin C 500mg 1.Nguyên tắc: Vitamin C (acid ascorbic) chuẩn độ phép đo iod theo phản ứng: Ở cuối định lượng, lượng thừa Iod tác dụng với hồ tinh bột cho màu xanh đen 2.Chuẩn bị: A Hóa chất: - Dung dịch AgNO3 2% - dung dịch Natri nitro pusiat 1% - dd NaOH 2M - HCl 25% - dd Diclorophenol indophenol - Dung dịch chuẩn độ Iod 0,1N - Hồ tinh bột B Dụng cụ : - Bình nón nút mài: - Cốc có mỏ loại: - Cối chày: - Đủa thủy tinh: - Ống nghiệm: Cách tiến hành 3.1 Tính chất Viên phải láng nhẵn, màu đều, cạnh thân phải lành lặn 3.2 Độ đồng khối lượng: Xác định 20 viên, khối lượng trung bình viên m ±5% 3.2 Xác định độ rã: Khơng q 30 phút 3.4 Định tính: Lấy lượng chế phẩm nghiền mịn, tương ứng với khoảng 0,1g acid Acorbic, lắc với 10 ml nước - Dịch lọc làm đỏ giấy quỳ xanh - 3ml dịch lọc + 0,5 ml dung dịch AgNO3 2% cho tủa đen - 5ml dịch lọc + 0,5 ml dun dịch Natri nitro pusiat 1% +2 ml dd NaOH 2M thêm giọt HCl 25% màu vàng chuyển sang màu lam 2ml dịch lọc làm màu 0,1ml dd Diclorophenol indophenol 3.5 Định lượng: Cân 20 viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,1g acid Ascorbic, hòa tan vào khoảng 10ml nước, chuẩn đọ dung dịch Iod 0,1N, thị hồ tinh bột 1ml đ Iod tương ứng với 0,008806g C4H8O6 BÀI KIỂM NGHIỆM NƯỚC OXY GIÀ LỖNG (chai 30,0ml) 1.Ngun Tắc: Hàm lượng H2O2 có nước H2O2 có nước H2O2 lỗng xác định phản ứng với KMnO4 sau: KMnO4 + H2O2 + H2SO4 = K2SO4 + MnSO4 + 8H2O + O2 2.Chuẩn bị B Hóa chất: - H2SO4 10% - Ether ethylic - Kalidicromat 5% - dd H2SO410% - KMnO4 0,1M - dd đỏ metyl - NaOH 0,1N - dd H2SO4 10% - Dung dịch chuẩn độ KMnO4 0,1N C Dụng cụ : - Bình nón nút mài 100ml: - Cốc có mỏ loại: - Ống đong 100ml: - Ống nghiệm: 3.Kiểm Nghiệm: 3.1 Tính chất: Chai phải kín, nhãn quy định, đựng dung dịch khơng màu 3.2 Độ đồng thể tích: Dùng ống đong khơ có dung tích 25,0ml 50ml để xác định thể tích đơn vị đong gói Cả đơn vị phải nằm giới hạn cho phép - Lọ 25,0ml: phải đạt từ 25,0 đến 27,5ml - Lọ 30ml: phải đạt từ 30,0 đến 33ml 3.3 Định tính: A Lắc 0,5ml chế phẩm với 2ml dd H2SO4 10%, 2ml ether ethylic 0,5 ml dung dịch kalidicromat 5%, lớp ether có màu xanh đậm B Lắc 2ml chế phẩm với 0,2ml dd H2SO410% 0,25ml KMnO4 0,1M Sau vài giây, dung dịch mầu hồng hay có màu hồng nhạt 3.4 Giới hạn Acid: Pha loãng 10ml chế phẩm với 20ml nước đun sôi để nguội, thêm 0,25ml dd đỏ metyl, lượng NaOH 0,1N thêm vào để làm chuyển màu dd không 0,05ml không nhiều 1,0ml 3.5 Định lượng: Nước oxy già loãng phải chứa từ 2,5 đến 3,5g H2O2 100ml - Tiến hành: Lấy xác 1,0ml dd chế phẩm vào bình nón nút mài chứa sẵn 20ml nước, thêm 10ml dd H2SO4 10% chuẩn độ dung dịch KMnO4 0,1N 1ml dung dịch KMnO4 tương ứng với 1,701mg H2O2 BÀI : KIỂM NGHIỆM THUỐC TIÊM VITAMIN B12 1000mcg (ống 1ml) Nguyên tắc: Cyanocobalamin có cực đại hấp thụ bước sóng 361 nm, áp dụng để xác định hàm lượng phương pháp đo quang phổ dựa hệ số A (1%,1cm) hay phổ hấp thụ Cyanocobalamin chuẩn Chuẩn bị: - Bình định mức 100ml: - Cốc có mỏ loại: - Đủa thủy tinh: - Máy đo pH - Xi lanh 5ml: Yêu cầu kỹ thuật: 3.1 Tính chất: ống hàn kín, nhãn quy chế đựng dung dich màu đỏ mận 3.2 Độ đồng thể tích: Phải đạt từ 1,0- 1,15ml Kiểm tra đơn vị bơm kim tiêm sạch, khô, ống nghiệm thuốc phải tích nằm giới hạn quy định 3.3 Định tính: Phổ hấp thu dung dịch mẫu thử ghi phần định lượng phải có cực đại hấp thụ 278nm ± 1nm, 361 ± 1nm 550 ± 2nm Tỉ số hấp thụ 278 nm 550nm so với độ hấp thụ 361 nm 0,57 ± 0,02 0,30 ± 0,02 3.4 pH: 4,0 – 5,5 Cho khoảng 5ml dd chế phẩm vào ống nghiệm xác định pH chế phẩm vào cốc có mỏ 50ml xác định pH chế phẩm pH metre pH dung dịch phải nằm quy định 3.5 Định lượng; Dung dịch tiêm Vitamin B12 1000mcg ống 1ml phải chứa cyanocobalamin (C63H88CoN14O14P) từ 95,0% đến 105,0% hàm lượng ghi nhãn - Tiến hành: pha loãng chế phẩm với nước để có nồng độ 20mcg 1ml Đo độ hấp thụ bước sóng 361nm với cốc đo dày 1cm, mẫu trắng nước cất - Tính hàm lượng cyanocobalamin (C63H88CoN14O14P) theo A (1%, 1cm), lấy 207 giá trị A (1%,1cm) Ở cực đại 361 nm BÀI XÁC ĐỊNH HOẠT LỰC DOXYCYCLLIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP VI SINH VẬT Mục đích: Kiểm nghiệm viên nang Doxycyclin xác định hoạt lực kháng sinh viên nang Doxycyclin Chuẩn bị: A.Hóa chất: - Dung dịch dinatri dihydro ethylene diamin tetraacetat 10% - Dung dịch NaOH 10M - Methanol, dicloromethan, acid sulfuric - Acid hydroclorid M - Môi trường số 1,2….( theo DĐVN IV) - Môi trường Mueller-Hinton Agar - Dung dịch đệm pH 6, pH 8,… - Chủng thị Bacilus cerus, Bacilus pumilus, Streptococci B.Dụng cụ: - Bản mỏng sắc ký: - Ống đong 100ml: - Pipet ml, ml: - Bình định mức 100 ml: - Cốc có mỏ 100 ml: - Phễu lọc thủy tinh: - Cối chày: - Nồi hấp Autoclave - Tủ sấy - 10 hộp petri - Các loại pipet 1,2, 10, 25ml - Bình định mức 100 ml, 10 ml - Khoanh giấy để tẩm kháng sinh Xác định hoạt lực kháng sinh Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, trộn nghiền thành bột mịn Cân lượng bột viên tương ứng 100 mg doxycyclin, hòa tan thêm acid hydroclorid 0,1 M vừa đủ 100ml Lắc kỹ, lọc Dịch lọc tiến hành định lượng theo chuyên luận “Xác định hoạt lực thuốc kháng sinh phương pháp thử vi sinh vật” Tính hàm lượng doxycyclin viên, 1mg doxycyclinC22H24N2O8 tương ứng với 1000 IU Hàm lượng doxycyclinC22H24N2O8 từ 95,0 đến 110,0% so với lượng ghi nhãn 3.1 Cân pha loãng: * Pha dung dịch thử: Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, trộn nghiền thành bột mịn Cân lượng bột viên tương ứng 100 mg doxycyclin, hòa tan thêm acid hydroclorid 0,1 M vừa đủ 100ml Lắc kỹ ta có dung dịch có nồng độ 1000UI/ml, lọc Hút xác 1ml dung dịch cho vào bình định mức 10ml, sau thêm dung dịch đệm pH 4,5 đến vạch, doxycyclin thêm dung dịch đệm pH 4,5 đến vạch dung dịch 100UI/ml Hút xác 0,2 ml ; 0,4ml; 0,8ml dung dịch cho vào bình định mức 10ml, sau thêm dung dịch đẹm dùng đén vạch ta có dung dịch: T1= 2UI/ml, T2= 4UI/ml, T3= 8UI/ml * Pha dung dịch chuẩn: 1mg bột Doxycyclin chuẩn có A UI (UI đơn vị quốc tế), trọng lượng cần cân để có 1000 UI/mg là: 1mg………… A UI X…………… 50 UI X= 1000.1/A (mg) Vậy để có 50mg Doxycyclin để pha vào bình định mức 50ml ta phải cân: Pc = 50 x X (mg) Sau ta pha loãng tiếp đến nồng độ SI = 2UI/ ml ; S2 = 4UI/ml ; 8UI/ml giống pha dung dịch thử 3.2 Chuẩn bị môi trường: - Đối với Doxycyclin dùng môi trường Mulder Hinton hay môi trường số Môi trường số là: Cao men bia 3,0g Cao thịt 4,0g Dextrose 1,0g Agar- Agar 15,0g Nước 1000ml Pepton 6,0g Cho tất hóa chất vào bình cầu đun sơi cho tan, để nguội đến 45- 500C Sau thêm 1% chủng thị Lắc kỹ cho chủng hòa môi trường Hút khoảng 20ml cho vào hộp lồng (dùng 10 hộp) Để thạch đong Tẩm giấy thấm kháng sinh Đặt giấy thấm theo thứ tự: S1, T1, S2, T2, S3, T3 Để yên 30 phút Cho vào tủ ấm ủ nhiệt 32-350C, từ 18-24h Đo vịng vơ khuẩn tính kết Tính kết quả: S = S1+S2+S3, T = T1+T2+T3; V= Max-Min V = V1+V2+V3+V4+V5+V6 T S A2; B= S3+T3 – (S1+T1) B2 A= Hm = 2.666.h5 V n( A2 1,5B ) B2 Hm X 0,031 R1 = Đối lg ( 2+M + Hm X 0,031) R1% R2 = Đối lg ( 2+M - Hm X 0,031) R2 e(%) = R % R %).100 2 R% R = Đối logarit ( 2+M) S T ( S S ) ( t t ) M= 4/3 log i 3 I = công bội pha nồng độ , i = 4/3 X logi = 0,4013 Pc: Khối lượng cân chuẩn Pt: Khối lượng cân thử 10 BÀI KIỂM NGHIỆM THUỐC GÓI SORBITOL Nguyên tắc : Sorbitol bị oxy hóa Kali periodat môi trường acid, phần dư kali periodat tác dụng với kali iodid giải phóng Iod tự xác định natri thiosulfate Chuẩn bị: A Hóa chất : - NaOH 1N - KMnO4 0,1M - thuốc thử Feling (A+B) - dd kali periodat 0,3% - acid sulfuric đậm đặc - Dung dịch Kali Iodide 30% - Dung dịch chuẩn độ Na2S2O3 0,1N - Hồ tinh bột B Dụng cụ : - Bình hút ẩm có nắp: - Bình nón nút mài: - Chén sứ có nắp: - Cốc có mỏ loại: - Đủa thủy tinh: - Ống nghiệm: Kiểm nghiệm: 3.1 Tính chất: Thuốc bột màu trắng, khơ tơi, khơng mùi, vị mát Thử cảm quang 3.2 Độ đồng khối lượng: 5,0g 5% Phương pháp thử : cân cân kỹ thuật đơn vị đóng gói bất kỳ, tất gói phải nằm giới hạn cho phép 3.3.Giảm khối lượng sấy: không 2% Phương pháp thử: cân khoảng g chế phẩm sấy nhiệt độ 70oC Khối lượng không 2% 3.4.Định tính: Hịa tan 0,1g chế phẩm 2ml nước, thêm giọt NaOH 1N giọt KMnO4 0,1M, đem đun tới sơi màu hồng thuốc tím, thêm 2ml thuốc thử Feling, đun sơi có tủa đỏ 3.5 Định lượng: 11 Phương pháp thử: cân xác khoảng 0,100g chế phẩm vào bình định mức 100ml, thêm khoảng 70ml nước, lắc để hòa tan thêm nước tới vạch Lấy xác 10ml dung dịch cho vào bình nón nút mài, thêm xác 25ml dd kali periodat 0,3% 1ml acid sulfuric đậm đặc, đun cách thủy khoảng 15 phút, sau làm nguội, thêm 2ml dd kali iodide 30% Để yên phút Sau chuẩn độ Iod phóng thích dd Na2S2O3 0,1N, thị hồ tinh bột Thực song song mẫu trắng điều kiện 1ml dd Na2S2O3 0,1N tương ứng với 0,00182g Sorbitol Hàm lượng sorbitol, C6H14O6, từ 95,0 đến 105,0% so với hàm lượng ghi nhãn 12 BÀI KIỂM NGHIỆM VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 mg Nguyên tắc: Paracetamol có cực đại hấp thụ bước sóng 257 nm, áp dụng để xác định hàm lượng phương pháp đo quang phổ dựa hệ số A(1%, 1cm) hay phổ hấp thụ Paracetamol chuẩn Chuẩn bị: A Hóa chất Acetone kalidcromat 5% natri hydroxyd 0,1N natri hydroxyd 0,01N B Dụng cụ Bình định mức 100ml: Cốc có mỏ 100ml: Cối chày: Đủa thủy tinh: Giấy lọc: tờ Máy đo UV Máy thử độ hịa tan Ống mao quản: cái/1 nhóm ống nghiệm: Phểu thủy tinh: Kiểm nghiệm : 3.1 Tính chất: Viên màu trắng, khơng mùi 3.2.Độ đồng khối lượng : Khối lượng trung bình viên m±5% Xác định 20 viên bất kỳ, không viên sai số cho phép khơng có viên nằm ngồi giới hạn gấp đơi sai số cho phép 3.3 Định tính: A Lấy lượng bột thuốc tương ứng với khoảng 0,5g paracetamol, thêm 30ml acetone(TT), khuấy kỹ, lọc, làm bay dịch lọc đến cắn, lấy cắn làm phản ứng sau đây: Lấy 0,1g cắn, thêm 2ml dung dịch acid hydroclorid loãng(TT), đun nóng phút, thêm 10ml nước cất, để nguội Thêm 1giọt dung dịch kalidcromat 5%(TT) xuất màu tím, khơng chuyển sang màu hồng Sấy cắn 105oC, độ chảy cắn khoảng 168-1720C 3.4 Độ hòa tan: Thiết bị cánh khuấy; Tốc độ quay: 50 vòng/phút ; Môi trường 900ml nước;Thời gian 45 phút 13 Cách tiến hành: pha loãng dung dịch thử với dung dịch NaOH 0,1M để dung dịch paracetamol khoảng 7,5 µg/ml Lọc đo độ hấp thụ bước sóng 257 nm với mẫu trắng dung dịch NaOH 0,1M Tính kết theo theo A(1%, 1cmm); lấy 715 giá trị A(1%, 1cm) bước sóng 257nm Yêu cầu: Ở viên thử lượng hoạt chất vào dung dịch khơng 75% lượng hoạt chất quy định 3.5.Định lượng: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình bột thuốc viên, nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 75mg paracetamol, cho vào bình định mức 100ml, thêm 25ml dung dịch natri hydroxyd 0,1N (TT), 60ml nước, lắc 15 phút, thêm nước đến vạch Lắc đều, lọc qua giấy lọc khô, bỏ 20- 30 ml dịch lọc đầu Lấy xác 10ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc Lấy xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức 100ml, thêm 10ml dung dịch NaOH 0,1N thêm nước đến vạch, lắc Đo độ hấp thụ dung dịch thu bước sóng 257nm Dùng cốc dày 1cm Mẫu trắng dung dịch natri hydroxyd 0,01N Tính hàm lượng paracetamol(C8H9NO2) theo A(1%, 1cmm); lấy 715 giá trị A (1%, 1cm) bước sóng 257nm Hàm lượng paracetamol C8H9NO2 : từ 95-105,0% so với lượng ghi nhãn 14 Bài 7: THỬ VÔ TRÙNG THUỐC TIÊM VITAMIN B1 VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ NHIỄM KHUẨN CỦA SIRO BỔ PHẾ PHẦN 1: THỬ VƠ TRÙNG THUỐC TIÊM VITAMIN B1 Mục đích: Xác định có mặt vi khuẩn nấm men chế phẩm thuốc Yêu cầu: - Nắm bắt cách pha chế môi trường - Phương pháp quy trình thử vơ khuẩn Ngun liệu: - Môi trường Thioglycolat hay BHI - Môi trường Sabauraud thạch hay mơi trường soya bean Dụng cụ vơ trùng: Bình nón, bơm tiêm 20ml Kỹ thuật thử: Dùng kim tiêm vô trùng hút lượng thể tích chế phẩm theo quy định cấy vào mơi trường BHI Saboraud, lắc Sau dem ủ 30- 350c môi trường phát vi khuẩn 20-250C trường phát nấm với thời gian từ 4-7 ngày (đối với vi khuản ngày cịn nấm ngày) Trong trình ủ phải quan sát biến đỏi mơi trường hàng ngày tối thiểu ngày đói với vi khuẩn ngày nấm Nếu q trình ủ khơng có tượng xày tức khơng có tượng làm đục mơi trường hay mơi trường có mùi chế phẩm khơng có mặt nấm ngược lại PHẦN 2: ĐÁNH GIÁ ĐỘ NHIỄM KHUẨN CỦA SIRO BỔ PHẾ Mục đích: Để biết tổng số vi khuẩn hiếu khí nấm sống lại 1g hay 1ml thuốc kiểm tra có mạt vi khuẩn gây bệnh có thuốc Yêu cầu: - Nắm bắt cách pha chế môi trường - Phương pháp quy trình ni cấy, phân lập VKHK, nấm vi khuẩn gây bệnh - Tính kết Nguyên liệu: - Thạch thường - Thạch Saboraud - Nước muối 0,9% vô trùng - Các loại môi trường khác Dụng cụ vơ trùng: Bình nón, pipet 10ml, ống nghiệm, hộp lồng Kỹ thuật: 5.1 Cân, pha loãng: - Cân vào bình nón 250ml lượng thuốc 5g 15 - Lấy trọng lượng thuốc nhân gấp 10 lần trừ trọng lượng số ml nước vơ trùng cần thêm vào cho đủ 1/10 Ví dụ: - Lượng thuốc - Lượng nước thêm vào - Lấy hộp lồng, cho1ml nồng độ vào hộp lồng - Đun chảy thạch, để nguội 45-500C, cho vào hộp lồng - Đun chảy thạch, để nguội 45-500C, cho vào hộp lồng chừng 15-18ml, xoay tròn để trộn đều, để nguội cho đong lại bọc lại hộp lồng vào giấy úp ngược hộp để tủ ấm 370C từ 24-48 tiếng 5.2 Tính kết quả: Đếm số khuẩn lạc cách chấm đáy hộp lồng, sau nhân với độ pha lỗng Lấy giá trị đĩa pha lỗng có số khoảng lạc lớn mà số khuẩn lạc đĩa không lớn 300 khuẩn lạc tính số lượng khuẩn lạc 1g hay 1ml chế phẩm Nếu không thấy khuẩn lạc mọc đĩa có độ pha lỗng 1/10 kết luận chế phảm có 10 khuản lạc 1g hay 1ml Đối với nấm mốc: tổng số nấm mốc tiến hành nồng độ pha loãng 1/10 dùng mơi trường Saboraud Tìm vi khuẩn gây bệnh: * Tìm Staphylococcus aurecus pseudomonas aeruginosa Cho chế phẩm vào 100ml môi trường lỏng casein đậu tương (glucose) ủ 35 - 370C, kiểm tra mọc môi trường Nếu thấy mọc, dùng que cấy môi trường cấy lên đĩa thạch Baird- parker Manitol- muối môi trường cetrimid Đầy đĩa, lật ngược đĩa petri, đem ủ 35 - 370C, sau 24h kiểm tra không thấy khuẩn lạc với đặc tính + Mơi trường manitol-muối: khuẩn lạc màu vàng với vùng vàng xung quanh + Thạch Baird- parker: khuẩn lạc màu đen bóng, viền xung quanh viền sáng 2-5mm chế phẩm khơng có Staphylococcus pseudomonas aeruginosa Nếu có khuẩn lạc nghi ngờ tiếp tục làm phản ứng sinh hóa Staphylococcus pseudomonas aeruginosa sau: 5.2.1 Nhuộm Gram: Cetrimid trực khuẩn Gram (-), thạch pseudomonas: trực khuẩn (-) 5.2.2 Phản ứng coaglucaza (đối với Staphylococcus): Lấy khuẩn lạc nghi ngowftreen môi trường Baird-parker hay manitol-muối cho vào ống nghiệm thêm vào ống nghiệm 0,5ml huyết tương thỏ Đem ủ cách thủy 370C kiểm tra ống nghiệm sau 3h đem ủ thêm 24h Nếu có dơng huyết tương với mức độ kết luận chế phẩm có Staphylococcus 5.2.3 Phản ứng oxydaza sinh sắc tố (Đối với pseudomonas aeruginosa) Lấy khuẩn lạc nghi ngờ thạch cetrimid cấy ria môi trường thạch pseudomonas phat hienj fluorescin pseudomonas phát pyrocyamin hộp petri Nếu có nhiều khuẩn lạc chia hộp lồng phần, phần cấy loại khuẩn 16 lạc lựa chọn Đậy lật ngược hộp ủ 35± 20c ngày kiểm tra đường cấy ánh sáng thường ánh sáng tia tử ngoại Trên thạch Cetrimid: Khuẩn lạc màu lục nhạt thông thường Thạch pseudomonas phát fluorescin: không màu đến màu vàng nhạt Thạch pseudomonas phát pyrocyamin: màu vàng nhạt Ánh sáng tử ngoại: - Trên thạch Cetrimid: màu lục - Pseudomonasp: màu xanh nước biển - Trên thạch pseu fluorescin: màu vàng 5.3.4 Phản ứng oxydase: Nhỏ lên khuẩn lạc hay chuyển khuẩn lạc lên mẫu giấy tẩm nước Ndimethyl-phenylen diamin dihydroclorid Nếu thấy màu đỏ hồng chuyển sang tím kết luận chế phảm có pseudomonas * Tìm salmonella Echerichia coli: Chế phẩm + 100ml môi trường lỏng lactose ủ: kiểm tra mọc, lắc nhẹ nhàng Lấy 1ml cho vào ống chứa sẵn 10ml hỗn hợp môi trường lỏng selenit-Cysitin môi trường lỏng tetrathionat, trộn đều, ủ 18-24h phần lại môi trường thạch xanh Briliant, môi trường thạch Bismuth sulfit đĩa thạch petri Đậy,lật ngược chế phẩm chế phẩm có: Thạch xanh Briliant: khuẩn lạc khơng màu hay màu hồng nhacjhay trắng đục, nhỏ, rỏ nét (thường bao quanh vùng màu hồng từ vàng tới đỏ) Thạch Bismuth sulfit: khuẩn lạc màu đen hay màu xanh Đem nhuộn Gram: thấy gram(-) trực khuẩn hình gaayjthif cấp chuyển sang ống thạch (nghiêng)- – đường: trước tiên cấy ria, sau sau xuống phần thạch, ủ Nếu kiểm tra không thấy môi trường bị kiềm hóa (màu đỏ) phần nghiêng acid hóa( màu vang phần dựng đúng, có khơng có màu đen kèm theo phần dựng đứng sinh H2S chế phẩm có Salmonella E.coli: Từ mơi trường Lactose lấy que cấy lên bề mặt môi trường MacConkey Đậy nắp, lật ngược hộp, ủ , kiểm tra khuẩn lạc Khuẩn lạc có màu đỏ gạch, có thể có vùng mật kết tuat bao quanh trực khuẩn gram(-) ( khơng có kết luận chế phẩm khơng có ) có cấy ria lên mặt thạch Eosin – xanhmethylen levine đĩa petri Nếu nhiều khuẩn lạc chia petri phần phần khuẩn lạc Đậy đĩa lật ngược, ủ Kiểm tra khơng có khuẩn lạc thể đặc tính ánh kim ánh sáng phản chiếu màu đen xuất ánh sáng truyền qua kết luận chế phẩm E.coli 17 ... S = S1+S2+S3, T = T1+T2+T3; V= Max-Min V = V1+V2+V3+V4+V5+V6 T S A2; B= S3+T3 – (S1+T1) B2 A= Hm = 2.666.h5 V n( A2 1, 5B ) B2 Hm X 0,0 31 R1 = Đối lg ( 2+M + Hm X 0,0 31) R1% R2... hấp thụ bước sóng 361nm với cốc đo dày 1cm, mẫu trắng nước cất - Tính hàm lượng cyanocobalamin (C63H88CoN14O14P) theo A (1% , 1cm), lấy 207 giá trị A (1% ,1cm) Ở cực đại 3 61 nm BÀI XÁC ĐỊNH HOẠT... khuẩn lạc 1g hay 1ml chế phẩm Nếu không thấy khuẩn lạc mọc đĩa có độ pha lỗng 1/ 10 kết luận chế phảm có 10 khuản lạc 1g hay 1ml Đối với nấm mốc: tổng số nấm mốc tiến hành nồng độ pha lỗng 1/ 10 dùng