KHOA DƯỢC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HUẾ BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM PHÂN TÍCH ĐỘC CHẤT GIÁO TRÌNH THỰC TẬP KIỂM NGHIỆM II (Dành cho đối tượng Dược chính quy và Liên thông chính quy) TÀI LIỆU LƯU HÀNH NỘI BỘ HU.
KHOA DƯỢC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HUẾ BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM - PHÂN TÍCH - ĐỘC CHẤT ……… ……… GIÁO TRÌNH THỰC TẬP KIỂM NGHIỆM II (Dành cho đối tượng Dược quy Liên thơng quy) TÀI LIỆU LƯU HÀNH NỘI BỘ HUẾ - 2021 BÀI 1: KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU PYRIDOXINE HYDROCLORID Nguyên tắc: Pyridoxine hydroclorid định lượng phương pháp chuẩn độ acidbazơ mơi trường khan, ion Cl- bị khóa hoạt động Hg2+, Pyridoxine thể tính bazơ mạnh môi trường acetic acid khan phản ứng với acid perclorid Chuẩn bị: A Hóa chất - Acid HCl 0,1M - HNO3 2M - AgNO3 2% - 46g FeCl3 dung môi A (25ml HCl đđ + 975 ml nước) vừa đủ 1000ml - 60g CoCl2 (Cobal clorid) dung môi A vừa đủ 1000ml - Acid HCl 0,1% - Dung dịch chì mẫu 1000 ppm - Dung dịch đệm acetat pH= 3,5 - Thuốc thử Thiocetamid - Acid acetic khan - Dung dịch thủy ngân (II) acetat - Dung dịch chuẩn độ acid perclorid 0,1N - Dung dịch tím tinh thể - Nguyên liệu pyridoxine hydroclorid B Dụng cụ - Bình nón nút mài 100ml: - Bình định mức 100ml: - Chén sứ có nắp: - Cốc có mỏ loại: - Đủa thủy tinh: - Máy đo pH - Ống nghiệm: Kiểm nghiệm 3.1 Tính chất: Bột kết tinh trắng hay gần trắng Dễ tan nước, khó tan tan ethanol 96%, thực tế không tan chloroform ether 3.2 Định tính A Phổ hấp thụ ánh sáng tử ngoại dung dịch 0,001% acid HCl 0,1M có cực đại khoảng 288-296 nm, A (1%, 1cm) bước sóng cực đại từ 420445 B Hịa tan 0,1g chế phẩm 10ml nước, hòa 0,5ml HNO3 2M, thêm 0,4ml dd AgNO3 2%, lắc tạo thành tủa trắng lổn nhổn 3.3 Độ màu sắc dung dịch Dung dịch S: hòa tan 2,50g chế phẩm nước khơng có CO2 để 50ml, dd S phải khơng có màu đậm màu V7 Cách pha dung dịch màu V7 - Dung môi A: 25ml HCl đđ + 975 ml nước cất - Dung dịch màu vàng: hịa tan 46g FeCl3 dung mơi A vừa đủ 1000ml Bảo quản tránh ánh sáng - Dung dịch màu đỏ: hòa tan 60g CoCl2 (cobal clorid) dung môi A (25ml HCl đđ + 975 ml nước) => 1000ml - Lấy 24ml màu vàng + 6ml mầu đỏ + 70 ml HCl 1% Sau đó, lấy 2,5ml hỗn hợp + 97,5 ml HCl 1% -> dd V7 3.4 pH: pH dd S từ 2,4 đến 3,0 3.5 Kim loại nặng: Không 20 phần triệu Lấy 12ml dd S thử theo phương pháp 1, dùng dd chì mẫu 1ppm để chuẩn bị mẫu đối chiếu - Ống thử: cho vào ống nghiệm 12ml dung dịch S, 2ml dung dịch đệm acetat pH= 3,5 1,2 ml thuốc thử Thiocetamid, lắc so sánh màu với ống mẫu sau phút - Ống mẫu: cho vào ống nghiệm 10ml dung dịch chì mẫu 1ppm 2ml dung dịch S, thêm ml dd đệm acetat pH = 3,5 1,2 ml thuốc thử Thioacetamid, lắc để yên phút - Ống trắng: cho vào ống nghiệm 10ml nước cất 2ml dung dịch S, thêm ml dd đệm acetat pH = 3,5 1,2 ml thuốc thử Thioacetamid, lắc để yên phút So sánh màu tạo thành ống thử ống chuẩn: Màu nâu ống thử không đậm màu ống mẫu Ống chuẩn có màu nâu nhạt so sánh với ống trắng chuẩn bị đồng thời điều kiện * Pha dung dịch chì mẫu ppm: - Lấy 1ml dd chì mẫu 1000 ppm, thêm 9ml nước, thể tích cuối 10ml - Lấy ml dung dịch pha cho vào bình định mức 100ml, thêm nước đến vạch Ta có dung dịch chì mẫu ppm 3.6 Mất khối lượng làm khô Không 0,5% (0,5g, sấy 100-105oC) 3.7 Định lượng Hòa tan 0,15g chế phẩm hỗn hợp gồm 5ml acid acetic khan (TT) 6ml dd thủy ngân (II) acetat (TT) bình nón nút mài 100ml Chuẩn độ dung dịch acid perclorid 0,1N, dùng 0,05 ml dung dịch tím tinh thể (CT) làm thị dd có màu xanh lục 1,00 ml dd acid perclorid 0,1N tương đương với 20,56mg C8H11NO3.HCl Xác định hệ số hiệu chỉnh K dung dịch acid perclorid 0,1N: Hòa tan 0,1g kali dihydro phtalat hỗn hợp gồm 20 ml acid acetic khan (TT) ml dd thủy ngân (II) acetat (TT) bình nón nút mài 100 ml Chuẩn độ dung dịch acid perclorid 0,1N, dùng giọt dung dịch tím tinh thể (CT) làm thị dd có màu xanh lục Yêu cầu: Pyridoxine hydroclorid phải chứa 99,0-101,0% C8H11NO3.HCl tính theo chế phẩm làm khô BÀI 2: KIỂM NGHIỆM VIÊN BAO TAN TRONG RUỘT ASPIRIN pH8 Hóa chất - NaOH - HCl đđ - H2SO4 - FeCl3 - Phèn sắt (III) amoni - Acid salicylic - Ethanol - Viên bao tan ruột aspirin pH8 Dụng cụ - Giấy lọc - Ống nghiệm, giấy lọc, giá đỡ - Cối chày sứ Tiến hành 3.1 Tính chất Viên bao có bề mặt nhẵn, có màu, đánh bóng Khi bẻ viên quan sát thấy lớp bao 3.2 Định tính Đun sơi 0,3 g bột viên đến phút với 10 ml dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) Để nguội, thêm dung dịch acid sulfuric 10% (TT) thừa acid, có tủa kết tinh có mùi acid acetic Lọc lấy tủa, hòa tan tủa vài ml nước, thêm giọt dung dịch sắt (III) clorid 0,5% (TT) có màu tím 3.3 Giới hạn acid salicylic tự Khơng 3,0 % Cân lượng bột viên tương ứng với 0,2 g acid acetylsalicylic, lắc với ml ethanol 96% (TT) pha loãng với nước đến 100 ml nhiệt độ không 10 oC Lọc giấy lọc lấy 50 ml dịch lọc, thêm vào ml dung dịch phèn sắt amoni 0,2 % (TT) pha, trộn để yên phút Dung dịch khơng có màu tím thẫm màu dung dịch mẫu (gồm ml dung dịch phèn sắt amoni 0,2% (TT) pha hỗn hợp ml dung dịch acid salicylic 0,10 % (kl/tt) pha, ml ethanol 96% (TT) nước vừa đủ 50 ml) Tiến hành thử ống nghiệm Nessler cho vào ống nghiệm giống để so sánh màu chúng 3.4 Độ rã Cho viên vào ống thử, không dùng đĩa, treo giá đỡ ống thử cốc chứa dung dịch acid HCl 0,1N (TT), vận hành thiết bị 120phút Lấy giá đỡ ống thử khỏi chất lỏng Trừ mảnh vỏ bao, không viên bị rã hay có dấu hiệu bị rạn nứt khiến hoạt chất bị hòa tan Thay chất lỏng cốc dung dịch đệm phosphat pH 6,8, cho đĩa vào ống vận hành thiết bị 60 phút Lấy giá đỡ ống thử khỏi chất lỏng Nếu mẫu thử không đạt yêu cầu viên bị dính vào đĩa, lặp lại phép thử với viên khác không dùng đĩa Mẫu thử đạt yêu cầu tất viên rã 3.5 Định lượng Cân 20 viên, xác định khối lượng trung bình, nghiền thành bột mịn, cân xác lượng bột viên tương ứng với 0,5 g acid acetylsalicylic, thêm 30 ml dung dịch natri hydroxyd 0,5 N đun sôi nhẹ 10 phút, chuẩn độ lượng natri hydroxyd 0,5 N thừa dung dịch acid hydrocloric 0,5 N, dùng dung dịch đỏ phenol làm thị Song song tiến hành mẫu trắng Hiệu số lần chuẩn độ biểu thị lượng dung dịch natri hydroxyd 0,5 N dùng để định lượng ml dung dịch natri hydroxyd 0,5 N tương ứng với 45,04 mg C9H8O4 Hàm lượng acid acetylsalicylic, C9H8O4, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn BÀI 3: KIỂM NGHIỆM VIÊN BAO PHIM NIFEDIPIN 20mg TÁC DỤNG KÉO DÀI Nguyên tắc: Nifedipin có cực đại hấp thụ bước sóng 333 nm, áp dụng để xác định hàm lượng phương pháp đo quang phổ hệ số A (1%,1cm) hay phổ hấp thụ nifedipin chuẩn Chuẩn bị: A Hóa chất - Chuẩn nifedipin - Natri lauryl sulfat - HClđđ - CHCl3 - C2H5OH B Dụng cụ - Cối chày sứ - Máy đo độ hòa tan - Cốc có mỏ loại 250ml, 100ml, 50ml - Phểu lọc - Bình tam giác 100 ml - Bình định mức 100ml, 50ml - Pipiet loại 2ml, 5ml Kiểm nghiệm 3.1 Tính chất Viên bao có bề mặt nhẵn, bao phim màu hồng đến màu đỏ nhạt, cạnh mặt viên lành lặn 3.2 Độ đồng khối lượng Xác định 20 viên Không viên nằm ngồi giới hạn chênh lệch so với KLTB khơng có viên có khối lượng vượt gấp đơi giới hạn KLTB (mg) % chênh lệch so với KLTB ≤ 80 10 > 80 đến < 250 7,5 ≥ 250 3.3 Độ hòa tan Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Mơi trường hịa tan: 900 ml Tốc độ quay: 100 vòng/phút Thời gian: 60 phút, 120 phút, 240 phút Cách pha mơi trường hịa tan: cân 30g natri lauryl sulfat, thêm từ từ vào lít dung dịch HCl 0,1N, vừa thêm vừa khấy Cách tiến hành: ( Chú ý tiến hành tình trạng tránh ánh sáng ) - Dung dịch chuẩn gốc: cân xác khoảng 20mg chuẩn nifedipin cho vào bình định mức 50ml, thêm 30ml ethanol 96%, siêu âm 15 phút, để nguội , thêm đủ thể tích , lắc - Dung dịch chuẩn: từ dung dịch chuẩn gốc pha lỗng mơi trường hịa tan thành dung dịch chuẩn có nồng độ phù hợp với quy định giai đoạn hịa tan ( tương đương mức phóng thích 65% cho giai đoạn giờ, 75% cho giai đoạn giờ, 100% cho giai đoạn ) Sử dụng dung dịch chuẩn cho giai đoạn đánh giá độ hòa tan tương ứng - Dung dịch thử: Sau thời gian quy định ( 1: : ) Lấy 10 ml dung dịch từ cốc hòa tan lọc làm dung dịch mẫu thử đồng thời bổ sung 10 ml mơi trường hịa tan vào cốc giai đoạn Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn, dung dịch thử bước sóng 238nm Mẫu trắng mơi trường hịa tan (Dựa vào độ hấp thụ dung dịch chuẩn, dung dịch thử bước sóng 238nm, lượng cân chuẩn, hàm lượng chuẩn độ pha loãng dung dịch chuẩn thử, tính hàm lượng Nifedipin hịa tan sau ; giờ) Yêu cầu: - Từ 65% - 80% so với hàm lượng nifedipin ghi nhãn hòa tan sau 60 phút - Từ 75% - 90% so với hàm lượng nifedipin ghi nhãn hòa tan sau 120 phút - Khơng 85% so với hàm lượng nifedipin ghi nhãn hòa tan sau 240 phút 3.4 Định tính Trong phần Định lượng, phổ tử ngoại dung dịch thử có hấp thụ cực đại khoảng 237 nm dải hấp thụ từ 320 nm đến 355 nm 3.5 Định lượng Loại bỏ lớp vỏ bao, cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 30 mg nifedipin chuyển vào cối, nghiền với ml cloroform (TT) Dùng ethanol (TT) chuyển vào bình định mức 100 ml, thêm ethanol (TT) đến định mức, lắc Lọc, loại bỏ dịch lọc đầu Pha loãng 5,0 ml dịch lọc thành 50,0 ml với ethanol (TT), lắc Đo độ hấp thụ (Phụ lục 4.1) dung dịch thu bước sóng 333 nm, cốc đo dày cm, so với mẫu trắng ethanol (TT) Tính hàm lượng nifedipin, C17H18N2O6, viên theo A(1%, cm) Lấy 140 giá trị A(1%, cm) bước sóng 333 nm Yêu cầu: Hàm lượng nifedipin, C17H18N2O6, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Bài 4: KIỂM NGHIỆM VIÊN SỦI PARACETAMOL 500mg Hóa chất - Acetone - HCl đđ - Kalidicromat - Natri hydroxyd - Viên sủi paracetamol Dụng cụ - Máy đo UV - Máy thử độ hịa tan - Máy đo độ nóng chảy - Ống mao quản Các tiêu kiểm nghiệm: 3.1 Tính chất Viên nén màu trắng 3.2 Định tính A Hịa tan viên với nước ấm, sau viên hết sủi bọt, dung dịch thu phải có màu trắng đục B Đo phổ hấp thụ dung dịch thu để định lượng (phần Định lượng) khoảng bước sóng từ 230 đến 350 nm Phổ thu phải có cực đại hấp thụ bước sóng 257 nm 3.3 Độ rã Cho viên vào cốc chứa 200 ml nước 15 - 25 oC, phải có nhiều bọt khí bay Viên coi rã hết hồ tan phân tán hết nước, khơng cịn hạt kết vón Thử với viên, chế phẩm đạt yêu cầu phép thử viên rã vòng phút 3.4 Định lượng Cân 10 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 75 mg paracetamol cho vào bình định mức 100 ml, thêm 25 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1M (TT); chờ cho dung dịch hết sủi bọt, thêm 50 ml nước; lắc kỹ 15 phút Thêm nước đến định mức, lắc Lọc, loại bỏ 20 ml dịch lọc đầu Pha loãng 10,0 ml dịch lọc thành 100,0 ml với nước Lấy xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức thể tích 100 ml, thêm 10 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1M (TT) Pha loãng với nước đến định mức Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch thu bước sóng 257 nm, cốc đo dày cm Dùng dung dịch natri hydroxyd 0,01M (TT) làm mẫu trắng Tính hàm lượng paracetamol (C8H9NO2) theo A (1%, 1cm) Lấy 715 giá trị A (1%, 1cm), bước sóng 257 nm Yêu cầu: Hàm lượng paracetamol C8H9NO2 : từ 95-105,0% so với hàm lượng ghi nhãn 10 BÀI 5: KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG CLORAMPHENICOL 250 mg Nguyên tắc Cloramphenicol có cực đại hấp thụ bước sóng 278 nm, áp dụng để xác định hàm lượng phương pháp đo quang phổ dựa hệ số A (1%,1cm) hay phổ hấp thụ Cloramphenicol chuẩn Kiểm nghiệm 2.1 Tính chất Nang cứng, bột thuốc nang trắng hay trắng ngà, không mùi 2.2 Đồng khối lượng Khối lượng trung bình bột thuốc nang: m 10% Cân 20 nang có chứa thuốc ghi khối lượng Mn, sau cân nang tiếp đỗ bột thuốc ra, dùng tăm bơng chùi vỏ, cân vỏ, hiệu số nang chứa thuốc trừ vỏ nang trị số khối lượng bột thuốc nang, sau xác định bột thuốc nang số 20 viên, cân 20 vỏ nang rỗng, ta có Mv So sánh khối lượng bột thuốc nang với giá trị m 10% Thuốc đạt độ đồng khối lượng khơng q viên vượt ngồi giới hạn cho phép khơng có viên vượt gấp đơi sai số cho phép 2.3 Định tính Lấy lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,1 g cloramphenicol, lắc với 10 ml ethanol (TT), lọc bay dịch lọc đến khơ Hịa tan 10 mg cắn thu ml ethanol 50% (TT), thêm 4,5 ml dung dịch acid sulfuric M (TT), 50 mg kẽm bột (TT) để yên 10 phút, gạn lớp chất lỏng lọc cần thiết Làm lạnh dung dịch thu nước đá, thêm 0,5 ml dung dịch natri nitric 10% (TT), sau phút thêm g ure (TT), ml dung dịch 2-naphtol (TT) ml dung dịch natri 11 hydroxid M (TT), màu đỏ xuất Làm lại thí nghiệm khơng có bột kẽm, dung dịch khơng có màu đỏ 2.4 Độ hịa tan Thiết bị: Kiểu giỏ quay Mơi trường hòa tan: 900 ml dung dịch acid hydrocloric 0,1 N (TT) Tốc độ quay: 100 vòng/phút Thời gian: 45 phút Cách tiến hành: Lấy 10 ml dung dịch môi trường hòa tan mẫu thử Lọc, bỏ dịch lọc đầu, pha loãng cần đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch thu bước sóng cực đại 278 nm (Phụ lục 4.1), cốc đo dày cm, dùng mơi trường hịa tan làm mẫu trắng Tính hàm lượng cloramphenicol, C11H12Cl2N2O5 , hòa tan viên theo A (1%, cm), lấy 297 giá trị A (1%, cm) cực đại hấp thụ 278 nm u cầu: Khơng 70% lượng cloramphenicol, C11H12Cl2N2O5, so với lượng ghi nhãn hòa tan sau 45 phút 2.5 Định lượng Cân 20 viên nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang Trộn nghiền mịn Cân lượng bột viên tương ứng với 20 mg cloramphenicol, thêm ml ethanol (TT), pha lỗng với nước bình định mức 100 ml tới vạch Lọc, bỏ 20 ml dịch lọc dầu, lấy xác 10 ml dung dịch pha lỗng với nước vừa đủ 100 ml Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch thu bước sóng hấp thụ cực đại 278 nm cốc dày cm, mẫu trắng nước Tính hàm lượng cloramphenicol theo A (1%, cm), lấy 297 giá trị A (1%, cm) cực đại 278 nm Hàm lượng cloramphenicol, C11H12Cl2N2O5, từ 95,0 đến 105,0% so với hàm lượng ghi nhãn 12 BÀI 6: ĐÁNH GIÁ ĐỘ KÍCH ỨNG DA CỦA KEM ACICLOVIR Mục đích: Thử kích ứng da dựa vào mức độ phản ứng da thỏ với chất thử so với phần da kế bên không đắp chất thử Phép thử không áp dụng cho chất axit kiềm mạnh (pH11,5) chất thử so với phần da kề bên không đắp chất thử Nguyên liệu súc vật: - Thuốc dùng thuốc mỡ aciclovir, tetracyclin, thuốc sát trùng - Thỏ trắng trưởng thành: đực (không sử dụng thỏ có chửa cho bú), khoẻ mạnh, cân nặng không kg Thỏ nhốt riêng ni dưỡng điều kiện thí nghiệm ngày trước thử Dụng cụ: - Tơng điện thiết bị thích hợp làm lông thỏ - Hộp/giá giữ thỏ - Kéo, panh - Bông, miếng dán, keo dán Tiến hành thí nghiệm: 4.1 Đặt mẫu thử Mỗi mẫu thử thỏ Liều chất thử thỏ 0,5 g 0,5 ml Đặt mẫu thử chuẩn bị lên miếng gạc khơng gây kích ứng 2,5 cm x 2,5 cm có độ dày thích hợp đắp lên da Cố định miếng gạc băng dính khơng gây kích ứng Sau bỏ gạc băng dính, chất thử cịn lại làm dung mơi thích hợp khơng gây kích ứng 4.2 Quan sát ghi điểm Quan sát ghi điểm phản ứng chỗ da đặt chất thử so với da kề bên không đặt chất thử thời điểm giờ, 24 , 48 sau làm mẫu thử Có thể kéo dài thời gian quan sát có tổn thương sâu để đánh giá đầy đủ khả hồi phục không hồi phục vết thương không nên 14 ngày 13 Bảng - Mức độ phản ứng da thỏ Phản ứng - - Điểm đánh giá Sự tạo vẩy ban đỏ Không ban đỏ Ban đỏ nhẹ(vừa đủ nhận thấy) Ban đỏ nhận thấy rõ Ban đỏ vừa phải đến nặng Ban đỏ nghiêm trọng (đỏ tấy) đến tạo thành vẩy dể ngăn ngừa tiến triển ban đỏ Gây phù nề Không phù nề Phù nề nhẹ (vừa đủ nhận thấy) Phù nề nhận thấy rõ (viền phù nề phồng lên rõ) Phù nề vừa phảI (da phồng lên khoảng mm) Phù nề nghiêm trọng (da phồng lên mm có lan rộng vùng xung quanh) Tổng số điểm kích ứng tối đa 4 Đánh giá kết Trên thỏ, điểm phản ứng tính tổng số điểm hai mức độ ban đỏ phù nề chia cho số lần quan sát Điểm kích ứng mẫu thử lấy trung bình điểm phản ứng thỏ thử.Trong trường hợp có dùng mẫu đối chứng, điểm phản ứng mẫu thử trừ số điểm mẫu đối chứng Chỉ sử dụng điểm thời gian quan sát 24 giờ, 48 để tính kết Đối chiếu điểm kích ứng với mức độ qui định bảng để xác định khả gây kích ứng da thỏ mẫu thử Bảng - Phân loại phản ứng thử da thỏ Loại phản ứng Điểm trung bình Kích ứng khơng đáng kể Từ đến 0,5 Kích ứng nhẹ lớn 0,5 đến Kích ứng vừa phải lớn 2,0 đến 5,0 Kích ứng nghiêm trọng lớn 5,0 đến 8,0 14 BÀI 7: KIỂM TRA CHÍ NHIỆT TỐ CỦA THUỐC TIÊM TRUYỀN NaCl 0,9% Mục đích: Phép thử xác định cách đo tăng thân nhiệt thỏ sau tiêm tĩnh mạch dung dịch vô khuẩn chất cần kiểm tra Nguyên liệu súc vật: -Dung dịch thuốc tiêm dung dịch NaCl 0,9%, dung dịch Ringer Lactat -Thỏ trưởng thành (>1,5 kg): con, khỏe mạnh, giống, nuôi dưỡng thức ăn chứa kháng sinh thỏ khơng có dấu hiệu giảm cân q trình thử nghiệm Khơng dùng để thử nghiệm nếu: (a) Thỏ dùng thử chất gây sốt có kết âm tính vịng ngày trước đó, (b) Thỏ dùng thử chất gây sốt có kết dương tính vịng tuần Dụng cụ: -Bơm, kim tiêm: cái/nhóm -Hộp/giá giữ thỏ: cái/nhóm -Nhiệt kế điện: cái/nhóm Tiến hành thí nghiệm: a.Thử nghiệm sơ Chỉ nên tiến hành thử sơ với thỏ lần dùng thử chất gây sốt Trong vòng đến ngày trước kiểm tra mẫu thử, tiêm tĩnh mạch tai 10ml/ kg thỏ dung dịch natri clorid 0,9% khơng có chất gây sốt, làm ấm đến khoảng 38o5 trước tiêm Ghi nhiệt độ thỏ, bắt đầu 90 phút trước tiêm tiếp tục sau tiêm Không dùng thỏ có nhiệt độ thay đổi 0,6oC vào thử nghiệm thức b.Thử nghiệm thức Mỗi mẫu thử nhóm thỏ Chuẩn bị tiêm mẫu thử: Mẫu thử hịa tan dung mơi khơng có chất gây sốt, dung dịch natri clorid 0,9% chất lỏng qui định chuyên luận riêng Làm ấm dung dịch thử lên khoảng 38o5 trước 15 tiêm Tiêm chậm dung dịch thử vào tĩnh mạch tai thỏ khoảng thời gian khơng q phút, trừ có dẫn khác chuyên luận riêng Lượng mẫu thử tiêm thay đổi tùy theo chế phẩm cần kiểm tra qui định chuyên luận riêng Thể tích tiêm khoảng 0,5 – 10ml/ kg thể trọng thỏ Theo dõi nhiệt độ xác định đáp ứng Ghi nhiệt độ thỏ 30 phút lần, 90 phút trước tiêm tiếp tục sau tiêm Theo dõi nhiệt độ trước tiêm, khơng dùng vào thử nghiệm nếu: - Thỏ có chênh lệch nhiệt độ ≥ 0,2oC lần ghi liên tiếp, - Thỏ có nhiệt độ ban đầu cao 39o8 thấp 38oC, - Nhiệt độ thỏ nhóm khác 1oC Đánh giá kết quả: Đầu tiên thử nhóm thỏ, tùy thuộc vào kết thu được, thử thêm nhóm thỏ khác tổng cộng nhóm, cần Nếu tổng đáp ứng nhóm khơng vượt q số ghi cột bảng đây, mẫu thử đạt yêu cầu Nếu tổng đáp ứng vượt số ghi cột không vượt số ghi cột lặp lại phép thử nhóm khác nêu Nếu tổng đáp ứng lớn số ghi cột mẫu thử không đạt yêu cầu Số thỏ Mẫu thử đạt tổng đáp ứng không vượt Mẫu thử không đạt tổng đáp ứng vượt 1,15 2,65 2,80 4,30 4,45 5,95 12 6,60 6,60 Những thỏ có nhiệt độ tăng cao q 1,2oC loại không dùng lại cho phép thử chất gây sốt 16 ... giá trị A (1%, cm) cực đại hấp thụ 27 8 nm u cầu: Khơng 70% lượng cloramphenicol, C11H12Cl2N2O5, so với lượng ghi nhãn hòa tan sau 45 phút 2. 5 Định lượng Cân 20 viên nang, tính khối lượng trung... hấp thụ cực đại 27 8 nm cốc dày cm, mẫu trắng nước Tính hàm lượng cloramphenicol theo A (1%, cm), lấy 29 7 giá trị A (1%, cm) cực đại 27 8 nm Hàm lượng cloramphenicol, C11H12Cl2N2O5, từ 95,0 đến... 1000ml - Lấy 24 ml màu vàng + 6ml mầu đỏ + 70 ml HCl 1% Sau đó, lấy 2, 5ml hỗn hợp + 97,5 ml HCl 1% -> dd V7 3.4 pH: pH dd S từ 2, 4 đến 3,0 3.5 Kim loại nặng: Không 20 phần triệu Lấy 12ml dd S thử